肾局部内皮素在蛋白尿发生发展中变化及作用研究

采用大鼠阿霉素性肾病模型动态观察不同病期大鼠血压、肾皮质血流、血、肾内皮素及２４ｈ尿蛋白量变化，结果：肾以质内皮素升高发生在尿蛋白升高之前，随内皮素的升高，尿蛋白分泌量也随之增高，两者显著相关，内皮素尚可导致肾皮质血流的减少，在蛋白尿高峰期及高峰期后，减少的肾皮质血流可加重尿蛋白的发展，两者呈显著负相关。结论：肾皮质内皮素异常增加是导致产生蛋白尿的机理之一。     

阿霉素肾病综合征大鼠肾内皮素变化及其影响的研究

目的观察内皮素对肾血流及蛋白尿的影响，探讨内皮素、肾血流在蛋白尿发生发展过程中的作用。方法制备大鼠阿霉素性肾病模型，动态观察不同病期大鼠血压、肾皮质血流、肾内皮素及24h尿蛋白量的变化，并将各指标进行相关分析。结果肾皮质内皮素升高发生在尿蛋白升高之前，随内皮素的升高，尿蛋白漏出量也随之增高，两者显著相关。内皮素可导致肾皮质血流的减少，在蛋白尿高峰期及高峰期后，减少的肾皮质血流可加重尿蛋白的发展，两者呈显著负相关。结论肾皮质ET的异常增加是导致蛋白尿发生的原因之一，肾血流量减少可加重蛋白尿的产生。     

肾局部血流在蛋白尿产生中的机制初探

目的 了解肾局部血流在蛋白尿发生发展过程中的变化及产生机制。方法 ①一次性注射法复制大鼠阿霉素肾病综合征模型。并测取２４ｈ尿蛋白含量;②分别于蛋白尿的前期、上升期、高峰期及下降期和多功能监护仪测量血压变化,激光多普勒微血管流量测定仪测定肾皮质血流;③取血及肾皮质匀浆用放射免疫法检测内皮素（ＥＴ）含量,用Ｇｒｉｅｓｓ法检测一氧化氮（ＮＯ）代谢产物ＮＯ２＾－,代表ＮＯ水平;④分别研究肾皮质血流与血浆、肾皮质的ＥＴ、ＮＯ、尿蛋白排泌量的变化及相关性。结果 ①平均动脉压（ｍｍＨｇ）正常鼠４个时间点数值为１１８,１１９,１１８,１１７;肾病鼠为１１６,１２４,１２９,１２１;各时间点与同期正常鼠间差异无显著性;②肾局部血流量（Ｐｕ）：正常鼠４个时间点值为６６．２,６８．４,６７．２,７０;肾病鼠为５８,５２,１９,２３;     

MAPKs激活在慢性醛固酮灌注所致高血压肾损伤中的作用

目的探讨MAPKs激活在慢性醛固酮灌注诱发高血压肾损伤中的作用.方法6周SD大鼠随机分组为对照组,醛固酮/盐组及醛固酮拮抗剂eplerenone治疗组,采用Westem blotting技术检测各组大鼠肾皮质组织MAPKs亚型ERK1/2,JNK及p38MAPK活性.结果醛固酮/盐组大鼠血压显著升高,肾重/体重比值增加,尿蛋白排泄量增加,其肾皮质组织ERK1/2及JNK活性明显升高(P＜0.05).eplerenone治疗降低了醛固酮诱发的高血压,蛋白尿以及肾皮质MApKs活性.结论MAPKs激活与慢性醛固酮灌注致高血压肾损伤密切相关,Eplerenone其具有肾脏保护作用.     

阿魏酸钠对肾大部切除大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨阿魏酸钠对5/6肾切除大鼠肾脏病变的保护作用.方法大鼠随机分为4组,假手术组(Sham组),肾切除组(NX组),NX+阿魏酸钠组(SF组),NX+依那普利(E组).8周后检测大鼠血压、24h尿蛋白定量、血肌酐、BUN,肾皮质内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)等,观察肾组织病理改变,并应用RT-PCR的方法检测肾皮质内TGF-β1 mRNA的表达;Western蛋白印迹方法检测TGF-β1蛋白质的表达.结果术后大鼠出现明显的尿蛋白[(201.2±4.1)mg/24h,肾皮质ET-1含量显著升高,且有明显的肾小球硬化,而阿魏酸钠和依那普利均能减少尿蛋白[阿魏酸钠(78.1±3.1)mg/24h,依那普利(65.9±6.3)mg/24h,与假手术组比,P＜0.01],减少肾皮质ET-1含量和肾小球硬化指数.肾大部切除后肾皮质TGF-β1mRNA及其蛋白的表达明显升高,用药组上述指标明显降低(SF组和E组与NX组相比,P＜0.01).结论在5/6肾大部切除模型中,阿魏酸钠对5/6肾大部切除大鼠肾脏有明显的保护作用,其机制可能其减少肾脏ET-1的生成,抑制TGF-β1的表达有关.     

高蛋白饮食及大量蛋白尿对慢性肾衰大鼠的加重损害作用

目的探讨高蛋白饮食及大量蛋白尿对慢性肾衰大鼠的加重损害作用。方法通过先用5／6肾切除大鼠制作慢性肾功能衰竭的动物模型，成功后再分别给予5／6肾切除大鼠不同蛋白饮食喂养2个月，制作有大量蛋白尿的慢性肾衰动物模型。生化检测不同蛋白饮食喂养的5／6肾切除大鼠血BUN、SCr、24h尿蛋白定量；放免检测血内皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素Fla(6-keto-PGFlα)；分光光度计比色法检测血和肾组织SOD、MDA、GSH—PX水平。结果给予5／6肾切除大鼠高蛋白饮食，可诱导建立CRF大鼠大量蛋白尿模型；高蛋白饮食及大量蛋白尿可通过加重CRF大鼠的血液动力学异常(升高血栓素B2、内皮素，降低血6-酮-前列腺素F1α)；减弱大鼠血超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，加速肾损害。结论高蛋白饮食可通过导致5／6肾切除大鼠大量蛋白尿，影响肾脏血管活性物质表达，降低5／6肾切除大鼠抗氧化能力而加速慢性肾衰的进展。     

阿霉素肾病大鼠podocin mRNA的表达及全反式维甲酸对其表达的影响

目的 观察阿霉素诱导的肾病模型大鼠肾脏podocin mRNA的表达特点和全反式维甲酸(ATRA)对其表达的影响,探讨在蛋白尿发生发展中podocin的作用以及ATRA治疗肾病的可能机制.方法 大鼠随机分为3组(对照组、模型组、干预组),建立阿霉素肾病大鼠模型,于阿霉素注射后第2天干预组每天给予20 mg/kg ATRA灌胃,每周检测24 h尿蛋白定量,4周后处死大鼠,检测血清白蛋白、胆固醇、甘油三酯,RT-PCR检测podocin mRNA的表达.结果 ①模型组、干预组大鼠与对照组相比,pdocin mRNA表达明显增加(P＜0.01),干预组podocin mRNA较模型组有所降低(P＜0.01).②阿霉素诱导的大鼠于注射阿霉素后24 h尿蛋白开始逐渐升高,第28天达高峰,干预组与模型组相比大鼠尿蛋白明显减少,第28天时降低约57％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 阿霉素肾病大鼠肾皮质podocin mRNA的表达发生了显著变化;ATRA可减少肾病大鼠尿蛋白量,同时减少肾皮质podocin mRNA的表达.     

足细胞损伤在多柔比星肾损害大鼠病程中变化及意义

目的 通过检测肾组织WT-1的表达变化来动态观察多柔比星肾纤维化大鼠足细胞的数目的变化,探讨其与蛋白尿和肾纤维化发展的时效量效关系.方法 36只SD大鼠随机分为模型组和对照组,尾静脉注射多柔比星建立多柔比星肾纤维化大鼠模型,首次注射多柔比星起,第4、7、10、13周每组处死模型组大鼠5只和对照组4只,留取肾脏标本,应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变,BCA法检测24 h尿蛋白排泄率,免疫组化和Western blot的半定量方法检测大鼠肾皮质中WT-1蛋白的表达.结果 第4周开始,肾纤维化组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P＜0.01),肾脏病理在第7周时出现局灶肾小球硬化,第10周时呈典型肾小球硬化,第13周时出现广泛的肾小球硬化和小管间质纤维化.随着模型组大鼠肾组织病理改变逐步加重及尿蛋白量逐渐增加,肾皮质WT-1蛋白的表达量逐渐减少,第4、7、10、13周分别较对照组下降24%、42%、56%、 70%.结论 足细胞相对密度及相对数量的减少与蛋白尿的严重程度成正比,并与肾纤维化的发展呈时间依赖性.     

肾脏缺血再灌注后内皮素-1、一氧化氮改变

目的：探讨再灌注后内皮细胞自分泌、旁分泌改变对肾脏血液动力学及肾功能的影响。方法：采用放免及生化方法测定内皮素、一氧化氮及肾功能改变，多谱勒血流计测定肾皮质血流变化。结果：缺血再灌注后肾组织及血液中ET－1水平升高，一氧化氮水平降低，肾皮质ET－1／NO水平与其血流量变化及血肌酐水平显著相关。结论：再灌注后肾血管内皮细胞的自分泌、旁分泌作用参与再灌注后肾脏血液动力学改变，在急性缺血性肾衰的发病机制中有重要作用。     

雷公藤多甙和消炎痛对蛋白尿病人肾脏作用的临床研究

目的　研究雷公藤多甙 (TripterigiumWilfordiiGlycosides ,TWG)对蛋白尿患者肾血流动力学的作用 ,并与消炎痛比较 ;方法　TWG组和消炎痛组各 1 5例病人 ,治疗前后分别检测尿蛋白定量、肾小球滤过率 (GFR)、肾有效血浆流量 (ERPF)和肾血管阻力 (RVR) ;结果　两组患者尿蛋白排泄均显著减少 ,TWG组治疗后RVR、GFR、ERPF无显著性变化 ,而消炎痛组RVR升高、ERPF下降、GFR无显著性下降 ;结论　消炎痛减少尿蛋白排泄伴ERPF降低和RVR升高 ,而TWG减少尿蛋白排泄而不伴ERPF和RVR变化。     

肾小球足细胞裂隙膜蛋白Podocin的变化与氧化应激反应

目的探讨氧化应激反应在肾小球足细胞裂隙膜分子屏障损伤中的作用。方法32只体重180～220g的♂SD大鼠按阿霉素给药剂量随机分成4组。于给药第3周末测尿蛋白的变化,同时处死大鼠取肾皮质检测氧化应激指标及肾小球Podocin蛋白的分布及半定量。结果①阿霉素组大鼠24h尿蛋白量及肾皮质丙二醛（MDA）量高于正常对照组,超氧化物歧化酶（SOD）量低于正常对照组,尤以中剂量组变化最明显。②正常对照组大鼠Podocin沿肾小球基底膜呈深褐色连续、线形分布;在中剂量组呈淡褐色点状或短线条状分布;量化分析显示,阿霉素组肾小球Podocin免疫组化分数明显低于正常对照组,尤以中剂量组最显著。③肾小球Podocin蛋白免疫组化分数与肾皮质MDA浓度呈负相关,与肾皮质SOD浓度呈正相关。结论蛋白尿的发生与肾小球足细胞裂隙膜蛋白Podocin的变化密切相关;肾小球足细胞裂隙膜蛋白Podocin的减少或缺失与以脂质过氧化反应为主的氧化应激反应密切相关。     

甘糖酯对糖尿病大鼠肾小球基底膜阴离子位点的影响

目的：观察甘糖酯对糖尿病大鼠尿蛋白排泄和肾上球基底膜阴离子位点的影响。方法：糖尿病大鼠在糖酯处理３周后，肾皮质小块浸泡于多聚亚胺溶液，用电子显微镜定量研究基底膜阴离子位点。结果；与对照组大鼠相比，糖尿病大鼠尿蛋白排泄量明显增加，肾小于 底膜阴离子位点明显减少；甘糖酯处理使糖尿病大鼠蛋白排泄量显著减少，使基底膜阴离子位点明显增加。     

CD2AP和α-actinin-4在大鼠阿霉素肾病模型中的表达

目的：观察CD2相关蛋白（CD2AP）和α-actinin-4这两种足细胞相关分子在大鼠阿霉素肾病模型中蛋白表达水平的变化，探讨它们与蛋白尿发生发展的相关性。方法：30只SD大鼠随机分为肾病模型组和正常对照组，建立阿霉素肾病模型，在2、4、6、8周，应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变，BCA法检测24h尿蛋白排泄量，半定量Western Blot的方法检测大鼠肾皮质中CD2AP和α-actinin-4的表达。结果：随着肾病模型组大鼠尿蛋白量逐渐增加，肾组织病理改变逐步加重，肾皮质CD2AP的表达量先明显增加，后逐渐降至对照组水平，2、4、6周分别为对照组的3．0、1．8、1．2倍，而α-actinin-4的表达量无明显变化。结论：阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2AP和α-actinin-4这两种足细胞相关分子的蛋白表达规律不同，前者与蛋白尿的发生发展有一定程度的相关性，后者则与尿蛋白量的变化无关。     

肾特灵配合泼尼松对阿霉素大鼠肾小球电荷屏障影响的实验研究

目的:探讨肾特灵配合泼尼松治疗肾病综合征蛋白尿的作用机制。方法:采用阿霉素制作大鼠肾病模型,检测应用肾特灵和泼尼松后大鼠尿蛋白、血清白蛋白、胆固醇、血肌酐、尿素氮指标,采用PEI染色、AB染色,电镜观察电荷屏障损伤情况。结果:肾特灵加泼尼松能减少尿蛋白,升高血清白蛋白,降低胆固醇,还能使硫酸肝素蛋白多糖、唾液酸糖蛋白增多,减少阴电荷丢失,修复电荷屏障,其作用优于单纯使用泼尼松。结论:肾特灵加泼尼松通过增加硫酸肝素蛋白多糖、唾液酸糖蛋白,减少阴电荷丢失,修复电荷屏障来减少尿蛋白电荷屏障的损伤是减少蛋白尿的主要原因。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的探讨阿魏酸钠(SF)对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)活性的影响.方法链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠灌胃给予SF 110mg·kg-1.·d-1,治疗8周,测定各组大鼠肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、PKC活性及丙二醛含量,观察肾脏病理改变.结果与正常对照组相比,糖尿病对照组大鼠肾重体重、肌酐清除率、24h尿蛋白、肾皮质胞膜PKC活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、肾皮质丙二醛显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性显著降低,肾脏病理学改变明显,SF治疗组上述指标显著改善.结论 SF可通过抑制肾脏PKC的激活对糖尿病大鼠肾脏产生保护作用.     

Dynamic changes of Nephrin expression in rats with chronic proteinuria renal fibrosis

目的 检测蛋白尿多柔比星肾损伤大鼠足细胞相对数目及Nephrin的表达变化,探讨Nephrin表达变化在蛋白尿发生发展中的意义.方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=16)和模型组(n=20),应用多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射、一周末后重复的方法建立大鼠蛋白尿慢性肾纤维化模型,于第1次注射多柔比星后4、7、10、13周末收集标本,观察大鼠24 h尿蛋白、血生化指标等,光镜、电镜观察肾组织的病理改变,Western blot检测大鼠肾皮质中Nephrin蛋白的表达,免疫组化观察Wilm肿瘤蛋白1(WT1)表达.结果 ①第4周末开始,模型组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P<0.01).②肾脏病理在第7周末时出现局灶肾小球硬化,第13周末肾小球呈明显硬化表现,第10周末见足细胞脱离基底膜.③肾皮质WTl蛋白的表达量逐渐减少,但肾脏Nephrin蛋白表达4周末时较对照组增加(P<0.01),7周末后逐渐降低.结论 足细胞相对密度及相对数量的减少可能是蛋白尿发生、发展的重要因素,病程中Nephrin蛋白表达量呈先升后降的变化趋势,疾病早期其表达增加可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应.     

内皮素与一氧化氮对肾病大鼠系膜细胞增生的影响

目的 :研究阿霉素肾病大鼠不同时期血浆及肾局部内皮素 (Eendothelin ,ET)、一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)的变化对系膜细胞增生的影响。方法 :4 8只SD大鼠随机分为对照组、肾病组及激素组。在实验第 1天 ,1周末 ,4周末 ,8周末应用生化法测定血浆及肾局部NO浓度及 2 4h尿蛋白排泌值 ,应用放射免疫法测定血浆及肾局部ET浓度 ,应用免疫组化法测定肾小球系膜细胞中CyclinD1,P2 7及PCNA阳性细胞率。结果 :第 1周末肾病组与激素组大鼠尿蛋白显著增高。第 4周末及实验末肾病组大鼠血浆及肾局部ET、尿蛋白、系膜细胞CyclinD1及PCNA阳性细胞率显著增高 ,P2 7阳性细胞率及血浆及肾局部NO显著降低 ,激素组大鼠血浆及肾局部ET、尿蛋白、系膜细胞CyclinD1及PCNA阳性细胞率较肾病组显著降低 ,P2 7阳性细胞率及血浆及肾局部NO显著增高。结论 :阿霉素肾病模型中 ,NO合成不足导致ET分泌增加 ,应是导致系膜细胞增生的重要原因。     

苦瓜提取物对糖尿病大鼠肾皮质Na~+,K~+-ATP酶活性的影响

目的探讨苦瓜提取物(MCE)对糖尿病肾病(DN)的保护作用及对肾皮质Na+,K+-ATP酶活性的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型,随机将大鼠分为正常组,模型组,MCE预防给药低、高剂量组,MCE治疗给药低、高剂量组。测定各组大鼠24 h尿蛋白量、血肌酐、尿素氮浓度及肾皮质Na+,K+-ATP酶活性的变化,HE染色观察肾脏病理学变化。结果与正常组相比,模型组大鼠的24 h尿蛋白量、血清肌酐、尿素氮浓度及Na+,K+-ATP酶活性均明显升高(P<0.05);与模型组相比,MCE各给药组大鼠的24 h尿蛋白量、血清肌酐、尿素氮浓度及肾皮质Na+,K+-ATP酶活性均明显降低(P<0.05或P<0.01),且MCE各给药组均在不同程度上减轻了DN组大鼠的肾小球结构模糊、细胞数增多等病理变化;相同剂量下与治疗给药组比较,MCE预防给药组24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮浓度及肾皮质Na+,K+-ATP酶活性均下降更为明显(P<0.05),减轻病理变化也更显著。结论苦瓜提取物对DN大鼠的肾损伤有一定保护作用,能阻遏DN大鼠肾皮质Na+,K+-ATP酶活性的升高。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾皮质血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及PPARγ激动剂吡格列酮对其表达的影响.方法:①雄性SD大鼠经单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为55 mg/kg)建立糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM组) 、糖尿病吡格列酮( pioglitazone 10 mg·kg-1·d-1)干预组(DP组),并以正常组(NC 组)作对照.②干预8周后,观察各组大鼠24 h尿蛋白(mg/24 h)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血糖及血脂的变化;用免疫组织化学和逆转录PCR检测肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达.结果:①DM组大鼠24h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及mRNA表达均较NC组明显升高;DP组大鼠24 h尿蛋白、BUN、Scr、肾皮质VEGF蛋白及 mRNA表达较DM组均有降低.②DM组血糖、血脂与NC组相比,差异有统计学意义,与DP组比较差异无统计学意义.结论:糖尿病大鼠肾皮质VEGF表达增强,吡格列酮可抑制糖尿病大鼠肾皮质VEGF的表达,减少尿蛋白,改善肾功能,延缓糖尿病肾病的发生、发展,发挥非降糖的直接肾保护作用.     

高蛋白饮食及大量蛋白尿对慢性肾功能衰竭大鼠的加重损害作用

目的:观察高蛋白饮食及大量蛋白尿对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠的加重损害作用。方法:通过先用5/6肾切除大鼠法制作CRF动物模型,成功后再分别给予5/6肾切除大鼠不同蛋白饮食喂养2个月,制作有大量蛋白尿的CRF动物模型。生化检测不同蛋白饮食喂养的5/6肾切除大鼠血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serumcreatinine,Scr)和24 h尿蛋白定量;放免检测血内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)、6-酮-前列腺素Flα(6 ketone prostaglandin Flα,6-Keto-PGFlα);分光光度计比色法检测血和肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平。结果:高蛋白饮食及大量蛋白尿可通过加重CRF大鼠的血液动力学异常,升高TXB2和ET-1,降低血6-keto-PGFlα;减弱大鼠血SOD和GSH-Px的活性,加速肾损害。结论:高蛋白饮食可通过导致5/6肾切除大鼠大量蛋白尿,影响肾脏血管活性物质表达,降低5/6肾切除大鼠抗氧化能力而加速CRF的进展。