止痛如神汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜ITF基因表达的影响

目的:观察止痛如神汤对溃疡性结肠炎的作用机制。方法:将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、奥沙拉嗪组(西药组)和止痛如神汤组(中药组),每组10只。除正常组外,其余3组均采用TNBS法制备UC大鼠动物模型。造模成功后开始药物干预,持续用药3周后分别取各组大鼠结肠组织,采用免疫组化法检测UC大鼠结肠黏膜ITF的含量。结果:经免疫组织化学法检测,模型组大鼠结肠黏膜ITF棕黄色阳性细胞表达较正常组明显减少,其阳性细胞的数目及平均光密度值皆明显下降,与正常组比较有明显统计学意义(P0.01)。中药组和西药组大鼠在结肠黏膜棕黄色阳性细胞表达较模型组显著升高,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:止痛如神汤有促进TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜ITF基因表达上调的作用,这可能是其抗UC作用的机理之一。     

脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立及四神丸加味的反证效果

目的:探索脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立方法并观察四神丸加味对模型的反证效果。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、三硝基苯磺酸(TNBS)模型组、病证模型组、以方测证组。正常对照组给予普通喂养;TNBS模型组采用TNBS与乙醇复合物灌肠进行造模;病证模型组给予番泻叶、腺嘌呤分阶段灌胃、外因干预、TNBS与乙醇复合物灌肠进行造模;以方测证组在复合因素建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型后予四神丸加味煎剂灌胃。实验结束后观察各组大鼠症状、体征及结肠病理改变,并检测血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平。结果:病证模型组大鼠出现嗜睡懒动,反应迟钝,蜷卧扎堆,毛发疏松粗糙、晦暗无光泽,眯眼弓背,肛周污秽,便形稀溏甚则黏液血便等症状;大鼠体质量明显减轻,饮水量明显减少,肛温下降,显微镜下观察结肠黏膜呈缺损,可见水肿、充血、大量炎症细胞浸润,伴有溃疡灶形成,结肠组织损伤程度评分较高;病证模型组大鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。以方测证组大鼠体质量明显增加,饮水量明显增加,肛温较前升高,结肠黏膜见轻度充血、水肿,有少量炎性细胞浸润;以方测证组大鼠结肠组织损伤程度评分、血清中IL-6、IL-8、TNF-α的浓度均低于病证模型组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:番泻叶、腺嘌呤分阶段灌胃结合环境因素干预、TNBS与乙醇复合物灌肠造模建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型是可行的。四神丸加味能改善溃疡性结肠炎脾肾阳虚型大鼠模型相关症状及体征。     

肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎作用实验研究

目的:研究不同提取方法及给药途径的肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎(Ulcerative Uolitis,UC)的作用。方法:采用灌服番泻叶浸剂加直肠注入2,4,6-三硝基苯磺酸复制脾虚型溃疡性结肠炎模型,灌胃给药或者灌胃给药加直肠给药,观察其对脾虚型溃疡性结肠炎的治疗作用。结果:造模后各组大鼠陆续出现脾虚症状并有大鼠死亡;模型组结肠重量及体重结肠比显著升高,大鼠溃疡数增加,大鼠粪便异常的动物数显著增加,肠黏膜可见溃疡,可见"陷窝脓肿"、"陷窝溃疡"形成,炎症程度较重,可见肠黏膜和黏膜下组织大量炎细胞浸润。给药组给药后,症状明显得到改善,各给药组体重在给药10天及15天后,较造模组增长明显加快,肠腑康胶囊口服+直肠组结肠重量及体重结肠比显著降低;肠腑康胶囊分别提取组体重结肠比显著降低;肠腑康胶囊灌胃+直肠给药组和分别提取灌胃组肠内溃疡个数明显减少;肠腑康胶囊灌胃+直肠给药组和肠腑康胶囊分别提取灌胃组大鼠粪便异常的动物数显著减少。病理组织学检查:口服+直肠组、分别提取组、混合提取组、补脾益肠丸组可显著提高溃疡愈合评分,提示本品对溃疡性结肠炎有较好的治疗作用,肠腑康胶囊给药途径口服+直肠组的作用优于其他两个给药途径和提取方法。结论:肠腑康胶囊(4.8g/kg)对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎有较好的治疗作用,不同给药途径和提取方法的肠腑康胶囊对大鼠脾虚型溃疡性结肠炎的影响不同,其中口服+直肠明显优于其他2个给药途径及方法。     

温阳益气方对脾肾阳虚型UC模型大鼠Th17细胞的影响

目的:观察温阳益气方对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型Th17细胞的影响。方法:40只SPF级Wistar大鼠运用TNBS造模法,成功制备出脾肾阳虚型UC大鼠模型后,随机分为4组:正常组、模型组、温阳益气(WYYQ)组、美沙拉嗪(MT)组。药物干预28 d后取标本。运用HE染色法进行UC大鼠结肠黏膜组织病理学观察,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-17、IL-23的表达;采用实时荧光定量PCR法定量分析结肠组织中RORγt mRNA的表达;采用Western Blot法测定结肠组织中Stat3蛋白的表达。结果:病理切片HE染色后在光镜下观察,可见结肠黏膜水肿、糜烂、出血,黏膜上皮缺损,溃疡灶形成。与模型组相比,WYYQ组和MT组镜下病理组织评分明显降低(P0.05),血清IL-17、IL-23含量明显降低(P0.05),结肠组织中RORγt mRNA的表达明显降低(P0.05),Stat3蛋白的表达明显降低(P0.05)。结论:温阳益气方能明显改善UC模型大鼠的炎症情况和黏膜组织的病理情况,降低血清IL-17、IL-23的含量,降低结肠组织中RORγtmRNA和Stat3的表达。抑制和降低UC模型大鼠结肠组织中Th17细胞的分化,可能是温阳益气方发挥其治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一。     

参榆灌肠方对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜修复的影响

目的:观察参榆灌肠方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织黏膜修复的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,随机分为正常组、模型组、参榆灌肠方组和SASP组,给药10 d后处死,取结肠组织,观察结肠大体形态变化,采用HE染色法观察结肠组织病理学改变,ELISA法检测细胞因子IL-17、TGF-β水平。结果:参榆灌肠方组大鼠体质量增加优于模型组(P0.05),结肠大体形态和病理组织学明显优于模型组;参榆灌肠方组大鼠IL-6水平明显低于模型组,TGF-水平高于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:参榆灌肠方灌肠可减轻溃疡性结肠炎模型大鼠肠道炎症反应,修复结肠黏膜。     

大鼠慢性溃疡性结肠炎模型的建立及操作规范探讨

[目的]建立大鼠慢性溃疡性结肠炎(UC)模型,探讨建立模型的操作规范。[方法]雄性Wistar大鼠,除正常对照(NC)组,其余大鼠用100 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/50%乙醇溶液建立溃疡性结肠炎急性模型,在造模10 d后,当所有模型大鼠便潜血转为"1+"时,随机抽取模型大鼠观察结肠病理组织学改变,剩余模型大鼠随机分为阳性对照(PC)组、UC组,用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液或生理盐水进行致炎诱导结肠炎复发,造模后观察各组大鼠疾病活动指数(DAI),实验终点期处死观察结肠黏膜损伤指数(CMDI)及病理组织学改变。[结果]与正常对照组比较,慢性溃疡性结肠炎组饮DSS后再次出现结肠炎发作,DAI及CMDI评分明显增高(P<0.05),而阳性对照组逐渐好转;病理组织学改变亦有显著差异。[结论]采用TNBS/乙醇溶液首次致炎,用DSS间断进行诱导复发,可以模拟UC急性期与缓解期交替发作的特点,病理组织学改变与人类相似。     

四君子汤对UC模型大鼠的治疗作用及其对紧密连接蛋白Occludin表达的影响

目的:观察四君子汤对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎大鼠治疗作用及其对黏膜上皮细胞紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)表达的影响。方法:SD大鼠实验分为正常组,模型组,阳性药组(柳氮磺胺吡啶肠溶片,SASP,0.4 g·kg~(-1)),四君子汤高、中、低剂量给药组(生药5.6,2.8,1.4 g·kg~(-1)),每组8只。除正常组外,其余各组采用TNBS灌肠法制作溃疡性结肠炎模型,造模24 h后各组分别按设计剂量连续ig给药10 d。观察大鼠饮食、精神状态、疾病活动指数、大便次数与质量等情况,末次给药24 h后,处死动物取结肠,肉眼观察结肠黏膜的病变并进行结肠大体形态损伤评分,取病变部位进行HE染色,光镜下评价黏膜病理损伤指数,免疫组织化学法检测大鼠结肠Occludin蛋白的表达。结果:模型组大鼠DAI评分、结肠形态与组织学损伤评分等均比正常组高,Occludin蛋白表达较正常组低(P0.05),四君子汤与SASP治疗能不同程度减轻TNBS诱导的UC模型对黏膜的破坏,使紧密连接蛋白Occludin表达升高,抑制结肠通透性的增加,保护结肠黏膜屏障功能(P0.05)。结论:四君子汤能有效增加Occludin蛋白表达,促进实验性UC大鼠结肠黏膜屏障功能修复,这可能是其治疗结肠炎的机制之一。     

2,4,6-三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎大鼠模型的建立及评价

目的建立大鼠2,4,6-三硝基苯磺酸(TBNS)溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型。方法:大鼠经结肠注入不同剂量的2,4,6-三硝基苯磺酸,分别于给药后1、3及7 d处死大鼠取出结肠,肉眼观察后进行组织学切片然后镜下观察。结果:各组大鼠体质量于造模3 d后开始下降,50 mg·kg-1组体质量于7 d后开始出现回升,100 mg·kg-1组和150 mg·kg-1组体质量则没有恢复;造模时间不是影响UC(溃疡性结肠炎)损伤程度的主要因素;病理切片结果表明,50 mg·kg-1组可见炎性细胞浸润,未出现肠腺肿胀及黏膜脱落现象,符合UC(溃疡性结肠炎)的病理特征。结论:TNBS造模7 d内,UC(溃疡性结肠炎)的造模成功与否与给药天数无关,而与剂量密切关联,以50 mg·kg-1的大鼠给药剂量最为合适。     

结肠安胶囊对溃疡性结肠炎大鼠免疫机制的影响

目的:探讨结肠安胶囊对溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠IL-8、TNF-a的影响。方法:制备结肠炎大鼠模型,分为模型对照组、结肠安组、SASP组,每组10只。用TNBS复制溃疡性结肠炎模型,连续给药3周。观察实验结束后观察大鼠结肠粘膜损伤指数(CMDI)、粪便隐血(OB)实验并测定大鼠血清IL-8和TNF-a含量。结果:结肠安可减轻结肠炎大鼠的粘膜损伤和潜血程度,各剂量组可显著降低IL-8及TNF-a值。结论:结肠安对对TNBS诱导的大鼠结肠炎有良好的治疗作用,其机理可能与降低IL-8及TNF-a作用有关。     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜PPAR-γmRNA和蛋白表达的影响

目的:观察四神丸对三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇灌肠所致溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠结肠黏膜PPAR-γm RNA和蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法:将Wistar大鼠60只随机分为空白组、模型组、四神丸组(5 g/kg)及柳氮磺吡啶(SASP,0.3 g/kg)组,采用TNBS/乙醇灌肠法复制UC大鼠模型,灌胃给药后肉眼观察结肠大体形态损伤并评分,采用RT-PCR和免疫组化法检测PPAR-γm RNA和蛋白的表达。结果:模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和溃疡形成;与空白组比较,模型组大鼠结肠组织PPAR-γm RNA和蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,四神丸组PPAR-γm RNA和蛋白的表达量升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:四神丸对TNBS/乙醇法所致UC大鼠模型结肠黏膜PPAR-γm RNA和蛋白的表达有上调作用,提示四神丸治疗UC的作用机制可能与调控PPAR-γ相关信号转导途径有关。     

热瘀散对胃肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠MPO的影响

目的:研究热瘀散对胃肠湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠的作用机制。方法:雄性SD大鼠52只,随机分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、热瘀散高剂量组及热瘀散低剂量组。采用复合因素(高脂、高糖饮食加湿热环境)复制胃肠湿热型模型,再用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇法复制UC模型。模型复制后各组大鼠给予相应药物治疗,连续15天,第16天处死,观察大鼠结肠黏膜损伤情况,并检测大鼠结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:模型组大鼠结肠黏膜大体评分、病理组织学变化表明模型复制成功;热瘀散能显著改善结肠黏膜的大体评分;热瘀散高、低剂量及SASP组均可降低大鼠肠组织MPO活性。结论:热瘀散具有降低MPO活性,抑制炎症效应细胞的增殖与活化,减少中性粒细胞浸润,从而减轻炎性反应、促进病变结肠溃疡的修复,对胃肠湿热型溃疡性结肠炎有明显的治疗作用。     

溃结康胶囊对TNBS诱导大鼠结肠炎治疗作用的研究

目的:探讨溃结康胶囊对TNBS诱导大鼠结肠炎的治疗作用.方法:制备TNBS结肠炎大鼠模型,实验设正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组(柳氮磺吡啶,0.50 g/kg)、溃结康给药组(0.64,0.32,0.16 g/kg),采用灌胃方式给药,给药时间从制备模型6 d后开始,连续12天.实验结束后观察大鼠结肠粘膜损伤指数(CMDI)、粪便隐血(OB)、髓过氧化物酶(MPO)活性和粘膜病理组织学情况,并检测结肠组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;胸腺、脾脏称重.结果:溃结康可减轻TNBS结肠炎大鼠的CMDI和OB程度,降低MPO水平,可改善结肠粘膜病理损伤;并可明显对抗胸腺萎缩和脾脏肿大;同时溃结康可明显降低MDA含量,增加SOD和GSH-Px水平.结论:溃结康对TNBS诱导的大鼠结肠炎有良好的治疗作用,其机理可能与抗炎、免疫调节和抗氧化损伤有关.     

汤建光教授治疗溃疡性结肠炎经验

溃疡性结肠炎是一种病因尚不十分清楚的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病,病变主要限于大肠黏膜与黏膜下层。临床表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛。对本病的治疗目前有效的西药是氨基水杨酸类、皮质类固醇激素和免疫调节剂,但疗效欠佳且存在一定的毒副作用。汤建光教授运用中医药治疗溃疡性结肠炎取得了较好的临床疗效。本文介绍汤教授治疗溃疡性结肠炎经验,以期推广。     

清肠化湿方干预治疗对溃疡性结肠炎急性活动期小鼠结肠组织黏膜修复及COX-2表达影响的实验研究

目的:探寻清肠化湿方对小鼠溃疡性结肠炎急性活动期模型结肠组织黏膜修复及COX-2表达的影响,进而分析其可能的作用机制。方法:采用TMBS法制备小鼠溃疡性结肠炎急性活动期模型。实验设对照组、模型组、清肠化湿方低剂量组,清肠化湿方中剂量组,清肠化湿方高剂量组,造模前预防性给药3天,造模后给药3天,分别观察给药结束后小鼠结肠组织黏膜修复及COX-2表达情况。结果:清肠化湿方低、中、高剂量组与模型组比较,结肠组织炎症程度、黏膜糜烂、溃疡等都有所减轻,且各组病理学评分显著低于模型组,有显著性差异;模型组小鼠结肠组织COX-2表达显著增强,清肠化湿方各剂量组可明显降低COX-2表达,清肠化湿方低、中剂量组与模型组比较有显著性差异。结论:清肠化湿方能修复溃疡性结肠炎结肠黏膜,抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠组织COX-2的表达,可能是其疗效的机制之一。     

β-catenin、C-myc表达介导溃疡性结肠炎相关癌变的实验研究

目的:观察溃疡性结肠炎相关癌变结肠黏膜β-catenin、C-myc表达变化,探讨β-catenin、C-myc在溃结癌变中的作用。方法:60只清洁级Balb/c小鼠随机分两组,每组30只,正常组、模型组;除外正常组,模型组采用DMH/DSS复合法制备溃结癌变模型,分别应用光镜检测结肠黏膜组织形态学变化,免疫组化及实时荧光定量PCR检测结肠黏膜β-catenin、C-myc蛋白及其mRNA表达变化。结果:模型组小鼠结肠肉眼可见浆膜层散在、多处息肉状隆起变化,镜下见腺体萎缩、高级别上皮内瘤变,部分癌变,其结肠β-catenin、C-myc蛋白及其mRNA呈高表达特点;与正常组比较,有统计学意义(P0.05)。结论:β-catenin信号突变及下游靶基因C-myc过度转录在溃疡性结肠炎相关癌变发生发展中占据重要地位,调控β-catenin将有望成为防治溃疡性结肠炎相关癌变的靶点。     

藏药湿生扁蕾提取物治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究

目的:观察藏药湿生扁蕾提取物(GTP)对小鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠制作小鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)模型,小鼠ig给予GTP(1.07,2.14,4.28 g.kg-1),连续14 d,观察对小鼠体质量变化、腹泻、结肠黏膜组织形态学及脾脏指数的影响。结果:湿生扁蕾提取物可不同程度地改善由TNBS的乙醇溶液所致UC小鼠体质量下降及腹泻症状,显著降低UC小鼠大体形态学损伤的肠黏膜粘连及其溃疡分值,明显抑制UC小鼠脾脏肿大。结论:湿生扁蕾提取物对小鼠溃疡性结肠炎有较好的改善作用,能减轻结肠局部的病理性损伤。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜泛素表达的影响

目的:观察溃疡性结肠炎(ulcerative coliotis,UC)大鼠模型结肠黏膜泛素基因和蛋白表达的变化,并探讨溃结灵对其的作用,进一步揭示溃结灵防治UC的作用机理。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预。采用逆转录PCR方法检测结肠黏膜泛素基因表达,Elisa方法检测结肠黏膜泛素蛋白的表达。结果:模型组泛素基因相对表达量高于正常组(P0.05);溃结灵中、低剂量组泛素基因相对表达量低于模型组(P0.05)。模型组泛素蛋白相对表达量高于正常组(P0.05);溃结灵中、低剂量组泛素蛋白相对表达量均低于模型组(P0.01,P0.05)。结论:溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜泛素基因和蛋白的表达均有下调作用,其作用机理可能为通过抑制IκB-α的泛素化降解,从而抑制NF-κB的活化,减轻炎症反应。     

苦参素注射液对实验性结肠炎大鼠 结肠黏膜保护机制的研究

目的:研究NOD2在实验性大鼠结肠炎发病机制中的作用,并探讨苦参素注射液对实验性大鼠结肠炎的治疗作用和治疗机制.方法:将40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和苦参素注射液(OMT)组,每组10只.对照组未行造模,其余3组均采用三硝基苯磺酸造模.OMT组大鼠给予苦参素注射液肌肉注射,美沙拉嗪组大鼠给予美沙拉嗪混悬液灌胃,模型组和对照组大鼠均以蒸馏水灌胃,治疗15 d,观察实验大鼠结肠黏膜大体形态及组织病理评分,并用免疫组化检测大鼠结肠黏膜NOD2,NF-KB p65蛋白表达,ELISA检测实验大鼠结肠黏膜IL-6的表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠结肠黏膜NOD2,NF-κB p65蛋白,IL-6表达较对照组明显升高(P＜0.01),美沙拉嗪组、OMT组大鼠结肠黏膜NOD2,NF-κB p65蛋白,IL-6表达较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:结肠黏膜NOD2,NF-κB p65蛋白过度表达,IL-6分泌增多参与了溃疡性结肠炎的发生发展过程,而OMT可以通过抑制NOD2,NF-κB p65蛋白过度表达,降低IL-6分泌,起到减轻结肠黏膜炎症,保护结肠黏膜的作用.