广佛手对脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症细胞因子调控的影响

目的:探讨广佛手对脂多糖诱导的肺上皮细胞炎症细胞因子的调控作用。方法:不同浓度广佛手水提取物和醇提取物作用于肺上皮细胞A549细胞后,采用CCK8法检测广佛手水提取物和醇提取物对A549细胞活力的影响;以脂多糖(10μg/m L)作用于培养的A549细胞,同时加入广佛手提取物,24 h后ELISA法测定上清液IL-8和IL-10的含量。结果:广佛手水提取物和醇提取物对A549细胞活力影响无统计学意义(P0. 05);脂多糖作用肺上皮细胞后,IL-8和IL-10释放均增加(P 0. 01),广佛手水提取物和醇提取物可减少脂多糖诱导的IL-8释放增加(P 0. 01),广佛手水提取物在LPS诱导后IL-10分泌明显增加(P 0. 01),而广佛手醇提取物对LPS诱导的IL-10分泌增加呈抑制作用(P 0. 01)。结论:广佛手水提取物和醇提取物对肺上皮细胞无损伤作用,对脂多糖造成的急性肺损伤模型有抑制促炎因子的释放和增加抗炎因子的释放双重保护作用。     

苏木酮A对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的探究苏木Caesalpinia sappan的活性成分苏木酮A对大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用。方法以牛Ⅱ型胶原蛋白诱导建立RA大鼠模型,以苏木酮A(50mg/kg)进行干预,考察大鼠足容积变化,对大鼠踝关节组织进行病理分析,采用免疫组化考察大鼠踝关节组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达。以脂多糖诱导Raw264.7细胞建立炎症细胞模型,考察苏木酮A对Raw264.7细胞上清液中一氧化氮和IL-6水平的影响。结果苏木酮A显著降低RA大鼠足容积(P<0.05),改善RA大鼠踝关节滑膜组织损伤,抑制RA大鼠踝关节滑膜组织中IL-6、TNF-α和MMP-9的表达。苏木酮A显著抑制脂多糖诱导的Raw264.7细胞上清液中一氧化氮和IL-6水平(P<0.01)。结论苏木酮A可有效缓解大鼠RA。     

基于Akt/mTOR信号通路探讨洋地黄毒苷调控甲状腺滤泡上皮细胞自噬与凋亡的机制

目的 探究洋地黄毒苷对脂多糖刺激下的人甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-roi3-1凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法 (1)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷低剂量组、脂多糖+洋地黄毒苷中剂量组及脂多糖+洋地黄毒苷高剂量组,各组进行对应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色观察各组细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin 1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70S6K蛋白表达情况。(2)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷组、脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组,各组进行对应处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR及p70S6K蛋白表达情况。结果 (1...     

大黄游离蒽醌对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响及机制研究

该研究以脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)刺激的J774A.1巨噬细胞建立细胞焦亡体外模型,探讨大黄游离蒽醌(free total rhubarb anthraquinones, FTRAs)对细胞焦亡的干预机制。体外培养J774A.1巨噬细胞,实验分组为空白对照组、不同质量浓度脂多糖(LPS,0.25、0.5、1μg·mL^-1)+ATP(1.25、2.5、5 mmol·L^-1)组,通过CCK-8法检测细胞活力、碘化丙锭(PI)凋亡细胞染色法、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素(IL)-18和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放,建立巨噬细胞焦亡体外模型。之后将J774A.1巨噬细胞随机分为6组：空白对照组,LPS+ATP组,FTRAs高剂量单独作用组,FTRAs低、中、高剂量预保护组。检测上述细胞焦亡的表型特征和关键指标作为评判FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡的影响依据。Western blot法和RT-PCR法检测半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1/11细胞焦亡通路相关蛋白和mRNA表达水平,阐明其抗焦亡效应的分子机制。结果显示巨噬...     

抗衰神方对小鼠免疫功能的增强作用

本实验系统研究了抗衰神方对小鼠细胞免疫和体液免疫功能的影响。结果表明,该方能明显增强小鼠脾细胞对刀豆蛋白 A(ConA)和细菌脂多糖(LPS)的增殖反应,明显增加小鼠特异的抗体芬泌细胞数,增强同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应及混合淋巴细胞反应,增强细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)杀伤靶细胞的活性,并能促进 ConA 刺激的小鼠脾细胞分泌白细胞介素-2。     

黄芪多糖对LPS诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶表达及皮质酮分泌的影响

目的 研究黄芪多糖对脂多糖(LPS)诱导H295R细胞损伤的维生素D系统关键酶(CYP27B、CYP24A)及皮质酮表达的影响.方法 用LPS溶液建立H295R细胞损伤模型.MTT法检测不同浓度的黄芪多糖对H295R细胞增值率的影响.分组:对照组,模型组,模型+黄芪多糖低、中、高剂量组,模型+维生素D组.ELISA法检...     

参远苷抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症机制研究

目的 研究参远苷对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的治疗作用.方法 采用细胞增殖-毒性检测(CCK-8)法评价参远苷对BV2小胶质细胞的细胞毒性,并研究不同浓度参远苷对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活力的影响;光学显微镜观察细胞形态变化;使用Griess试剂测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)浓度;通过酶联免...     

毛蕊异黄酮通过调控TREM-1表达对重症急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

目的:探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)对重症急性胰腺炎(SAP)腺泡细胞损伤的影响及其分子机制。方法:将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组(AR42J细胞)、SAP组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖)、SAP+Calycosin-L组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+10μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-M组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+50μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-H组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+si-NC组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-NC)、SAP+si-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-TREM-1)、SAP+Calycosin+pcDNA组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA)及SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA-TREM-1)。酶联免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、髓样细胞表达触发受体-1(TREM-1)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TREM-1 mRNA表达。结果:与Con组比较,SAP组细胞凋亡率,IL-6、TNF-α水平,Bax、cleaved-caspase3、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。与SAP组比较,SAP+Calycosin-L组、SAP+Calycosin-M组及SAP+Calycosin-H组SAP腺泡细胞IL-6、TNF-α水平,Bcl-2、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加,均呈浓度依赖性(P<0.05)。与SAP+si-NC组比较,SAP+si-TREM-1组SAP腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05)。与SAP+Calycosin+pcDNA组比较,SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮可通过调控TREM-1表达减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,保护SAP腺泡细胞免受损伤。     

白花丹参水溶性部位抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:探明白花丹参对脂多糖处理的血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法:内毒素处理培养的人脐静脉内皮细胞造成细胞凋亡。培养液中添加系列浓度的白花丹参水溶性成分培养细胞,倒置相差显微镜观测细胞形态变化。吖啶橙染色,共聚焦显微镜观测凋亡细胞核片段化状况;PI染色,流式细胞仪检测细胞周期分布。生化试剂盒检测细胞内脂质过氧化物(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果:脂多糖处理使血管内皮细胞形成大量凋亡小体,细胞核片段化严重,并明显降低了细胞存活率,改变了细胞周期的正常分布,阻止细胞由G1期进入S期,同时显著上调了细胞中的MDA含量,而下调了其中的SOD、GSH-PX活性明显。白花丹参水溶性部位在一定浓度范围内,剂量依赖性地逆转脂多糖引起的上述变化。结论:白花丹参水溶性部位可能通过调节细胞氧化应激状态抑制脂多糖导致的血管内皮细胞凋亡。     

金黄扶正茶对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响

目的:探讨金黄扶正茶对免疫抑制小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞免疫功能的影响.方法:金黄扶正茶高、中、低剂量组分别连续给昆明种小鼠ig 10 d,同时隔日sc注射环磷酰胺(30 mg·kg-1)造成免疫抑制模型.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导脾脏T淋巴细胞增殖和脂多糖(IPS)诱导B淋巴细胞增殖的影响及自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)活性,酶法检测腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮合酶(NOS)的活性,用全自动酶标仪检测巨噬细胞吞噬中性红能力.结果:金黄扶正茶低、中、高剂量组均能显著提高免疫抑制小鼠的T,B淋巴细胞的吸光度(A,P＜0.01);而中、高剂量组能显著提高免疫抑制小鼠NK细胞、LAK细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬活性及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活力(P＜0.01或P＜0.05).结论:金黄扶正茶能促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖,增强NK细胞、LAK细胞活性,提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性,从而增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能.