类风湿关节炎患者Th17细胞膜上RANKL的表达及意义

目的探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血和关节液中Th17细胞膜上RANKL的表达水平与RA病情活动程度指标CRP、ESR、RF及DAS28评分的关系。方法用流式细胞术及RT-PCR方法检测RA患者外周血和关节液中Th17细胞膜上RANKL的表达水平。结果 RA患者外周血Th17细胞膜上RANKL表达明显高于健康对照组（P〈0.05）,RA患者关节液中Th17细胞膜上RANKL表达高于RA外周血（P〈0.05）,RA患者外周血Th17细胞膜上RANKL表达与DAS28评分呈正相关性（r=0.36,P〈0.05）。RTPCR结果提示RA患者CD4~＋T上RANKL表达较健康对照组升高（P〈0.05）。CD4~＋T细胞RANKL mRNA水平与IL-17mRNA水平呈显著正相关（r=0.63,P〈0.001）。结论 Th17细胞膜上RANKL表达明显升高,且与病情活动程度显著相关,提示Th17细胞可能参与RA骨破坏过程,在RA的破骨免疫致病机制中可能起重要作用。     

Th17细胞在过敏性哮喘发病中的作用及其与Notch信号通路的关系

目的探讨辅助性T细胞（Th）17在过敏性哮喘发病中的作用及其与Notch信号通路的关系。方法选择过敏性哮喘患儿40例（哮喘组）和体检儿童40例（健康对照组）。采用流式细胞仪检测其Th17细胞比例,实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞Notch1、Notch4、维甲酸相关孤儿核受体（RORγt）mRNA表达水平,ELISA法检测外周血清IL-17水平。过敏性哮喘患儿Notch1mRNA表达水平分别与Th17细胞比例、RORγtmRNA表达水平和IL-17水平进行相关性分析。结果哮喘组Th17细胞比例、Notch1及RORγtmRNA表达水平、IL-17水平均显著高于健康对照组(均P＜0.05),而两组儿童Notch4mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05)。哮喘组Notch1mRNA表达水平与Th17细胞比例、RORγtmRNA表达水平、IL-17水平均呈正相关（r=0.780、0.555和0.636,均P＜0.01）。结论Th17细胞在过敏性哮喘中发挥重要作用,Notch1可能通过影响Th17表达参与过敏性哮喘的病理过程。     

类风湿关节炎患者Th17细胞水平变化的研究

目的分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中T辅助细胞17（T help cell 17,Th17）水平,探讨其在RA中的变化特点及与实验室指标的相关性。方法 32例RA患者及20名健康对照人群,用四色分选流式细胞仪检测外周血Th17细胞,分析RA患者外周血Th17细胞百分数的变化及其与发病的相关性。结果 RA患者外周血Th17水平（1.13±0.85）明显高于健康对照组（0.59±0.36）,P〈0.05;RA患者外周血Th17细胞水平（以其占淋巴细胞的百分比表示）与其相应的血沉、C反应蛋白及DAS28评分呈显著正相关（P均〈0.05）。结论 Th17细胞在RA外周血过度表达,提示Th17细胞在RA的免疫致病机制中可能起重要作用。     

血小板微粒及其表面标记物CD62P、CD154与 类风湿关节炎的相关性研究

目的观察血小板微粒（platelets microparticles, PMPs）在类风湿关节炎（RA）患者关节液和外周血中的表达及其与健康人外周血对照之间的差异,探讨PMPs水平与RA活动指标之间的关系。方法采用流式细胞术检测26例活动期〔疾病活动指数（DAS）28≥3.2〕RA患者外周血和15例健康对照组外周血PMPs含量、PMPs的CD62P 、CD154阳性比率,检测RA患者和15例健康对照组外周血C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACPA）指标,分析PMPs含量与各指标相关性。其中16例有膝关节积液RA患者同时检测配对外周血和关节液PMPs含量及CD62P+PMPs和CD154+PMPs比率。结果①RA患者外周血PMPs含量高于健康对照组（P<0.01）,RA患者外周血PMPs含量高于配对关节液（P<0.01）; ②RA患者外周血CD62P+PMPs比率高于健康对照组（P<0.05）和配对关节液（P<0.05）;③RA患者外周血CD154+PMPs比率高于健康对照组（P<0.01）和配对关节液（P<0.05）;④RA患者外周血PMPs含量与疾病活动性评分DAS28 ( r=0.462, P=0.018)呈正相关,与ESR、CRP、RF、ACPA不存在相关性;而关节液PMPs含量与CRP、ESR、RF、ACPA、DAS28均无相关性。结论RA患者外周血PMPs表达异常,且与疾病活动性有关,提示PMPs在RA疾病活动和关节损害中发挥重要作用。     

类风湿关节炎患者Th17细胞相关细胞因子的表达及临床意义

目的分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血和关节液中T辅助细胞17（Thelp cell 17,Th17）相关细胞因子白介素-6（interleukin-6,IL-6）、白介素-17（interleukin-17,IL-17）水平,探讨其在RA中的变化特点及与实验室指标的相关性。方法用ELISA检测RA患者血清和关节液和正常人血清IL-6、IL-17水平。结果RA患者外周血血清IL-6、IL-17水平明显高于健康对照组[IL-6：（54.1±12.7）pg/mlvs（37.0±13.0）pg/ml,P〈0.05;IL-17：（57.8±15.6）pg/mlvs（47.6±8.5）pg/ml,P〈0.05],RA患者关节液中IL-6、IL-17水平明显高于RA外周血血清组[IL-6：（360.4±54.7）pg/mlvs（54.1±12.7）pg/ml,P〈0.01;IL-17：（82.1±12.5）pg/mlvs（57.8±15.6）pg/ml,P〈0.01]。IL-6水平与红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate,ESR）、C-反应蛋白（C-reactiveprotein,CRP）、类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）呈显著正相关。结论Th17相关细胞因子在RA外周血及关节局部过度表达,提示Th17型细胞因子在RA的免疫致病机制中可能起重要作用。     

溃疡性结肠炎中Th17/Treg细胞联合检测的临床意义

目的 检测溃疡性结肠炎(UC)患者血液中Th17/Treg细胞的比例变化,探讨其在UC发病中的作用.方法 该院2009年6月～2011年6月消化内科诊治的UC患者42例,另取健康对照42例.流式细胞仪检测Th17和Treg细胞的表达百分比;Trizol提取血液细胞总RNA,Real-time荧光定量PCR检测ROR γt和Foxp3基因的表达;ELISA检测IL-6和TGF-β1的表达水平.结果 UC患者血液中出现了Th17细胞比例的升高和Treg细胞比例的降低,相应的Th17/Treg细胞比值从对照组的(0.54±0.18)升高到UC组的(7.84±2.07)(P ＜0.01).ROR γt基因在UC患者中表达上调,而Foxp3基因则表达下调,与对照组相比二者的比值从(0.767±0.084)升高到(1.351±0.114)(P＜0.01).ELISA检测结果表明UC患者外周血中细胞因子IL-6的表达水平显著高于对照组(P＜0.01),而TGF-β1的表达水平显著低于对照组(P＜0.01).结论 UC患者存在Th17/Treg细胞的比例失衡,Th17/Treg细胞比例的失衡,可能参与LD患者免疫功能的紊乱,在UD患者肠道的损伤中发挥着重要的作用.     

辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠外周血和肺泡灌洗液中 IL －17、IL －21及 RORγt 的影响

目的：观察辛伐他汀对吸烟导致慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠外周血及肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（ IL）－17、IL－21及转录因子视黄酸相关孤儿受体γt（ RORγt）表达的影响,探讨辛伐他汀治疗COPD的价值及其作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、吸烟组及治疗组,每组10只。对照组每天自然饮食,不作任何特殊处理。吸烟组及治疗组给予烟雾干预,同时治疗组给予辛伐他汀干预。4个月后,测量大鼠体重、肺功能、计数肺泡灌洗液（ BALF）中白细胞数量及分类,观察各组大鼠肺组织的病理改变,采用酶联免疫吸附（ ELISA）方法对大鼠外周血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白进行检测;应用流式细胞术对外周血及肺实质中CD4＋IL－17＋T细胞（ Th17）进行测定。结果实验结束后,肺功能检测显示吸烟组中动态肺顺应性（ Cdyn ）、呼气容积（FEV0.3）／用力肺活量（FVC）较对照组明显下降,呼气相气道相应阻力（Re）、吸气相气道相应阻力（Ri）明显升高。治疗组各项指标相对于吸烟组均有所改善。 ELISA 检测显示,吸烟组血浆及BALF 中IL －17、IL －21和RORγt蛋白表达明显升高;治疗组血浆及BALF中IL－17及RORγt蛋白的表达较吸烟组显著降低（ P＜0.05）。Th17细胞在吸烟组大鼠外周血及肺实质中的表达较对照组明显升高（ P＜0.05）;治疗后,大鼠外周血及肺实质中的Th17细胞有所下降。结论 COPD大鼠的外周血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白升高,辛伐他汀能够降低COPD大鼠血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白的表达,可能是其抑制COPD大鼠肺组织炎症反应和肺结构破坏的机制之一。     

Notch1信号通路通过调控Th17细胞参与实验性自身免疫性甲状腺炎的发生和发展

目的 探讨Notch1信号通路是否通过调控辅助性T细胞17 (Th17)参与实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）的发生和发展。方法 将24只小鼠随机平均分为NC组、EAT-A组（给予猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射）、EAT-B组（猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射前给予γ分泌酶抑制剂腹腔注射）。HE染色观察甲状腺内淋巴细胞浸润程度;流式细胞术检测小鼠脾脏单核细胞（SMC）悬液中Th17细胞比例;ELISA法检测血清甲状腺球蛋白（TgAb）滴度和SMC培养上清白细胞介素-17A (IL-17A)浓度;实时PCR分析脾细胞中Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达水平;Western blotting检测脾脏组织中IL-17A蛋白表达水平。结果EAT-A组和EAT-B组小鼠甲状腺中有不同程度淋巴细胞浸润,与NC组相比血清TgAb滴度显著升高（P <0.01）。EAT-A组和EAT-B组小鼠Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达,以及SMC中Th17细胞比例、IL-17A浓度、IL-17A蛋白表达水平均高于NC组（均P <0.01）。EAT...     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+Foxp3+Treg/Th17细胞的变化及意义。方法:分别采用流式细胞术、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测15例急性乙型肝炎(AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、40例无症状携带者(AsC)及30例健康对照者外周血外周血Treg/Th17细胞百分率、核转录因3(Foxp3)/(RORγt)mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)/白细胞介素17(IL-17)的水平。结果:AHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异;而CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义。CHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义;与正常对照组相比,AsC组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异。结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞失衡可能与HBV感染的状态、结局有关。     

活动期类风湿性关节炎患者IL-17和IL-27水平变化及其临床意义

目的分析活动期类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）患者血清和关节液中白细胞介素-17（Interleukin-17,IL-17）和白细胞介素-27（Interleukin-25,IL-25）水平,探讨IL-17和IL-27在活动期RA患者中的临床意义及其与相关实验指标的相关性。方法选择56例活动期RA患者为实验组,30例健康体检者为对照组,采用免疫散射比浊法测定血清C反应蛋白（CRP）和类风湿因子（RF）的浓度,用魏氏法测定红细胞沉降率（ESR）,用化学发光微粒子免疫检测法检测抗环胍氨酸多肽抗体（CCP）浓度,用ELISA法测定健康体检者血清和RA患者血清及关节液中的IL-17、IL-27水平。结果 RA患者血清和关节液中IL-17和IL-27水平明显高于对照组;RA患者血清IL-17水平与ESR、CRP、CCP呈正相关性,关节液中IL-17水平与ESR、CRP呈正相关性,与RF无相关性;RA患者血清及关节液中IL-27水平与ESR、CRP、RF和CCP无明显相关性;RA患者血清及关节液中IL-17与IL-27水平呈正相关性。结论 IL-17和IL-27在RA患者的血清和关节液中过度表达,提示IL-17和IL-27参与了RA的免疫性致病机制,其具体作用尚待进一步研究。     

特应性皮炎患儿外周血Th17、Th1/Th2细胞亚群的研究

目的检测特应性皮炎(AD)患儿外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、Th2和Th17)数量和比例的变化,探讨其在AD发病机制中的作用。方法选择40例AD患儿,分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并进行相关分析。结果AD患儿PBMC中CD4+IL-4(+Th2)细胞的数量、CD4+IL-17(+Th17)细胞的数量均高于健康对照组([19.56±4.9)%vs(12.91±1.7)%,P0.05;(26.61±2.6)vs(11.4±1.2),P0.05],Th1/Th2细胞的比值低于健康对照组([0.98±0.13)vs(1.84±1.6),P0.05]。结论IL-17+Th17细胞与Th1/Th2比值变化可能参与AD患儿的免疫学发病机制。     

Th17细胞在小鼠H22原位肝癌模型中的表达和意义

目的 检测小鼠原位肝癌模型中Th17细胞的表达,探讨其在肝癌免疫中的作用. 方法 30只Balb/C小鼠随机分为肝癌模型组（10只）、生理盐水对照组（10只）、空白对照组（10只）,流式细胞术检测小鼠分离纯化后的各组新鲜脾脏Th17细胞的相对比例;实时RT-PCR检测各组肝组织IL-17基因和RORγT基因表达水平.结果 肝癌模型组脾脏Th17/ CD4＋T细胞的比例高于生理盐水对照组脾脏、空白对照组脾脏,差异有统计学意义（P 〈 0.01）,而各对照组之间的比例差异无统计学意义（P 〉 0.05）.肝癌模型组肿瘤组织IL-17 mRNA和RORγT mRNA的表达水平均高于各自对照组,差异有统计学意义（P 〈 0.01）,而IL-17 mRNA和RORγT mRNA在各自对照组之间表达水平的差异无统计学意义（P 〉 0.05）. 结论 Th17细胞在小鼠原位肝癌模型中数量增多,IL-17表达升高,增强免疫反应,但在肝癌免疫中的作用及机制复杂,有待深入研究.     

Th17细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎中醮检测及临床意义

目的 探讨IL-6、IL-17在类风湿关节炎（RA）患者外周血及关节液中的表达及临床意义.方法 RA患者51例为RA外周血组,其中15例为RA关节液组,30例健康者作为对照组,IL-6及IL-17采用ELISA方法检测.结果 RA外周血组及关节液组具有较高的IL-6、IL-17检测值（P ＜ 0.05）.ESR、RF、CRP与RA外周血及关节液中IL-6呈显著正相关,RA患者关节液中IL-17与RA各观察指标呈正相关（P ＜ 0.05）.结论 RA患者的IL-6、IL-17在其外周血及关节液中的过度表达提示其在RA的发病过程中可能发挥着重要的作用.     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用

目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例。结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后,对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用。活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+ T细胞(32.78±3.41)中,明显低于未转染组(44.54±1.75)(P<0.01)。结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+ T细胞产生IFN-γ有正调控作用。