mRNA定量法检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价

目的评价应用mRNA定量法进行结核分枝杆菌利福平、异烟肼药物敏感性分析的临床应用价值。方法应用定量聚合酶链反应（PCR）方法检测三株结核分枝杆菌标准株在利福平、异烟肼处理24小时后85B mRNA表达水平的变化;并以不同的结果判断标准,比较本方法和绝对浓度法对87株临床分离菌株利福平、异烟肼药敏试验检测结果的差异性。结果利福平或异烟肼敏感株在相应的药物处理24小时后85B mRNA表达水平明显下降,分别为无药对照的0.01%和0.35%以下,而耐药株无明显变化。以85B mRNA的表达水平下降到无药对照的1%以下为敏感,大于10%为耐药,1%～10%之间为可疑进行判断,本方法与绝对浓度法有一致的检测结果。结论85B mRNA可以作为结核分枝杆菌药物敏感性试验的分子标志,应用85B mRNA检测结核分枝杆菌的耐药性是一种快速有效的检测方法。     

基因芯片法用于检测长沙地区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解长沙市中心医院2013年1月1日至2014年9月30日临床分离的1 031株结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。方法将结核分枝杆菌培养阳性,并经鉴定为结核分枝杆菌的1 031株菌株,采用绝对浓度法进行常规药敏检测,同时应用基因芯片技术检测利福平和异烟肼耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上的位点突变,并对2种结果进行比较。结果基因芯片法检测利福平耐药性中,其敏感株896株,耐药株135株;检测异烟肼耐药性为敏感株901株,耐药株130株。与绝对浓度法比较,基因芯片检测利福平耐药结果与其一致的菌株共1 011株(包含敏感株894株,耐药株117株),符合率为98.00%;基因芯片检测异烟肼耐药结果与其一致的菌株共1 005株(包含敏感株890株,耐药株115株),符合率为97.48%。与利福平耐药相关的rpoB基因的突变位点最常见的为531TCG→TTG突变,占耐药株的51.11%;其次为526CAC→TAC突变耐药株的10.37%;526CAC→GAC共11株菌株突变,占耐药菌株的8.15%。异烟肼耐药主要是由katG315AGC→ACC位突变引起,占耐药株的83.85%,inhA-15C→T突变仅占12.30%。结论基因芯片法与绝对浓度法结果高度一致,可成为筛查利福平和异烟肼耐药性的快速有效方法,长沙地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药以rpoB531,526及katG315突变位点为主。     

应用微孔噬菌体扩增法检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性

目的　应用并评价微孔噬菌体扩增法 (micro wellphagereplicationassay ,MPRA)快速检测临床结核分枝杆菌分离株对利福平的敏感性。方法　将适当浓度的利福平溶液作用于结核分枝杆菌临床分离株 ,一定时间后 ,加入噬菌体悬液。应用MPRA法检测利福平药物的敏感性。结果　应用绝对浓度法对利福平敏感的 4 2株菌株中 38株MPRA法敏感 ;绝对浓度法对利福平耐药的 131株菌株中 12 4株MPRA法耐药。MPRA法与绝对浓度法的符合率为 93 6 % (16 2 / 173) ,与绝对浓度法相比 ,MPRA法的敏感度为 94 7% (12 4 / 131) ,特异度为 90 5 % (38/ 4 2 )。结论　MPRA法不失为一种快速检测结核分枝杆菌对利福平敏感性的较好方法     

Geno-typeMTBDRplus分子线性探针杂交技术在结核病诊断与耐药性检测中的应用价值

目的　评价Geno-type MTBDRplus 分子线性探针杂交技术显色法（以下简称杂交酶显色法）在结核病快速诊断及检测异烟肼（INH）和利福平（RIF）药物敏感中的应用。方法　选取2016 年1 月~2019 年12 月的临床确诊结核病患者的临床标本413 例,同时采用BD 960 液体培养法和杂交酶显色法进行结核分枝杆菌检测,并对其中108 株菌株进行异烟肼和利福平药敏检测,比较两种方法的一致性。结果　杂交酶显色法测得结核分枝杆菌358 例（86.68%）,BD 960 液体培养法测得结核分枝杆菌376 例（91.04%）;两种方法结果相符349 例（84.50%）。108 株菌株中杂交酶显色法和BD 960 液体培养法分别检出异烟肼敏感87 株（80.56%）和88 株（81.48%）,检出利福平敏感96 株（88.89%）和94 株（87.04%）。两种方法对结核分枝杆菌的鉴定及异烟肼、利福平药物敏感检测具有高度一致性。结论　与BD960 液体培养法相比,杂交酶显色法检测结核分枝杆菌及异烟肼和利福平药敏更为快速有效。     

实时荧光PCR分子信标检测耐利福平结核分枝杆菌印rpoB基因

目的 应用实时荧光PCR分子信标技术,建立快速检测临床标本中结核分枝杆菌利福平rpoB相关耐药突变点方法,探讨其缩短耐药实验报告时间的临床应用价值.方法 以分枝杆菌药物敏感性实验绝对浓度法为标准,12株非结核分枝杆菌、4株非分枝杆菌作对照,对174例结核患者临床分离株应用实时荧光PCR分子信标方法,检测利福平rpoB核心区域的耐药突变点并将结果与直接测序进行比较.结果 (1)实时荧光PCR分子信标方法:82例结核分枝杆菌利福平敏感菌株中,3例发生rpoB基因突变,特异度为96.3%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,82例检出耐药突变,敏感度为89.1%;准确性为92.5%.(2)DNA直接测序分析:82例结核分枝杆菌利福平敏感株中,1例发生rpoB基因突变,特异度为98.8%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,83例发生:rpoB基因突变,敏感度为90.2%;准确性为94.2%.检测174株结核分枝杆菌临床分离菌株,与实时荧光PCR分子信标方法检测一致性为98.3%(171/174).结论 实时荧光PCR分子信标方法检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变点可作为结核患者快速耐药检测的初筛方法之一.     

基因芯片技术检测对结核分枝杆菌耐药的诊断价值

目的探讨基因芯片技术检测在结核分枝杆菌耐药诊断中的应用价值。方法痰涂片结核分支杆菌阳性患者194例,应用基因芯片技术检测痰标本结核分枝杆菌耐药情况;以痰细菌学检查+药物敏感试验(比例法)结果为"金标准",采用一致性Kappa检验,分析基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药的诊断价值。结果比例法检出敏感菌株164例,耐药菌株30例,其中利福平耐药3例,异烟肼耐药2例,2种药物双重耐药25例;基因芯片技术检出敏感菌株166例,耐药菌株28例,其中利福平耐药2例,异烟肼耐药1例,2种药物双重耐药25例;基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药率(14.43%)与比例法(15.46%)比较差异无统计学意义(P0.05);基因芯片技术诊断结核分枝杆菌的多药耐药率(12.87%)、单药耐药率(1.55%)与比例法(12.87%、2.57%)具有一致性(Kappa=0.960,P0.001;Kappa=0.960,P0.001)。结论基因芯片技术诊断结核分枝杆菌耐药具有简便、快捷、准确的特点,对及时准确进行抗结核治疗有重要意义。     

结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立

目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况，以此来判断耐药结果。结果在56个利福平耐药菌株中，有50个菌株都在rpoB基因上榆出有突变，利福平耐药突变检出率为89．3％（50／56）；有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变。有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变，异烟肼耐药突变检出率为81．0％（47／58）；有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测。     

聚合酶链反应-测序技术快速检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG基因突变的研究

目的应用PCR-DNA测序技术快速检测耐异烟肼结核分枝杆菌分离株KatG基因突变,评价其在检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性方面的应用价值。方法47株耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株及30株结核分枝杆菌敏感分离株用PCR-DNA测序技术检测KatG基因突变。结果47株耐异烟肼结核分枝杆菌分离株中,有31株KatG基因检出有突变,突变检出率为66.0%(31/47);30株结核分枝杆菌敏感株检出1株KatG基因突变。结论PCR-DNA测序技术方法敏感、准确、特异,可快速检测结核分枝杆菌KatG耐药基因突变,有利于耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性的快速检测。     

聚合酶链反应-测序技术快速检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG基因突变的研究

目的 应用PCR-DNA测序技术快速检测耐异烟肼结核分枝杆菌分离株KatG基因突变,评价其在检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性方面的应用价值.方法 47株耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株及30株结核分枝杆菌敏感分离株用PCR-DNA测序技术检测KatG基因突变.结果 47株耐异烟肼结核分枝杆菌分离株中,有31株KatG基因检出有突变,突变检出率为66.0%(31/47);30株结核分枝杆菌敏感株检出1株KatG基因突变.结论 PCR-DNA测序技术方法敏感、准确、特异,可快速检测结核分枝杆菌KatG耐药基因突变,有利于耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性的快速检测.     

阳江市耐多药结核杆菌抗结核药物敏感性研究

选取2012年5月~2013年10月间的144份结核菌药物敏感标本,对其进行抗结核药物(利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇)的敏感性进行检测,分析检测结果。结果研究结果显示,非结核分枝杆菌19份,占13.19%;结核分枝杆菌125份,占86.81%。在非结核分枝杆菌中,对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇均耐药的16例,占84.21%;在结核分枝杆菌中,耐多药(异烟肼和利福平同时耐药)29份,占23.20%。阳江市耐多药结核杆菌对抗结核药物具有较高的耐药率,需引起临床重视。     

噬菌体法与BacT／ALERT3D检测吡嗪酰胺对耐药性结核分枝杆菌的比较研究

【目的】建立噬菌体生物扩增法（PhaB法）快速测定吡嗪酰胺（PZA）耐药性,探讨其在结核分枝杆菌（MTB）PZA耐药性测定中的应用价值。【方法】应用MTB噬茵体法快速MTB耐药的PhaB方法并用于测定115株MTB-1盎床分离株耐药性。同时与BacT／ALERT3D药敏试验结果相比较,对耐药性测定结果不符合的菌株测定其最低抑茵浓度（MIC）。【结果]PhaB法检测PZA耐药性的最佳测定条件为pH值5．5、药物浓度200mg／L、37℃作用48h。115株临床分离株,PhaB法敏感90株,耐药25株;BacT／ALERT3D法敏感87株,耐药28株;其中两种方法均敏感85株,均耐药24株,即测定结果相符109株,符合率94．78％;测定结果不符6株,不符合率5．22％。如以BacT／ALERT3D测定结果为判断标准,则PhaB检测PZA耐药性的敏感性为85．71％（24／28）,特异性为97．70％（85／87）,阳性预测值为96％（24／25）,阴性预测值为94．44％（85／90）,准确性为94．78％（109／115）。【结论]PhaB法检测PZA耐药性只需2～3d时间,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为MTB的PZA耐药性快速筛选方法。     

HAIN用于检测原发性耐药结核的研究

目的通过与传统的比例法在新发涂阳病人中对结核分枝杆菌进行耐药检测比较,评价HAIN（线性探针）用于检测原发性耐药结核的可行性。方法随机抽取我院2012年1月至2013年3月新发涂阳病人的痰标本,分别进行HAIN检测和酸性罗氏培养、比例法药敏试验,并对结果进行分析比较,共323例病人被纳入分析。结果以比例法为金标准,HAIN方法对异烟肼（P=0.823）和利福平（P=1.000）的耐药检测结果与金标准的差异无统计学意义,HAIN检测异烟肼耐药的灵敏性为80.4%、特异性为96.6%,检测利福平耐药的灵敏性为95.8%、99.6%。HAIN对原发耐多药结核的检测（P=0.790）与金标准的差异也无统计学意义,灵敏性为78.9%、特异性为97.9%。结论 HAIN技术适用于临床原发耐药结核的快速筛查。     

中药单体抗多重耐药鲍曼不动杆菌抑菌分析

目的 通过观察几味中药单体(柚皮素、柚皮苷、小檗碱半硫酸盐、棓丙酯)对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响,为临床上治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的药物.方法 采用微量肉汤稀释培养法检测不同浓度的中药单体处理后的22株多重耐药鲍曼不动杆菌和2株标准菌株的牛长情况.结果 柚皮素、柚皮苷和小檗碱半硫酸盐对多重耐药鲍曼不动杆菌和标准菌株无抑制作用;棓丙酯能影响鲍曼不动杆菌生长,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为64~128μg/ml,最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)为128~61μg/ml.结论 棓丙酯能抑制多重耐药鲍曼不动杆菌,可作为一种潜在新药用于临床;从中药单体中寻找抗菌药物是解决目前多重耐药菌的感染的有效途径之一.     

结核分枝杆菌临床分离株对三种氟喹诺酮类药物的敏感性分析研究

目的对结核分枝杆菌（MTB）临床分离株对氧氟沙星（OFX）、左氧氟沙星（LFX）和莫西沙星（MFX）三种临床常用的氟喹诺酮类药物的敏感性进行分析研究,为临床用药提供依据。方法本研究采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的最低抑菌浓度（MIC）检测。对来自我院不同结核病患者的163株MTB临床分离株进行0FX、LFX、MFX三种药物的MIC检测和BactecMGIT960药敏检测。结果163株中OFX耐药株占35．6％;耐多药（MDR）结核菌株中,OFX耐药率为73．5％,MDR菌株中LFX耐药率超过一半以上;所有MTB菌株MFX的MIC值均≤1μg／ml。结论目前在MTB临床分离株中,OFX和LFX已出现较高的耐药率,值得引起临床医生的重视,MFX在MDR结核和广泛耐药（XDR）结核中显示出良好的抗菌效果,给MDR结核病的治疗带来希望。     

Experimental in vitro efficacy study on the interaction of epiroprim plus isoniazid against Mycobacterium tuberculosis

Thirty Mycobacterium tuberculosis strains (8: INH(R)/INH(R), 12: INH(R)/RIF(S), 10: INH(S)/RIF(S)) were examined against MICs of epiroprim (EPM) and isoniazid (INH) separately or in association. EPM alone proved to be insufficiently active against the various mycobacterial isolates (MIC > or =256 microg/ml). The observed average sensitivity to the association of EPM plus INH was, in contrast, considerably increased, as reflected by reduced MICs and lower percentages of resistant strains. MICs ranged between 16 and 32 microg/ml EPM and 2 and 4 microg/ml INH for INH(R) strains. All INH(S) isolates were inhibited by a concentration of 0.125 microg/ml EPM and 0.06 microg/ml INH. The fractional inhibitory concentration indices indicated an additive activity on INH(R)/RIF(R) strains and a synergistic activity on INH(R)/RIF(S) and INH(S)/RIF(S) strains. The synergistic activity of this drug association needs to be confirmed in an animal model.     

结核分枝杆菌临床分离株药敏结果与耐药程度的关联分析

目的 探讨结核分枝杆菌临床分离株对12种抗结核药物的MIC值及其药敏检测结果 与耐药程度的关联规律,从而为临床制定治疗方案提供借鉴依据.方法 采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的MIC检测.对上海市肺科医院2009年1-6月间的163株结核分枝杆菌临床分离株进行RFP、INH、SM、EMB、OFLX、LVFX、MOX、AMK、CPM、PTA、CLA和PAIN的MIC检测和Bactec MGIT快速培养仪药敏检测,并进行MIC与耐药程度的关联性分析.结果 67%(42/62)的SM耐药株MIC≥16 μg/ml,63%(51/81)的INH耐药株MIC≥8 μg/ml,77%(50/65)的RFP耐药株MIC≥8 μg/ml,20%(12/60)的EMB耐药株MIC≥4 μg/ml;43%(25/58)的OFLX耐药株MIC≥8 μg/ml;41%(15/37)的AMK耐药菌株MIC≥16 μg/ml,41%(12/29)的CPM耐药菌株MIC≥4 μg/ml.OFLX耐药株的3个氟喹诺酮类药物的MIC(OFLX、LVFX和MOX的MIC分别为2～128、1～32和0.0625～1 μg/ml)差异有统计学意义(F=16.874,P<0.01);SM、INH、RFP、EMB、OFLX、AMK和CPM在任6种及7种药物同时耐药株中的MIC值(分别为0.5～128、2～64、0.25～128、1～32、1～64、0.5～128和1～128μg/ml)明显高于任1种及2种药物耐药菌株的MIC值(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～32、0.25～2、0.125～2、0.5～4和1～4 μg/ml,F值分别为20.066、40.499、47.197、70.373、91.432、41.840和21.547,P均<0.05);SM、INH、RFP、EMB在4种药物同时耐药菌株中MIC值(分别为1～128、2～64、0.25～128和1～32μg/ml)显著高于任1种及2种药物耐药株(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～64和0.25～2 μg/ml,F值分别为26.242、23.563、31.541和64.469,P均<0.05);RFP在MDR酶株的MIC值(2～64 μg/ml)显著高于非MDR的耐药菌株的MIC值(0.25 μg/ml,F=5.613,P<0.05).结论 本研究揭示了常用的12种抗结核药物的耐药程度与常规药敏检测结果 之间的关联规律,为临床医生根据常规药敏结果 制定更加有效的抗结核治疗方案提供重要的借鉴.     

MPT64在MTB利福平和异烟肼耐药性检测方法中的应用

目的 建立一种以MPT64为指标的结核分枝杆菌（MTB）耐药性检测的快速方法,探讨MPT64在MTB利福平（RFP）和异烟肼（INH）耐药性检测中的应用。方法 应用胶体金免疫层析法（GICA）分别检测MTB敏感株和耐多药株在含（观察组）与不含（对照组）RFP、INH的Middlebrook 7H9液体培养基上培养3、7、10 d的培养液中的MPT64,通过凝胶成像仪白光源拍照进行条带灰度分析（Image Jab Software 3.0）,比较敏感株和耐多药株间的灰度比值的差异,依据受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分析确定RFP、INH耐药的灰度比值界值;以比例法检测结果为金标准,评价新建方法的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 对照组中,随着培养时间的延长,12株MTB敏感株和11株耐多药株的灰度比值增大;观察组中,敏感株在不同的培养时间的灰度比值没有显著变化,而耐多药株则明显增大。3、7、10 d敏感菌与耐多药菌在药物培养基中MPT64检测灰度比值差异均有统计学意义（P均< 0.05）。依据观察组灰度比值分别绘制以MPT64指示的RFP和INH耐药性检测的ROC曲线,两者的3 d AUC分别为0.84和0.77,灰度比值界值均为0.05;7、10 d AUC均为1.00,7 d的灰度比值界值分别为0.23与0.20;10 d的灰度比值界值分别为0.49和0.48。GICA检测MPT64用于34株MTB的RFP、INH耐药性鉴定的准确度分别为97%和94%,灵敏度分别为93%和86%,特异度均为100%,阳性预测值均为100%,阴性预测值分别为95%和91%。结论 GICA检测MPT64于MTB培养7 d时能准确检测抗结核药物RFP、INH耐药性,MPT64可作为MTB药敏试验的有效检测指标。     

吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达的影响及其诱导细胞凋亡作用

本研究探讨吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达及细胞凋亡的影响及吉西他滨应用于白血病治疗的可行性。体外培养人白血病细胞系HL-60细胞,以不同浓度吉西他滨作用于HL-60细胞,用RT-PCR方法检测细胞c-myc mRNA表达的变化;以Western blot方法检测细胞C-MYC蛋白表达水平;原位酶标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡情况。结果表明,1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞12、24、36、48小时后,不同程度地抑制HL-60细胞c-myc mRNA的表达,并具有时间依赖性,其最适作用时间为24小时,与阿糖胞苷(Ara-C)组及空白对照组比较,抑制作用差异有统计学意义(p0.05)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24、48、72小时后,C-MYC蛋白表达水平明显下降,于48小时抑制作用最明显,抑制率为94.16%,方差分析显示,各时间点吉西他滨组与空白对照组和Ara-C组比较,差异均有统计学意义(p0.01);吉西他滨作用24小时组、48小时组及72小时组组间比较,也有显著性差异(p0.01)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24小时后,出现明显的诱导细胞凋亡作用,阳性率83.67%,与空白对照组(阳性率3.00%)和Ara-C组(阳性率10.67%)比较差异均有统计学意义(p0.01)。结论:吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因及C-MYC蛋白表达有显著的抑制作用,能够诱导HL-60细胞凋亡,其抑制及诱导凋亡作用强于阿糖胞苷,提示吉西他滨可能作为白血病治疗的新选择。     

丹参酮IIA对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

目的：分析丹参的主要活性成分丹参酮IIA对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织因子（TF）表达的影响。方法将分离的HUVECs随机等分为空白对照组、凝血酶处理组及不同浓度丹参酮IIA处理组。其中凝血酶处理组加入凝血酶（终浓度5U/ml），不同浓度丹参酮IIA处理组加入凝血酶（终浓度5U/ml）和不同浓度的丹参酮IIA（终浓度分别为0.25μg/ml、0.5μg/ml、0.75μg/ml和1.0μg/ml），空白对照组则加入等量的无血清培养基。各组HUVECs均在37℃培养6h后收集细胞。结果各组HUVECs孵育6h后，凝血酶处理组HUVECs中TF mRNA的转录明显强于空白对照组（P〈0.001），不同浓度的丹参酮IIA可不同程度抑制TF mRNA的转录，与凝血酶处理组比较差异均有统计学意义（P〈0.001），且呈剂量依赖关系。HUVECs与凝血酶孵育后，所表达的TF促凝活性（TF：C）和抗原含量（TF：Ag）均明显增加，明显高于空白对照组（P〈0.001）。不同浓度的丹参酮IIA均可不同程度地抑制凝血酶所诱导的TF：C和TF：Ag表达（P〈0.001），且呈剂量依赖关系。结论丹参酮IIA可抑制凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞TF基因的转录和表达，这可能是丹参酮IIA发挥抗血栓形成作用的重要机制。     

Drug resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates from Brazil: Phenotypic and genotypic methods

We determined the susceptibility profile of 80 Mycobacterium tuberculosis (MTB) clinical isolates from Brazil against isoniazid (INH) and rifampicin (RIF) drugs by two phenotypic methods (Resazurin Microtiter Assay - REMA and BACTEC™ MGIT™ Mycobacterial Detection System). DNA polymorphisms were also determined by PCR-SSCP in isolates resistant to INH and RIF. BACTEC™ MGIT™ 960 detected 22 susceptible isolates to INH and RIF, 48 MDR isolates (resistant at least to INH and RIF) and nine mono-resistant isolates (eight to INH and one to RIF). REMA performance was determined by Receiver Operating Characteristic curve, whose assay was validated utilizing as reference the BACTEC™ MGIT™ 960 system. ROC curve showed cut-off values of 0.0625 μg/mL and 0.125 μg/mL, for INH and RIF, respectively. REMA-INH demonstrated sensitivity and specificity of 100% while REMA-RIF showed sensitivity of 97.2% and specificity of 100%. PCR-SSCP detected DNA polymorphisms in 87.5% and 75.5% of isolates classified as INH-resistant and RIF-resistant, respectively. One discordant sample found to RIF (resistant by BACTEC™ MGIT™ 960 and susceptible by REMA) showed no mutation by PCR-SSCP. In conclusion, our studies demonstrated that the combination of phenotypic method REMA, which allowed rapid detection of MDR-MTB with higher levels of sensitivity and specificity, with the genotypic method PCR-SSCP, which demonstrated high accuracy in the search of polymorphisms in the resistance genes, proved to be a useful strategy to study MDR-MTB clinical isolates from national reference center located in São Paulo city.