甘草附子汤调控NF-κB信号通路抑制胶原诱导型关节炎小鼠骨质破坏的作用

目的 探讨甘草附子汤（GCFZ）抑制胶原诱导型关节炎（CIA）小鼠模型骨质破坏的作用机制。方法 将30只雄性DBa/1J小鼠随机分为5组,分别为正常组、CIA组、甘草附子汤低剂量组（GCFZ-L,2.4 g·kg^-1）、甘草附子汤高剂量组（GCFZ-H,4.8 g·kg^-1）和甲氨蝶呤组（MTX,1 mg·kg^-1）,每组6只,二次免疫法诱导CIA模型;观察记录各组小鼠关节炎指数,苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠踝关节组织病理学变化;番红-固绿染色检测小鼠踝关节软骨破坏情况;显微计算机断层扫描（Micro-CT）扫描检测小鼠踝关节骨质破坏的情况;免疫组化法观察踝关节核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（IKKα/β）、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）的表达情况。结果 与正常组比较,CIA组关节肿胀明显,关节炎指数评分显著升高（P<0.01）;与CIA组比较,GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组均能显著抑制关节肿胀,并且明显降低关节炎指数评分（P<0.05,P<0.01）。HE染色和番红-固绿染色显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组）能明显抑制滑膜的侵袭,并且关节软骨破坏明显减轻。Micro-CT扫描分析显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）骨破坏评分显著降低（P<0.01）。免疫组化结果显示,与正常组比较,CIA组NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均显著升高（P<0.01）;而与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均明显降低（P<0.05,P<0.01）;而GCFZ-L组仅NF-κB p65积分吸光度显著降低（P<0.01）。结论 甘草附子汤可能通过调控NF-κB信号通路来抑制CIA小鼠的骨质破坏。     

经方麻黄附子细辛汤合防己黄芪汤减轻膜性肾病小鼠氧化应激损伤的机制研究

[目的] 观察经方麻黄附子细辛汤合防己黄芪汤治疗阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）制备膜性肾病小鼠模型的有效性,及对肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素（IL）-6、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平、核转录因子-κB（NF-κB）表达的影响。[方法] 60只Balb/c小鼠按体质量分层随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组各12只。C-BSA制备膜性肾病小鼠模型。给药6周后取血清,全自动生化分析仪检测小鼠血清白蛋白（ALB）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）的水平;苏木精-伊红（HE）染色和过碘酸雪夫（PAS）染色观察肾组织病例形态学变化;酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测肾脏组织SOD、MDA、IL-6、MCP-1含量表达;运用免疫组化染色法检测肾组织NF-κB蛋白的表达。[结果] 给药6周后,与模型组比较,中药低中高各剂量浓度组TG、TC水平各有不同程度的下降（P<0.05或P<0.01）,ALB水平显著提高（P<0.01）,小鼠的肾小球和肾小管结构损伤程度较模型组都有了不同程度的改善。肾组织SOD含量均有不同程度的增加（P<0.05或P<0.01）,MDA、IL-6、MCP-1含量均明显下降（P<0.01）。小鼠肾组织NF-κB蛋白表达均有不同程度的下降（P<0.05或P<0.01）。[结论] 经方麻黄附子细辛汤联合防己黄芪汤可有效改善脂质代谢紊乱,提高血浆白蛋白水平,减轻膜性肾病小鼠肾脏病理损害,对膜性肾病小鼠具有治疗作用;可有效抑制膜性肾病小鼠肾脏氧化应激反应和炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

山豆根水提物对类风湿关节炎骨破坏及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 观察山豆根水提物对类风湿关节炎（RA）的干预影响，并基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路研究其抗RA骨破坏的作用及机制。方法 采用高效液相色谱（HPLC）测定山豆根水提物中主要活性物质的含量，应用Ⅱ型胶原诱导法建立类风湿关节炎模型（CIA）小鼠，设正常组、模型组、甲氨蝶呤组（0.5 mg·kg^-1）、山豆根水提物低、高剂量组（100、200 mg·kg^-1）。观察CIA小鼠关节红肿畸形表现及关节炎临床积分；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠关节组织病理改变；微计算机断层扫描技术（Micro-CT）检测小鼠关节骨破坏程度；抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察小鼠关节组织中破骨细胞形成情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路关键蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠关节红肿畸形程度、关节炎临床积分、滑膜增生及炎性细胞浸润程度显著升高（P<0.01），关节组织骨破坏程度、破骨细胞形成数目及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织蛋白酶K（CTSK）、活化T细胞核因子1蛋白（NFATc1）、PI3K和磷酸化（p）-Akt蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，山豆根水提物各剂量组能明显改善CIA小鼠关节畸形程度及关节炎临床积分（P<0.05，P<0.01），缓解小鼠关节组织病理改变（P<0.01），且降低小鼠关节骨破坏程度和破骨细胞形成情况（P<0.05，P<0.01），此外还显著下调小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达（P<0.01）。结论 山豆根水提物能够显著延缓RA炎症反应，尤其抑制骨破坏，其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

普洱茶素II改善高脂血症ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用机制研究

目的 研究普洱茶素II对高脂血症诱发动脉硬化ApoE基因敲除小鼠（ApoE^-/-）的治疗效果及作用机制。方法 ApoE^-/-小鼠通过喂养高脂饲料建立动脉粥样硬化动物模型,造模成功后将小鼠随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀（30 mg/kg）组和普洱茶素II低、高剂量（50、100 mg/kg）组,给药6周后检测小鼠血浆总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglycerides,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和非高密度脂蛋白胆固醇（non-high density lipoprotein cholesterol,non-HDL-C）水平,以及主动脉流出道斑块面积等指标的差异。体外培养人脐静脉内皮细胞HUVEC和人外周血单核细胞THP-1,检测普洱茶素II对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density protein,ox-LDL）诱发单核与内皮细胞黏附的影响,利用Western blotting对蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）/血管细胞黏附因子（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）通路相关蛋白表达进行检测。结果 普洱茶素II显著抑制了高脂饮食诱导ApoE^-/-小鼠的体质量、肝脏质量、肝脏指数、附睾脂肪质量和附睾脂肪指数（P＜0.05、0.01）,降低血浆TC、TG、non-HDL-C水平（P＜0.05、0.01）,升高HDL-C水平（P＜0.05）,减少主动脉流出道脂质沉积。体外实验证实,普洱茶素II显著抑制HUVEC与THP-1细胞间的黏附（P＜0.05）,抑制ox-LDL诱导的HUVEC细胞中VCAM-1、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）和Akt/NF-κB通路相关蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 普洱茶素II能够显著改善ApoE^-/-小鼠的肥胖、脂代谢紊乱、主动脉斑块沉积,通过调控Akt/NF-κB/VCAM-1通路抑制内皮细胞与单核细胞的黏附,进而抑制动脉粥样硬化的发生与发展。     

瘀血痹片对大鼠胶原诱导性关节炎的干预作用及抗炎机制

目的 观察瘀血痹片对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的干预作用并探索抗炎相关机制。方法 建立大鼠CIA模型，给药组和阳性药组分别灌胃给予低、中、高剂量瘀血痹片（0.1，0.2，0.4 g·kg^-1）和甲氨蝶呤（0.4 mg·kg^-1 ），每3 d检测发病率、机械痛敏阈值及冷刺激痛敏；给药30 d后取材，外周血检测血小板计数（PLT）及纤维蛋白原（FIB）含量；苏木素-伊红染色法分析CIA大鼠关节组织病理变化；免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测CIA大鼠关节组织中白细胞介素（IL）-1β，IL-8，核转录因子-κB（NF-κB） p65，磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65），大鼠肉瘤（Ras）及Raf-1蛋白表达情况。此外，采用10 μg·L^-1的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人类类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS），转移小室法检测RA-FLS迁移及侵袭能力。Western blot检测RA-FLS中Ras，Raf-1，p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果 与正常组比较，CIA模型组发病率升高，机械痛阈值明显降低（P<0.05，P<0.01），冷刺激反应评分显著增高（P<0.01），外周血中PLT和FIB含量，大鼠关节组织病理评分，RA-FLS迁移和侵袭细胞个数及炎性相关因子的表达水平均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，瘀血痹片低、中、高剂量组均能降低CIA大鼠发病率，提高其机械痛阈值并降低冷刺激痛敏反应评分（P<0.05，P<0.01）；降低CIA大鼠外周血中PLT和FIB含量（P<0.05，P<0.01），改善关节滑膜增生、骨及软骨破坏等病理变化（P<0.05，P<0.01），并抑制RA-FLS的迁移及侵袭。此外，瘀血痹片低、中、高剂量组均能不同程度地著抑制CIA大鼠关节组织中IL-1β，IL-8，Ras，Raf-1和p-NF-κB p65的含量，以及RA-FLS细胞中Ras，Raf-1及p-NF-κB p65等蛋白表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 瘀血痹片具有降低大鼠CIA发病率、关节炎临床症状和改善关节组织病理变化、抑制滑膜生成等作用，并且这一作用可能与其对Ras/Raf-1/NF-κB信号通路的抑制有关。     

参苓白术散通过IκBα/NF-κB通路调控Lewis肺癌小鼠肿瘤自噬的研究

目的 观察培土生金法代表方参苓白术散对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织IκBα/NF-κB信号通路以及肿瘤自噬的干预作用，探讨参苓白术散联合顺铂对肺癌的部分治疗机制。方法 选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只，采用腋窝皮下接种肺癌Lewis细胞悬液法建立Lewis肺癌小鼠模型，建模成功后随机分为4组：模型组、顺铂组、中药组和中药+顺铂组，每组10只。模型组给予等量蒸馏水灌胃；顺铂组每周给与腹腔注射顺铂（5 mg·kg^-1）一次，共2次；中药组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天；中药+顺铂组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天，同时每周给与腹腔注射顺铂（5mg·kg^-1）一次，共2次。给药14天后，测定各组小鼠肿瘤体积，并计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率；采用ELISA法测定肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和白细胞介素-1（interleukin-1β， IL-1β）的含量；采用透射电镜观察肿瘤细胞超微形态的变化；采用免疫组化法测定核因子κB抑制蛋白α（NF-kappa-B inhibitor alpha， IκBα）和核因子-κB（nuclear factor-κ-gene binding， NF-κB）P65的蛋白表达水平；采用Western blot法测定自噬相关基因3（autophagy related gene 3， Atg3）、自噬相关基因5（autophagy related gene 5， Atg5）、自噬特异性基因（Beclin-1）和微管相关蛋白1轻链3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3， LC3）的蛋白表达水平。结果 与模型组比较，顺铂组、中药组、中药+顺铂组小鼠肿瘤体积和相对肿瘤体积显著减小（P<0.01），肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）、NF-κB P65蛋白入核率显著降低（P<0.01），Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01），和顺铂组比较，中药组和中药+顺铂组肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），中药+顺铂组肿瘤组织LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 参苓白术散能够上调IκBα蛋白表达，抑制NF-κB的激活，降低肿瘤组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量，调控肿瘤组织炎症反应，改变肿瘤微环境，并上调肺癌组织Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平，激活肿瘤发生自噬，抑制肿瘤的生长。     

黄连解毒汤调控炎性免疫抗类风湿性关节炎机制

目的 观察黄连解毒汤对胶原诱导性关节炎（CIA）模型小鼠病理改变及免疫损伤的影响,探讨黄连解毒汤抗类风湿性关节炎的可能机制。方法 24只DBA/1小鼠,随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤组和黄连解毒汤组,每组6只,采用Ⅱ型胶原诱导建立CIA小鼠模型,给药组给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg^-1）和甲氨喋呤（0.5 mg·kg^-1）干预,观察小鼠关节肿胀症状,每3 d进行关节炎指数评分,评分达到峰值后取材;流式细胞仪检测外周血粒细胞、单核细胞、T淋巴细胞;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子表达;微计算机断层扫描技术（Micro-CT）扫描踝关节;苏木素-伊红（HE）染色检测关节组织病理改变。结果 与正常组比较,模型组小鼠关节肿胀,关节炎指数评分明显升高（P<0.05）;外周血粒细胞比例明显升高（P<0.05）,单核细胞、T淋巴细胞比例明显降低（P<0.05）,中性粒细胞淋巴细胞比例（NLR）显著升高（P<0.01）;关节组织炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6表达升高（P<0.01）;Micro-CT可见踝关节明显骨质破坏,病理可见到关节周围组织存在大量的炎性细胞浸润、滑膜增生。与模型组比较,黄连解毒汤组小鼠关节肿胀症状明显减轻,关节炎指数评分明显降低（P<0.05）;外周血T淋巴细胞比例升高,NLR显著降低（P<0.01）;关节中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达显著下降（P<0.01）;骨破坏及关节组织病理损伤情况明显改善。结论 Ⅱ型胶原导致CIA小鼠全身和关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,并且对关节局部的作用更为显著,从而抑制CIA小鼠关节病变和骨破坏。     

基于“肾主骨”理论探讨金匮肾气丸调控AGEs/RANKL/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症小鼠的影响

目的 基于“肾主骨”理论研究金匮肾气丸通过调控晚期糖基化终产物（AGEs）/核转录因子-κB（NF-κB）受体激活剂（RANKL）/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症（DOP）小鼠的影响。方法 选取40只6周龄骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失（MKR）小鼠,雌雄各半,高脂饲料喂养8周建立DOP模型,将造模成功的小鼠随机分成模型组、金匮肾气丸低、高剂量组（1.3、2.6 g·kg^-1）和阿仑膦酸钠组（0.01 g·kg^-1）,每组10只;另取10只同龄FVB/N小鼠为正常组。各给药组分别予以相应药物灌胃,每日1次,连续4周。给药结束后,各组小鼠行空腹血糖（FBG）检测和口服糖耐量实验（OGTT）;检测小鼠肾功能和肾指数;采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察肾脏组织病理学变化;免疫组化检测小鼠肾脏组织AGEs、磷酸化核转录因子-κB（p-NF-κB）和RANKL蛋白表达水平;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织AGEs/RANKL/NF-κB信号通路相关蛋白和股骨组织中骨保护素（OPG）、Runt相关转录因子2（RUNX2）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠FBG显著升高（P<0.01）,骨小梁退变,骨形态参数指标异常,OGTT的曲线下面积（AUC）显著升高（P<0.01）,肾脏体积增大,肾功能指标、肾指数显著升高（P<0.01）,肾小球、肾小管结构紊乱,肾脏组织AGEs、RANKL表达和p-NF-κB/NF-κB值明显升高（P<0.05）,股骨组织中OPG和RUNX2表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,金匮肾气丸各剂量组小鼠OGTT的AUC显著降低（P<0.01）,组织病理分析显示,肾小球和肾小管的结构病变缓解,肾脏组织AGEs、RANKL的表达和p-NF-κB/NF-κB值明显降低（P<0.05,P<0.01）,股骨组织中RUNX2和OPG表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 金匮肾气丸可通过改善肾功能,下调AGEs/RANKL/NF-κB信号通路抑制炎性反应,进而缓解DOP小鼠骨质疏松症状,起到从肾论治DOP的作用。     

二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

目的 观察古代经典名方二妙散（EMS）对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）分化的影响。方法 按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS（5.4 g·kg^-1）组及甲氨蝶呤（MTX,0.5 mg·kg^-1）组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠,于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型（此为第2次免疫）,并于第2次免疫当天开始灌胃给药,除MTX为每周3次外,其余每天1次,共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分,第49天取材后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况;免疫荧光（IF）双标法检测CIA小鼠关节中CD4⁺T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17（IL-17）和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3（FoxP3）在关节滑膜中的表达情况;流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。结果 与正常组比较,CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显,小鼠关节结构严重紊乱,关节软骨及骨破坏明显,骨侵蚀严重（P<0.01）;小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高（P<0.01）,Treg细胞表达比例显著减少（P<0.01）;与CIA组比较,EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常,骨侵蚀、骨破坏较轻,关节面相对完整光滑;EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结组织中,EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低（P<0.01）,Treg细胞的表达比例显著增加（P<0.01）。结论 EMS通过调节Th17/Treg平衡,抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA。     

基于VEGF通路探讨断藤益母汤抑制胶原诱导型关节炎小鼠血管翳形成的作用

目的 探讨断藤益母汤抑制胶原诱导型关节炎（CIA）小鼠血管翳形成的机制。方法 SPF级DBA/1雄性小鼠24只,随机分为4组,分别是空白组（NC组）,模型组（CIA组）,甲氨蝶呤组（MTX组）,断藤益母汤组（DTYM组）,每组6只。除正常组外,其余组小鼠进行造模。二次免疫起,给予灌胃等体积溶媒,MTX（1 mg·kg^-1）和DTYM（15.4 g·kg^-1）,给药35 d。观察小鼠一般情况、关节炎指数;取材后进行膝、踝关节微型计算机断层摄影（micro CT）扫描,苏木素-伊红（HE）和番红-固绿染色观察病理改变,免疫组化检测血小板-内皮细胞黏附分子-1（CD31）,血管内皮生长因子-α（VEGF-α）,血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）,磷酸化（p）-VEGFR2的表达。结果 与NC组比较,CIA组小鼠踝关节红肿明显,关节炎指数评分显著上升（P<0.05,P<0.01）,膝、踝关节关节面明显破损,软骨厚度降低,膝、踝关节micro CT骨破坏评分明显升高（P<0.01）,滑膜中CD31,VEGF-α,VEGFR2,p-VEGFR2积分吸光度显著升高（P<0.01）;与CIA组比较,DTYM组踝关节红肿程度明显减轻,给药3周后小鼠关节炎指数评分明显下降（P<0.05,P<0.01）,膝、踝关节关节面更完整,软骨厚度增加,膝、踝关节micro CT骨破坏评分均明显降低（P<0.05,P<0.01）,滑膜中CD31,VEGF-α,VEGFR2,p-VEGFR2积分吸光度显著降低（P<0.01）。结论 断藤益母汤可能是通过调控VEGF通路抑制CIA小鼠血管翳的形成。     

哈巴俄苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻神经炎症诱导的神经元损伤

目的 研究哈巴俄苷对神经炎症诱导神经元损伤的作用。方法 采用MTT检测血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）和哈巴俄苷对小鼠小胶质BV2细胞活性的影响;观察BV2细胞的形态变化;检测细胞上清液中炎症因子水平;采用免疫荧光检测核因子-κB p65（nuclear factor-κB p65,NF-κB p65）核易位以及CD86、髓系细胞触发受体2（triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2）的表达;采用Western blotting检测Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）、髓样分化因子88（molecule myeloid differentiation factor 88,MyD88）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）蛋白表达。分别使用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和TLR4抑制剂（TAK-242）进一步验证哈巴俄苷的作用机制。建立BV2-HT22细胞共培养模型,检测线粒体膜电位、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达,研究哈巴俄苷对神经炎症引起的神经元损伤的影响。结果 Ang II显著上调BV2细胞TLR4、MyD88、IL-1β、TNF-α和iNOS蛋白表达（P＜0.01、0.001）,促进NF-κB p65入核（P＜0.001）,调节小胶质细胞表面炎症标志物CD86和TREM2的表达（P＜0.05）。哈巴俄苷和TAK-242可逆转Ang II或LPS诱导的BV2细胞的作用（P＜0.05、0.01、0.001）。此外,哈巴俄苷可显著下调BV2-HT22共培养模型HT22细胞中凋亡相关蛋白的表达（P＜0.01、0.001）,抑制HT22细胞凋亡（P＜0.05、0.001）。结论 哈巴俄苷可能通过抑制Ang II诱导的BV2细胞TLR4/MyD88/ NF-κB通路的激活来减轻炎症反应,进而缓解炎症引起的神经元细胞的凋亡。     

槲皮素对黄药子致肝损伤小鼠的保护作用及其机制

目的 探究槲皮素对黄药子致肝损伤的保护作用及其机制。方法 将48只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟宾（100 mg/kg）组和槲皮素高、中、低剂量（80、50、20 mg/kg）组。对照组ig 0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组小鼠ig相应药物及黄药子醇提物（2 g/kg）,1次/d,连续30 d。实验结束后称定小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数;测定血浆中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malonaldehyde,MDA）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、IL-1β水平;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）染色观察肝脏组织病理学变化;TUNEL染色法检测肝脏细胞凋亡情况;采用Western blotting检测肝脏核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、磷酸化核因子-κB p65（phosphorylated nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65）、血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、多药耐药相关蛋白2（multidrug resistance-associated protein 2,MRP2）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1（uridine diphosphate-glucuronosyltransferase 1A1,Ugt1a1）、P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达;采用qRT-PCR检测肝脏MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达。结果 与模型组比较,槲皮素显著降低小鼠肝脏指数及肝功能（P＜0.05、0.01）,减轻肝脏组织病理变化,降低血浆中MDA水平（P＜0.05、0.01）,升高SOD活性（P＜0.01）,降低TNF-α、IL-1β水平（P＜0.05、0.01）,升高IL-10水平（P＜0.01）,抑制肝脏p-NF-κB p65、Bax蛋白表达（P＜0.05、0.01）,促进Nrf2、HO-1及药物转运体蛋白表达（P＜0.05、0.01）,并上调MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达（P＜0.01）。结论 槲皮素对黄药子诱导的肝损伤有一定保护作用,其作用机制可能与减轻炎症、抑制细胞凋亡、调控Nrf2及药物转运体的表达相关。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响

 目的 观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB、c-Jun表达的影响。方法 SD雄性大鼠连续14周给予酒精建立酒精性肝病模型,随机分为模型对照组,三七高、低剂量组和硫普罗宁组,在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周。同时设立正常对照组,连续14周灌胃给水。免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK、c-Jun蛋白的表达。结果 模型对照组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun均较正常对照组明显升高（P<0.01）;三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα、p-IκBα、p-JNK/c-Jun表达较模型对照组明显降低（P<0.01,P<0.05）。结论 三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα、p-JNK/c-Jun的过度表达,这可能是其有效防治酒精性肝病发生发展的重要机制之一。     

蔓性千斤拔素D通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控CIA大鼠炎症反应的相关机制

目的 观察蔓性千斤拔素D对大鼠胶原诱导型关节炎（CIA）的作用并探讨其作用机制。方法 将40只大鼠随机分为正常组、CIA组、甲氨蝶呤（MTX）组（1.35 mg·kg^-1）、蔓性千斤拔素D低剂量组（1.5 mg·kg^-1）及蔓性千斤拔素D高剂量组（3.0 mg·kg^-1）,每组8只,除正常组外,其余均采用Ⅱ型胶原诱导CIA模型。给药组通过灌胃给予相应药液,正常组给予相应体积生理盐水,MTX组每周1次,蔓性千斤拔素D各组每天1次,共给药28 d。实验中记录各组大鼠关节炎评分和关节肿胀度,苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠踝关节病理学变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Toll样受体2（TLR2）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κB（NF-κB） p65 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR2、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达量。结果 与正常组比较,CIA组大鼠踝关节明显肿胀,关节炎临床评分及关节肿胀度显著升高（P<0.01）,踝关节组织结构明显破坏,血清炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高（P<0.01）,TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与CIA组比较,各给药组大鼠关节炎临床评分及关节肿胀度均明显降低（P<0.05,P<0.01）,踝关节组织结构病理变化明显改善,血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,踝关节TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 蔓性千斤拔素D在一定程度上可降低类风湿关节炎大鼠炎性因子的表达,能起到良好的治疗作用,其作用机制可能是通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的活化而发挥抗炎作用。     

党参多糖调控NF-κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠T细胞免疫紊乱和气道炎症的影响

[目的] 研究党参多糖通过调控核转录因子κB（NF-κB）信号通路对慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）大鼠T细胞免疫紊乱和气道炎症的影响。[方法] 从60只SD大鼠中随机挑出50只建立慢阻肺“肺脾气虚证”模型,余下10只作为对照组。通过烟熏加脂多糖法并配合番泻叶浸液建立大鼠慢阻肺脾肺气虚证模型。将建模成功的大鼠随机分为5组,地塞米松组给予1.95 mg/kg的地塞米松,党参多糖高、中、低剂量组分别给予200、100、50 mg/kg的党参多糖,模型组和对照组均按照大鼠体质量1 mL/kg灌胃生理盐水。每日1次,连续治疗30 d。流式细胞仪检测大鼠外周血中CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平;瑞氏-吉姆萨染色（Giemsa）后对肺组织灌洗液中炎性细胞计数;苏木素-伊红（HE）染色检测大鼠肺组织病变;实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测大鼠肺组织NF-κB、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）信使核糖核酸（mRNA）相对表达量;通过免疫共沉淀法检测肺组织中NF-κB和IκBα结合水平;通过凝胶迁移实验（EMSA）检测大鼠肺组织中NF-κB与DNA结合情况;通过蛋白免疫印记（WB）检测大鼠肺组织核NF-κB、胞浆NF-κB、IκBα蛋白表达水平及磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-IκBα）水平。[结果] 治疗后,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组大鼠外周血CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均高于模型组（P<0.05）;模型组巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数量均高于对照组（P<0.05）,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均低于模型组（P<0.05）;与对照组相比,模型组大鼠肺组织出现严重炎性细胞浸润,气管壁变形增厚,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均出现好转;免疫共沉淀结果显示,IκBα与NF-κB可结合,且模型组IκBα和NF-κB结合最少,党参多糖低剂量组稍多,地塞米松组和中剂量组较多,党参多糖高剂量组更多,对照组最多。IκBα mRNA、胞浆NF-κB蛋白和IκBα蛋白相对表达水平结果显示：模型组均低于对照组（P<0.05）,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均高于模型组（P<0.05）。[结论] 党参多糖可抑制慢阻肺肺脾气虚证大鼠T细胞免疫紊乱,减轻气道炎症反应和肺组织病变,推测可能与抑制NF-κB信号传导,下调NF-κB mRNA和核NF-κB蛋白表达水平,上调IκBα mRNA和蛋白表达水平,上调胞浆NF-κB蛋白表达水平,抑制NF-κB核位移,抑制p-IκBα有关。     

藏红花素通过Nrf2/HO-1通路对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用

[目的] 探讨藏红花素对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障（BBB）的保护作用及其机制。[方法] 按随机数字表法将240只健康SD大鼠分为假手术组,模型组,低（10 mg/kg）、中（20 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量藏红花素组和尼莫地平（2 mg/kg）组,每组40只;采用夹闭大脑中动脉2 h的方法复制脑缺血再灌注大鼠模型,各组分别于造模手术前7 d开始每日1次腹腔注射给药（假手术组和模型组均给予0.9%氯化钠溶液）。再灌注24 h后,进行神经功能缺失评分,红四氮唑（TTC）染色法计算脑组织梗死率,失质量法检测脑组织含水量;苏木精-伊红（HE）染色法观察脑组织病理学改变;伊文思蓝渗透法检测BBB通透性;酶联免疫吸附（ELISA）法检测脑组织肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）、干扰素-γ （IFN-γ）含量;分光光度法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测脑组织闭合蛋白（Occludin）、闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、核因子E2相关因子2 （Nrf2）、血红素加氧酶-1 （HO-1）、胞浆核因子-κB p65 （NF-κB p65）、胞核NF-κB p65蛋白表达。[结果] 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺失评分、脑梗死体积率、脑含水量均升高（P<0.05）;脑组织可见水肿,神经元数量减少、空泡变性,胞核偏移、固缩深染,炎性细胞浸润等病理学改变;脑组织伊文思蓝渗透量升高（P<0.05）;脑组织TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MDA含量升高,SOD、CAT活性降低（P<0.05）;脑组织Occludin、ZO-1、Nrf2、HO-1表达量降低,胞浆NF-κB p65、胞核NF-κB p65表达量和胞核NF-κB p65/胞浆NF-κB p65比值升高（P<0.05）。与模型组比较,中、高剂量藏红花素组和尼莫地平组神经功能缺失评分、脑梗死体积率、脑含水量降低（P<0.05）;脑组织病理学改变明显改善,伊文思蓝渗透量（P<0.05）;TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MDA含量降低且SOD、CAT活性升高（P<0.05）;Oc－cludin、ZO-1、Nrf2、HO-1表达量升高,胞浆NF-κB p65、胞核NF-κB p65表达量和胞核NF-κB p65/胞浆NF-κB p65比值降低（P<0.05）。[结论] 藏红花素对脑缺血再灌注大鼠BBB结构和通透性具有一定的保护作用,能够减轻脑组织损伤,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路,抑制NF-κB入核,进而抑制氧化应激和炎症反应有关。     

柴芍六君子汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抗溃疡性结肠炎的机制

目的 探究柴芍六君子汤对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜损伤的防治作用及机制。方法 50只Balb/c雄性小鼠,随机分为正常组、模型组、柴芍六君子汤低、高剂量组、柳氮磺吡啶组。除正常组外,其余各组自由饮用2.5% DSS,连续7 d,造模成功后给予药物连续干预7 d。每天记录小鼠体质量、粪便等一般生理状态,计算疾病活动指数（DAI）评分。测量结肠长度;苏木素-伊红（HE）染色观察结肠黏膜组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、髓过氧化物酶（MPO）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κB（NF-κB）、NF-κB抑制蛋白（IκB）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量显著下降（P<0.01）,腹泻及便血严重,DAI评分显著增加（P<0.01）。与模型组比较,柴芍六君子汤治疗组小鼠体质量下降趋势得到显著缓解（P<0.01）,腹泻及便血状态显著改善,DAI评分显著下降（P<0.01）;结肠长度明显增加（P<0.05）;HE染色发现治疗组结肠黏膜损伤明显改善,炎细胞浸润减少;与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-1β、MPO含量显著升高（P<0.01）,SOD含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,治疗组血清中IL-1β、MPO水平显著降低（P<0.01）,SOD水平显著升高（P<0.01）;Western blot检测结果显示,与正常组比较,模型组小鼠结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平显著增加（P<0.01）,IκB蛋白表达量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,柴芍六君子汤治疗组小鼠结肠组织中炎症相关蛋白TLR4、MyD88、NF-κB、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,IκB蛋白表达量显著增加（P<0.01）。结论 柴芍六君子汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织的炎症性损伤。     

黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL^-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化。结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义。所有给药组的平均面积均低于模型组(P<0.01)。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P<0.01,P<0.01)。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P<0.01)。结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位。     

基于GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对高糖合并LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方（ZJTP）对高糖合并脂多糖（LPS）损伤后人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响及作用机制。方法 通过细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平确定LPS最适损伤浓度及作用时间、ZJTP含药血清的最佳作用浓度。将HUVECs分为空白组、模型组、ZJTP含药血清组、短链脂肪酸（SCFAs）混合液组。采用ELISA检测内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和TNF-α的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测G蛋白偶联受体43（GPR43）、β-抑制蛋白-2（β-arrestin-2）、核转录因子-κB抑制因子α（IκBα）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达；免疫荧光法（IF）观察NF-κB p65入核情况。运用小干扰核糖核酸（siRNA）的方法观察GPR43在炎性损伤调控中的作用。将干扰后的细胞分为空载体组、ZJTP含药血清组、Si-GPR43组、Si-GPR43+ZJTP含药血清组。ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α含量；Western blot检测通路蛋白表达；IF观察NF-κB p65入核情况。结果 最适造模条件为1 mg·L^-1 LPS作用24 h；最佳药物干预条件为5%的ZJTP含药血清作用24 h。与空白组比较，模型组ET-1含量显著升高，NO含量显著下降（P<0.01）；炎症因子水平显著上升（P<0.01）；GPR43和IκBα蛋白表达量下降，β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著升高（P<0.01）；NF-κB p65蛋白由核外转移至核内（P<0.01）。与模型组比较，ZJTP含药血清组ET-1含量下降，NO含量升高（P<0.05）；炎症因子水平下降（P<0.05）；GPR43和IκBα蛋白表达升高，β-arrestin-2和NF-κB p65表达下降（P<0.05）；NF-κB p65由核外转移至核内的数量减少（P<0.01）。机制研究发现，与Si-GPR43组比较，ZJTP含药血清干预后IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著下降（P<0.01）；GPR43和IκBα蛋白表达量显著上升（P<0.01），β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著下降（P<0.01）；NF-κB p65由核外转移至核内数量减少（P<0.01）。结论 ZJTP对高糖合并LPS诱导炎性损伤的HUVECs具有保护作用，其机制可能与调控GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路有关。