pEGFP-HSP70重组质粒的构建及其在大鼠神经干细胞中的表达*

 目的：构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达。方法：采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70（HSP70）基因的全序列cDNA,并克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2上, 经EcoRⅠ、BamHⅠ酶切及测序分析对重组质粒pEGFP-HSP70进行鉴定。采用Nucleofector转染技术将重组质粒pEGFP-HSP70转染至胎鼠神经干细胞中。结果：(1) 胎鼠HSP70 cDNA序列被正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C2中, 成功构建重组大鼠pEGFP-HSP70质粒。荧光强度检测空质粒转染组（pEGFP-C2组）、pEGFP-HSP70组与对照组相比显著升高（P<0.01）;pEGFP-HSP70组内24 h的荧光强度与7 d（P<0.05）、14 d（P<0.05）和21 d（P<0.01）相比降低明显。(2) 转染后HSP70的表达在1 d（P<0.05）、7 d（P<0.01）和14 d（P<0.01）与对照组相比均明显升高。结论：神经干细胞可直接作为基因靶细胞, 能有效地表达重组质粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神经干细胞中的表达与转染时间密切相关。     

来自成体人胚胎神经干细胞和多巴胺神经元的基因表达谱

神经干细胞具有自我更新及多能性的特点,是理想的移植细胞来源,可用于治疗神经退化损伤性疾病如帕金森病。Ma-rei等用Agilent公司和Illumina公司的全人类基因组寡核苷酸微阵列芯片比较了人胚胎神经干细胞在培养的某单一时间点的基因表达谱,并与富含多巴胺神经元的成年黑质部位的尸检组织进行对比。在这两种检材中鉴定了13 525个上调基因,其中     

活化的星型胶质细胞生成Aβ对阿尔茨海默病的影响

在阿尔茨海默病(AD)发病机制中,Aβ起着中心作用。尽管神经元是大脑中Aβ的主要来源,但星型胶质细胞的数量至少是神经元的5倍,因此在AD中星型胶质细胞产生的Aβ,即使是低水平的,也起着重大的作用。此外,活化的星型胶质细胞可使Aβ生成明显增加。位点APP裂解酶1(BACE1)裂解APP导致发Aβ的生成。为了探索是否促炎症细胞因子或者Aβ42     

大脑高丰度miRNA在恶性胶质细胞瘤中表达减少引起对死亡基因的靶向调控

恶性胶质细胞瘤是一种高侵袭性恶性肿瘤。杜克大学医疗中心的研究人员通过高通量测序列全面分析表达于恶性胶质细胞瘤及非肿瘤大脑组织中的微小RNA(microRNAs,miRNAs)。他们鉴定了超过400种不同的细胞内miRNAs前体。所有被分析的样品中都未检测到已知的病毒miRNAs。聚类分析显示在恶性胶质细胞瘤中多种miRNAs包括miR-128、miR-     

远志皂苷元对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞的保护作用

目的: 观察远志皂苷元(senegenin,Sen)对氧化应激损伤的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的影响并初步探讨其作用机制。方法: 采用上丘荧光金逆行标记RGCs后,体外原代RGCs混合细胞培养,随机分为control组、H₂O₂组、Sen+H₂O₂和Sen组。检测带荧光金荧光细胞的活力。同上述分组处理视网膜,用Hoechst 33258 染色后观察视网膜细胞核形态的变化,Western blotting检测视网膜细胞cleaved caspase-3、细胞色素C及Bcl-2蛋白的表达。结果: 与control组比较,Sen浓度在10、20和40 μmol/L时, RGCs活力无明显变化(P>0.05),但Sen浓度达到80和160 μmol/L时,RGCs活力明显下降,差异显著(P<0.01)。25、50、100和200 μmol/L H₂O₂明显降低RGCs活力(P<0.05)。Sen浓度在10、20和40 μmol/L时,对50 μmol/L H₂O₂损伤的RGCs有较好的保护作用(P<0.05),其中40 μmol/L Sen保护作用最为明显。Hoechst 33258染色表明Sen可以减少H₂O₂引起的视网膜细胞凋亡。Western blotting结果表明Sen促进Bcl-2蛋白的表达,降低线粒体细胞色素C的释放,下调cleaved caspase-3的表达。 结论: Sen保护RGCs对抗氧化应激引起的损伤,其机制可能与其增强Bcl-2蛋白表达和减少氧化应激引起的细胞凋亡有关。     

阿尔茨海默病的神经炎症随着年龄的增长而减弱

炎症是阿尔茨海默病(AD)的显著特征。大脑衰老对炎症的作用是有影响的,因此对于年龄发展相关性的疾病例如AD也会发生一定作用。鉴于炎症与AD的临床表现和年龄依赖性的相关关系从未有过研究,荷兰科学家分析了一批年龄为52～     

脑血管病环状RNA的转录后调控及展望

正环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类存在于多种生物体内通过共价键结合的闭合环状非编码RNA。circRNAs性质稳定,不易被核酸酶水解,广泛存在于不同器官组织中并呈现出时空特异性和组织特异性~([1])。近年来,随着现代生物信息学技术的发展,circ RNAs的生成机制及生物学特性已为越来越多的学者所熟知,但其对靶基因表达的调控作用还不甚明朗。根据基因来源的不同,circRNAs可以分     

AD大鼠模型中tau基因缺失引起轴突变性

Tau病变包括各种以细胞内存在tau蛋白聚合物、有进行性痴呆和锥体外系症状为特征的进行性神经退行性病变,如额颞叶痴呆、FTDP-17、PSP、CBD、Pick's病以及阿尔茨海默病(AD)。Tau病变发病机制的一个中心问题是tau蛋白功能障碍如何