肝干细胞－卵圆细胞的研究进展

卵圆细胞是肝脏干细胞的代表细胞,主要存在于幼肝及成人受损的肝脏中,是一种双潜能的肝脏干细胞,多种因素调节其分化,在此过程中动态表达一系列表面标志物。卵圆细胞的分化异常与肝癌的发生关系密切。在体外大量扩增卵圆细胞并使之分化为成熟的 有功能的肝细胞,为终末期肝病、肝脏的组织工程研究及基因治疗开辟了新的途径。      

肝卵圆细胞诱导分化调控机制的研究进展

肝卵圆细胞是在肝损伤大鼠模型肝内发现的一类细胞,被认为是多能肝干细胞的子代细胞,也被认为是一种肝干细胞。大量研究认为肝卵圆细胞能够在肝脏严重受损、肝细胞增殖受抑制的情况下被活化,通过增殖、分化而形成成熟的肝细胞和胆管上皮细胞,重建受损的肝组织。随着生物技术的发展,肝卵圆细胞诱导分化被广泛发掘,因此,其必将在治疗肝脏疾病方面具有前景,而且在治疗胆道疾病,尤其是在修复胆道损伤及胆道黏膜上皮的完整性上成为可能。     

肝卵圆细胞与慢性肝病

肝卵圆细胞 (ｈｅｐａｔｉｃｏｖａｌｃｅｌｌ,ＨＯＣ)是在慢性肝病患者的肝脏中出现的一种具有多分化潜能的原始细胞 ,可分化为过渡细胞、小肝细胞和成熟肝细胞 ,也可向胆管细胞分化[1 ,2 ] 。ＨＯＣ直接参与了肝组织的再生和修复 ,与肝癌的发生有密切的关系。下面就ＨＯＣ与慢性肝病的关系 ,综述如下。1　肝卵圆细胞的特征1944年Ｏｐｉｅ在致癌物饲养的诱癌大鼠的肝脏中发现了ＨＯＣ并首先描述 ,将这种细胞核呈卵圆形、细胞体积较小的细胞称为卵圆细胞。随后许多学者在诱癌大鼠动物模型上对ＨＯＣ进行了大量研究。然而 ,人体肝脏是否存在…     

大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究

目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法,用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF、LIF等生长因子联合应用诱导肝卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞.观察肝卵圆细胞到肝细胞形态变化过程,用免疫荧光技术,Western blotting分析检测了干细胞标志c-kit和RT-PCR分析法检测肝干细胞白蛋白和CK19 mRNA表达鉴定卵圆细胞.结果 分离得到的肝卵圆细胞活度达到90%,细胞形态包括大小和颜色呈不均质,卵圆细胞直径是肝细胞直径的1/4～1/6.诱导后出现大而圆的肝细胞,可见卵圆细胞到肝细胞的中间变化过程,新分离的肝卵圆细胞在生长因子诱导下有向肝细胞分化的特性.经c-kit免疫荧光染色显黄绿色荧光,Western blotting检测肝卵圆细胞有c-kit蛋白条带,而大鼠肝细胞及胆管细胞则未出现条带.PCR分析显示卵圆细胞有CK19和白蛋白mRNA表达.结论 新分离的肝卵圆细胞同时表达c-kit,CK19和白蛋白3种抗原,诱导分化出现一系列从卵圆细胞到肝细胞的形态学变化,这种现象证明分离的肝卵圆细胞就是肝干细胞,经诱导分化可以产生成熟的肝细胞,成为进一步研究肝干细胞生物学特性的基础.     

肝卵圆细胞的起源、标志物、调控和应用前景

 肝脏在机体内发挥着重要作用,包括糖和脂质代谢,血浆蛋白的合成和对内外源性毒物的解毒作用等。目前肝脏的慢性疾病是导致人类死亡的重要原因。肝脏依靠肝细胞的自我更新和肝卵圆细胞的增殖分化两大途径参与肝损伤的修复。然而,我们对肝卵圆细胞的起源、特异性标志物、信号通路的调控等方面依然尚未完全阐明。最近一些研究通过运用新的分离技术和基因系谱追踪技术对肝卵圆细胞的起源和生物学功能有新的发现。本文较详尽地对以上内容进行了综述。     

肝干细胞的研究进展

肝干细胞研究近年来已取得重要进展 ,肝干细胞的存在目前趋于肯定。肝干细胞分为肝源性和非肝源性两类。前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞 ;后者包括胚胎干细胞 (ＥＳ细胞 )、骨髓 /血液干细胞及胰腺上皮细胞等。1　肝干细胞与肝脏生长、发育及再生成熟肝细胞和肝内胆小管细胞均系原始肝细胞(ｐｒｉｍｉｔｉｖｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ)生成。目前认为 ,肝再生通常通过处于增生静止期的分化肝细胞进入细胞周期完成。如果这一途径出现缺陷 ,胆管上皮细胞可从门脉汇管区移出并分化成肝细胞。这种胆管上皮细胞被称为卵圆细胞 (ｏｖａｌｃ…     

肝脏卵圆细胞诱导分化为胰岛β细胞的研究进展

肝脏卵圆细胞是具有多向分化潜能的干细胞, 在一定的条件下可诱导分化为胰岛β细胞,葡萄糖、细胞外基质、细胞因子和胰岛转录因子等诸多因素均参与分化过程的调控。文章就肝脏卵圆细胞向胰岛β细胞分化的影响因素进行综述。     

肝脏卵圆细胞诱导分化为胰岛β细胞的研究进展

肝脏卵圆细胞是具有多向分化潜能的干细胞, 在一定的条件下可诱导分化为胰岛β细胞,葡萄糖、细胞外基质、细胞因子和胰岛转录因子等诸多因素均参与分化过程的调控。文章就肝脏卵圆细胞向胰岛β细胞分化的影响因素进行综述。     

大鼠肝癌发生过程中卵圆细胞分化的双染色研究

用r`谷氨酰转肽酶-甲胎蛋白(GGT-AFP)双染色法,对F_344大鼠肝癌发生过程中卵圆细胞的分化进行研究.结果表明,与免疫酶双标记法相比,此法具有特异性高、简便、精确、易于观察、经济、易推广等优点。卵圆细胞GGT 阳性,AFP 阴性;过渡细胞GGT,AFP 双表达;小肝细胞AFP 阳性,胆管细胞GGT 阳性。提示卵圆细胞是一种具有分化潜能的干细胞,过渡细胞双表达是处于双向分化状态,表达AFP 可以分化成小肝细胞,表达GGT 可以分化成胆管细胞。     

肝干细胞在肝脏疾病中应用研究进展

肝干细胞是目前肝病基础研究的重点之一,其应用于临床仍有许多问题,如人肝干细胞建系困难,人肝于细胞生长缓慢,体外培养易分化,失去分裂增殖能力;有关肝干细胞向肝细胞癌细胞分化机制及各种癌基因、抑癌基因调控仍未明r。本文将就肝干细胞在肝脏疾病中的应用进行研究。肝于细胞（hepaticstemcellHsc）是一类具有双向分化（可同时向肝细胞和胆管细胞分化和增殖）、自我更新潜能的原始细胞。当肝实质损害尤其是肝大部分切除时,HSC发生分化和高效增殖,参与肝细胞严重损害后的再生和修复。1肝干细胞的来源及其标志物：目前认为HSC可分为肝源性和非肝源性。肝源性HSC来源于前肠内胚层,在胚胎发育过程中以胚胎肝细胞的形式存在,在成年哺乳动物中以胆管源性肝卵圆细胞形式存在,包括成熟肝细胞、肝卵圆细胞等。非肝源性HSC主要来源于胚胎干细胞、骨髓干细胞等。     

小鼠单纯肝切除后再生肝组织内大小核分裂相和卵圆细胞的观察

目的:探究C57小鼠单纯2/3肝切除后肝组织内与再生和肝干细胞有关的病理形态学变化及其意义.方法:在4个对照组(正常组、假手术组、倒千里光碱组和倒千里光碱2/3肝切除组)的参照下,观察实验组C57小鼠单纯2/3肝切除后不同时间肝脏病理形态变化(核分裂相和卵圆细胞等)和CK19、AFP免疫组化检测情况.结果:单纯2/3肝切除后小鼠均出现不同程度的成熟肝细胞通过大核分裂相分裂增生、轻重不等的小胆管/终末胆管增生反应和个别例中有类似于倒千里光碱肝切除模型组的卵圆细胞增生;尤其还有大小核分裂相分布等一些文献未提及的形态学改变.结论:本研究提出肝流域假说的初步设想:肝内成体干细胞存在于小胆管/终末胆管附近,是肝主质细胞的重要源头;在其向中央静脉方向的流向上产生各级分化程度不同的子代(自卵圆细胞到小肝细胞、成熟肝细胞),沿肝板形成该流域干流;而经由血流到达肝脏的过客性干细胞可不同程度地在不同区段作为该流域的支流汇入干流并转分化为肝系细胞.     

大鼠肝组织中增生卵圆细胞移植裸鼠后的形态观察

将化学诱癌早期产生的大量卵圆细胞增生肝组织,移植于裸鼠皮下,结合G-6-P酶和γ-GT酶组织化学(简称组化)、AFP免疫组化、~3H-dT放射自显影及超微结构形态学方法,动态地观察卵圆细胞的演变过程。实验结果表明,卵圆细胞显示未分化细胞特征,移植后卵圆细胞仍增生活跃,进一步向过渡细胞、小肝细胞及胆管细胞分化。我们认为卵圆细胞代表肝组织中的一种原始的干细胞,在致癌剂的作用下,由于分化异常,可成为肝细胞癌的组织来源之一。     

大鼠肝脏卵圆细胞干细胞特性的研究

目的探讨大鼠肝脏卵圆细胞体外培养扩增及其干细胞特征。方法采用2-乙酰氨基芴/四氯化碳方法建模,胶原酶灌流和流式细胞术分选纯化卵圆细胞,进行培养和扩增。透射电子显微镜观察肝脏卵圆细胞的超微结构,免疫细胞化学法检测干细胞标志物OV-6、c-kit和Thy-1.1的表达;RT-PCR法检测卵圆细胞内c-kit、肝细胞标志物(HNF-4α、AFP)和胆管细胞标志物(CK-7、CK-19)的基因表达;Western blotting法检测OV-6和AFP蛋白的表达。结果大鼠肝脏组织可见明显的卵圆细胞增生,成簇分布,逐渐向肝实质内延伸。细胞体外培养可达40 d以上,细胞体积较小,多呈圆形和卵圆形。透射电子显微镜下可见细胞直径5～10μm,细胞核大,胞质少,核/质比例大,细胞器少,仅见少量线粒体和内质网。免疫细胞化学检测显示,细胞表面OV-6、c-kit和Thy-1.1染色阳性;RT-PCR检测显示,卵圆细胞内有c-kit、HNF-4α、AFP、CK-7和CK-19基因表达;Western blotting检测显示,OV-6蛋白持续表达,AFP蛋白表达逐渐增强。结论大鼠肝脏卵圆细胞体外可大量扩增并且保留其干细胞和双向分化潜...     

大鼠肝脏卵圆细胞干细胞特性的研究

目的 探讨大鼠肝脏卵圆细胞体外培养扩增及其干细胞特征.方法 采用2-乙酰氨基芴/四氯化碳方法建模,胶原酶灌流和流式细胞术分选纯化卵圆细胞,进行培养和扩增.透射电子显微镜观察肝脏卵圆细胞的超微结构,免疫细胞化学法检测干细胞标志物OV-6、c-kit和Thy-1.1的表达;RT-PCR法检测卵圆细胞内c-kit、肝细胞标志物(HNF-4a、AFP)和胆管细胞标志物(CK-7、CK-19)的基因表达;Western blotting法检测OV-6和AFP蛋白的表达.结果 大鼠肝脏组织可见明显的卵圆细胞增生,成簇分布,逐渐向肝实质内延伸.细胞体外培养可达40d以上,细胞体积较小,多呈圆形和卵圆形.透射电子显微镜下可见细胞直径5～10 μm,细胞核大,胞质少,核/质比例大,细胞器少,仅见少量线粒体和内质网.免疫细胞化学检测显示,细胞表面OV-6、c-kit和Thy-1.1染色阳性;RT-PCR检测显示,卵圆细胞内有c-kit、HNF-4α、AFP、CK-7和CK-19基因表达;Western blotting检测显示,OV-6蛋白持续表达,AFP蛋白表达逐渐增强.结论 大鼠肝脏卵圆细胞体外可大量扩增并且保留其干细胞和双向分化潜能特性.     

肝细胞癌组织及卵圆细胞中细胞角质素18及消减基因P02的表达

目的:观察肝细胞癌、癌周肝硬化组织及卵圆细胞中细胞角质素18(CK18)及消减基因P02的表达情况.方法:采用免疫组化SP法观察8例正常肝组织,27例肝硬化组织和43例肝细胞癌组织中CK18的表达;采用原位杂交方法检测肝细胞癌、癌周肝硬化组织及卵圆细胞中P02的表达.结果:肝硬化组织和正常肝组织中CK18阳性表达率分别为29.6%和25.0%(P>0.05),肝细胞癌组织中CK18阳性表达率为65.1%,与肝硬化组和正常肝组织比较差异有统计学意义(P<0.05).在13对肝硬化的汇管区和肝细胞癌癌巢周边可见到卵圆细胞中P02的强阳性表达,且其数量在2种组织中差异有统计学意义(P<0.05).结论:CK18参与了肝硬化到肝细胞癌的癌变过程;CK18在卵圆细胞中的强阳性表达,及其在肝细胞癌和肝硬化组织中数量上的显著性差异,证明卵圆细胞与肝脏损伤后再生及癌变有关,支持肝细胞癌的卵圆细胞起源学说;P02是一个肝细胞癌高表达基因,可能通过促进卵圆细胞的增殖来介导肝细胞癌的发生.     

大鼠肝卵圆细胞的增殖模型建立和体外分离培养、诱导分化研究

目的 建立大鼠肝卵圆细胞(HOC)的增殖模型,探讨分离培养及鉴定HOC的方法.方法 采用2-乙酰氨基芴/部分肝切除术刺激建立成体大鼠肝卵圆细胞增殖模型,于肝切除术后第12天切取剩余肝脏,使用胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞,免疫荧光技术和KT-PCK分析法检测肝卵圆细胞标志物mRNA表达.行体外培养并添加干细胞生长因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)诱导其分化.结果 分离得到的肝卵圆细胞存活率达到90%,经c-kit免疫荧光显色,PCR 分析显示有CK19和白蛋白mRNA表达.生长因子诱导下有向胆管细胞和肝细胞分化的特性.结论 肝卵圆细胞分离纯化及鉴定方法和肝卵圆细胞成功培养,为进一步研究肝干细胞生物学特性和与肝癌的关系提供了物质基础.     

造血干细胞在肝脏疾患中的应用前景

近年来 ,肝细胞移植技术有了很大的进展 ,但仍存在着免疫排斥 ,细胞移植数量受限 ,肝功能支持时间短等问题。肝干细胞移植有可能克服其缺陷 ,而肝干细胞与造血干细胞相关关系的研究更是启迪与激起人们对肝细胞移植的研究热情。研究证明 ,骨髓造血干细胞在一定条件下可横向分化成卵圆细胞 ,并能进一步分化成肝细胞和胆管上皮细胞。在动物模型中 ,已成功地利用骨髓造血干细胞替代肝实质细胞治疗某些肝脏疾患。造血干细胞的这种惊人的可塑性 (即横向分化能力 )大大开阔了肝细胞移植的临床应用前景。1　肝干细胞与肝脏的修复　　肝脏是人体重要…     

肝细胞生长因子、卵圆细胞、骨髓细胞和肝再生

进一步研究肝细胞生长因子在肝脏再生中的作用以及肝细胞生长因子分别和卵圆细胞、骨髓细胞的相互作用。     

肝卵圆细胞增殖研究新进展

肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)是肝脏应对各种因素所致肝损伤修复过程中最重要的细胞,同时是研究肝纤维化、肝硬化以及肝癌的发展机制的关键细胞,也是组织工程种子细胞研究的重要对象。作为肝卵圆细胞活化后的重要步骤,增殖是其后续分化、凋亡以及体外培养获得大量种子的关键环节。本文就影响肝卵圆细胞增殖的因子及信号转导通路两方面作一综述。     

人胎肝干细胞的体外诱导分化

目的 :体外分离和诱导分化人胎肝干细胞。方法 :原代分离培养人胎肝干细胞集落 ,免疫细胞化学鉴定细胞集落分子标志物的表达 ;在体外因子作用下诱导干细胞定向分化为成熟肝脏细胞 ,对其生物学特性进行初步鉴定。结果 :从人胎肝组织中成功分离表达AFP、Albumin、Cytokeratin等标志物的胎肝干细胞集落 ;在体外因子作用下肝干细胞定向分化为成熟肝脏细胞。结论 :人胎肝中同样存在具有干细胞特性的原始细胞 ,体外可定向分化为成熟肝细胞。人肝干细胞的分离培养对于肝脏发育及其病理学的深入研究奠定了良好的基础。