基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4对结肠癌肝转移潜能的影响

目的 探讨趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4对结肠癌肝转移潜能的影响.方法 采用Western-blot法检测不同结肠癌细胞株中CXCR4蛋白及不同组织中SDF-1蛋白的表达,MTT法检测SDF-1及抗CXCR4单抗对结肠癌细胞HT-29增殖能力的影响,体外趋化实验检测HT-29细胞定向迁移能力的变化.建立裸鼠结肠癌肝转移瘤模型,观察CXCR4特异性拮抗剂AMD3100对裸鼠肝转移率和转移瘤数目的 影响.结果 HT-29细胞表达较高强度的CXCR4蛋白,而肝组织表达高强度的SDF-1蛋白.与对照组相比,SDF-1可以诱导HT-29细胞增殖(0.76±0.11 vs0.38±0.06,P<0.05),抗CXCR4单抗对SDF-1的诱导增殖具有显著的抑制作用(0.42±0.08 vs0.76±0.11,P<0.05);SDF-1可促进HT-29细胞的趋化迁移,抗CXCR4单抗可显著抑制SDF-1诱导下HT-29细胞的迁移能力(104.6±18.3 vs 148.8±26.2,P<0.05).AMD3100治疗组裸鼠结肠癌肝转移率显著低于对照组(40% vs 100%,P<0.05),平均瘤结节数目显著低于对照组(7.8±2.6 vs 22.4±8.6,P<0.05).结论 SDF-1/CXCR4生物轴参与了结肠癌肝转移过程,拮抗CXCR4功能可抑制裸鼠结肠癌肝转移,其机制与抑制CXCR4能够有效阻断结肠癌细胞在SDF-1诱导下的细胞增殖和定向迁移有关.     

大鼠肝卵圆细胞的电镜观察及SDF-1/CXCR4轴作用研究

目的 本研究通过应用AMD3100封闭卵圆细胞表面CXCR4受体,从而起到抑制趋化因子SDF-1的生物活性,观察大鼠肝卵圆细胞的生长及SDF-1,CXCR4 mRNA表达情况,探讨SDF-1/CXCR4轴在肝卵圆细胞激活、增殖、分化中所起的作用.方法 建立卵圆细胞增殖模型,分为四组,分别为:2-AAF/PH组,AMD3100/PH组,2-AAF/AMD3100/PH组,PH组,重(150±20)g的Wistar大鼠予2-AAF灌喂,联合2/3肝切除,制作卵圆细胞模型,并通过尾静脉注射AMD3100阻断SDF-1的生物学作用,分别在术后的第3、5、7、10、14、21天6个时间点各处死6只大鼠,取肝脏标本行CXCR4和SDF-1 RT-PCR,检测卵圆细胞CXCR4及SDF-1 mRNA的表达情况,并取第10天肝脏透射电镜检查,观察卵圆细胞的超微结构.结果 给予AMD3100抑制SDF-1作用后,肝脏卵圆细胞数量减少,细胞膜受体CXCR4表达下调,同时SDF-1表达也呈下调趋势.结论 抑制SDF-1活性可以在一定程度上减少卵圆细胞的增殖,SDF-1可以通过自分泌或旁分泌途径激活并促进肝卵圆细胞增殖.     

SDF-1/CXCR4在大鼠肝卵圆细胞增殖过程中的表达及意义

目的研究基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1,SDF-1）及其受体CXCR4、CK18、CK19及AFP在大鼠肝卵圆细胞增殖过程中的表达情况,进一步探讨SDF-1/CXCR4生物学轴的作用。方法选择144只体重180～200g雄性Wistar大鼠,按随机抽签法平均分为4组后分别给予不同的处理,即灌喂2-乙酰氨基芴（2-acetylaminofluorene,AAF）和（或）尾静脉注射CXCR4的特异性抑制剂AMD3100,并联合行部分肝切除术（PH）,因而分别命名为AAF组、AAF/AMD3100组、AMD3100组和PH组。AAF剂量为15mg/（kg&#183;d）,AMD3100剂量为1.25mg/（kg&#183;d）。各组分别于手术后第3、5、7、10、14和21d各处死6只大鼠,取其肝组织行常规组织学观察,采用免疫组织化学染色法检测肝卵圆细胞中SDF-1及其受体CXCR4、CK18、CK19和AFP的表达。结果AAF组大鼠肝组织内见明显的肝卵圆细胞增殖反应且卵圆细胞胞浆CK18、CK19、AFP和SDF-1及其受体CXCR4染色均呈阳性;AAF/AMD3100组大鼠肝卵圆细胞增殖的数量和SDF-1及CXCR4阳性细胞数较AAF组明显减少（P〈0.05,P〈0.01）;AMD3100组及PH组大鼠肝组织均未见到卵圆细胞。结论肝卵圆细胞在增殖过程中表达CK18、CK19、AFP和SDF-1及其受体CXCR4,SDF-1/CXCR4轴可能有刺激肝卵圆细胞增殖的作用。     

结直肠癌细胞株趋化因子受体的表达及其趋化实验

目的 观察结直肠癌细胞株趋化因子受体CXCR4的表达及其趋化实验,探讨CXCR4在结直肠癌转移中的作用.方法 培养结直肠癌细胞株HT-29、SW480,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色、Western blot检测结直肠癌细胞株的趋化因子受体CXCR4表达.采用SDF-1诱导的趋化实验模型检测两种结直肠癌细胞株的趋化活动.结果 免疫组织化学检测每100个HT-29或SW480细胞表达CXCR4蛋白的阳性率分别为48.7%和52.6%,RT-PCR和Western blot检测显示CXCR4呈阳性表达;趋化实验表明区化因子SDF-1处理组的细胞移动计数(HT-29:27.6±3.9;SW480:25.3±4.4)显著高于空白对照组(HT-29:9.6±2.5;SW480:9.8±2.1)和抗体处理组(HT-29:9.1±3.1;SW480:9.3±2.0).结论 结直肠癌细胞株可表达CXCR4,趋化因子SDF-1可以趋化结直肠癌细胞.     

阻断趋化因子受体3途径对结肠癌患者术后局部复发和肝转移影响的研究

目的 探讨趋化因子受体3(CXCR-3)对结肠癌术后局部复发和肝转移的影响.方法 常规培养HT-29细胞,采用RT-PCR、Western-blot方法检测靶向CXCR-3的反义肽核酸(asPNA)对CXCR-3mRNA和蛋白表达水平的变化.建立人结肠癌术后局部复发裸鼠动物模型、人结肠癌术后肝转移动物模型.分别经尾静脉注射asPNA、随机错配肽核酸和生理盐水,分析CXCR-3的asPNA对结肠癌术后局部复发和肝转移的抑制作用.结果 asPNA处理结肠癌细胞后,CXCR-3mRNA和蛋白表达受到明显抑制(P＜0.05).asPNA组与随机错配组和对照组比较,裸鼠结肠癌术后复发率(20%比60%、60%,P＜0.05)、肝转移率(30%比100%、100%,P＜0.05)、平均肝转移瘤数目[(7.6±2.4)比(28.4±9.8)、(26.8±8.6),P＜0.05]均显著降低.结论 CXCR-3的asPNA能够抑制结肠癌术后局部复发和肝转移,其机制可能与其特异性抑制HT-29细胞CXCR-3mRNA和蛋白表达有关.     

基质细胞衍生因子联合外周血内皮祖细胞移植治疗裸鼠肢体缺血

目的 应用基质细胞衍生因子(SDF-1)结合外周血内皮祖细胞(EPCs)移植治疗裸鼠肢体缺血,探讨其促进血管新生的能力.方法 建立裸鼠后肢缺血模型,随机分为缺血对照组、EPCs移植组、SDF-1组、SDF-1联合EPCs移植组及SDF-1联合AMD3100处理后的EPCs移植组.移植第3、7天检测后肢腓肠肌CD34+VEGFR+细胞数,第28天检测缺血区新生血管密度.结果 移植第3天对照组、EPCs组、SDF-1组、SDF-1+EPCs组、SDF-1+AMD3100 EPCs组双阳性细胞数分别为0.00±0.00个/HP、5.30±0.65个/HP、0.00±0.00个/HP、10.31±0.63个/HP及1.86±0.17个/HP;第7天分别为0.00±0.00个/HP、7.05±0.18个/HP、0.00±0.00个/HP、11.81±0.53个/HP及2.83±0.48个/HP,第28天新生毛细血管数分别为3.00 ±0.13个/HP、6.15±0.04个/HP、6.20±0.10个/HP、10.65 ±0.08个/HP、6.21±0.08个/HP.SDF-1可增加缺血区CD34+ VEGFR+细胞浸润数量(P＜0.05),提高新生血管数量(P＜0.05),SDF-1联合外周血EPCs可进一步提高新生血管数量(P＜0.05).结论 SDF-1能够促进EPCs归巢,增强血管形成能力,促进血管新生;AMD3100能够阻断SDF-1的诱导迁移效应.

Abstract：

Objective To explore the effect of stromal cell-derived factor-1 ( SDF-1 ) in combination with transplantation of peripheral blood endothelial progenitor cells (EPCs) for the treatment of nude mice hindlimb ischemia. Methods Hindlimb ischemia model was established in nude mice, mice were then divided into five groups randomly: ischemic control group, peripheral blood EPCs transplantation group, SDF-1 local application group, SDF-1 combined with EPCs group, SDF-1 combined with AMD3100 treated EPCs group. Local CD34+VEGFR+ cells in the hind gastrocnemius were detected at day 3,7 after transplantation. The intensity of neovasculorization were evaluated at day 28. Results The double-positive cells number of control group, EPCs group, SDF-1 group, SDF-1 + EPCs group, SDF-1 + AMD3100 EPCs group were 0.00 ±0.00,5. 30 ±0.65,0.00 ±0.00,10. 31 ±0. 63,1. 86 ±0. 17 at day 3 and 0. 00 ±0. 00, 7.05 ±0. 18,0. 00 ±0. 00,11. 81 ±0. 53,2. 83 ±0. 48 at day 7. The number of new capillaries were 3. 00 ± 0.13,6.15 ± 0. 04,6. 20 ± 0. 10,10. 65 ± 0.08,6. 21 ±0. 08 at day 28. SDF-1 increased the CD34 + VEGFR+ cells (P ＜0. 05) and the number of new vessels (P ＜0.05). SDF-1 combined EPCs further increased the number of new vessels (P ＜ 0. 05 ). Conclusions SDF-1 enhances blood vessel formation and promotes angiogenesis by promoting EPCs homing, which could be blocked by AMD3100.     

β1整合素表达下调对结肠癌肝转移的抑制作用

目的 探讨β1整合素表达下调对人结肠癌细胞(HT-29)肝转移的抑制作用.方法 采用脂质体将β1整合素反义寡核苷酸(ASODN)转染到HT-29细胞内,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测β1整合素的表达.Transwell侵袭室方法检测HT-29体外侵袭转移能力.裸鼠开腹于脾脏被膜下注射转染的HT-29建立肝转移模型,30 d后处死裸鼠,计算肝转移癌的数量与大小,免疫组织化学(SP法)观察转移癌中β1整合素的表达.结果 与对照组比较,实验组β1整合素mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Transwell体外侵袭实验实验组迁移的细胞数明显减少(P<0.05);体内裸鼠肝转移实验组转移癌数量(4.00±0.93)个/只、平均体积(10.10±6.50)mm3/只、平均重量(0.0440±0.0008)g/只、免疫组织化学肝转移癌中β1整合素表达阳性细胞百分率(28.60±3.79)%均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 β1整合素表达下调对结肠癌肝转移具有抑制作用.     

AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶3、9、13水平的影响

目的探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXCR4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)3、9、13水平的影响,明确AMD3100的作用机制。方法取12例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者144块软骨组织(OA软骨组)和12例创伤性截肢患者144块正常软骨组织(正常软骨组)(Mankin评分均为0或1),根据添加培养液不同,每组再分为A、B、C 3个亚组。A亚组含1 000 nmol/L AMD3100及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,B亚组含1 000 nmol/L MAB310及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,C亚组含100 ng/mL SDF-1的DMEM液。体外培养2、4 d后,ELISA法测定培养液内MMP-3、9、13含量,RT-PCR检测软骨组织中MMP-3、9、13 mRNA表达。结果 ELISA法及RT-PCR检测示:同组相同时间点A亚组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著低于B、C亚组(P<0.05)。同一时间点相同亚组OA软骨组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著高于正常软骨组(P<0.05)。结论 SDF-1通过SDF-1/CXCR4信号通路可诱导人关节软骨中MMP-3、9、13的表达和释放;AMD3100可阻断SDF-1/CXCR4信号通路,使软骨细胞MMP-3、9、13 mRNA表达水平及分泌量降低,但AMD3100不能使退变的OA软骨分泌MMP-3、9、13恢复至正常软骨水平。     

SDF-1/CXCR4信号轴调控骨髓间充质干细胞向哮喘小鼠肺组织的迁移

目的：探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）/CXCR4轴在外源性骨髓间充质干细胞（MSC）向哮喘模型小鼠肺组织迁移的作用.方法：无菌条件下取GFP转基因小鼠骨髓MSC,体外扩增,鉴定.采用Transwell培养系统,观察0、50、100、150和200 ng/ml SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100对MSC体外定向迁移的影响.取60只雌性BALB/c小鼠,随机分为6组（n=10）：PBS非哮喘组、MSC非哮喘组、PBS哮喘组、MSC哮喘组、SDF-1处理哮喘组、AMD3100处理哮喘组.哮喘组采用哮喘致敏液0.2 ml（含100 μg卵白蛋白）致敏,并使用卵白蛋白雾化吸入激发哮喘.非哮喘组在致敏和激发时均予以PBS处理.MSC处理组于哮喘激发前移植外源性MSC.SDF-1处理哮喘组在MSC移植前气管内注入SDF-1,AMD3100处理哮喘组注入AMD3100预先孵育的MSC.PBS哮喘组注射等量的PBS液.采用Westernablot和RT-PCR方法检测肺组织中SDF-1的表达水平,通过荧光显微镜观察表达GFP的外源性MSC在哮喘小鼠肺组织中的分布情况,比较SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100干预对MSC向肺组织迁移的影响.结果：Transwell实验显示MSC的迁移水平与SDF-1（0~150军ng/ml）成浓度依赖性.与正常小鼠比较,哮喘小鼠肺组织SDF-1表达增强.与MSC非哮喘组比较,MSC哮喘组小鼠肺部有更多MSC聚集.在哮喘肺组织中增加外源性SDF-1能够促进MSC向肺组织迁移.通过AMD3100阻断MSC的CXCR4可以明显减少MSC向肺组织的迁移水平.结论：SDF-1/CXCR4轴参与了MSC迁移到哮喘小鼠肺组织的过程.     

基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用

目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对神经干细胞(NSCs)迁移的影响.方法 由GFP转基因SD大鼠胚胎脑组织获取NSCs并进行传代培养,免疫细胞化学染色法检测SDF-1特异性受体CXCR4的表达,利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1(0、1、10、50、100、500、1000μg/L)对NSCs定向迁移数量的影响,随后分别使用CXCR4激动剂和阻断剂处理NSCs,再次利用上述方法观察最适浓度SDF-1时NSCs的迁移.结果 成功分离培养得到能够稳定表达GFP的NSCs,且CXCR4在该种NSCs上有表达.体外趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500μg/L时达到最高峰;CXCR4特异性激动剂和阻断剂分别能够增强和减弱SDF-1对NSCs定向迁移的趋化作用.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相互作用,能够对NSCs的定向迁移产生靶向性作用.     

SDF-1/CXCR4介导体外冲击波促进大鼠骨髓间充质干细胞的黏附、迁移作用

目的探讨体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对大鼠骨间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、迁移及成骨分化的影响及SDF-1/CXCR4通路在其中的作用。方法体外试验分四组:空白对照组(Ctrl组)、冲击波组(ESW组)及CXCR4特异性抑制剂AMD3100对照组(AMD组),采用最适宜能力ESW(500脉冲次数、10 kV)处理MSCs,通过黏附率、划痕试验、Transwell试验对比MSCs黏附及迁移能力的差别,通过ELISA检测SDF-1分泌表达及蛋白免疫印迹法检测CXCR4的表达,研究SDF-1/CXCR4通路的作用;体内试验则选取12周龄SD大鼠48只,随机分成Ctrl、ESW及AMD 3组各16只,采用右侧股骨中段骨缺损模型,各组骨缺损处植入载有该组细胞的PLGA支架,AMD组术后接受AMD3100注射(1 mg/kg/day),于术后第4、8周取材,通过HE染色评估骨缺损区域的骨愈合及新生骨形成情况。结果 ESW明显增加了MSCs的SDF-1分泌量及CXCR4受体表达,促进了MSCs的黏附、迁移及骨缺损的愈合,AMD3100可部分抑制ESW此促进作用。结论 ESW可促进MSCs的黏附、迁移能力,并促进骨缺损区域的骨愈合,其分子机制与分泌型蛋白SDF-1及其受体CXCR4的表达相关,此结果为ESW在促进骨愈合治疗中的临床应用提供了理论基础。     

基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4轴经PI3K/Akt通路对胃癌细胞CD133表达的调控作用

目的 观察胃癌中基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4(SDF-1α/CXCR4)轴经由PI3K/Akt信号通路对下游分子CD133表达及其活性的影响.方法 免疫细胞化学染色检测胃癌KATO -Ⅲ细胞株中CXCR4、Akt、p-Akt及CD133的表达.分别用SDF-1α、AMD3100及LY294002作用于胃癌KATO -Ⅲ细胞株,半定量酶链聚合反应(PCR)检测CXCR4 mRNA和CD133mRNA的表达变化,蛋白免疫印迹法检测CXCR4、Akt、p-Akt及CD133蛋白的表达变化.结果 免疫细胞化学染色证实KATO -Ⅲ细胞呈CXCR4、Akt、p-Akt及CD133阳性表达.SDF-1α组中,CXCR4蛋白(0.980±0.083)、p-Akt蛋白(0.770±0.071)及CD133蛋白(0.890±0.078)表达与对照组(0.750±0.042、0.680±0.038、0.720±0.034)比较明显增高(P＜0.05).与对照组(0.540±0.036、0.520±0.034)比较,CD133 mRNA(0.890±0.061)表达明显增高(P＜0.05).AMD3100组与对照组(0.750±0.042、0.680±0.038、0.720 ±0.034)比较,CXCR4蛋白(0.430±0.055)、p-Akt蛋白(0.350±0.050)及CD133蛋白(0.110±0.060)表达显著下降(P＜0.05).LY294002组中,p-Akt蛋白(0.100 ±0.033)、CD133蛋白(0.440±0.055)表达与对照组(0.680±0.038、0.720±0.034)比较显著下降(P＜0.05).同时,与对照组(0.540±0.036)比较,CD133mRNA(0.310±0.021)表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 刺激或抑制SDF-1α/CXCR4轴可经由PI3K/Akt信号通路上调或下调CD133表达.     

SDF-1/CXCR4介导体外冲击波促进骨折愈合中MSCs的成骨分化作用

目的探讨体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对大鼠骨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响及SDF-1/CXCR4通路在其中的作用。方法体外试验中分空白对照组(Ctrl组)、冲击波组(ESW组)及CXCR4特异性抑制剂AMD3100对照组(AMD组),采用最适宜能量ESW(500脉冲次数、10 k V)处理MSCs,通过ELISA检测SDF-1分泌表达,根据茜素红染色及碱性磷酸酶试验结果对比MSCs成骨分化的差别;体内试验则选取12周龄SD大鼠48只,随机分成Ctrl、ESW及AMD 3组各16只,采用右侧股骨中段骨缺损模型,各组骨缺损处植入载有该组细胞的PLGA支架,AMD组术后接受AMD3100注射(1 mg/kg/day),于术后第4、8周取材,通过Micro-CT、H-E染色及免疫组化评估骨缺损区域的骨愈合及新生骨形成情况。结果 ESW明显增加MSCs的SDF-1分泌量及体内外成骨分化作用,AMD3100部分抑制ESW促进作用。结论ESW可明显增加MSCs的成骨分化作用,通过分泌性蛋白SDF-1及CXCR4受体相互作用介导其促进骨缺损区域的新骨形成以促进骨折愈合,此研究为ESW在促进骨愈合临床治疗中的应用提供了理论基础。     

成纤维细胞生长因子5对胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响

目的观察成纤维细胞生长因子5(FGF5)对人胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响。方法利用高表达FGF5的人胰腺癌PANC-1细胞系(北京大学第一医院外科大肠癌实验室提供),通过短发卡RNA(shRNA)稳定转染技术,构建FGF5低表达细胞系PANC-1-FGF5-,并以未转染质粒和转染对照粒的PANC-1细胞作为对照。通过皮下注射各组细胞建立裸鼠皮下种植瘤模型;通过脾脏内注射各组细胞建立肝转移模型,6周后切取皮下种植瘤体并称重,切取肝转移标本,计数肝转移灶数目。单因素方差分析比较各组裸鼠皮下种植瘤质量和肝转移灶个数的差异,Spearman等级相关性分析各组裸鼠皮下种植瘤质量和肝转移灶个数与各组细胞FGF5表达水平之间的相关性。结果蛋白质印迹法(Western blot)法证实FGF5低表达及对照质粒细胞构建成功;PANC-1-FGF5-组皮下种植瘤质量[(0.42±0.19)g]明显低于Pan-1组[(1.35±0.45)g]和PANC-1-Vector组[(1.32±0.35)g],差异有统计学意义(F=18.506,P<0.01);PANC-1-FGF5-组肝转移灶数目[(7.50±4.11)个]明显少于PANC-1组[(26.25±9.78)个]和PANC-1-Vector组[(26.25±9.78)个],差异有统计学意义(F=12.971,P<0.01);种植瘤质量和肝转移灶数与FGF5的表达量成正相关(r=0.818、0.806,P<0.01)。结论FGF5在裸鼠体内能够促进胰腺癌细胞的生长和肝转移能力。     

离体冻伤模型创面愈合过程中基质细胞衍生因子1促表皮干细胞迁移的研究

目的 了解离体皮肤冻伤模型创面愈合过程中,基质细胞衍生因子1(SDF-1)对创缘表皮干细胞(ESC)的运动趋化作用.方法 体外构建三维皮肤等价物全层冻伤模型(创面呈孔形),免疫组织化学染色观察冻伤后3、7 d创缘间质内SDF-1的表达情况.另将冻伤模型分为对照组(创面区添加PBS 50 μL/孔)、SDF-1组(创面区添加100 ng/mL SDF-1,50μL/孔)和AMD3100组[创面区用100 ng/mL AMD3100(50μL/孔)处理30 min后,添加SDF-1 50μL/孔],观察各组创缘中ESC的分布变化.结果 免疫组织化学染色显示,冻伤后3、7 d创缘间质内SDF-1的表达逐渐增加.与对照组及AMD3100组相比,SDF-1组创缘基底层整合素β1阳性细胞数量增多,且部分阳性细胞向上层表皮迁移聚集,创缘ESC数量更多,表皮细胞层数增加.结论 SDF-1促进ESC向创缘迁移聚集参与创面修复,这可能是ESC参与创面修复过程的机制之一.     

CXCR4抑制剂AMD3100抑制结肠癌细胞奥沙利铂耐药的机制研究

目的：探讨CXCR4抑制剂AMD3100对奥沙利铂耐药的影响及其作用机制。方法：构建奥沙利铂耐药细胞HCT116;q-PCR和Western blot检测耐药组与对照组CXCR4表达及PI3K-AKT信号通路磷酸化水平。q-PCR和Western blot检测CXCR4抑制剂AMD3100刺激上述细胞系后PI3K-AKT信号通路磷酸化水平变化。CCK8检测AMD3100抑制CXCR4或联合应用AKT抑制剂LY294002对奥沙利铂耐药细胞的耐药性影响。结果：不同浓度奥沙利铂刺激后,耐药组细胞活性无显著变化,而对照组细胞活性随奥沙利铂浓度增加而显著下降。q-PCR和Western blot检测发现耐药组细胞CXCR4表达和PI3K-AKT磷酸化水平显著上升（P<0.05）。给予CXCR4抑制剂AMD3100后,CXCR4表达和PI3K-AKT磷酸化水平显著下降（P<0.05）。结论：CXCR4通过激活PI3K-AKT信号通路在结肠癌奥沙利铂耐药中发挥作用。AMD3100能够增强耐药细胞对奥沙利铂的敏感性,可能成为对抗结肠癌化疗耐药的潜在治疗药物。     

17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞增生和凋亡的影响

目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamyein,17-DMAG)对人结肠癌HT-29细胞增生抑制及诱导其凋亡的作用.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增生的影响;DAPI染色在倒置荧光显微镜下观察17-DMAG作用于HT-29细胞24 h后细胞核的形态;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率;免疫印迹实验分析Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量-依赖性抑制HT-29细胞增生.0.1μmol/L、0.25μmol/L 、0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L和0.5μmol/L作用于HT-29细胞24 h后,细胞增生抑制率分别为(14.36±0.95)％、(22.17±1.15)％、(28.45±1.16)％、(35.04±1.58)％、(46.85±2.44)％和(57.19±2.06)％;作用48h后,细胞增生抑制率分别为(20.80±1.17)％、(27.55±0.65)％、(33.33±1.23)％、(46.20±4.76)％、(55.45±4.47)％和(61.75±2.72)％;作用72h,细胞增生抑制率分别为(29.62±2.27)％、(39.19±1.74)％、(44.29±2.00)％、(50.66±2.17)％、(58.84±3.18)％和(70.74±2.65)％.DAPI染色倒置荧光显微镜观察0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L与2.5μmol/L的17-DMAG作用HT-29细胞24h,均可见到细胞凋亡的改变.AnnexinV-FITC双染法检测结果显示,正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率(早期+晚期)为(2.72±0.57)％,0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24 h后细胞总凋亡率分别为(5.38±0.46)％、(6.88±0.52)％、(10.44±0.32)％与(17.87±4.66)％,不同浓度组的细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).17-DMAG药物作用HT-29细胞24h,随着药物剂量的增加,cleaved Caspase-3的表达有增加趋势.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增生,诱导其通过Caspase-3途径凋亡.     

咖啡酸苯乙酯对结肠癌细胞JNK-paxillin信号通路的影响

目的:探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)对结肠癌细胞增殖抑制作用及对c-jun氨基酸末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法:体外培养人结肠癌细胞株(HT-29),采用MTT法观察不同浓度的CAPE在不同时间段对HT-29细胞生长的抑制率;不同浓度的CAPE处理HT-29细胞24 h后,用Western blot法检测细胞中JNK及paxillin两种蛋白表达量的变化。结果:4个浓度(2.5,5.0,7.5,10.0μg/L)的CAPE均能明显抑制结肠癌细胞HT-29的增殖,且呈现明显的浓度和时间依赖性(均P<0.01);4个浓度的CAPE均能降低JNK和paxillin蛋白表达水平,且呈明显的浓度依赖性(均P<0.01)。结论:CAPE可在体外抑制人结肠癌细胞HT-29的增殖,机制可能与其降低JNK-paxillin信号通路的活性有关。     

肿瘤靶向性鼠伤寒沙门菌A1-R对人结直肠癌肝转移裸鼠原位移植瘤模型的治疗效果

<正>在结肠癌及其他癌症中,肝转移是最常见的死亡原因。一般来说,肝转移难以治疗。本研究旨在探索鼠伤寒沙门菌A1-R治疗人类结直肠癌肝转移原位裸鼠模型的治疗效果。本研究使用了HT-29人类结肠癌细胞表达红色荧光蛋白(RFP)。     

小檗碱对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡及细胞膜钾通道的作用

目的 观察小檗碱(Berberine,以下简称"Ber")对结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡的作用并探讨其离子通道机制.方法 Ber 0.1～30.0μmol/L处理HT-29细胞.氮蓝四唑盐法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,膜片钳检测延迟整流钾通道[IK(V)].结果 0.1～30.0μmoL/L Ber均可抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),其抑癌率与作用时间及浓度相关;HT-29细胞经Ber处理24 h后,凋亡率明显增高(P<0.05),0.1、0.3、3.0、30.0μmoL/L Ber组凋亡率分别为(7.6±1.8)%、(9.8±2.1)%、(22.3±4.2)%、(40.6±4.5)%,对照组凋亡率为(2.4±1.1)%;0.3、3.0、30.0μmoL/L的Ber能浓度依赖性抑制结肠癌细胞IK(V)(P<0.01),阶跃刺激为+80 mV时,对照组、0.3、3.0、30.0μmol/L Bet组IK(V)分别为(488±42)、(376±22)、(296±25)、(225±34)pA,0.3、3.0、30.0μmol/L Ber处理组IK(V)分别为对照组的(77.16±5.41)%、(61.35±6.09)%、(45.87±7.62)%.结论 Ber具有抑制结肠癌细胞HT-29增殖并诱导其凋亡的作用,此作用可能与Ber抑制肿瘤细胞细胞膜钾离子通道开放有关.