化学修饰的茯苓多糖抗肿瘤效应的组织学观察

目的 :揭示化学修饰的茯苓多糖抗肿瘤的效应。方法 :①化学修饰的茯苓多糖 :用 0 .9%NaCl水溶液从茯苓的菌丝体中提取多糖 ,经硫酸酯化 ,获得硫酸酯化的茯苓多糖。②动物实验 :Sarcoma 180肿瘤细胞 (每只 5× 10 6个 )接种于 7～ 8周的BalB/c小鼠的背部皮下 ,然后随机分为茯苓多糖治疗组、5 -Fu阳性对照组和PBS缓冲溶液阴性对照组 ,每组 10只。进行腹腔注射 ,连续注射 7d。③检测 :在最后一次注射后第 2d处死小鼠 ,切取肿瘤 ,称重 ,计算抑瘤率 ,并对肿瘤组织、肝、肾和脾等进行组织学观察。结果 :① 5 -Fu的肿瘤抑制率为 4 6 % ,经过化学修饰的茯苓多糖的抑制率为 38.39%。②组织学观察显示 ,茯苓多糖治疗组可见到肿瘤细胞成片坏死区 ,亦可见核染色质浓缩 ,边聚 ,甚至是半月形 ,说明肿瘤细胞的坏死与凋亡同时存在。③组织学观察还显示 ,经过化学修饰的茯苓多糖对肝、肾无明显的组织学损害 ;与阳性和阴性对照组比较 ,茯苓多糖治疗组小鼠的脾脏脾小节清晰 ,脾中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞密集 ,表现出对脾的保护作用。结论 :化学修饰的茯苓多糖对小鼠Sarcoma 180肿瘤细胞有杀伤和诱导凋亡的作用 ,并对机体免疫力有增强作用。     

灭活链球菌瘤内注射对S180小鼠肿瘤细胞内Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的 研究灭活链球菌瘤内注射对S180小鼠肿瘤疗效以及肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 建立S180小鼠肿瘤模型,使用灭活链球菌连续和序贯注射的方法分别瘤内注射小鼠,空白对照组注射生理盐水.观察肿瘤的大小、小鼠生存时间,用免疫组化检测肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白的表达.结果 连续治疗组的抑瘤率注射后1、2、3周分别为20%、45%、53%,序贯治疗组的抑瘤率注射后1、2、3周分别为8%、40%、49%,与对照组比较差异有显著性( P <0.05).连续注射和序贯注射抑瘤率差异无显著性.各组小鼠生长曲线表明,用药组小鼠治疗后中位生存时间分别为38.0 d、37.0 d、34.0 d.与空白对照组比较,灭活链球菌瘤内注射组的Bcl-2蛋白表达明显减低,Bax蛋白表达明显增加(均 P <0.05).结论 灭活链球菌持续瘤内注射能明显抑制小鼠S180肿瘤细胞生长, 提高小鼠的中位生存时间.序贯注射能取得同连续注射同样的效果.灭活链球菌可能是通过降低Bcl-2蛋白表达和增强Bax蛋白表达,促进肿瘤细胞的凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用.     

灭活链球菌瘤内注射对小鼠S180肿瘤疗效及Bcl-2、Bax蛋白表达的研究

目的 研究灭活链球菌瘤内注射对S180小鼠肿瘤疗效以及肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法 建立S180小鼠肿瘤模型,使用灭活链球菌连续和序贯注射的方法分别瘤内注射小鼠,空白对照组注射生理盐水。观察肿瘤的大小,生存时间,用免疫组化检测肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 连续治疗组的抑瘤率注射后3周分别为20%,45%,53%,序贯治疗组的抑瘤率注射后3周分别为8%,40%,49%,与对照组比较差异显著（P＜0.05）。连续注射和序贯注射抑瘤率差别不显著。各组小鼠生长曲线表明,用药组小鼠治疗后中位生存时间38.0 d、37.0 d、34.0 d。与空白对照组比较,灭活链球菌瘤内注射组的Bcl-2蛋白表达明显减低,Bax蛋白表达明显增加（P＜0.05）。结论 灭活链球菌持续瘤内注射方法有明显抑制小鼠S180肿瘤细胞生长, 降低Bcl-2蛋白表达和增强Bax蛋白表达,显著提高小鼠的中位生存时间。序贯注射能取得同连续注射同样的效果。灭活链球菌的抑瘤作用可能是通过促进肿瘤细胞的凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

强精煎对小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因表达影响的研究

目的:观察强精煎对实验小鼠睾丸Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:将80只健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组、强精煎组、黄精赞育胶囊组,以环磷酰胺注射液40mg/kg腹腔注射制造小鼠生精功能障碍模型,以HE染色观察小鼠睾丸病理形态,采用Johnson评分评价精子发生和发生障碍程度,用免疫组织化学SABC法检测Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白在小鼠睾丸实质组织中的表达率。结果:模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤,强精煎组则生精功能良好,黄精赞育胶囊组稍差。与正常组比较,模型组Johnson评分偏低,且Fas和Fasl蛋白表达率偏高(P<0.01),强精煎组和黄精赞育胶囊组与正常组各方面差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸Johnson评分偏高,Fas、Fasl和Bax蛋白表达率显著降低(P<0.01),Bcl-2表达率显著升高(P<0.01),细胞内Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01)。结论:强精煎可以抑制Bax、Fas和Fasl,并促进Bcl-2蛋白在受损伤小鼠睾丸实质组织中的表达。     

白细胞介素1受体拮抗剂诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究

目的:从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)干预急性胰腺炎的可能机制。方法:72只SD大鼠,随机分为胰腺炎组、IL-1Ra干预组、对照组,每组24只,各组造模后在1,2,6和12 h 4个时间点分别检测6只大鼠。干预组分别于制模前12,6,2 h及制模时各注射IL-1Ra 1 mg/100 mg体质量,胰腺炎组仅同时注射等量生理盐水。应用细胞凋亡原位标记(TUNEL)染色、免疫组化技术等检测胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因Bax,Bcl-2,Fas,FasL的蛋白表达。结果:干预组1,2,6和12 h胰腺细胞凋亡指数显著高于胰腺炎组相应时间点(均P<0.01);对照组见较弱的Bax、Fas的表达,干预组各时间点胰腺细胞Bax、Fas染色阳性率明显高于胰腺炎组(均P<0.01);对照组未见Bcl-2表达,干预组各时间点胰腺细胞Bcl-2染色阳性率与胰腺炎组相比无显著差异性(均P>0.05);胰腺炎组、干预组中均没有见到胰腺腺泡细胞中FasL表达,但是在间质中均可见浸润的炎性细胞FasL免疫组化染色阳性。结论:IL-1Ra干预急性胰腺炎的机制可能不仅限于对炎症反应的抑制,它可能是通过上调凋亡调控基因Bax和Fas/FasL系统的表达,诱导胰腺腺泡细胞的凋亡从而减轻胰腺炎的严重程度。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物对瘤重、抑瘤率的影响;并用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化法和real time RT-PCR法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果三叶青各剂量组抑瘤率和肿瘤细胞凋亡率均高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其效应呈浓度依赖性;各剂量组Bcl-2的蛋白和mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)、Bax的蛋白和mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)、高剂量组caspase-3的蛋白表达上升(P<0.05)。结论中药三叶青乙酸乙酯提取物能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,可能与其促进肿瘤细胞坏死及下调Bcl-2、上调Bax和caspase-3从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

威灵仙多糖对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响

目的：探讨威灵仙多糖对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响及其分子机制。方法：不同浓度威灵仙多糖作用于Bel7402细胞48h后,荧光显微镜观察人Bel7402细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：威灵仙多糖能诱导Bel7402细胞凋亡,40mg/L时凋亡率为17.63%,实验组与对照组比较有显著性差异;并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论：威灵仙多糖能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2的基因表达有关。     

30例自然流产患者绒毛滋养细胞凋亡及调控蛋白Bcl-2、Bax的表达研究

目的通过观察绒毛合体滋养细胞凋亡以及凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在自然流产患者中的表达,探讨细胞凋亡在自然流产的发病机制。方法采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学法对30例自然流产患者绒毛合体滋养细胞中调亡指数及凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax阳性表达率进行检测,并以30例人工终止早孕的健康妇女做对照(对照组),所有数据采用SPSS16.0 进行统计学分析。结果自然流产组绒毛滋养细胞中凋亡指数为(32.45±5.87)%,明显高于对照组的(19.38±4.16)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Bax和Bcl-2在两组合体滋养细胞中的阳性率比较显示,自然流产组中Bax阳性率增高,Bcl-2阳性率下降,Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论绒毛合体滋养细胞凋亡明显增加、Bax阳性率增高和Bcl-2阳性率下降在自然流产中产生重要作用。     

腹腔注射卡因酸对大鼠海马细胞凋亡的影响

目的: 探讨腹腔注射兴奋性氨基酸对大鼠海马神经元及Bax/bcl-2表达的影响。方法: 将大鼠随机分成两组,实验组给予腹腔注射卡因酸,对照组给予腹腔注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS);3天后以尼氏染色海马神经元,T U NEL法检测海马神经元凋亡;Bax/bcl-2抗体标记神经元Bax/bcl-2蛋白,SABC法检测。结果: 实验组大鼠海马神经元带变狭,TUNEL染色阳性对照片可见大量阳性细胞,阴性对照片未见阳性细胞;实验组Bax为强阳性,Bcl-2为阳性;PBS生理盐水对照组Bax为弱阳性(+),Bcl-2均为强阳性(++)。结论: 腹腔注射卡因酸可以引起大鼠海马神经元凋亡,Bax表达上调,Bax/bcl-2平衡改变可能与神经元凋亡有关。     

心肌肥大大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的变化

目的:探讨心肌肥大大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。方法:腹腔注射异丙肾上腺素,建立大鼠心肌肥大模型。采用原位末端缺口标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡;应用Westernblotting和免疫组化方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达,并使用HPIAS10009图像分析仪进行定量分析。结果:与对照组比较,心肌肥大组心肌细胞凋亡显著增加(P<0.01),Bax表达增加(P<0.01),而Bcl-2表达减少(P<0.01),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01)。结论:Bcl-2和Bax基因参与了心肌肥大心肌细胞凋亡的调控。     

壳寡糖对S180肉瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的探讨壳寡糖对S180肉瘤细胞的生物学效应，为其治疗肿瘤提供新的理论基础。方法体外实验：用流式细胞仪测壳寡糖作用下S180肉瘤细胞周期、细胞凋亡情况。体内实验：建立S180肉瘤小鼠皮下移植瘤模型，给予壳寡糖后，测瘤体积，并用免疫组化法测瘤组织Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果体外实验：高浓度壳寡糖作用后S180肉瘤细胞阻滞于G0/G1期，同时S180肉瘤细胞凋亡增加。体内实验：壳寡糖对小鼠S180肉瘤有明显的抑制作用并能提高促凋亡基因Bax的表达，降低抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论壳寡糖可抑制S180肉瘤细胞的生长，使S180细胞阻滞于G0／G1期并诱导其发生凋亡，其机制可能与Bcl-2蛋白下调而Bax蛋白上调有关。     

Bcl-2、Bax、Fas在大肠癌脾胃虚弱证患者舌苔脱落细胞表达及其相关性研究

目的：探讨舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas表达水平与大肠癌脾胃虚弱证的关联性。方法：用免疫组化方法,检测舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas的阳性表达率。结果：三组间Bcl-2、Bax蛋白阳性表达率有统计学意义,P＜0.05;Fas蛋白阳性表达率无统计学意义,P＞0.05。结论：Bcl-2蛋白高表达,抑制细胞凋亡,Bax蛋白低表达,使细胞凋亡能力减弱,共同作用使舌苔细胞的生存期延长,细胞凋亡速率减慢,这可能是导致肿瘤细胞增殖与凋亡失衡,引发细胞恶性增殖而发为癌症的主要原因。     

Expression and Significance of Bcl-2, Bax, Fas and Caspase-3 in Different Phases of Human Hemangioma

Summary： The relationship between Bcl-2, Bax, Fas, caspase-3 and development of hemangioma and the molecular mechanism was investigated. By using immunohistochemical S-P method, proliferating cell nuclear antigen was detected. According to the classification of Mulliken in combination with PCNA expression, 27 cases were identified as proliferating hemangioma and 22 cases as involutive hemangioma. Five normal skin tissues around the tumor tissue served as controls. By using immunohistochemical technique, the expression of Bcl-2, Bax, Fax and Caspase-3 was detected. The cells expressing Bcl-2, Bax, Fax and cappase-3 were identified as hemangioma endothelia by immunohistochemical staining of Ⅷ factor. The average absorbance （A） and average positive area rate of Bcl-2, Bax, Fas and caspase-3 expression were measured by using HPIAS-2000 imaging analysis system. The results showed that the expression of Bcl-2 in the endothelia of proliferating hemangioma was significantly higher that in involutive degenerative hemangioma endothelia and vascular endothelia of normal skin tissue （P〈0.01）. The expression of Bax, Fas and Caspase-3 in the endothelia of involutive hemangioma was obviously higher than in the endothelia of proliferating hemangioma and normal skin tissue （P〈0.01）. The expression of BAx and Fas in endothelia of proliferating hemangioma was higher than in those of normal skin tissue （P〈0.05）. It was suggested that Bcl-2, Bax, Fas and caspase-3 might be involved in the development and involution of hemangioma. Bcl-2 could promote the growth of hemangioma by inhibiting apoptosis of endothelia. Bax, Fas and caspase-3 promote the switch of hemangioma from proliferation to involution by inducing the apoptosis of hemangioma endothelia.     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

抑瘤饮影响小鼠S180移植瘤组织中Bcl-2和Bax表达的动态研究

目的动态研究中药复方制剂抑瘤饮体内对小鼠S180移植肿瘤组织中Bcl-2和Bax表达的影响。方法BALB/c小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞24 h后开始,抑瘤饮组小鼠每日灌服抑瘤饮,对照组小鼠每日灌服等量凉开水。分别于第10、20、30、40 d杀鼠取瘤制成切片,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax表达,以图像分析系统对染色结果进行测定。结果各时间点抑瘤饮组肿瘤组织中Bcl-2表达均低于对照组,Bax表达均高于对照组。结论抑瘤饮体内抑瘤作用可能与下调肿瘤组织中Bcl-2表达,上调肿瘤组织中Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡有关。     

奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制探讨

目的 :研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 :应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用 ;电镜观察细胞的形态改变 ;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况 ;免疫组织化学法检测突变型p5 3,Bcl- 2 ,Bax ,Fas等凋亡相关基因蛋白的表达。结果 :奥沙利铂对HepG2有明显的抑制作用 ,细胞阻滞于S期和G2 /M期 ,G0 /G1期细胞减少 ,作用 72h出现凋亡峰 ,电镜可以找到凋亡小体 ,免疫组织化学表明Bax表达增强 ,突变型 p5 3、Bcl- 2表达减弱 ,Fas表达无差异。 结论 :奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖及诱导凋亡作用 ,其机制与促凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

肺癌组织凋亡相关基因的表达意义

目的:探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas,Bax,p53,Bcl-2蛋白的表达意义,为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据. 方法:应用原位末端DNA片段标记法(TUNEL),结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas,Bax,p53及Bcl-2蛋白检测. 结果:在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为:Fas 28%,Bax 70%,p53 69%,Bcl-2 33%,各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同,且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系(P＜0.05). 其中,p53,Fas随肺癌病理分期的升高而增加,Bcl-2则随病理分期的升高而减少,而Bax则与病理分期无明显关系(P＜0.05). 结论:肺癌组织有调亡相关基因表达,其表达程度与肺癌的病理类型有关,p53, Fas表达可能与不良预后有关.     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。