淋巴细胞白血病细胞分化与抗原受体基因重排研究

用McAbs免疫酶和PCR技术研究了35例淋巴细胞白血病细胞分化起源及IgH和TCRγ,δ基因重排。结果表明,20例表达B细胞表面标记者中,B-ALL15例分别起源于B祖、前前B、前B和成熟B细胞,B-CLL5例均起于成熟B细胞;17例检测到IgH基因重排,8例伴TCRγ基因重排,2例伴TCRδ基因缺失。8例T-ALL分别起源于幼稚、普通和成熟胸腺细胞,均检测到TCRγ基因重排和(或)TCRδ基因重排(缺失)。3例T,B-双标记ALL同时发生IgH和TCRγ基因双重重排。4例AUL中3例发生TCRγ基因重排。讨论了细胞分化与抗原受体基因重排间的相关性及临床意义。     

基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用

目的:建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术,探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用. 方法: 从组织蜡块中切取组织片5～10张,提取基因组DNA,PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果:20例良性淋巴组织反应性增生病例中, 淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性;18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例, TCRβ基因重排3例,未见有IgH基因重排;32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性,有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性;3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排;IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义(P<0.05). 结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.     

18例上呼吸道NK/T细胞淋巴瘤的病理组织学、免疫表型及基因分析

目的分析18例上呼吸道NK/T细胞淋巴瘤的病理组织学、免疫表型及基因重排情况。方法收集已确诊为NK/T细胞淋巴瘤的18例患者石蜡包埋标本,用多种抗体研究其免疫表型;PCR方法检测T细胞受体β和γ基因的克隆性重排。结果18例上呼吸道NK/T细胞淋巴瘤患者中,15例CD56阳性,2例检测到了TCRβ和γ基因克隆性重排。结论大多数上呼吸道NK/T细胞淋巴瘤起源于NK细胞,一小部分为T细胞来源;在淋巴结中,NK细胞淋巴瘤很少;在进行NK细胞标志物检测的同时可进行TCR基因重排检测,以确定其细胞起源。     

PCR检测非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRβ基因重排

目的 探讨PCR方法检测IgH和TCRβ基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NHL)诊断中的临床意义。方法 用PCR方法检测40例非霍奇金淋巴瘤和5例慢性淋巴结炎的基因重排情况。结果 20例B细胞NHL中检测出19例IgH基因重排，20例T细胞NHL中检测出17例TCRβ基因重排。结论 PCR方法检测NHL中IgH和TCRβ基因重排具有敏感、特异的优点，在非霍奇金淋巴瘤的诊断中具有重要价值。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在非霍奇金淋巴瘤中检测的临床意义

目的：探讨免疫球蛋白重链（IgH)和T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的检测意义。方法:PCR方法检测25例NHL和1例反应性淋巴结炎患者,及20例正常人骨髓、周围血和／或淋巴结核细胞（MNCs0中克生性IgH、TCRγ基因重排。结果：克隆性IgH和／或TCRγ基因重排在25例NHL中检出为84.0%（21／25）;克隆性IgH基因重排在B－NHL和T－NHL中检出分别为86.7%(13/15)和20.0%(2/10),克隆性TCRγ基因重排分别为53.3%(8/15)和80.0％（8／10）。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重。结论：IgH、TCRγ基因重排检测有助于NHL的诊断和鉴别诊断,及发现NHL早期骨髓浸润 和判断预后。     

N-甲基亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤TCR基因重排分析

目的探讨N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的单克隆起源。方法采用巢式PCR方法,对8例MNU诱导的胸腺淋巴瘤组织进行T细胞受体β链(TCRβ)和γ链(TCRγ)克隆性基因重排分析,并对TCRγ基因重排的PCR产物直接测序。结果 8例胸腺淋巴瘤检测TCRβ和TCRγ均呈克隆性基因重排。DNA序列测定证实TCRγ基因PCR扩增产物为基因重排产物。结论巢式PCR TCR基因重排检测及DNA序列分析证实,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤是来源于T细胞的肿瘤。     

39例淋巴瘤样丘疹病临床病理学研究

目的对39例淋巴瘤样丘疹病进行了组织学、免疫表型和分子生物学特征研究.材料与方法 39例病例均来自贵州省各地.除H.E.,PAS和Giemsa染色外,进行了CD20、CD45RO、CD4、CD8、CD15、CD30、ALK及EMA等免疫组织化学研究,以及IgH和TCR分子生物学研究.结果全部病例分成3型:A型33例,B型2例和C型4例.在大多数病例(31/33),肿瘤细胞,特别是大细胞表达CD3抗原.大多数T细胞组群,包括瘤样T细胞表达CD4 /CD8-辅助T表型(12/21).几乎所有病例(36/39)都表达CD30抗原,其中1例(A型)同时表达ALK和EMA.Ki-67增殖指数平均为54%.4例表达TCRγ基因多克隆重排,其中,2例分别显示IgH多克隆和单克隆重排.结论淋巴瘤样丘疹病主要累及成人或老年人.男女之比是4.6:1.组织学特征表现为极少数H/R-S样的大的异型淋巴细胞混杂在大量炎性细胞背景(A型)中或主要为脑形核的异型淋巴细胞(B型).形态学上,C型以结节状或片状排列的大的异型淋巴细胞为特征.免疫表型上,除2例B型外,其余病例均表达CD30抗原.大多数病例为CD4 /CD8-辅助T细胞免疫表型,并且均表达全T-细胞抗原CD3.     

血管免疫母细胞性淋巴结病病变性质的研究

①目的　通过对血管免疫母细胞性淋巴结病 (AIL)较系统的研究 ,进一步认识AIL的病变性质 ,探讨其可能的发病机制和病因 ,筛选对判定AIL病变性质有临床实用价值的方法和指标。②方法　在临床病理研究的基础上 ,采用PCR技术、免疫组化技术、图像分析技术 ,对 4 4例符合AIL组织学诊断标准病例的免疫表型、基因重排、bcl 2 /IgH融合基因、EBV DNA、DNA含量、P5 3蛋白、bcl 2、c myc、EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP 1 )、PCNA等多项指标进行检测分析 ;同时选择非何杰金淋巴瘤 (NHL) 2 0例和淋巴结反应性增生 1 0例作为对照。③结果4 4例AIL的临床表现十分复杂 ,呈多系统、多脏器受累的复杂的临床表现 ;有在某季节 (春季 )集中发病的倾向。AIL的免疫表型表现为以T细胞增生为主。在组织学上 ,AIL表现为良恶性增生兼有的特征 ,片巢状透明细胞增生的出现是诊断恶性的组织学特征。 4 4例AIL中有 1 6例 (36 .7% )为克隆性基因重排阳性 ,其中 1 2例为TCRγ克隆性重排 ,2例为IgH克隆性重排 ,2例为TCRγ和IgH双重排 ,其克隆性重排的检出率在AIL、NHL和反应性增生间的差异均有显著意义 (χ2 =8.2 1 8～ 2 6 .0 36 ,P <0 .0 1 )。 4 4例AILP5 3蛋白阳性表达率为 31 .8% ,2 0例NHLP5 3蛋白阳性表达率为 70 .0 % ,反应性增生者无     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因克隆性重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者检测外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体gamma基因(TCRγ)克隆性重排的意义.方法 对235例NHL患者进行了254例次血浆游离DNA提取,通过globin基因确定血浆游离DNA存在,通过PCR方法检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)基因克隆性重排.并与病理组织DNA及外周血单个核细胞DNA基因克隆性重排结果同时进行对比观察.结果 初发及复发患者220例中219例均成功提取到血浆游离DNA.B-NHL患者140例中IgH重排阳性118例(84.3%),TCRγ重排阳性1例(0.7%);T-NHL患者80例中TCRγ重排阳性44例(55%),IgH重排阳性2例(2.5%),IgH和TCRγ重排同时阳性4例(5%);34例临床缓解病例中仅3例(8.8%)提取出血浆游离DNA,但IgH和TCRγ重排均阴性.56例NHL患者血浆游离DNA IgH或TCRγ基因重排结果与病理组织结果一致(P＞0.05).67例NHL患者血浆游离DNA与外周血单个核细胞DNA IgH和TCRγ基因重排结果显示,血浆游离DNA阳性率高于单个核细胞DNA(P＜0.05).结论 采用血浆游离DNA检测NHL患者IgH和TCRγ基因克隆性重排具有较高的临床诊断价值,与病理标本高度一致;标本取材简单方便,对NHL的治疗反应监测也有重要参考价值.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理分析

目的按照WHO关于B细胞淋巴瘤的新分类,对我省部分弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)进行形态学、免疫学表型及基因重排的研究。探讨三结合方案在DLBCL中的诊断和鉴别诊断价值。方法收集28例弥漫性大B细胞淋巴瘤,进行组织形态学观察和免疫表型测定,同时采用PCR扩增对其进行免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体β基因(TCR-β)克隆性重排的研究。结果28例弥漫性大B细胞性淋巴瘤有四种变型,分别为中心母细胞型17例(60.7%),免疫母细胞型5例(17.8%),间变性大细胞型4例(14.3%),富于T细胞或组织细胞型2例(7.1%)。免疫组织化学标记:28例DLBCL肿瘤细胞CD20均阳性表达(100%);4例间变性大细胞型DLBCL肿瘤细胞CD30阳性表达(14.3%);1例中心母细胞型DLBCL肿瘤细胞CD5阳性表达(3.5%);1例富于T细胞或组织细胞型DLBCL肿瘤细胞Lysozyme阳性表达(3.5%)。PCR扩增检测结果:DLBCL中IgH重排9例(32.1%),TCR重排10例(35.7%),双阳性2例(7.1%),总的阳性率为75.0%。结论弥漫性大B细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断,长期以来一直是病理工...     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排检测在急性非淋巴细胞白血病患者中的意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者中的临床意义。方法 用聚合酶链反应（PCR）检测50例ANLL患者骨髓、外周血单个核细胞（MNCs）中克隆性IgH、TCRγ基因重排。结果 克隆性IgH和／或TCRγ基因重排在50例ANLL中检出率为32.0%（16／50），其中IgH为28.0%（14／50），TCRγ为16.0%（8／50）。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重排。27例非M3初发ANLL患者经DA或HA标准方案化疗，10例基因重排阳性的患者1疗程后获完全缓解3例（30.0%），而17例基因重排阴性患者1疗程后完全缓解13例（76.5%），两者判别具有显著性意义（P＜0.05）。结论 （1）IgH、TCRγ基因重排不仅出现于淋巴细胞来源的的肿瘤，也可见于部分ANLL患者；（2）出现IgH和／或TCRγ基因重排可能是ANLL患者预后不佳的指标之一。     

NK／T细胞淋巴瘤的病理、免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测

目的 探讨NK／T细胞淋巴瘤(NK／TCL)的临床病理学特征和免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测。为诊断和鉴别诊断提供依据。方法 收集30例NK／TCL及其临床资料，用免疫组化S-P法标记LCA，CD56，CD3，CD45RO，CD20及CK抗体和聚合酶链式反应扩增方法检测12例NK/TCK的TCRγ基因重排。结果 NK／TCL组织学特点为多形性淋巴细胞增生。大片的凝固性坏死和血管浸润；免疫组化表达LCA、CD3、CD45RO和CD56阳性，CD20、CK阴性；12例NK／T细胞淋巴瘤TCRγ基因重排的阳性率为66．7％(8／12)。结论 NK/TCL是一组异质性肿瘤．结合其组织学特点和免疫组化表型可做出诊断；NK/TCL超过半数存在TCRγ基因重排．表明大部分为T细胞的单克隆性增生。     

急性髓性白血病免疫球蛋白重链重因和T细胞受体γ基因重排的检测及意义

为检测急性髓性白血病（AML）患者免疫球蛋白重链基因（IgH)和T细胞受体γ基因（TCRγ）克隆性重排情况，并初步探讨其意义，采用聚合酶链反应（PCR）检测51例AML患者IgH及TCRγ基因重排。结果表明，51例患者中9例（17．65％）发生IgH基因重排，11例（21．57％）出现TCRγ基因重排。由此可见，AML中确实存在系列失真现象，可有IgH及TCRγ重排发生。     

IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用

目的 通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用.方法 通过Clustal W 软件比较44条有效的lgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgH FR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物.另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物.通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况.以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照.结果 IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgH FR3区和lgH FR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%.以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性.结论 IgH不同区域引物比较.FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区.FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率.     

南京地区23例成人非何杰金淋巴瘤免疫病理分析

应用了A、B、C法7种单克隆抗体进行免疫组化染色,检测南京地区23例成人非何杰金淋巴瘤活检标本,结果示9例T系淋巴瘤,8例B系淋巴廇,非T非B及未定型淋巴瘤各3例。病理组织学表现与免疫表型符合率B系达80％,T系达60％。故根据形态学表现估测免疫表型是可行的。经HTLV抗体血清检测,仅1例多形细胞性T淋巴瘤患者阳性。     

NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型、EB病毒感染及TCRγ基因重排的检测

目的检测NK／T细胞淋巴瘤（NK／TCL）的免疫表型、EB病毒感染及TCRγ基因重排，为诊断和鉴别诊断提供依据。方法收集诊断NK／TCL48例患者石蜡包埋标本，用免疫组化S-P法标记LCA、CD79aαCD20、CD56、CD3、CD45R0及EBV抗体研究其免疫表型；EBER探针原位杂交方法检测EB病毒编码的小分子RNA（EBER）；聚合酶链式反应扩增方法检测TCR）,基因重排。结果48例NK／TCL均表达LCA，CD3、CD45RO、CD56和EBV阳性率分别为44％、52％、73％和19％，CD79α和CD20均为阴性；EBER阳性率为81％；TCRγ基因重排阳性率为19％。结论NK／T细胞淋巴瘤免疫表型不一致，并非所有病例CD56阳性，石蜡切片中CD3阳性定位于细胞质；EBER在肿瘤细胞中高表达，提示它们可能为NK细胞来源；TCR7基因重排阳性说明NK／TCL中存在T细胞的单克隆性增生。     

鼻腔NK／T细胞淋巴瘤特异分子标志及预后相关因素研究

目的 探讨鼻腔NK／T细胞淋巴瘤的特异性免疫标志及预后的相关因素。方法 以鼻腔NK／T细胞淋巴瘤30例石蜡组织标本为研究对象．同部位B细胞淋巴瘤20例为对照，采用S—P三步法行免疫组化染色；采用PCR法对12例鼻腔NK／T细胞淋巴瘤行TCRβ、γ基因重排分析，2例B细胞淋巴瘤为对照；对全纽病例回顾性分析、比较．探讨预后的相关因素。结果 30例鼻腔NK／T细胞淋巴瘤中，CD45RO阳性26例、CIM323例、CD3ε24例阳性定位于胞浆、CD5626例、CD309例、CD20、CD45RA、CD57、CD16及CD3表面全部阴性；细胞毒颗粒蛋白TIA—1、GranzymeB、Perforin的阳性表达分别为30例、28例、24例；对照组20例B细胞淋巴瘤均不表达。背景反应性中性粒细胞和组织细胞表达TIA—1，肿瘤细胞的异型性和CD30／GranzymeB的表达密切相关。12例NK／T细胞淋巴瘤TCRβ的基因检出率为58．3％（7例），TCRγ／链基因检出率为66．7％（8例）。结论 NK／T的常规诊断可在形态学的基础上，联合使用CD45RO，CD3e、CD56，GranzymeB免疫化染色确定：全组病例超过半数存在TCRβ、TCRγ基因重排，表明大部分为T细胞单克隆性增生；肿瘤细胞的异型性和CD30／GranzymeB的表达密切相关，其意义尚待深入探讨：影响预后的相关因素主要有临床分期、肿瘤侵犯、全身症状、病理分级及治疗方法等。     

IgH、TCRγ基因重排检测非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的临床意义

IgH、TCRγ基因重排检测为早期检测非霍奇金淋巴瘤     

B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排的检测

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在B细胞性淋巴瘤(B-NHL)中的诊断价值。方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法检测B细胞淋巴瘤30例．淋巴结反应性增生(RH)10例及T细胞淋巴瘤(T-NHL)2例的IgH基因重排。结果 30例B-NHL中，22例(73．3％)出现IgH基因克隆性重排，而RH及T-NHL均未出现IgH基因重排。结论 B细胞淋巴瘤中存在B细胞单克隆增生，支持肿瘤单克隆起源学说；IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和反应性增生以及T细胞和B细胞淋巴瘤有重要意义。