免疫组织化学技术常见问题分析及解决对策

免疫组织化学是利用免疫学反应原理,通过特定的标记抗体来显示组织细胞内或细胞间相应抗原变化规律的一门科学[1].随着科研工作的深入开展,要求从事开展免疫组织化学的工作人员,要对其试剂生产技术的提高、新抗体不断出现、方法学的不断完善和注重标本处理等变化有足够的了解.     

微血管密度和VEGF在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测40例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中MVD和VEGF的表达。结果40例膀胱癌组织中MVD记数为MVD为(47.9±8.7)。其中Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级膀胱癌MVD分别为(36.2±7.5)、(44.4±9.7)和(54.9±7.0);VEGF阳性率72.5%(29/40),Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级阳性率分别为43.8%(7/16)、85.7%(12/14)和100%(10/10)。正常膀胱组织MVD(13.4±7.8),VEGF表达为0%。结论MVD值和VEGF的表达与膀胱癌的病理分级及临床分期有关,可以作为膀胱癌诊断和预后的有效指标之一。     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

B型超声引导下经皮肝穿刺胆道造影应用体会

我院自 1995年 4月至 2 0 0 0年 8月在超声引导下作经皮肝穿刺胆道造影 (Ｂ型超声引导下ＰＴＣ)检查 ,效果良好 ,现报告如下。1　临床资料本组病例男 16例 ,女 13例 ,男、女之比 1∶0 81,年龄 30～ 6 3ａ ,平均年龄 4 8 2ａ ,穿刺前均作胸透、心电图、肝肾功 ,出凝血时间测定 ,血小板计数检查以了解患者心、肝、肾、凝血功能 ,常规Ｂ型超声检查均提示肝内胆管扩张。检查时机及检查前准备 :此项检查为创作性检查 ,安排在术前一天或术晨检查为宜。术前常规肌注Ｖｉｔｋ1,改善凝血功能 ,肝功能不良者需保肝治疗 ,做碘过敏试验 ,术前 12ｈ禁食 …     

神经肽Y及其Y2受体表达在糖尿病肾病中的变化及作用

目的 探讨神经肽Y(NPY)及其Y2受体(Y2R)表达、Na+,K+-ATPase活性在大鼠糖尿病肾病(DN)中的变化及作用.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组和糖尿病组(2周和4周组);采用放射免疫法测定血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法 检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法 检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重/体重和肾皮质Na+,K+-ATPase活性.结果 ①注射STZ诱导糖尿病发生2周、4周后,糖尿病组大鼠血糖、UAER和肾重/体重的显著高于正常对照组;②与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血浆和肾皮质的NPY水平和Na+,K+-ATPase活性显著升高(P＜0.01);③糖尿病组大鼠肾皮质的NPY mRNA和Y2R蛋白表达显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 糖尿病大鼠早期NPY、Y2R的表达和Na+,K+-ATPase活性的异常改变可能在糖尿病肾病的发生、发展过程中具有重要作用.     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y_2受体表达的影响

目的：探讨黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y（NPY）及其Y2受体（Y2R）表达的影响。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率（UAER）、肾重/体重。结果：①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平（P〈0.01）;③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组（P〈0.05）。结论：APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

凋亡调控因子XIAP对缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的建立体外培养新生大鼠心肌细胞缺氧模型,用XIAP进行干预,以探讨XIAP能否抑制细胞凋亡。方法培养新生SD大鼠（1～3天龄）心肌细胞至第4天,脂质体介导转染pDsRed2-XIAP、pDsRed2-N1质粒和不转染的心肌细胞分别设为模型组、对照组和空白组。以物理性缺氧（95%N2＋5%CO2）方式培养,在6h、12h用流式细胞仪AnnexinVFITC及原位末端标记法（TUNEL）检测细胞调亡,结果采用统计学SPSS11.5软件包进行单项方差分析。〈0.05,有显著差异。结果①缺氧后经TUNEL检测,各组均有心肌细胞凋亡;②流式细胞仪检测心肌细胞凋亡随缺氧时间延长而增多;③模型组心肌细胞凋亡率较对照组与空白组明显减少（〈0.01）。结论缺氧能诱导心肌细胞凋亡。XIAP能明显减少缺氧诱导鼠心肌细胞的凋亡。     

微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血24例报告

自 2 0 0 1年 1月以来 ,我院引进YL 1型颅内血肿穿刺针 ,进行射流冲碎、液化术 ,治疗高血压脑出血2 4例 ,取得良好效果 ,现报告如下。1　临床资料1.1　一般资料　本组 2 4例 ,男 19例 ,女 5例。年龄38～ 77a ,平均 5 8.4a ,其中 38～ 5 0a4例 ,5 1～ 6 0a14例 ,6 0a以上 6例。术前昏迷 16例 ,其中深度昏迷 2例 ,中度昏迷 5例 ,浅昏迷 9例 ,神志清醒者 8例 ,2 1例偏瘫 ,12例失语 ,一侧瞳孔散大 4例 ,双侧瞳孔散大 1例。本组均行CT检查 ,基底节出血 17例 ,皮层下出血 6例 ,丘脑出血 1例 ,血肿破入脑室 6例。出血量均大于 30ml,最多 12 0ml。…     

p53、nm23蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的研究p53、nm23基因在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学S-P法检测45例宫颈鳞癌组织、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈鳞状上皮中p53、nm23蛋白的表达.结果p53、nm23蛋白在宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为64.44%、46.67%;在CIN中阳性表达率分别为0、30.00%;在NE组均无表达.p53蛋白在宫颈鳞癌中阳性表达与在CIN、NE中的不表达差异均有显著性(P＜0.01).nm23蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达与在NE中的不表达差异有显著性(P＜0.05),但与在CIN中的表达差异无显著性(P＞0.05);与病理学分级、淋巴结转移均呈负相关(P＜0.05,P＜0.01).结论p53、nm23基因参与了宫颈鳞癌的发生发展过程.p53蛋白的过表达是宫颈癌组织恶性变的生物学标志;检测nm23蛋白对判断宫颈癌淋巴结转移和预后有重要意义.     

血小板衍生生长因子在肺鳞癌及肺腺癌中的表达及意义

目的　探讨血小板衍生生长因子 (PDGF)在肺鳞癌和肺腺癌中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学技术观察了PDGF -A链和PDGF -B链在 42例肺鳞癌和 1 5例肺腺癌中的表达 ,并测定了它们在肺非特异性炎症组织中的表达。结果　PDGF -A链和PDGF -B链的表达主要定位于肿瘤细胞胞浆、血管内皮细胞及平滑肌细胞 ,炎症组织的肺泡上皮细胞及血管平滑肌细胞少量表达。PDGF -A链和PDGF -B链在肺鳞癌及肺腺癌中均有显著表达 ;PDGF的过度表达与肿瘤细胞的分化程度无关。结论　PDGF -A链和PDGF -B链的过度表达与肺鳞癌和肺腺癌有关 ;PDGF -A链和PDGF -B链的生物学特征可能有所不同 ,PDGF -B链与肿瘤微血管增生的关系可能更密切