丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的 探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)增生和细胞周期的影响.方法 采用不同浓度的VPA(0.5 mmol·L-1、1 mmol·L-1、2 mmol·L～、4 mmol·L-1)作用于HLECs,四甲基偶氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测在不同时间点(24 h、48 h、72 h)VPA对细胞增生的抑制作用;流式细胞仪测定VPA(1 mmol·L-1、2 mmol·L-1)作用于HLECs 48 h后细胞周期分布情况;Western blot测定在VPA(1 mmol·L-1、2mmol·L-1)作用于HLECs 48 h后,细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)在蛋白质水平表达量的改变.结果 MTT检测显示VPA浓度≥0.5 mmol·L-1对体外HLECs增生的抑制作用呈时间和剂量依赖性.VPA作用48 h后,各药物浓度组(0.5 mmol·L-1、1 mmol·L-1、2 mmol·L-1、4 mmol·L-1)细胞生长抑制率分别为11.05%、21.58%、26.67%和38.25%,流式细胞仪检测显示VPA可阻滞HLECs由G0/G1期向s期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.经2 mmol·L-1VPA作用48 h,G0/G1期及S期细胞比例分别为(85.40±3.90)%和(7.35±1.47)%,与阴性对照组[(53.14±1.71)%和(35.31±1.14)%]比较差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot检测发现VPA可促进p21蛋白质水平的表达.VPA处理48 h后,各组平均灰度比值分别为0.582±0.082(1 mmol·L-1)和0.914±0.113(2 mmol·L-1),与阴性对照组(0.303±0.029)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VPA可以通过促进p21表达,使HLEcs阻滞于G0/G1期,最终抑制HLECs增生.     

电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);...     

金雀异黄素对培养的人RPE细胞诱导凋亡作用的研究

目的 研究金雀异黄素(genistein,Gen)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制.方法 0、25、50、100、200μmol·L-1 Gen分别作用RPE细胞24 h;MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期,定量分析凋亡;免疫印迹技术检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated proteinkinases,ERK)、p38MAPK的表达及活性.结果 不同浓度的Gen作用RPE细胞24 h后,细胞生长明显受到抑制,抑制率分别为6.44%、14.71%、28.97%、45.75%;细胞凋亡率明显增高,分别为16.87%、19.44%、23.14%、34.81%;细胞周期表现为S期和G2/M期阻滞,并伴随G0/G1期细胞减少;p-ERK1/2表达下调,p-p38表达下调.ERK1/2的激活与Gen诱导的细胞凋亡呈负相关,p38的激活与凋亡可能也存在一定的关系.结论 Gen可以抑制人RPE细胞的增殖,并诱导其凋亡,存在量效关系,且主要是通过ERK通路发挥生物学效应.     

氯通道阻滞剂NPPB对培养牛角膜内皮细胞增殖的抑制作用

目的观察氯离子通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB]对培养牛角膜内皮细胞增殖的作用。方法实验设5组,对照组,0.1%二甲基硫氧化物DMSO(di mathyl sulfoxide)组,50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1NPPB组。应用MTT比色分析法观察细胞增殖情况,计算细胞存活率。采用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值和细胞存活率较对照组均显著降低,并具有浓度和时间依赖性。经100μmol·L-1NPPB处理48h后,与对照组相比,细胞出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论NPPB能浓度依赖性抑制培养牛角膜内皮细胞的增殖,并使细胞停滞于G1期。     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生和迂移的影响

目的探讨Tumstatin肽对视网膜血管内皮细胞增生和迁移的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法采用MTT比色法观察1mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1、20mg.L-1和40mg·L-1的Tumstatin肽(T8肽)对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增生的影响;采用流式细胞仪检测20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞细胞周期的影响;采用划痕修复实验观察0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽对RF/6A细胞迁移的影响。结果5mg·L-1以上浓度的T8肽对RF/6A细胞增生有抑制作用且呈剂量依赖性,1mg·L-1、5mg.L-1、10mg·L-1、20mg·L-1和40mg·L-1浓度的T8肽抑制率分别为(2.69±1.10)%、(6.58±1.91)%、(16.77±3.05)%、(31.60±7.57)%和(40.05±8.43)%,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。未加入T8肽时,RF/6A处于G0～G1期、S期和G2～M期的细胞比例分别为(43.66±1.37)%、(44.13±0.99)%和(12.21±0.39)%,而加入20mg·L-1的T8肽后则分别为(55.27±0.63)%、(28.51±0.68)%和(16.23±1.00)%,细胞凋亡率也由原来的0增加到(7.18±0.25)%,2组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。培养基中加入0mg·L-1、5mg·L-1、10mg·L-1和20mg·L-1的T8肽后RF/6A细胞24h的迁移距离分别为(248.09±2.28)μm、(175.27±3.22)μm、(120.81±3.59)μm和(44.65±1.83)μm,而48h时则为(393.68±2.21)μm、(341.62±4.27)μm、(254.65±2.93)μm和(118.69±5.96)μm,在同一时段,各组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论T8肽能够抑制RF/6A细胞的增生和迁移,使细胞阻滞于G0～G1期及诱导细胞凋亡是其抑制RF/6A细胞生长的原因。     

曲尼司特对培养兔晶状体上皮细胞的作用

目的 观察曲尼司特(Tranilast)对培养兔晶状体上皮细胞增殖的作用及其对细胞周期的影响。方法 将传代的兔晶状体上皮细胞用含不同曲尼司特浓度的培养液培养，每天计数，绘制细胞生长曲线，收集细胞做流式细胞仪检查。空白培养液培养的细胞做阴性对照，含0．004％丝裂霉素C(MMC)培养液培养的细胞为阳性对照。结果 用180μmol／L的培养液培养细胞时细胞增殖明显受到抑制，随药物浓度增加，细胞增殖受抑制越明显，细胞生长曲线越低平，细胞形态变化不大。经流式细胞术进行细胞周期分析，随药物浓度增加G0／G1期细胞数增多(67．47％～79％)，而S期细胞数减少(21．19％～4．32％)。阳性对照组细胞于48h全部死亡。结论 曲尼司特具有抑制晶状体上皮细胞增殖的效果，且呈浓度依赖性。曲尼司特将细胞抑制在G1期的限制点内。     

nmhaFGF和haFGF 对放线菌素D诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenic human acidic fibmblast growth factor,nmhaFGF)和 haFGF对放线菌素D诱导的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞凋亡的保护作用,同时探讨2种浓度放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡模型的复制条件.方法 用0.25 mg·L-1和0.50 mg·L-1放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡,用琼脂糖凝胶电泳检测2种浓度放线茵素D诱导hRPE细胞DNA断裂情况,并用流式细胞仪检测放线菌素D诱导hRPE细胞的凋亡率,确定诱导hRPE细胞凋亡的条件,分另q以0.02 mg·L-1、0.06 mg·L-1、0.18 mg·L-1、0.54 mg·L-1和1.62 mg·L-1的nmhaFGF和haFGF预作用于hRPE细胞24 h,并设置正常细胞组和凋亡模型细胞组,观察nmhaFGF和haFGF对hRPE细胞凋亡的作用.结果 0.25 nag·L-1和0.50 mg·L-1放线菌素D诱导hRPE细胞凋亡16 h后细胞凋亡率分别为32.68%和53.27%.琼脂糖凝胶电泳结果显示0.25 mg·L-1放线菌素D诱导细胞凋亡条带清晰,而0.50 mg·L-1放线茵素D诱导hRPE细胞凋亡条带模糊,因此0.25 mg·L-1放线菌素D作用hRPE细胞16 h是诱导hRPE细胞凋亡的最佳条件.在nmhaFGF各剂量组中,随着nmhaFGF浓度升高,hRPE细胞凋亡率明显降低,其中1.62 mg·L-1剂量组细胞凋亡率最低,为(11.49±0.50)%;相同浓度haFGF各剂量组细胞凋亡率也呈现不同程度的降低,但随着haFGF剂量升高,凋亡率下降的趋势不如nmhaFcF剂量组明显,在haFGF剂量组中,1.62 mg·L-1剂量组细胞凋亡率最低,为(14.35±1.02)%,nmhaFGF和haFGF对hRPE细胞凋亡率的下降作用经比较差异无统计学意义.结论 haFGF和nmhaFGF都可以发挥对hRPE细胞凋亡的保护作用.该保护作用可能是通过发挥其非促分裂活性实现的.     

蛋白激酶C抑制剂对人角膜基质细胞增殖周期的调控作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)的抑制剂星状孢菌素(ST)对人角膜基质细胞在G1／S时相阶段的调控作用及分子机制。方法 流式细胞仪(FCM)测量PKC抑制剂ST对人角膜基质细胞周期的影响,cyclin／DNA双参数法检测细胞周期蛋白E(cyclin E)蛋白含量。结果 ST使人角膜基质细胞阻滞在G1期,实验组G1期细胞百分比(2．5μg/L ST组为78．4％,5μg/L ST组为90．9％)明显高于对照组(72．4％),并呈现剂量依赖性;cyclin／DNA双参数流式细胞术分析显示ST使G1期细胞cyclin E蛋白水平下降,同时G1期细胞数增加。结论 PKC抑制剂ST能调控人角膜基质细胞的周期,并在G1／S时相发挥其抑制细胞生长的作用。     

基因表达调控物对HXO-Rb44细胞瘤株端粒酶活性的影响

目的　通过检测基因表达调控物全反式维甲酸对HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性及细胞周期变化的影响 ,探讨治疗视网膜母细胞瘤的新途径。方法　将视网膜母细胞瘤株HXO Rb4 4 分为对照组及实验组 ,分别进行体外培养 2 4、48、72h后 ,以PCR ELISA方法检测其端粒酶活性及用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果　实验组与对照组的端粒酶活性有显著差异 (P <0 .0 1) ,实验组的端粒酶活性与药物作用时间之间 ,呈显著负相关 (r =-0 7756,F =3 3 2 16,P <0 .0 1)。实验组细胞周期发生变动 ,即G1期比率上升 ,S期比率下降。结论　基因表达调控物全反式维甲酸可减弱HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性 ,影响其周期变化 ,抑制其增殖     

TNP-470对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用

目的：观察TNP-470对人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞生长的影响。 方法：采用MTT、细胞生长曲线、倒置显微镜形态学观察、荧光染色、流式细胞术等方法观察不同浓度TNP-470对ECV-304细胞形态、细胞增殖和细胞周期的影响。 结果：MTT结果显示：在低浓度（0．2μg／D时,TNP-470对ECV-304增殖无明显抑制作用,从2μg／L开始产生抑制作用,且该抑制作用具有量效关系,IC50值为305μg／L;生长曲线：20,200,2000μg／LTNP-470处理细胞后,细胞增殖被抑制,且具有剂量一时相依赖性;倒置相差显微镜下观察：各时间段对照组细胞生长状态正常,排列整齐呈铺路石样;从2μg/L开始出现细胞增殖抑制现象,随作用时间的延长和浓度增高抑制作用更为明显：2000μg／L组见少部分脱落、悬浮细胞;流式细胞仪分析经20,200,2000μg／L的TNP-470作用24,36h后,细胞被阻滞在G0／G1期,G2／M和S期的细胞数减少（P〈0．05）,细胞分裂受抑制,增殖指数降低。 结论：TNP-470能使ECV-304细胞周期阻滞在G0／G1期,对细胞增殖具有抑制作用。     

低温冷冻对角膜缘干细胞生物学特性的影响

目的 评价低温冷冻保存对体外培养兔角膜缘干细胞生物学特性的影响.设计实验研究.研究对象新西兰白兔.方法 新西兰白兔20只（40眼）,制备2 mm周边角膜和2 mm球结膜的环形浅层角膜缘植片,待形成细胞单层后,将培养的细胞低温冻存1个月,然后复苏培养.将未冻存的细胞和冻存复苏后的细胞采用免疫细胞荧光染色、流式细胞仪检测,鉴定培养细胞的生物学特性,通过倒置显微镜、MTT比色法比较传代培养的角膜缘干细胞低温保存前后的形态结构和特性.主要指标角膜缘干细胞活性及生物学特性.结果 显微镜下观察冻存复苏后的细胞,与未冻存细胞相比,细胞状态差,贴壁时间晚,核浆比变小,形态不规则;免疫荧光细胞染色检测ABCG2单克隆抗体阳性率未冻存细胞为81.7%,低温冻存细胞降至46.9%,差异有统计学意义（P〈0.05）;流式细胞仪检测低温冻存细胞与未冻存细胞角膜缘干细胞占总细胞的比例分别为0.90%和2.43%,差异有统计学意义（P〈0.05）;MTT法检测低温冻存的细胞比未冻存细胞增殖活性降低,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 低温冻存后角膜缘干细胞的活性和生物学特性均受到严重影响,其冻存方法和复苏技术有待进一步改进.     

体外培养的晶状体上皮细胞株的确定及生长、分化规律

目的建立牛、兔、人晶状体上皮细胞的体外培养，进一步认识晶状体上皮细胞生长、分化规律。方法应用组织块培养方法进行３种晶状体上皮细胞的体外培养，经Ｇｉｍｓａ染色，在倒置显微镜下对培养的晶状体上皮细胞的生长、分化规律进行观察。结果培养至６ｗｋ的人胎儿晶状体上皮细胞中有特征性的“晶状体小体”形成；牛、兔晶状体上皮细胞去分化是发生在第３代，而人晶状体上皮细胞在第４代开始出现去分化；它们传代至第８代时生长都趋于停止，出现老化表现；来自人的晶状体上皮细胞生长增殖率与年龄呈负相关关系（ｒ＝－０．９９６）。结论“晶状体小体”的形成可作为确定晶状体上皮细胞株的一项特征性依据，而体外培养的人、牛、兔晶状体上皮细胞具有相同的有限生长潜能，在相同的条件下，牛、兔晶状体上皮细胞的生长增殖速度比人晶状体上皮细胞快，但易于发生去分化；此外，人晶状体上皮细胞的生长增殖率与年龄密切相关，年龄越小，晶状体上皮细胞的生长增殖速度越快。     

尾静脉注射碘酸钠对小鼠视网膜形态结构变化的影响

目的　探讨尾静脉注射碘酸钠（NaIO₃）对小鼠视网膜形态结构的影响。方法　36只昆明小鼠分为4组:对照组、损伤3 d组、损伤7 d组、损伤14 d组。对照组不作任何处理，各损伤组小鼠经尾静脉单剂量注射NaIO₃（35 mg?kg^-1）。在NaIO₃损伤3 d、7 d、14 d后取材，进行视网膜组织铺片和组织切片。利用HE染色、NeuN免疫组织化学染色及 Opn1mw、GFAP、Iba1免疫荧光染色，检测NaIO₃注射后不同时间小鼠视网膜形态结构的改变。结果　HE染色结果显示，损伤3 d后外核层每10 μm长度细胞数由正常水平（31.97±2.27）个下降至（26.21±0.83）个，差异有统计学意义（P<0.05）；损伤7 d后内核层每10 μm长度细胞数由正常水平（12.33±0.16）个下降至（11.39±0.43）个，差异有统计学意义（P<0.05）。NeuN染色结果显示，损伤14 d后视网膜神经节细胞层每100 μm长度视网膜神经节细胞数由正常水平（14.92±1.74）个下降至（11.25±0.09）个，差异有统计学意义（P<0.05）。GFAP染色结果显示，损伤3 d组每200 μm × 200 μm 范围内活化的Müller细胞数由对照组的（16.96±0.85）个增加至（20.42±1.64）个，差异也有统计学意义（P<0.05）。Opn1mw、Iba1染色结果显示，损伤后视网膜视锥细胞外节段变薄、小胶质细胞数增加。结论　尾静脉注射NaIO₃会引起小鼠视网膜形态结构不可逆的损伤，且该损伤具有时间依赖性。     

Magnetic attraction of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's membrane

PURPOSE: To evaluate the feasibility of a novel method of magnetic attraction of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's membrane. METHODS: Cultured rabbit corneal endothelial cells (RCEC) were exposed to spherical iron powder at various concentration ranging 0-100 micro moll(-1). After 24hr, the cell density and morphology were evaluated. RCEC that had been exposed to spherical iron powder (RCEC-iron), were trypsinized and poured onto a culture dish where a neodium magnet was fixated paracentrally. After 24hr, the cell density was measured at the areas with and without a magnet. Rabbits' corneas were cryo-injuried to detach corneal endothelial cells and 1x10(5)/200 micro l RCEC-iron were injected into the anterior chamber. Neogium magnet was fixed on the lid for 24hr to attract RCEC to Descemet's membrane. Each operated eye was observed up to 2 months after the injury. RCEC group (rabbits with cryo-injury and injection of normal cultured RCEC) and cryo group (rabbits with cryo-injury but without injection of RCEC) served as controls. RESULTS: The RCEC-iron density on the dish decreased in the medium containing iron powder of 10 micro moll(-1) or more. When RCEC had been exposed to iron powder of between 5 and 10 micro moll(-1), the ratio of RCEC in the field with a magnet to RCEC in the field without a magnet increased. In the RCEC-iron group, the mean corneal thickness gradually decreased and was significantly less than in the other two groups at 2, 4, and 8 weeks after the cell injection. Fluorescein microscopic examination showed a monolayer of DiI-labelled cells on the Descemet's membrane. CONCLUSION: Magnetic attachment of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's nembrane can be a method of choice for corneal endothelial decompensation.     

Cytotoxic effects of antiproliferative agents on human retinal glial cells in vitro

Purpose: Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is characterizedby the formation of cellular membranes on the detached retina and also in the vitreous. Glial cellscan be found in epiretinal and subretinal membranes from eyes with PVR, proliferative diabeticretinopathy (PDR), idiopathic macular pucker, uveitis and other diseases affecting theretina. Proliferation and contraction of glial cells appears to play a role in the pathogenesisof PVR. This study is designed to inspect the effectiveness of harringtonine, as well as colchicine,daunomycin and fluorouracil, against cellular proliferation of cultured human retinal glial cellsthat might be involved in the retinal and/or vitreous proliferation. Methods: Cultures of human retinal glial cells were preparedusing the enzyme digesting method. Cells that had been in culture for 2–5 passages were usedin this study. Harringtonine (0.063 g/ml 2.0 g/ml), colchicines(0.5 g/ml 16.0 g/ml), daunomycin (0.1 g/ml 3.2 g/ml) and 5-fluorouracil(0.5 g/ml 16.0 g/ml) were added to cultures of human retinal glial cellsand the proliferation rates of the cells were measured by the MTT method. Results: Harringtonine at the dosage of 0.063 g/mlinduced suppression of cellular growth, but the changes were not statistically significant (p > 0.05).At a dosage ranging from 0.125 g/ml to 2.0 g/ml, harringtonine significantly suppressedcellular growth according to the test (p < 0.01). Likewise, other antiproliferativeagents inhibited cellular growth significantly at a dosage from 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(colchicine), 0.2 g/ml to 3.2 g/ml (daunomycin) and 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(5-fluorouracil), but not at 0.5 g/ml (colchicine), 0.1 g/ml (daunomycin) and0.5 g/ml (5-fluorouracil). The ID₅₀ were 0.33 g/ml (harringtonine), 3.11 g/ml (colchicine), 0.79 g/ml (daunomycin) and 5.23 g/ml (5-fluorouracil), respectively.Conclusions: Harringtonine was extremely effective ininhibiting human retinal glial cell proliferation, like other antiproliferative drugs such as colchicine,daunomycin and 5-fluorouracil. Harringtonine, therefore, may be a candidate for further studies regardingthe treatment of experimental PVR.     

干细胞移植在视网膜神经节细胞损伤修复中的应用

进行性视网膜神经节细胞损伤在一些致盲性眼病中屡见不鲜。目前临床上缺乏有效的损伤修复方法,然而最近研究显示干细胞移植为受损视网膜神经节细胞的保护和替代治疗提供了新思路。本文将就干细胞移植为基础的研究进展进行综述。     

曲安奈德体外对人视网膜色素上皮细胞功能和结构的影响

目的:探讨曲安奈德(triamcinolone acteonide,TA)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞功能和活性的影响.方法:通过MTT(四甲基偶氮唑盐比色法),细胞移行实验,细胞黏附实验,RT-PCR检测不同浓度TA(包括含赋形剂的和去除赋形剂的,以及纯赋形剂)在不同时间段对RPE细胞增殖,RPE细胞移行,RPE细胞黏附和线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)损伤的影响.结果:浓度大于0.1g/L含赋形剂和不含赋形剂的TA以及单纯赋形剂对细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).细胞移行实验:0.1g/L浓度TA在3个时间点与含血清对照组相比,对100mL/L血清刺激的RPE细胞的移行有显著的抑制作用(P＜0.05).在24,48h与含血清对照组相比各实验组对RPE细胞的黏附有显著的抑制作用(P＜0.05).不同浓度TA(含赋形剂)与RPE细胞作用24h后,结果mtDNA缺失片段不明显,未见明显差异,长片段明显,各组无明显差异.结论:TA对RPE细胞功能(移行能力,黏附能力,增殖能力)有抑制作用,对RPE细胞mtDNA影响不明显.     

Effects of ambient oxygen concentration on the proliferation and viability of cultured human corneal epithelial cells

Ambient oxygen (O(2)) affects the metabolism and other functions of corneal epithelial cells. The effects of O(2) concentration on the proliferation and viability of corneal epithelial cells in culture were investigated. Simian virus 40-transformed human corneal epithelial (HCE) cells were maintained at 37 degrees C in a humidified incubator containing 5% CO(2) and 95% air. The cells were subsequently transferred to a multigas incubator and exposed to 5% CO(2) and either 1, 21, or 60% O(2) plus 94, 74, or 35% N(2), respectively. Cell proliferation was evaluated by determination of cell number and measurement of the incorporation of bromodeoxyuridine. Cell lysis was quantified by measurement of the release of lactate dehydrogenase. Apoptosis was evaluated by flow cytometric analysis of cells stained with annexin V and propidium iodide as well as by immunoblot analysis of cleavage of caspase-7. The phosphorylation (activation) of Akt was also detected by immunoblot analysis. Hyperoxia (60% O(2)) inhibited the increase in cell number and the incorporation of bromodeoxyuridine apparent in HCE cells exposed to normoxia (21% O(2)). It also induced the release of lactate dehydrogenase, an increase in the proportion of apoptotic (annexin V(+), propidium iodide(-)) cells, the cleavage of caspase-7, and the phosphorylation of Akt. None of these effects was observed in cells exposed to hypoxia (1% O(2)). The amounts of the cleaved forms of caspase-3, 6, and 9 did not differ among HCE cells cultured under 1, 21, or 60% O(2). These results indicate that hyperoxia inhibited the proliferation of, and induced death by apoptosis in, cultured human corneal epithelial cells. The antiapoptotic protein Akt was also activated in cells exposed to hyperoxia, possibly reflecting a protective response to oxygen toxicity.     

正常人结膜杯状细胞的体外培养

目的体外建立人结膜杯状细胞系,观察其形态结构等生物学特征,并观察杯状细胞超微结构。设计实验性研究。研究对象体外培养的人结膜杯状细胞。方法外眼手术中取正常球结膜组织,放入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,以组织块培养法进行培养。通过倒置相差显微镜下细胞形态、特殊组化染色和免疫组化方法鉴定杯状细胞。利用透射电镜观察其超微结构。主要指标细胞形态、结构。结果培养24小时后细胞从组织块向外长出,6￣10天后可形成细胞单层,并可传3￣5代。倒置相差显微镜下可见杯状细胞呈长椭圆形,胞浆中含有黏蛋白颗粒。对阿利新蓝/过碘酸-希夫试剂染色(AB-PAS染色)呈阳性;对杯状细胞特异性中间丝角蛋白-7(CK-7)和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体均呈阳性反应,而对复层非角化上皮细胞特异性中间丝角蛋白-13(CK-13)呈阴性反应。透射电镜下可见离体杯状细胞体积较大,呈长椭圆形,核位于细胞一端,胞浆中充满圆形黏蛋白颗粒,大小不一。传三代后杯状细胞纯度可达80%左右。结论人结膜杯状细胞可在体外培养并传代,并保持在体细胞特性,为进一步研究杯状细胞相关的眼表疾病提供实验室基础。(眼科,2006,15:172-176)