Zacopride增强心肌内向整流钾电流(IK1)效应的受体和信号转导通路

目的:探讨5-HT4受体激动剂兼5-HT3受体阻断剂zacopride增强心肌内向整流钾电流(IK1)效应的受体和细胞信号转导机制.方法:应用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞膜IK1电流,分别观察10 μmol/L 5-HT4受体阻断剂 RS23597-190、10 μmol/L 5-HT3受体激动剂间氯苯双胍(m-CPBG)、5 μmol/L PKA 抑制剂 KT5720、5 μmol/L PKC 抑制剂GF109203x 和 5 μmol/L PKG抑制剂 KT5823对zacopride 增强IK1的影响.结果:10 μmol/L 5-HT4受体阻断剂RS23597-190本身可抑制IK1电流,在预先应用RS23597-190的基础上,1 μmol/L zacopride仍可明显激动IK1通道,使其内向电流(-100 mV)增强32.5% (P< 0.05).10 μmol/L 5-HT3受体激动剂m-CPBG对IK1电流无明显影响,也不能逆转1 μmol/L zacopride对IK1的增强效应(P> 0.05).此外,5 μmol/L PKA 阻断剂 KT5720能显著抑制1 μmol/L zacopride对IK1的增强效应(P< 0.05),而PKC 阻断剂GF109203x和PKG阻断剂KT5823则对1 μmol/L zacopride的效应无明显影响(P> 0.05).结论:Zacopride对 IK1的增强作用可能经由PKA介导的信号转导通路,而不依赖于5-HT3和5-HT4受体.     

肾上腺髓质素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用及其信号转导机制

目的: 研究肾上腺髓质素( adrenomedullin, ADM)抑制豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的信号转导机制。方法: 应用全细胞膜片钳技术,记录应用ADM(1-100 nmol·L^-1)前后L-型钙电流(I_Ca,L),以及分别记录应用ADM特异性受体拮抗剂ADM_22-52(100 nmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶A (PKA) 特异性拮抗剂H-89(10 μmol·L^-1) + ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶C (PKC) 特异性拮抗剂PKC_19-36(10 μmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、PKC特异性激动剂PMA(1 μmol·L^-1)前后I_Ca,L。结果: ADM(1-100 nmol·L^-1)浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,并可被ADM_22-52(100 nmol·L^-1)完全阻断;H-89(10 μmol·L^-1)对ADM抑制I_Ca,L的作用无影响。PKC_19-36(10 μmol·L^-1)可完全阻断ADM 对I_Ca,L的抑制效应,且PMA(1 μmol·L^-1)可模拟ADM 对I_Ca,L的抑制效应。结论: ADM作用于特异性ADM受体可浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,此作用有可能与PKC激活相关。     

胡椒碱减轻H2O2 引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流及超速激活延迟整流钾电流的异常改变

目的: 研究胡椒碱对H₂O₂引起的兔单个心房肌细胞内向整流钾电流(I_K1)及超速激活的延迟整流钾电流(I_KUr)异常的影响。方法: 采用全细胞膜片钳技术分析50 μmol/L H₂O₂对兔单个心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响,并研究预先应用7 μmol/L胡椒碱对其的保护作用。结果: 7 μmol/L胡椒碱对正常兔心房肌细胞I_K1和I_KUr及其通道动力学无显著影响。在50 μmol/L H₂O₂作用下,兔心房肌细胞I_K1峰值由(-148.2±16.7)pA/pF降低至(-64.2±9.8)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线上移;而I_KUr峰值由(16.0±2.1)pA/pF降低至(6.1±1.4)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线下移,通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线左移及恢复时间减慢,而且存在频率依赖性特征。预先给予7 μmol/L胡椒碱,明显减轻H₂O₂对I_K1和I_KUr的抑制作用(P<0.01),并可减少H₂O₂对超速激活延迟整流钾通道动力学的异常影响。结论: 胡椒碱可减轻氧化应激对心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响。     

过氧亚硝酸阴离子供体通过蛋白激酶C途径抑制CA1区神经元延迟整流钾电流

目的: 过氧亚硝酸阴离子(ONOO^-)是一种性质活泼的自由基,可引起强的氧化性损伤,介导了一氧化氮(NO)的大部分毒性作用。本研究探讨ONOO^-对脑片海马神经元延迟整流钾电流(I_K)和动作电位时程(APD)的影响及其作用机制。方法: 应用全细胞脑片膜片钳技术记录I_K和动作电位。结果: ONOO^-供体SIN-1可抑制I_K电流峰值,使其激活曲线向超极化方向移动,并可延长APD。脑片预处理PKC抑制剂chelerythrine (2.5 μmol/L)可抑制SIN-1对I_K的作用。PKC激动剂PDBu (6 μmol/L)不仅加强而且模拟SIN-1对I_K的影响。然而,鸟苷酸环化酶(GC)抑制剂ODQ对SIN-1的作用无影响。结论: ONOO^-可能通过PKC-I_K-动作电位信号级联反应作用于海马神经元,并不依赖环磷鸟苷(cGMP)通路,这可能是ONOO^-神经毒性的机制之一。     

家兔陈旧性心肌梗死心室肌细胞钾离子电流的变化

目的:探讨陈旧性心肌梗死(HMI)心律失常的发生机制,观察HMI非梗死区心肌细胞动作电位时程(APD)、瞬时外向钾电流(I_to)、延迟整流钾电流(I_K)和内向整流钾电流(I_K1)的变化。方法: 12只家兔随机分为2组,陈旧性心肌梗死组(HMI)开胸结扎冠状动脉左回旋支,假手术组开胸但不结扎冠状动脉。3个月后应用全细胞膜片钳技术记录非梗死区心肌细胞的APD、I_to、 I_K和I_K1。 结果: (1)HMI组心肌细胞的膜电容明显高于假手术组;(2)HMI组心肌细胞的APD显著延长,并有早期后除极(EAD)出现;(3)HMI组心肌细胞I_to 、I_K,tail和I_K1的电流密度分别为(4.03±0.33)pA/pF、(1.14±0.11)pA/pF和(17.6±2.3)pA/pF,显著低于假手术组的(6.72±0.42)pA/pF、(1.54±0.13)pA/pF和(25.6±2.6)pA/pF(P<0.01)。结论: HMI非梗死区心室肌细胞I_to 、I_K,tail、和I_K1的电流密度的降低是其APD延长和EAD出现的离子流基础,而APD延长和EAD的出现,可能在HMI恶性心律失常的发生中起着重要作用。     

钙通道阻滞剂对大鼠肾上腺嗜铬细胞烟碱受体通道电流的影响

目的:研究钙通道阻滞剂(CCB)对大鼠肾上腺嗜铬细胞(RAMC) 烟碱受体通道电流(I_NIC)的作用。方法: 利用全细胞膜片钳技术,用烟碱(NIC)诱发RAMC的NIC受体通道电流,分别观察硝苯吡啶(NIF)、ω-conotoxin GVIA和ω-agatoxin IVA急性灌洗细胞前后I_NIC的变化。结果: 不同类型和浓度的CCB分别灌洗RAMC ,均能明显抑制NIC所诱发的细胞I_NIC,灌洗5 min时 10 μmol/L NIF、400 nmol/L ω-conotoxin GVIA和100 nmol/L ω-agatoxin IVA对I_NIC的峰值抑制率分别为(61.7±5.1)%、(29.3±7.4)%和(17.6±7.5)%。结论: 不同类型的CCB急性作用于RAMC能明显阻滞NIC所诱发的I_NIC,提示CCB可能通过直接阻滞NIC受体通道来抑制RAMC儿茶酚胺的分泌过程。     

槲皮素抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞T型钙通道的表达

目的: 通过观察原代培养的人脐动脉平滑肌细胞在内皮素(ET-1)作用下对T型钙通道(TCC)的影响,进一步探讨槲皮素(Que)对心血管的保护作用。方法: 原代培养人脐动脉平滑肌细胞,经鉴定于2-3代用于实验。将细胞随机分成对照组、Que组、 模型组和实验组。对照组:不加入任何药物;Que组:加入Que 80 μmol/L培养24 h模型组:加入100 nmol/L ET-1培养24 h;实验组:加入Que培养1 h后,再加入100 nmol/L ET-1共同培养24 h,其中Que的浓度为20、40、80 μmol/L。采用RT-PCR和Western blotting检测TCC的主要亚基α_1G在mRNA和蛋白水平的表达。利用全细胞膜片钳技术,检测TCC电流(I_CaT)。结果: 模型组α_1G mRNA和蛋白的表达均强于对照组和实验组(P＜0.05),模型组I_CaT密度明显大于对照组和实验组(P＜0.01),而对照组和Que组的实验结果无明显差别(P＞0.05)。结论: ET-1诱导人血管平滑肌细胞中TCC的表达和I_CaT的增强,Que能抑制这种增强效应。这可能是Que发挥保护心血管功能的机制之一。     

5-羟色胺对心肌细胞增殖及蛋白激酶C活性的影响

目的：观察5-羟色胺（5-HT）对新生大鼠心肌细胞增殖及蛋白激酶C（PKC）活性的影响，探讨5-HT在心肌肥大发病中的作用。方法：培养乳鼠心肌细胞,应用BCA法测定细胞总蛋白；流式细胞仪测定DNA含量；同位素底物掺入检测PKC活性。结果：5-HT在1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1和100 μmol·L^-1时均显著促进心肌细胞蛋白质和DNA合成，以10 μmol·L^-1剂量时作用最强。5-HT在1 μmol·L^-1和10 mol·L^-1剂量时可加强心肌细胞PKC活性，并促使PKC从胞浆移位到细胞膜，5-HT₂受体拮抗剂mianserin可逆转此作用。结论：5-HT可促进新生大鼠心肌细胞总蛋白和DNA合成，并通过心肌细胞5-HT₂受体激活PKC活性，促使PKC从胞浆移位到细胞膜，提示5-HT可能参与心肌肥大的发生发展过程.     

缺血预处理延缓大鼠心肌缺血引起的细胞间电脱耦联

目的:研究缺血预处理(IPC)延缓心肌细胞间电脱耦联现象及其可能的机制,尤其是线粒体膜ATP敏感性钾通道(mitoK_ATP)在其中的作用。方法:大鼠心脏Langendorff离体灌流,用四电极法测量心肌整体阻抗(R_t),监测R_t在心肌缺血后的变化来判断心肌细胞发生电脱耦联的时间。结果:(1)对照组心肌缺血40 min后复灌30 min,心肌细胞间电脱耦联发生平均时间为(13.29±0.95) min;(2)IPC可以明显延迟电脱耦联的发生时间、促进心肌缺血复灌后收缩功能的恢复;(3)IPC前给予mitoK_ATP特异阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD,100 μmol/L)取消了IPC的心脏作用;(4)MitoK_ATP特异开放剂diazoxide(60 μmol/L)预处理可以模拟IPC延迟电脱耦联、促进心肌收缩功能恢复;(5)Diazoxide的IPC模拟作用能被5-HD取消,也能被L型钙通道特异阻断剂verapamil(2.0 μmol/L)和自由基清除剂N-(2-mercaptopropionyl)glycine(300 μmol/L)取消。结论:IPC可以通过激活mitoK_ATP延缓大鼠心肌缺血造成的细胞间电脱耦联和改善心肌收缩功能。     

扎考必利对哇巴因诱发的成年大鼠心律失常的抑制作用

目的:观察内向整流钾通道激动剂扎考必利(zacopride)对哇巴因(ouabain)诱发的成年大鼠心律失常的影响,并探讨其电生理机制。方法:利用ouabain建立成年大鼠离体和在体心律失常模型,观察zacopride对各类心律失常的作用。应用全细胞膜片钳技术,观察zacopride对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(I_(K1))、静息膜电位(RMP)及延迟后除极(DADs)的影响。结果:浓度为1μmol/L的zacopride使ouabain诱发的离体心脏期前收缩个数、室速和室颤持续时间及发生率均显著降低(P0.05)。在麻醉大鼠,15μg/kg的zacopride使ouabain诱发的期前收缩个数、室速和室颤持续时间及发生率均显著降低(P0.05)。Ouabain使I_(K1)明显减小(P0.05),而0.1~10μmol/L zacopride可部分恢复甚至完全逆转ouabain对I_(K1)的抑制作用,其中1μmol/L为最大效应浓度。Ouabain使RMP减小(P0.05),应用zacopride(0.1~10μmol/L)后,RMP呈不同程度地增大,zacopride在1μmol/L时达最大效应浓度,使RMP增大至接近正常水平。1μmol/L的zacopride可有效抑制ouabain诱发的成年大鼠心室肌细胞DADs,使其发生率由91.67%下降至12.50%(P0.05);在灌流液中加入1μmol/L BaCl_2后,DADs再次出现。结论:内向整流钾通道激动剂zacopride对ouabain诱发的成年大鼠室性心律失常具有明显抑制作用,其机制与zacopride适度增强I_(K1)、使RMP负值增大并抑制DADs有关。     

尿本周氏蛋白及转化生长因子β1对肾近端小管上皮细胞增殖的影响

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周氏蛋白(BJP)及转化生长因子β₁(TGF-β₁)在体外对肾近端小管上皮细胞(PTC)增殖的影响。方法:将自MM患者尿中提取的λ型BJP和/或TGF-β₁与大鼠NRK.52E株PTC共同培养, 用[H³]TdR掺入研究PTC增殖。并用ELISA法测定BJP与PTC培养上清液中的TGF-β₁含量。结果:①100-800μmol/LBJP以浓度依赖方式抑制PTC增殖, 当浓度≥400μmol/L与对照组比较有显著差异(P＜0.05), 当加入2μg/LTGF-β₁共同培养, 在BJP浓度为400μmol/L时, [H³]TdR掺入低于单用BJP(P＜0.05), 但与单用BJP浓度为800μmol/L无显著差异;②100-800μmol/LBJP与PTC共同培养液中的TGF-β₁含量均增加, 尤以BJP为400μmol/L明显大于对照组(P＜0.05);③外源性0.5-10μg/LTGF-β₁与PTC共同培养, [H³]TdR掺入随TGF-β₁浓度增加而减少。结论:MM患者λ型BJP可抑制PTC的增殖, 其部分机理可能与其促进对PTC增殖也有抑制作用的TGF-β₁过度产生有关。     

抗心脏AT1受体抗体对大鼠心室肌细胞离子电流的影响

目的: 探讨AT₁受体抗体在心脏疾患发病中的作用,观察AT₁受体抗体对大鼠心室肌细胞几种主要离子电流的影响。方法: 按照人AT₁受体细胞外第二环表位肽段合成AT₁受体抗原肽段,以此肽段对大鼠进行主动免疫,获取抗AT₁受体抗体;应用全细胞膜片钳技术,测定大鼠心室肌细胞L型Ca²⁺通道电流(I_Ca-L)、钠－钙交换电流(I_Na/Ca)、瞬时外向钾电流(I_to)与内向整流钾电流(I_K1)。结果: 抗AT₁受体抗体IgG可剂量依赖性地增加I_Ca-L和I_Na/Ca,而减小I_to和I_K1。以上各项指标与对照相比,均有显著差异。上述效应与AT₁受体激动剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对这些电流的作用是一致的,并且可被AT₁受体选择性拮抗剂氯沙坦所阻断。结论: 心脏AT₁受体抗体对心肌细胞离子电流具有显著的激动剂样效应,可以促进心肌细胞钙离子内流,而影响心脏的活动。这可能是该抗体参与心脏疾患发病的因素之一。     

血管紧张素Ⅱ对心房颤动患者外向钾电流的作用

目的：研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心房颤动(AF)患者心房肌外向钾电流的作用及其受体机制。方法: 采用急性酶解法获取游离心房肌细胞，应用膜片钳全细胞技术记录外向钾电流。结果: (1) 在钳制电位-10 mV~+50 mV时, AF组瞬时外向钾电流(I_to1)密度明显低于窦性心律(SR)组（P<0.01），而持续性外向钾电流（I_sus）密度与SR组无明显差异。(2) 以0.1 μmol/L AngⅡ灌流后，在钳制电位0 mV~+50 mV时，SR患者的Ito1密度明显低于灌流前（P<0.01），其动力学特性没有改变，AngⅡ对AF组I_to1的抑制作用明显低于SR组 (P<0.01)。0.1 μmol/L AngⅡ对两组I_sus没有影响。(3) AngⅡ对Ito1的抑制作用可逆，10 μmol/L缬沙坦（valsartan）以及1 μmol/L沙拉新(saralasin)均能完全消除0.1 μmol/L AngⅡ对Ito1的抑制，以10 μmol/L valsartan灌流后，膜电位+50 mV时I_to1的电流密度增加（22.46±4.30）%。结论: AngⅡ通过Ⅰ型受体（AT₁R）介导，明显抑制心房肌细胞膜I_to1，是AF患者心房肌瞬时外向钾通道电重构的机制之一。     

Bcl-2基因反义核酸增强三氧化二砷对NB4细胞凋亡效应

目的:研究和探索bcl-2基因反义核酸(bcl-2ASODN)是否能提高三氧化二砷(As₂O₃)对NB4白血病细胞的凋亡效应。方法:采用微量细胞培养的方法,观察反义核酸、砷剂单独以及反义核酸、砷剂联合培养NB4细胞的生物效应和凋亡形态变化;用免疫组化的方法,结合流式细胞技术,测定NB4细胞的DNA和Bcl-2蛋白的变化。结果:As₂O₃(0.25μmol/L)+bcl-2ASODN(10.0μmol/L)联合诱导NB4细胞凋亡作用显著强于单用As₂O₃(0.25μmol/L)或bcl-2ASODN(10.0μmol/L)(P＜0.01)。流式细胞仪检测显示,联合用药Bcl-2蛋白表达亦明显少于反义核酸、砷剂单独给药组(P＜0.01)。结论:bcl-2基因反义核酸能明显提高和显著增强As₂O₃对NB4白血病细胞的致凋亡效应。     

小鼠神经元中CCK8与EGF协同作用的初步研究

目的: 探讨八肽胆囊收缩素(CCK₈)与表皮生长因子(EGF)在神经元信号转导中的交叉对话(cross-talk)及可能存在机制,并对CCK₈与EGF的协同作用进行初步研究。方法: CCK₈刺激表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化的受体类型分析:培养的乳小鼠神经元随机分为对照组(等量的DMEM培养基)、CCK₈刺激组(10^-7 mol/L)、CCK_A受体拮抗剂L364 718组、CCK_B受体拮抗剂L365 260组以及L364 718+L365 260联合组(浓度均为10^-8 mol/L),拮抗剂加入10 min后再给予CCK₈,作用5 min后收集细胞提取蛋白,Western blotting检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白表达量的变化;CCK₈与EGF对神经元EGFR磷酸化状态的影响和CCK₈与EGF协同作用功效分析:培养的乳小鼠神经元随机分为对照组、CCK₈(10^-7 mol/L)组、EGF(40 μg/L)组以及CCK₈+EGF组,药物作用5 min后终止反应,处理和分析方法同前,同时通过MTT法检测各组神经元培养不同时间(24、48、72、96 h)后细胞的生长活性。结果: (1)2种CCK受体拮抗剂均可降低EGFR蛋白的磷酸化水平,其中A型受体拮抗剂的作用明显强于B型,2种拮抗剂同时作用对EGFR蛋白磷酸化水平的降低作用更为明显;(2)CCK₈和EGF分别刺激神经元后,EGFR的磷酸化水平均增强,但CCK₈+EGF刺激后表现更为显著;(3)CCK₈与EGF联用对增强神经元生长活性和延长其存活时间的作用较两药单独作用效果更为明显(P<0.05)。结论: (1)CCK_A和CCK_B受体均介导了CCK₈激活EGFR磷酸化的信号转导途径,但A型受体发挥了更为重要的作用;(2)CCK₈与EGF信号转导途径之间存在着cross-talk;(3)CCK₈与EGF可能通过信号转导的cross-talk协同促进小鼠神经元的生长与存活。     

中枢给予5-羟色胺2C受体拮抗剂对DOCA高血压大鼠血压的作用

目的: 本实验是为了证实中枢神经系统的5-HT_2C受体是否参与了血压的调节和高血压的发病。方法: 使用SD造模DOCA高血压大鼠, 通过植入右侧脑室的不锈钢导管, 用微型渗透泵以恒定速率慢性脑室输注选择性5-HT_2C受体拮抗剂RS102221, 观察拮抗中枢神经5-HT_2C受体后对DOCA高血压大鼠血压的影响。另一个实验使用SD大鼠, 慢性脑室输注选择性5-HT_2C受体促进剂MK212, 以及MK212和RS102221同时输注, 以进一步证实5-HT_2C受体对大鼠血压的作用。结果: 脑室输注RS102221能减低DOCA大鼠血压的发展, MK212能使SD大鼠发展为高血压, 而同时使用RS102221的SD大鼠血压则保持正常。结论: 中枢神经系统5-HT_2C受体参与DOCA大鼠血压的调节和高血压的发病。     

远志皂苷元对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞的保护作用

目的: 观察远志皂苷元(senegenin,Sen)对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的影响并初步探讨其作用机制。方法: 采用上丘荧光金逆行标记RGCs后,体外原代RGCs混合细胞培养,随机分为control组、H₂O₂组、Sen+H₂O₂和Sen组。检测带荧光金荧光细胞的活力。同上述分组处理视网膜,用Hoechst 33258 染色后观察视网膜细胞核形态的变化,Western blotting检测视网膜细胞cleaved caspase-3、细胞色素C及Bcl-2蛋白的表达。结果: 与control组比较,Sen浓度在10、20和40 μmol/L时, RGCs活力无明显变化(P>0.05),但Sen浓度达到80和160 μmol/L时,RGCs活力明显下降,差异显著(P<0.01)。25、50、100和200 μmol/L H₂O₂明显降低RGCs活力(P<0.05)。Sen浓度在10、20和40 μmol/L时,对50 μmol/L H₂O₂损伤的RGCs有较好的保护作用(P<0.05),其中40 μmol/L Sen保护作用最为明显。Hoechst 33258染色表明Sen可以减少H₂O₂引起的视网膜细胞凋亡。Western blotting结果表明Sen促进Bcl-2蛋白的表达,降低线粒体细胞色素C的释放,下调cleaved caspase-3的表达。 结论: Sen保护RGCs对抗氧化应激引起的损伤,其机制可能与其增强Bcl-2蛋白表达和减少氧化应激引起的细胞凋亡有关。     

全反式维甲酸对人胚肺成纤维细胞增殖及α-SMA表达的影响

目的: 研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚肺成纤维细胞(HFL-I)增殖与分化的影响。方法: 体外培养HFL-I, MTT法检测不同浓度ATRA(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L)作用3 d对HFL-I增殖能力的影响。5 μg/L 转化生长因子β₁(TGF-β₁)刺激0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达,刺激0 d、1 d、3 d、5 d后,Western blotting法检测α-SMA蛋白表达。不同浓度ATRA干预,24 h后RT-PCR方法检测α-SMA mRNA表达,3 d后用Western blotting方法检测α-SMA蛋白表达。结果: (1) MTT法检测显示不同浓度ATRA以浓度依赖性方式抑制HFL-I细胞的增殖(P<0.05)。(2)5 μg/L TGF-β₁诱导后,HFL-I细胞中α-SMA mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05)。(3) ATRA以浓度依赖性方式下调TGF-β₁诱导的α-SMA mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论: ATRA能够抑制HFL-I细胞的增殖和TGF-β₁诱导的分化,该作用可能是通过下调α-SMA mRNA和蛋白的表达实现的。     

转铁蛋白结合镱跨膜转运及镱对U-87MG细胞增殖的影响

目的:研究转铁蛋白/转铁蛋白受体转运系统对转铁蛋白结合镱(Yb₂Tf)跨膜转运进入神经胶质瘤U-87MG细胞,以及转铁蛋白结合镱和非转铁蛋白结合镱对U-87MG细胞增殖的影响。方法:细胞培养及ICP-MS镱测定法。结果:随Yb₂Tf浓度增加,细胞镱摄入量增加。当浓度达2μmol/L时,细胞摄取镱基本达到饱和状态。细胞摄入镱量也随镱:apoTf摩尔比增大而增加,当摩尔比达到1.5时,摄入量达到最高水平。0.4μmol/LYb₂Tf可显著抑制U-87MG细胞增殖,而Yb³⁺浓度高达10μmol对细胞增殖仅有轻微影响。结论:转铁蛋白/转铁蛋白受体介导的膜转运可能是镱跨越U-87MG细胞的机制之一。转铁蛋白结合Yb³⁺可以有效地抑制U-87MG细胞的增殖。     

The properties of the inward rectifier potassium currents in rabbit coronary arterial smooth muscle cells

In freshly-isolated, single, smooth muscle cells of rabbit coronary arteries, an inward rectifier K⁺ current [I _K(IR)] was identified using the whole-cell voltage-clamp technique. The current/voltage (I/V) relationship of I _K(IR) showed strong inward rectification with a very small outward current when the smooth muscle cells were dialyzed with a pipette solution containing Mg²⁺. However, dialyzing the cells with a nominally Mg²⁺-free pipette solution revealed a significant outward current hump in the I/V relation of I _K(IR), suggesting that the strong inward rectification of I _K(IR) is partly due to the inhibitory effects of internal Mg²⁺. I _K(IR) was unaffected by tetraethylammonium (1 mM), 4-aminopyridine (1 mM), or glibenclamide (1 μM), but was inhibited by extracellular Ba²⁺ with a concentration of 0.87 μM eliciting half-maximal inhibition at –120 mV. I _K(IR) induced in rabbit coronary smooth muscle cells declined during very negative hyperpolarizing steps, due largely to a block by external Na⁺. I _K(IR) was inhibited by α₁-adrenergic stimuli. Methoxamine, an α₁-adrenergic agonist, concentration dependently inhibited I _K(IR) in the presence of the β-adrenergic antagonist propranolol. The methoxamine concentration required for half-maximal inhibition was 205 μM. We conclude that inward rectifier K⁺ current is present in rabbit coronary smooth muscle cells and that it shares many properties with the inward rectifier K⁺ current described for other cell types. Received: 2 February 1999 / Accepted: 24 March 1999