嗅鞘细胞移植治疗帕金森叠加综合征1例

患者，女，23岁，由北京西山医院神经疾病研究治疗中心诊断为帕金森叠加综合征。采用立体定向方法，将嗅鞘细胞移植到患者双额放射冠部位。患者术后当天诉右手可以握拳，语言较术前清晰，四肢肌张力较术前减低，第2天双侧下肢肌张力较术前减低，第3天语言较术前明显清晰，面部表情较术前丰富。国际统一的帕金森病评定量表评分显示，自嗅鞘细胞移植后4h开始，患者神经功能逐渐有部分改善，术后第14天总分由术前109分降至97分：其中言语表达2→1分，面部表情4→3分，强直项中：颈3→2右上肢3→2左上肢3→2右下肢3→1左下肢3→2，手指拍打实验：右手4→3左手4→3，手运动：右4→3左4→3。患者住院期间未发现任何不良事件。     

嗅鞘细胞移植治疗运动神经元病／肌萎缩侧索硬化的初步报告

目的：探讨嗅鞘细胞移植治疗运动神经元病／肌萎缩侧索硬化的安全性及有效性。方法：对8例运动神经元病／肌萎缩侧索硬化患者在脊髓病变处分两点共注入50μL嗅鞘细胞悬液，细胞数共约10&;#215;10^5个。结果：术前肌萎缩侧索硬化功能评分(ALSFRS)[(18．6&;#177;7．9)分]分别与术后2～4周【(21．8&;#177;7．6)分]比较，差异有显著性意义(t=-2．376，P=0．049)，与术后3～6个月[(21．5&;#177;7．6)分]比较，差异无显著性意义(t=-2.025，P=0.083)，8例患者的神经功能均稳定或改善。术后行肌电图检查的患者显示术后自发电位减少或消失，收缩时肌电波幅较术前明显降低，电位密度明显增加。结论：嗅鞘细胞移植安全可行，术后2～4周和3～6个月均能阻止或逆转运动神经元病／肌萎缩侧索硬化的病情恶化。     

人骨髓基质细胞培养、纯化和鉴定

目的:介绍一种为临床细胞学治疗提供自体骨髓基质细胞(BMSCs)的分离纯化方法.方法:采用红细胞沉降和密度梯度离心相结合的分离纯化方法从骨髓血中分离BMSCs.台盼蓝染色实验测定BMSCs活力;对BMSCs进行CD44、CD34抗体免疫荧光显色,激光共聚焦显微镜观察.结果:BMSCs活性大于95%,纯度大于85%,细胞的纯度和均一性均符合中国卫生部第三类医疗技术的要求,已达到临床应用标准.结论:本细胞制备方法简单易行,可批量获得BMSCs,满足临床治疗的需要.     

脑内神经网络修复关键点的临床验证

背景：细胞移植的安全有效靶点选择,是临床研究的重要方向。对脑内是否存在能发挥重要治疗作用的点或区域,以最大限度对神经网络发挥良性影响进而修复,是研究先行者必须优先考虑的课题之一。 目的：通过临床资料分析,证实细胞移植脑内神经网络修复关键点(KPNNR)理论的客观性、真实性和实用性。 方法：2003-05/2009-01共有631例各类中枢神经系统疾病患者接受神经网络修复关键点嗅鞘细胞移植,其中609例资料齐全,男392例,女217例;年龄1.2~84(42.87±19.64)岁,病程0.4~35(5.11±5.46)年。疾病分布：肌萎缩侧索硬化432例次、脑性瘫痪110例次、多发性硬化25例次、共济失调12例次、多系统萎缩7例次、遗传性痉挛性截瘫6例次、持续性植物状态6例次、痴呆2例次、脑缺氧后遗症2例次、帕金森叠加综合征2例次、非特异性脑炎后遗症2例次、肾上腺脑白质营养不良1例、核黄疸后遗症1例、皮质基底核变性1例。患者来自75个国家或地区。 结果与结论：细胞移植后随访2~8周,平均4周,609例次中526例次神经功能获不同程度改善,近期总改善率为86.37%,其中肌萎缩侧索硬化改善率为87.96%。脑性瘫痪改善率为82.7%,特别是4例伴有癫痫者,术后发作明显减少。共济失调改善率为83.3%。遗传性痉挛性截瘫改善率为83.3%。围手术期出现不良事件共33例次,发生率为5.4%,主要为术后头痛、发热等,多经对症治疗后痊愈。结果提示,大脑内神经网络修复关键点(KPNNR)客观存在,在该点进行嗅鞘细胞移植安全可行,能改善多种中枢神经系统疾病患者的神经功能和(或)延缓病情的进行性恶化。     

来源于人胚室下区神经干/祖细胞的贴壁法培养和鉴定

目的建立有效的人胚胎神经干/祖细胞分离及纯化方法以达到临床需要。方法无菌取胎脑室管膜下区组织,经反复机械吹打制备细胞混悬液,采用贴壁法进行体外培养、传代。传代后用Nestin进行细胞鉴定。结果应用贴壁法进行胎脑室管膜下区神经干/祖细胞的培养能够稳定传代20代以上;共聚焦显微镜下可见Nestin阳性细胞表达呈递增趋势,传至P3(passage3)阳性率为35%,P7为79%,P12为90%,P15为99%。传到前七代时分别做细胞存活率鉴定,可达(82.57±1.38)%。结论成功建立了来源于人胚室下区的神经干/祖细胞的贴壁法培养,为该细胞移植治疗神经系统疾病提供了技术方法支持。     

肌电图评价肌萎缩侧索硬化389例嗅鞘细胞脑内移植的效果

背景：肌萎缩侧索硬化尚缺乏有效治疗手段，细胞学治疗是研究的重要方向之一。目前研究表明，嗅鞘细胞、骨髓基质细胞、脐血间质干细胞等具有一定临床疗效。 目的：观察嗅鞘细胞脑内移植治疗肌萎缩侧索硬化的肌电图改变，分析肌电图检查对肌萎缩侧索硬化疗效的评定价值。 设计、时间及地点：病例自身对照观察，于2003-09/2007-12在北京市虹天济神经科学研究院及北京康复中心神经外科完成。 对象：选择389例接受胚胎嗅鞘细胞脑内移植治疗的肌萎缩侧索硬化患者。 方法：局麻下作双额发际内2.0~3.0 cm，旁开中线2.5~2.9 cm，长约0.5 cm小切口2个，两侧共缓慢注射细胞数2×104/μL嗅鞘细胞悬液100 μL。移植前及移植后三四周分别采用丹麦Keypoint-4型肌电/诱发电位仪检查患者肌电图。 主要观察指标：每例患者检查8~12块肌肉，包括四肢近、远端肌肉以及舌肌、胸锁乳突肌。移植前后肌电图主要对比自发电位、运动单位电位以及大力收缩时募集波型的改变。 结果：①389例患者中332例（85.3%）肌电图检查显示不同程度改善，主要有3类：a.自发电位减少：122例出现不同程度此项改变。b.300例出现数量不等的肌肉募集波型由低级向高级转变，电位密度明显增加，如单纯相转变为混合相；混合相转变为干扰相。c.移植前未能测到运动单位电位而术后新出现者51例。②51例（13.2%）肌电图无变化，移植前后肌电图大致相同。③6例（1.5%）比移植前差，主要变化为自发电位增多或肌肉大力收缩时募集波型减弱。 结论：嗅鞘细胞移植近期能改善肌萎缩侧索硬化患者的神经功能，延缓病情的进行性恶化。肌电图检测用于胚胎嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化疗效评定具有较好的应用价值，通过移植前后肌电图改变可以较客观反映治疗的有效性。     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.     

胚胎嗅鞘细胞移植改善晚期脊髓损伤病人生存质量的研究

1对象与方法2005年8月-2006年8月,本科治疗晚期脊髓损伤病人55例,其中男47例,女8例;年龄6-65岁,平均36.3岁。伤后时间6-336个月,平均89个月。损伤节段:C段27例,T段27例,T12-S11     

时间减影法与双能量减影法在脑血管成像中的对比观察

目的 比较双能量减影法与时间减影法CT脑血管成像的图像质量和扫描剂量,评价两种方法的优劣及临床应用价值.方法 对60例临床怀疑颅内血管性病变患者行CT血管成像检查,包括平扫及增强扫描,增强扫描采用双能量程序,即A球管采用80 kV,B球管采用140 kV,一次性扫描采集两个不同能量的数据.数据后处理:①用平扫+80 kV增强数据行传统去骨数字减影(时间减影法);②用80 kV及140 kV两个不同能量的数据行直接去骨减影(双能量减影法).保存减影后数据,完成容积显示(VR)和最大密度投影(MIP).将MIP及VR图像质量分为4级,比较两种处理方法的图像质量和患者所接受的平均有效放射剂量.全部病变结果均经手术或介入证实.结果 ①两种方法均清晰显示所有患者的颈内动脉颅内主干及主要分支,Willis环显示清楚;两种方法总体质量评分值差异无统计学意义(P>0.05);②两种方法均清晰显示24例动脉瘤大小、形态、与载瘤动脉关系、瘤颈及瘤轴指向;4例血管畸形病例均清晰显示异常血管团的形态和范围,动静脉畸形较好显示供血动脉及引流静脉;③时间减影法CTA患者受到的平均有效放射剂量为(26.60±0.50)mSv,双能量CTA的平均有效放射剂量为(22.40±0.50)mSv.结论 时间减影法与双能量减影法CT血管成像均能清晰显示正常颅内血管及血管性病变;双能量减影法患者受到的放射剂量更低.对扫描中不配合患者,双能量减影法去骨效果更好.     

双源CT冠状动脉造影后处理技术:心电图编辑

冠状动脉粥弱硬化性心脏病(冠心病)是一种严重危害人类健康并危及生命的疾病之一,选择性冠状动脉造影(CAG)仍为诊断冠心病的"金标准",但该方法具有一定的创伤性,死亡率和并发症发生率分别达0.15%和1.5%[1],且费用较贵不易为患者所接受,而CT心脏冠状动脉成像技术以其无创性、低风险、低成本成为无创性评价冠状动脉有无狭窄的主要方法.本研究对双源CT(DSCT)冠状动脉造影图像因心率失常造成的阶梯状伪影通过心电图(ECG)编辑,旨在为临床提供符合诊断要求的冠状动脉图像.