嗅鞘细胞移植治疗运动神经元病/肌萎缩侧索硬化的初步报告

目的:探讨嗅鞘细胞移植治疗运动神经元病/肌萎缩侧索硬化的安全性及有效性。方法:对8例运动神经元病/肌萎缩侧索硬化患者在脊髓病变处分两点共注入50μL嗅鞘细胞悬液,细胞数共约10×105个。结果:术前肌萎缩侧索硬化功能评分(ALSFRS)犤(18.6±7.9)分犦分别与术后2～4周犤(21.8±7.6)分犦比较,差异有显著性意义(t=-2.376,P=0.049),与术后3～6个月犤(21.5±7.6)分犦比较,差异无显著性意义(t=-2.025,P=0.083),8例患者的神经功能均稳定或改善。术后行肌电图检查的患者显示术后自发电位减少或消失,收缩时肌电波幅较术前明显降低,电位密度明显增加。结论:嗅鞘细胞移植安全可行,术后2～4周和3～6个月均能阻止或逆转运动神经元病肌萎缩侧索硬化的病情恶化。     

嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症：88例近期结果报告

目的：探讨嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症的安全性和有效性。方法：选择2003-01／2005-03首都医科大学附属北京朝阳医院神经外二科和北京西山医院神经疾病研究治疗中心收治肌萎缩侧索硬化症患者88例。早期在脊髓病变处分两点共注入50μL嗅鞘细胞悬液，细胞数共约1&;#215;10^6个。后改为在双侧大脑放射冠处各注射50μL嗅鞘细胞悬液，细胞数共约2&;#215;10^6个。术前和术后近期（2-4周）进行神经功能评定和肌电图检查。神经功能评定采用国际统一的肌萎缩侧索硬化症功能评分标准（ALSFRS）。结果：88例患者全部进入结果分析。术前ALSFRS（20.69&;#177;9．32）分与术后2-4周（23．96&;#177;9.06）分比较，72例患者（81.8％）的神经功能呈稳定或改善（P〈0．001）。63例（71．6％）术后行肌电图检查的患者显示术后自发电位减少或消失，收缩时肌电波幅较术前明显降低，电位密度明显增加。结论：嗅鞘细胞移植安全可行，术后2-4周能阻止或逆转肌萎缩侧索硬化症的病情恶化。     

肌萎缩侧索硬化症患者嗅鞘细胞移植后的短期随访及磁共振波谱评价

目的：采用运动皮质及相关脑区的质子磁共振波谱检查，分析上运动神经元明显受累的肌萎缩侧索硬化症患者嗅鞘细胞移植后质子谱变化。 方法：于2004—12／2005—02在北京市石景山区西山神经再生和功能重建研究所治疗的7例肌萎缩侧索硬化症患者，均符合El Escorial诊断标准。在嗅鞘细胞移植术前及术后2周检查其神经功能状态、肌萎缩侧索硬化症功能评分（分值越高神经功能越好）、肌电图和质子磁共振波谱。分别于大脑脚、内囊膝部、内囊后肢、放射冠和中央前回测量N-乙酰天冬氨酸／肌酐和胆碱复合物／肌酐比值。 结果：7例肌萎缩侧索硬化症患者均进入结果分析。①嗅鞘细胞移植后2周2例患者功能评分较术前明显改善（术前29，30，术后34，30），肌电图波幅较术前明显升高。其余5例上述2项指标保持稳定。②7例患者N-乙酰天冬氨酸／肌酐和胆碱复合物／肌酐比值整体水平降低（波幅比值：1．624&;#177;0．347，1．531&;#177;0．193；1．030&;#177;0．269，0．919&;#177;0．115；曲线下面积：1．697&;#177;0．354，1．021&;#177;0．182；1．625&;#177;0．230，0．912&;#177;0．118），但2例改善的患者在其相应的解剖区域N-乙酰天冬氨酸／肌酐升高。 结论：肌萎缩侧索硬化症患者N-乙酰天冬氨酸／肌酐和胆碱复合物／肌酐比值整体水平降低，可能是由于疾病的进展或穿刺操作的干扰有关。其中2例患者显示N-乙酰天冬氨酸／肌酐比值增高，而且与神经学检查发现相印证，并为肌电图检查所支持。     

嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症中期安全性评价

目的：在证明嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症的近期安全性的基础上，进一步评价其中期安全性。方法：本项研究为嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症系列研究的一部分。①随机选择2004-12／2005-05北京西山医院神经疾病研究治疗中心采用嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症患者13例，均经过世界神经病联合会El Escofial诊断标准确诊，病情呈进行性恶化趋势。②所有患者均接受胚胎嗅鞘细胞移植治疗，即取胚胎嗅球，消化成单个嗅鞘细胞后，培养两三周，然后在患者双侧大脑放射冠处各注射50μL嗅鞘细胞悬液，细胞数共约2&;#215;10^6个。③术后采用MRI颅脑扫描进行影像学检查，定期随访，仔细比较注射部位及其周围脑结构的形态学变化，分析嗅鞘细胞移植物的生物安全性。结果：按意向处理分析，嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症患者13例，随访5．1-11．8个月，平均7．5个月，全部进入结果分析。随访期问，无发热、头痛、头晕、恶心及呕吐等神经系统并发症。术前术后MRI扫描对比，颅内移植部位及其周围未发现新生肿瘤、出血、水肿、囊肿形成、神经结构破坏以及感染（脓肿）等病理性改变。结论：本研究首次证明在7个月随访期内，采用嗅鞘细胞移植手术治疗肌萎缩侧索硬化症是安全的。     

嗅鞘细胞移植后脑出血大鼠神经前体细胞增殖及神经功能评分变化

背景：嗅鞘细胞作为一种可再生且自体取材的移植细胞，在脊髓疾病移植治疗中受到广泛关注，关于脑出血的移植治疗目前有待实验结果的进一步积累。目的：观察嗅鞘细胞移植后脑出血大鼠神经前体细胞的增殖，评估嗅鞘细胞移植治疗大鼠脑出血的疗效。设计：完全随机对照实验。单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科。材料：实验于2002-03／2003-03在华中科技大学同济医学院临床神经研究中心完成。选择健康雄性Wistar大鼠32只随机分为2组，每组16只。嗅鞘细胞移植组在制作大鼠尾状核出血模型第3天时，取10μL嗅鞘细胞悬液向大鼠脑内匀速注射（1μL/min）。对照组注射生理盐水10μL。方法：大鼠在移植前，移植后第3，7，14，30天分别进行神经功能评分。模型制作后第1天在两组中各取1只大鼠，制备脑组织切片，神经元轴突髓鞘观察采用髓鞘固蓝染色，神经纤维观察采用神经纤维嗜银染色。各组移植后第3，7，14，30天各取1只大鼠，制作石蜡切片，观察嗅鞘细胞移植后存活、迁徙及神经前体细胞的增殖情况，并进行神经前体细胞计数。主要观察指标：①两组大鼠脑出血后神经元轴突髓鞘和神经纤维观察。②两组大鼠脑出血后第3，7，14，30天神经前体细胞计数。③两组大鼠脑出血后第3，7，14，30天时神经功能缺损评分。结果：32只大鼠均进入实验分析。①脑出血后第30天时血肿周边及血肿灶中嗅鞘细胞计数：移植组的髓鞘化数量和神经纤维数量明显多于对照组。②两组大鼠脑出血后神经前体细胞计数：脑出血后第7，14，30天，嗅鞘细胞移植组的神经前体细胞数明显多于对照组[（41．1&;#177;2.4）个／视野，（34．5&;#177;1．2）个／视野；（43．6&;#177;1．2）个／视野，（37．2&;#177;2．0）个／视野；（19.3&;#177;1．0）个／视野，（14．2&;#177;0．4）个／视野，（t=2．42-4．02,P〈0．05）]。③两组大鼠脑出血后神经功能缺损评分：嗅鞘细胞移植组在脑出血后第14，30天时明显低于第3天[（2．21&;#177;0．20）分，（1．50&;#177;0．21）分，（2．74&;#177;0．21）分，0=2．06，3．27，P〈0．05）]，对照组只在脑出血后第30天时低于第3天[（1．96&;#177;0．12）分，（2．76&;#177;0．20）分，（t=2．47，P〈0．05）]。结论：①嗅鞘细胞有增加内源性神经前体细胞数量的作用。②嗅鞘细胞可促进脑内神经细胞轴突再生，使其重新髓鞘化并建立突触联系，恢复其运动功能，进而加快损伤组织的修复。     

突触蛋白在肌萎缩侧索硬化转基因小鼠运动神经元上的表达

目的：评估肌萎缩侧索硬化转基因小鼠脊髓前角和大脑运动皮质运动神经元上的突触蛋白在不同疾病阶段的数量变化。 方法：实验于2003—11／2004—06在墨尔本大学HFI研究所脑损伤与修复组完成。表达突变人类超氧化物歧化酶1基因的转基因小鼠36只（肌萎缩侧索硬化组），以及表达B6SJL基因的正常小鼠36只（对照组），两组分别按性别及出生后60，90及120d随机分为每个时间点12只，雌雄各半。①采用荧光金标记法标记腰段脊髓及皮层的运动神经元。②采用免疫荧光方法标记突触蛋白，阳性对照为加入突触蛋白抗体并有阳性表达；阴性对照省略此抗体。③采用共焦计数系统计数并行统计学分析。 结果：①荧光金标记的运动神经元：经荧光显微镜检查确定腰段脊髓及皮层的运动神经元均被荧光金清楚地标记。②运动神经元的突触蛋白计数：在疾病中期出生后90d及后期出生后120d，运动神经元上的突触蛋白的数量呈显著性降低（腰段脊髓细胞体：（0．75&;#177;0．06），（0．59&;#177;0．09）／μm；腰段脊髓树突：（0．71&;#177;0．06）（0．55&;#177;0．03）／μm；大脑皮层运动神经元细胞体：（0．79&;#177;0．03），（0．63&;#177;0．08）／μm；大脑皮层运动神经元树突：（0．76&;#177;0．07），（0．61&;#177;0．08）／μm，P〈0．01）；同组别雌雄对照差异无显著性。 结论：肌萎缩侧索硬化运动神经元突触蛋白数量的降低与疾病及病程的进展有直接关系。     

移植神经生长因子和脑衍生神经生长因子基因修饰的嗅鞘细胞对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后神经生长因子和脑衍生神经生长因子基因修饰的嗅神经鞘细胞移植对脊髓损伤后细胞凋亡及促进神经功能恢复的作用。方法：实验于2003—09／2004—04在广东医学院实验动物中心完成，SD大鼠48只，雌雄不限，体质量240～260g。随机分为3组：基因修饰组，嗅鞘细胞移植组，脊髓损伤组，每组16只。均首先行大鼠脊髓损伤造模。基因修饰组和嗅鞘细胞移植组分别移植神经生长因子、脑衍生神经生长因子修饰的嗅鞘细胞和单纯嗅鞘细胞，脊髓损伤组不做治疗。移植后12周，采用免疫组织化学法和原位末端标记法对损伤区的脊髓组织切片进行细胞凋亡的检测，主要观察bcl-2(细胞凋亡抑制基因)，bax和fas(细胞凋亡诱导基因)阳性表达的情况评估经基因修饰和未经基因修饰的单纯嗅鞘细胞对脊髓神经凋亡的抑制及诱导作用。结果：48只大鼠均进入结果分析。①原位末端标记法检测结果：基因修饰组细胞凋亡数低于嗅鞘细胞移植组，脊髓损伤组最高。②免疫组织化学结果：Bcl-2蛋白表达的顺序为基因修饰组&;gt;嗅鞘细胞移植组&;gt;脊髓损伤组(20．79&;#177;6．40，13．54&;#177;3．66，9．34&;#177;2．12，P&;lt;0．05）；Fas，Bax蛋白表达的顺序均为脊髓损伤组&;gt;嗅鞘细胞移植组&;gt;基因修饰组【(24．98&;#177;4．32，40．48&;#177;2．05)，(18．92&;#177;4．74，25．54&;#177;3．82)，(11．78&;#177;3．81，16．87&;#177;3．30)，(P&;lt;0．05)】。结论：单纯移植嗅鞘细胞其存活时间与分泌有限。神经生长因子和脑衍生神经生长因子是神经营养因子的主要成员，用神经生长因子和脑衍生神经生长因子基因修饰嗅鞘细胞后可提高嗅鞘细胞的生存时间和提高分泌神经营养因子功能，移植后具有抑神经细胞凋亡的作用。     

切断周围神经后局部嗅鞘细胞移植对脊髓及神经节内神经元的作用

目的：观察周围神经切断后局部嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓及神经节内神经元的作用，为嗅鞘细胞移植治疗周围神经损伤提供实验依据。 方法：实验于2005—08／2006—01在西安交通大学医学院动物实验中心完成。选用健康成年SD大鼠55只，随机数字表法分为3组：对照组25只．实验组25只、空白组5只。①对照组与实验组大鼠在坐骨切迹处游离坐骨神经的各分支，在远端切断，在半腱肌内侧肌膜上切口，将坐骨神经近断端的各游离分支包埋进肌肉，神经外膜与肌膜缝合固定，实验组在缝合口两侧2mm处肌肉中各注射1&;#215;10^9L^-1的嗅鞘细胞0．1mL，对照组注射细胞培养液DMEM。空白组仅暴露坐骨神经而不进行切断。②术后1，2，3，7和14d，分批处死对照组和实验组大鼠，每次5只，空白组于14d后处死，分别进行病理及TUNEL法观察神经元的改变。 结果：实验共选用大鼠55只，全部进入结果分析。①坐骨神经损伤后各组不同时间点苏木精-伊红染色观察伤侧前角运动神经元存活率变化：术后7，14d，实验组大鼠脊髓前角运动神经元的形态改变与对照组相似，但变性数目明显少于对照组，存活神经元数目明显多于对照组（P〈0．01）。②坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧前角运动神经元凋亡指数变化：在术后第3，7，14天，对照组明显多于实验组[（21&;#177;1．1）％，（1．2&;#177;0．8）％；（3．1&;#177;1．1）％，（1．4&;#177;0．6）％；（6．1&;#177;1．8）％，（4．1&;#177;1.3）％，P〈0．05]。③坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧神经节神经元凋亡指数变化：7，14d时，实验组的神经节内的感觉神经元凋亡阳性细胞要较对照组少[（2．1&;#177;0.32）％，（4．4&;#177;0．56）％；（4．3&;#177;1．8）％，（6．7&;#177;2．5）％，P〈0．05]。 结论：在周围神经损伤后脊髓及神经节内神经元有凋亡发生，嗅鞘细胞移植对神经元凋亡有保护作用。     

嗅鞘细胞移植对周围神经端侧吻合后侧支轴突再生的修复作用

目的：观察大鼠腓神经轴突数目、神经纤维直径、髓鞘厚度、神经电生理和胫前肌湿重恢复率，探讨大鼠周围神经损伤行嗅鞘细胞移植对端侧吻合后轴突再生的作用。方法：实验于2004—03／11在广东医学院实验动物中心完成。Wistar大鼠72只，随机分为3组，每组24只。端端吻合组：行左腓总神经端端吻合；端侧吻合组：行左胫腓神经端侧吻合；嗅鞘细胞组：行左胫腓神经端侧吻合后再生室内注嗅鞘细胞悬液。术后30和60d进行各项指标检测。①再生腓神经的神经电生理检测：应用VikingⅡ型肌电图仪检测大鼠胫前肌的肌电图和运动神经传导速度。②胫前肌湿重：胫前肌肌湿重恢复率=实验侧肌湿重／正常侧肌湿重&;#215;100％。⑧组织学检查：腓总神经轴突数目。④超微结构：透射电镜下观察。结果：纳入72只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠再生腓神经电生理检查结果：术侧胫前肌M波，术后30d，端端吻合组出现M波，波幅〉5mV，端侧吻合组和嗅鞘细胞组75％出现M波，术后60d，端侧吻合组和嗅鞘细胞组100％出现M波，其中嗅鞘细胞组的波幅大部分〉5mV。随时间的延长各组手术侧运动神经传导速度增加，潜伏期缩短，30d，端端吻合组与正常侧差异无显著性（P〉0．05），60d时嗅鞘细胞组与端端吻合组之间差异无显著性（P〉0．05），与端侧吻合组比较差异仍有显著性（P〈0．05）。②大鼠胫前肌湿重恢复率：30d，嗅鞘细胞组明显优于端侧吻合组[（56．57&;#177;1．89）％，（50．21&;#177;3．68）％，P〈0．05]，在60d时已与端端吻合组无显著性差异[（91．34&;#177;1．76）％，（97．11&;#177;3．41）％，P〉0．05]。③大鼠腓总神经组织学检查：60d，嗅鞘细胞组神经轴突数目优于端侧吻合组[（997．00&;#177;123．34），（710．00&;#177;102．01）个／mm^2，P〈0．05]。④大鼠再生神经组织透射电镜观察结果：60d嗅鞘细胞组再生纤维增厚，髓鞘内板层变致密，轴浆内富含神经微丝，微管排列规则，分布均匀，电镜下观察同端端吻合组类似。结论：嗅鞘细胞移植可以促进周围神经端侧吻合后侧支轴突再生，改善端侧吻合质量。     

大鼠自体嗅黏膜移植修复胸髓损伤：形态学和行为学的验证

目的：采用自体嗅黏膜作为组织供体修复脊髓损伤，从形态学和行为学角度验证嗅成鞘细胞移植治疗脊髓损伤的作用及效果，为应用自体嗅成鞘细胞移植治疗临床脊髓损伤提供实验依据。 方法：实验于2002-06／2004-10在北京大学基础医学院解剖学与组织胚胎学系中枢神经发育与再生研究室完成。选取清洁级6周龄雄性SD大鼠18只，随机分为自体嗅黏膜移植组10只，冻融对照组8只。两组均建立脊髓损伤模型，自体嗅黏膜移植组取位于鼻中隔后上部的嗅黏膜移植于脊髓损伤处，冻融对照组将自体嗅黏膜冷冻于-20℃冰箱5min，取出后室温放置5min解冻，重复5次后将冻融自体嗅黏膜移植于脊髓损伤处。术后6周于脊髓损伤节段上下各5mm处取材，片厚20μm。然后两组分别以神经丝蛋白和神经生长因子受体蛋白免疫荧光双标染色、激光共聚焦显微镜检测移植效果。免疫组织化学染色观察移植嗅黏膜与周围组织的生长情况。通过BBB行为学评分对两组动物后肢恢复功能进行评估。 结果：实验选取SD大鼠18只，全部进入结果分析。①免疫组织化学摄片观察移植细胞在脊髓组织中再生情况：自体嗅黏膜移植组有部分空洞形成，但有部分神经纤维穿过移植区，可见神经生长因子受体蛋白免疫反应阳性的嗅成鞘细胞呈束状排列。冻融对照组无再生纤维通过且形成较大空洞，神经生长因子受体蛋白p75免疫组化反应阴性。②两组大鼠的神经丝蛋白和神经生长因子受体蛋白免疫荧光双标染色结果：自体嗅黏膜移植组免疫荧光标记纤维中夹有神经生长因子受体蛋白p75标记的存活的嗅成鞘细胞，细胞随标记的神经丝蛋白纤维走行方向排列，与宿主组织愈合良好。冻融对照组未见神经生长因子受体蛋白p75标记的嗅成鞘细胞以及神经丝蛋白标记的再生纤维，且形成较大空洞。③两组大鼠手术前后行为学评分结果：与冻融对照组比较，术后2，3，4，5，6周自体嗅黏膜移植组BBB行为学评分显著升高[（3．8&;#177;0．7），（5．6&;#177;1．4）；（4．1&;#177;0．6），（9．7&;#177;1．3）；（4．6&;#177;1．7）。（12．5&;#177;1．2）；（5．8&;#177;0．9），（13．5&;#177;0．9）；（6．3&;#177;0．9），（13．8＋0．9）分；P〈0．05或0．01]。 结论：嗅黏膜移植以及其中的嗅成鞘细胞对大鼠脊髓损伤修复具有明显的促进作用，并可恢复损伤神经的部分功能。同时自体嗅黏膜移植还有助于脊髓损伤部位神经纤维的再生。     

胚胎嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤影响功能恢复的因素

目的：探讨胚胎嗅鞘细胞移植晚期脊髓损伤患者后，影响其功能恢复的因素b。方法：①取胚胎嗅球，消化成单个嗅鞘细胞后培养12-17d待用。②选择2001—11／2004—01首都医科大学附属北京朝阳医院和北京西山医院收治的脊髓损伤、志愿接受胚胎嗅鞘细胞移植的患者300例。其中完全性损伤222例。不完全性损伤78例。病程0．5-31年，平均3．1年。将胚胎嗅鞘细胞移植到脊髓损伤部位的上下处。③所有患者在胚胎嗅鞘细胞移植手术前和手术后2-8周按ASIA标准评价和随访，比较年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平对胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的影响。。结果：①按ASIA标准评价神经功能有部分功能快速恢复，其中运动功能由术前（39．1&;#177;20．6）分提高到（45．9&;#177;20．3）分（P〈0．001）。轻触觉由术前（51．7&;#177;24．9）分提高到（63．4&;#177;23．0）分（P〈0．001），痛觉由术前（53．0&;#177;24．21分提高到（65．3&;#177;22．7）分（P〈0．001）。②手术前ASIA级别为A级者222例。术后38例改善为B级。46例为C级。（萤除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外，年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平等因素比较没有显著性差异。结论：胚胎嗅鞘细胞移植能快速帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分神经功能。但除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外，年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平并不是影响胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的因素。     

嗅鞘细胞移植后脊髓损伤区髓磷脂相关糖蛋白表达的动态变化

目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤区轴突生长抑制因子髓磷脂相关糖蛋白的影响。 方法：实验于2005-08／2006—02在西安交通大学教育部环境与疾病相关基因研究重点实验室完成。①选取成年SD大鼠40只，随机数字表法分为正常组、模型组、DF12对照组、嗅鞘细胞组，10只／组，②除正常组外，其余各组均建立脊髓全横断损伤模型．术后嗅鞘细胞组在距损伤缘上下各1mm处注射原代培养12d的成年大鼠嗅鞘细胞悬液．浓度掘整为1&;#215;10^11 L^-1，深度均为1．0mm，每处各注射细胞悬液1μL，DF12对照组注射DF12培养液，方法与剂量同上：模型组、正常组均不进行任何移植处理。③分别于移植后1，4，8周采用组织学、行为学方法和免疫印迹技术检测各组动物脊髓损伤区髓磷脂相关糖蛋白表达的变化。 结果：实验选取40只SD大鼠均进入结果分析①组织学检查嗜银染色结果：移植8周后除正常组外，其余各组均可见明显的神经纤维再生。但模型组、DF12对照组大部分纤维排列紊乱如乱发状．明显迂曲；而嗅鞘细胞组新生轴突明显，无论数墙还是质量都优于模型组及DF12对照组。②移植后不同时间点各组下肢运动功能检测BBB评分结果的比较：移植1．4，8周，嗅鞘细胞组BBB评分均明显高于模型组、DF12对照组，且移植4，8周时差异有显著性意义[（5．25&;#177;1．28），（1．62&;#177;1．50），（2．25&;#177;1．03）分：（11．5&;#177;2．20），（4．37&;#177;1．84），（3．75&;#177;1．03）分；F=18．090～47．635，P均〈0．01]。③髓磷脂相关糖蛋白western blot检测结果：模型组、DF12对照组、嗅鞘细胞组脊髓损伤后髓磷脂相关糖蛋白的表达明显增强，均明显高于正常组（P〈0．05）；但嗅鞘细胞组明显低于模型组、DF12对照组（P〈0．05）。 结论：嗅鞘细胞移植可能通过降低脊髓损伤后损伤区髓磷脂相关糖蛋白的表汰．从而促讲榻伤脊髓的修复．     

FK506对嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症患者神经功能改善的影响

目的：观察大环内酯类免疫抑制剂FK506对嗅鞘细胞移植后肌萎缩侧索硬化症患者神经功能的干预情况。 方法：①取4个月中期流产胚胎（孕妇及其家属知情同意）的嗅球，消化成单个嗅鞘细胞后，培养2周，然后将其移植到患者双额放射冠部位。②报告1例患者：白人男性，49岁，德国籍，进行性四肢无力伴肌萎缩2年。按世界神经病联合会E1 Escorial诊断标准确诊。先后共接受嗅鞘细胞脑内移植2次。第1次为单纯细胞移植，5个月后接受第2次移植术，术后当天下午即开始口服FK506胶囊3mg，2次／d，共42d。术前和术后随访疗效评定采用国际统一的肌萎缩侧索硬化症功能评分标准（满分40分代表正常，随病情加重分数减少，最低为0分），同时对两次移植治疗效果进行比较。 结果：第1次术后，患者的神经功能部分改善，肌萎缩侧索硬化症功能评分由术前26分增至32分（医生评定）。第3个月病情又开始加重，至第5个月降至15分（患者及其家属经医师正规培训后独立进行量表评定）。第2次移植后，肌萎缩侧索硬化症功能评分由术前16分增至19分（医生评定）。随访5个月病情基本稳定，评分为14分（患者及其家属评定）。 结论：免疫抑制剂和神经营养和保护剂FK506可提高肌萎缩侧索硬化症患者嗅鞘细胞移植的治疗效果，延长神经功能改善时间。     

嗅鞘细胞再移植治疗肌萎缩侧索硬化症1例

目的:探讨嗅鞘细胞再移植对肌萎缩侧索硬化症患者的治疗价值。方法:①患者资料:选择2005-05北京市虹天济神经科学研究院收治的肌萎缩侧索硬化症患者1例,男性白种人,42岁,西班牙籍,四肢无力伴肌萎缩进行性加重2年,分别于2005-05-27日和2006-10-11日给予嗅鞘细胞脑内移植。治疗方案患者知情同意。②移植方法:取4个月流产胚胎(孕妇及其家属均知情同意)的嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养2周,细胞浓度约2×1010L-1。第2次移植术前进行供、受体细胞HLA配型。根据两次术前MRI图片,选取双额放射冠锥体束走行部位为注射细胞靶点,局麻下采用立体定向技术注射胚嗅鞘细胞100万个/侧。术后口服他克莫司胶囊1mg,2次/d,共42d。③功能评估:电子邮件随访5个月,采用国际统一的肌萎缩侧索硬化功能评分标准进行延髓和呼吸功能、上肢功能、下肢功能、其他功能评定,功能从完全丧失至正常为0～4分,总分40分。结果:①患者在围手术期及随访期内均未发现任何不良事件及副反应。②术前5个月内,肌萎缩侧索硬化功能评分由33分迅速降至17分。③第1次术后2周检查,患者肢体运动功能改善,双上肢抬举好转,书写较术前清晰,站立行走时平衡能力改善,翻身及穿衣好转,肌萎缩侧索硬化功能评分由17分增加至24分。出院后半年患者病情保持稳定。2005-10,双下肢力量较前稍下降,且坐位控制平衡能力下降。2005-12患者腕部及手部无力开始缓慢加重。至术后17个月肌萎缩侧索硬化功能评分为18分。④第2次术后1周检查,双上肢、腹部和双下肢力量有所增加,但肌萎缩侧索硬化功能评分仍为18分。再次出院后5个月随访,分数增加至20分。结论:嗅鞘细胞移植能改善肌萎缩侧索硬化症患者神经功能障碍的症状,再次治疗仍然有效。     

嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症:88例近期结果报告

目的:探讨嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症的安全性和有效性。方法:选择2003-01/2005-03首都医科大学附属北京朝阳医院神经外二科和北京西山医院神经疾病研究治疗中心收治肌萎缩侧索硬化症患者88例。早期在脊髓病变处分两点共注入50μL嗅鞘细胞悬液,细胞数共约1×10个。后改为在双侧大脑放射冠处各注射50μL嗅鞘细胞6悬液,细胞数共约2×10个。术前和术后近期(2～4周)进行神经功能评6定和肌电图检查。神经功能评定采用国际统一的肌萎缩侧索硬化症功能评分标准(ALSFRS)。结果:88例患者全部进入结果分析。术前ALSFRS(20.69±9.32)分与术后2～4周(23.96±9.06)分比较,72例患者(81.8%)的神经功能呈稳定或改善(P<0.001)。63例(71.6%)术后行肌电图检查的患者显示术后自发电位减少或消失,收缩时肌电波幅较术前明显降低,电位密度明显增加。结论:嗅鞘细胞移植安全可行,术后2～4周能阻止或逆转肌萎缩侧索硬化症的病情恶化。     

嗅鞘细胞移植改善晚期脊髓损伤患者神经功能的近期效应

背景：既往认为中枢神经无再生能力。但近年来研究发现，脊髓损伤后，改变局部环境，损伤的神经轴突可以有再生能力并能恢复部分神经功能。 目的：探讨胚嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤患者是否安全、可行和有效恢复神经功能。 设计：自身前后对照观察。 单位：北京西山医院神经疾病研究治疗中心、首都医科大学附属北京朝阳医院神经外二科和解放军海军总医院神经外二科。 对象：选择2001-11／2003—02首都医科大学附属北京朝阳医院神经外二科和海军总医院神经外二科治疗的晚期脊髓损伤患者171例。其中完全性损伤147例，不全性损伤24例。伤后时间：0.5～18年。治疗过程经有关医疗伦理委员会讨论同意，细胞捐献者自愿同意，被治疗者知情同意。 方法：①取胚胎嗅球，消化成单个嗅鞘细胞后培养12-17d。②将胚胎嗅鞘细胞移植到患者脊髓损伤部位的上下处。③所有患者在胚胎嗅鞘细胞移植手术前和手术后2～8周按美国脊髓损伤学会（ASIA）评分标准评价。 主要观察指标：①嗅鞘细胞移植术后患者脊髓功能恢复情况。②不良事件及副反应。 结果：171例患者全部进入结果分析。①嗅鞘细胞移植术后患者脊髓功能恢复情况：171例均有部分神经功能快速恢复，其中运动功能评分由术前34．5&;#177;20、3提高到42．0&;#177;20．0（P〈0．001），轻触觉评分由术前47、2&;#177;24．0提高到61．8&;#177;23．0（P〈0．001），痛觉评分由术前48．6&;#177;23、5提高到64．0&;#177;22、8（P〈0、001）。②不良事件及副反应：1例术区感染导致脊髓损害表现早期加重；2例严重肺部感染，1例丘脑出血，此3例患者最终因严重呼吸、循环衰竭而死亡。 结论：嗅鞘细胞移植能快速促进晚期脊髓损伤患者恢复部分神经功能，但作用机制尚需进一步观察。     

脊髓内移植神经干细胞对臂丛神经根性撕脱伤后前角运动神经元生存和修复的影响

目的：观察臂丛根性撕脱伤后脊髓内移植神经干细胞的存活、分化、迁移情况以及对原有前角运动神经元的影响。方法：实验于2004-01／12在福建医科大学分子生物学中心以及福建省骨科研究所完成。将雄性SD大鼠60只随机分为3组，每组20只。①单纯组：将C5-7神经根经后路撕脱制作大鼠臂丛根性撕脱伤模型，不进行细胞移植。②对照组：模型制作后即刻移植灭活神经干细胞（5&;#215;10^8L^-1）4μL于C6脊髓前角。③实验组：模型制作后即刻把体外培养的5-溴尿嘧啶标记的神经干细胞（5&;#215;10^8L^-1）4μL移植于C6脊髓前角。各组于术后1，2，4．8，12周5个时间点取脊髓标本制备切片，每个时间点4只，分别计算损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率。观察移植神经干细胞存活、迁移、分化情况采用免疫组织化学染色方法。结果：60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠臂丛根性撕脱伤后不同时间前角运动神经元存活率：实验组2，4，8，12周时间点均高于对照组和单纯组[实验组：（79.3&;#177;2．9）％，（66.2&;#177;3.8）％，（57.0&;#177;5.4）％，（47．6&;#177;4.8）％；对照组：（69．4&;#177;3．1）％，（45．4&;#177;3．7）％，（33.4&;#177;6．5）％，（29．2&;#177;2.3）％；单纯组：（71.0&;#177;3．0）％，（45．9&;#177;29）％，（355&;#177;5.4）％，（27.9&;#177;1．9）％，t=3．8730-85009，P〈0.01]。（2）神经干细胞移植入脊髓后不仅能存活，迁移达一个脊髓节段，并可以进一步分化为神经元以及星型胶质细胞。结论：①臂丛神经根性撕脱伤后脊髓前角内可以提供神经干细胞分化成星型胶质细胞和神经元的适宜微环境，而随时间不同表现出不同的分化趋向。②移植神经干细胞大鼠前角运动神经元存活率增高，说明神经干细胞移植除能分化为神经元而发挥神经元替代作用外，对神经根撕脱引起脊髓运动神经元死亡也具有保护作用，能明显减少神经根撕脱后运动神经元的继发性变性死亡。     

嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症中期安全性评价

目的:在证明嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症的近期安全性的基础上,进一步评价其中期安全性。方法:本项研究为嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症系列研究的一部分。①随机选择2004-12/2005-05北京西山医院神经疾病研究治疗中心采用嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症患者13例,均经过世界神经病联合会ElEscorial诊断标准确诊,病情呈进行性恶化趋势。②所有患者均接受胚胎嗅鞘细胞移植治疗,即取胚胎嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后,培养两三周,然后在患者双侧大脑放射冠处各注射50μL嗅鞘细胞悬液,细胞数共约2×106个。③术后采用MRI颅脑扫描进行影像学检查,定期随访,仔细比较注射部位及其周围脑结构的形态学变化,分析嗅鞘细胞移植物的生物安全性。结果:按意向处理分析,嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症患者13例,随访5.1～11.8个月,平均7.5个月,全部进入结果分析。随访期间,无发热、头痛、头晕、恶心及呕吐等神经系统并发症。术前术后MRI扫描对比,颅内移植部位及其周围未发现新生肿瘤、出血、水肿、囊肿形成、神经结构破坏以及感染(脓肿)等病理性改变。结论:本研究首次证明在7个月随访期内,采用嗅鞘细胞移植手术治疗肌萎缩侧索硬化症是安全的。     

肌电图评价肌萎缩侧索硬化389例嗅鞘细胞脑内移植的效果

背景:肌萎缩侧索硬化尚缺乏有效治疗手段,细胞学治疗是研究的重要方向之一.目前研究表明,嗅鞘细胞、骨髓摹质细胞、脐血间质干细胞等具有一定临床疗效.目的:观察嗅鞘细胞脑内移植治疗肌萎缩侧索硬化的肌电图改变,分析肌电图检查对肌萎缩侧索硬化疗效的评定价值.设计、时间及地点:病例自身对照观察,于2003 09/2007-12在北京市虹天济神经科学研究院及北京康复中心神经外科完成.对象:选择389例接受胚胎嗅鞘细胞脑内移植治疗的肌萎缩侧索硬化患者.方法:局麻下作双额发际内2.0～3.0 cm,旁升中线2.5～2.9 cm,长约0.5 cm小切门2个,两侧共缓慢注射细胞数2×104/μ L嗅鞘细胞悬液100 μ L.移植前及移植后三四周分别采用丹麦Keypoint-4犁肌电,诱发电位仪检查患者肌电图.主要观察指标:每例患者检查8～12块肌肉,包括四肢近、远端肌肉以及舌肌、胸锁乳突肌.移植前后肌电图主要对比自发电位、运动单位电位以及大力收缩时募集波型的改变.结果:①389例患者中332例(85.3%)肌电图检查显示不同程度改善,主要有3类:a.自发电位减少:122例出现不同程度此项政变.b.300例出现数量不等的肌肉募集波犁由低级向高级转变,电位密度明显增加,如单纯相转变为混合相:混合相转变为十扰相.c.移植前未能测到运动单位电位而术后新出现者51例.②51例(13.2%)肌电图无变化,移植前后肌电图大致相同.③6例(1.5%)比移植前筹,丰要变化为自发电位增多或肌肉大力收缩时募集波型减弱.结论:嗅鞘细胞移植近期能改善肌萎缩侧索硬化患者的神经功能,延缓病情的进行性恶化.肌电图检测用于胚胎嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化疗效评定具有较好的应用价值,通过移植前后肌电图改变可以较客观反映治疗的有效性.     

胶质细胞源性神经营养因子对培养脊髓运动神经元的影响

背景：胶质细胞源性神经营养因子对运动神经元具有营养作用，但不同浓度的营养因子对培养运动神经元体外生长影响的作用缺乏量化数据，目的：采用体外培养胚胎大鼠的脊髓运动神经元，观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子对其生长活性的作用。设计：以体外培养细胞为对象的验证性观察，单位：河北医科大学第二医院神经内科。材料：实验于2001-01／2002-09在河北医科大学第二医院神经内科实验室完成。选择成年清洁级雌雄SD大鼠合笼，取孕15d的大鼠胚胎进行脊髓分离。方法：取孕鼠15d胚胎的脊髓腹侧半组织进行原代体外分离培养。胶质细胞源性神经营养因子组按浓度1，10，50，100μg／L分为4组。对照组为不含胶质细胞源性神经营养因子的培养液。各组设立8个复孔，共做2个批次。从细胞形态学及应用MTT法观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓运动神经元的影响。主要观察指标：培养运动神经元的细胞存活数目和细胞突起的长度。结果：①脊髓运动神经元细胞突起的长度比较：胶质细胞源性神经营养因子1μg／L组、10μg／L组、50μg／L组和100μg／L组明显高于对照组[（107．4&;#177;35．4068，160．5&;#177;38．5649．450．5&;#177;60．6403，293．5&;#177;67．3814，82．8&;#177;7．9725）μm，t=2．610—2．647，P〈0．01]．②细胞存活数：胶质细胞源性神经营养因子1μg/L组、10μg/L组、50μg／L组和100μg／L组明显高于对照组[（13.9&;#177;0．8999，16．1&;#177;0.6680．20.1&;#177;0.6679．26．0&;#177;0.6030，10．5&;#177;0．7820）μm，t=2。211—2-312,P〈0．05]。③MTT比色微量分析：胶质细胞源性神经营养因子1μg／L组、10μg／L组、50μg／L组和1μg／L组明显高于对照组[（0.350&;#177;0.0598，0．3667&;#177;0．0719，0.3819&;#177;0．0638，0．3953&;#177;0．0605，0．2858&;#177;0．0325）μm，t=2．259—2．577．P〈0．05]．结论：不同浓度胶质细胞源性神经营养因子对体外培养大鼠胚胎脊髓运动神经元有小同程度的促生长作用。