苏木酮A对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的探究苏木Caesalpinia sappan的活性成分苏木酮A对大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用。方法以牛Ⅱ型胶原蛋白诱导建立RA大鼠模型,以苏木酮A(50mg/kg)进行干预,考察大鼠足容积变化,对大鼠踝关节组织进行病理分析,采用免疫组化考察大鼠踝关节组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达。以脂多糖诱导Raw264.7细胞建立炎症细胞模型,考察苏木酮A对Raw264.7细胞上清液中一氧化氮和IL-6水平的影响。结果苏木酮A显著降低RA大鼠足容积(P<0.05),改善RA大鼠踝关节滑膜组织损伤,抑制RA大鼠踝关节滑膜组织中IL-6、TNF-α和MMP-9的表达。苏木酮A显著抑制脂多糖诱导的Raw264.7细胞上清液中一氧化氮和IL-6水平(P<0.01)。结论苏木酮A可有效缓解大鼠RA。     

天然活性小分子靶标蛋白识别方法学研究进展

药物靶标是指人体内与药物相互作用并赋予药物效应的特定分子。作为传统中药的药效物质基础,天然活性小分子的作用机制阐明,特别是作用靶标的鉴定一直是药学研究者关注的重要课题,然而目前该领域一直未取得长足的进展。作者针对近年来在天然活性小分子靶标蛋白识别鉴定方面出现的新技术、新方法进行了总结,系统介绍了目前该领域的主流研究方法,原理以及成功案例,同时还探讨了每种方法的适用性及不同方法之间的优劣。相信该文对从事天然药物化学、药理学以及化学生物学领域的研究人员有一定的启发和借鉴作用。     

毛蕊花糖苷抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究

探究毛蕊花糖苷(acteoside,ACT)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的抑制作用及潜在机制。该实验以LPS诱导BV-2细胞作为炎症模型,将BV-2细胞分为正常对照组、模型组、给药组,ACT按指定浓度(12.5,25,50μmol·L-1)作用于细胞。采用NO试剂盒检测NO炎症因子的释放量,ELISA法检测TNF-α和IL-6的表达量,Western blot法检测炎症相关蛋白(i NOS,COX-2,p-IKKβ,IKKβ,p-IκB,IκB)的表达。此外,通过检测细胞核/浆中NF-κB p65的表达以及借助免疫荧光技术,阐明ACT对炎症转录因子NF-κB p65核转位的作用。结果显示,ACT可显著降低LPS诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症,且呈剂量依赖性。具体表现在:显著降低炎症因子NO,IL-6和TNF-α的释放量,抑制炎症相关蛋白i NOS和COX-2的表达。同时,ACT可明显抑制NF-κB信号通路中关键蛋白IKKβ和IκB的磷酸化,且明显抑制NF-κB p65的细胞核转位。以上结果表明,毛蕊花糖苷可显著降低LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其潜在机制是通过抑制NF-κB信号通路实现的。     

基于线粒体细胞色素B(cyt b)基因条形码的中药海蛇品种鉴定

海蛇是名贵中药材之一,新鲜海蛇易腐败,因而海蛇一般晒干保存,由于在晒干后的形状改变,传统的外观鉴定不再适用,而基因条形码作为一种较新的分子鉴定方法不受形状改变影响,适用于海蛇晒干制品的品种鉴定。该文以平颌海蛇、环纹海蛇和兰伯特海蛇等6种海蛇为研究对象,通过提取实验和基因测序技术测定了这6种海蛇的cyt b基因序列,对这些序列进行互相比对并用相似性搜索算法评价5条序列的鉴定成功率。研究显示,cyt b基因的获取不受样品状态的影响,种内种间差异明显,鉴定成功率高。结果表明cyt b序列可以作为海蛇晒干制品的品种鉴定方法。     

基于靶点“钩钓”策略的肉苁蓉苯乙醇苷药理靶点鉴定及功效解析

目的探究肉苁蓉苯乙醇苷类成分抗脑缺血再灌注损伤作用的靶点蛋白群及相关作用机制。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断模型,考察肉苁蓉苯乙醇苷的脑保护作用。通过构建一种表面键合有肉苁蓉苯乙醇苷的琼脂糖固相微球,利用键合在固相微球表面的苯乙醇苷类分子从脑组织裂解液中特异性捕获相应的脑保护作用相关靶点蛋白,并进行高分辨质谱鉴定。结果肉苁蓉苯乙醇苷能够显著改善大鼠脑缺血再灌注损伤,包括降低脑缺血面积、降低缺血相关行为学评分及提高脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)水平。利用靶点"钩钓"策略共获得HSP90等18个靶点蛋白。针对这些靶点蛋白的生物学功能,将其分为9类,包括抗氧化、离子通道、免疫调节、细胞存活、细胞骨架等。结论从靶点源头上解释了肉苁蓉苯乙醇苷发挥抗痴呆、缓解疲劳、抗肿瘤、免疫调节等诸多作用的潜在药理机制,进而也展示了一种解析中药复杂成分体系分子药理机制的新方法。     

加味五子衍宗丸神经保护作用靶点群的鉴定与功能分析

中药复杂体系的作用靶点群鉴定是中药药理机制研究的关键。该研究构建了一种表面键合有光敏二苯甲酮基团的磁性微球,利用紫外光激发下二苯甲酮基团活化并与中药化学成分中的碳氢键发生共价键合的特性,将中药加味五子衍宗丸的化学成分组键合到磁性微球表面,并与神经细胞裂解液共孵育,进而富集加味五子衍宗丸对应的神经保护靶点群。针对靶点群进行蛋白质组学分析,共发现32个潜在结合靶点。KEGG分析发现这些靶点主要与Hippo和Cell cycle信号通路关系密切,提示加味五子衍宗丸可能参与调控神经干细胞增殖和促进神经细胞分化。该研究从靶点源头上解释了加味五子衍宗丸发挥抗痴呆和神经保护作用的潜在药理机制,进而也提供了一种用于解析中药复杂成分体系作用靶点群的研究方法,可为今后中药方剂药理机制的科学诠释提供重要的方法学借鉴与参考。     

保元汤心肌保护作用靶点群的鉴定与功能分析

保元汤作为治疗元气虚弱的著名方剂,临床上广泛用于冠心病治疗,但由于成分复杂,因此其作用靶点及药理机制尚不明确。该研究构建了一种表面键合有光敏化学基团二苯甲酮的固相微球,利用紫外光激发下二苯甲酮基团与中药化学成分中的碳氢键发生化学偶联反应,将中药保元汤的化学成分组整体键合到微球的表面,并与小鼠心脏组织裂解液共孵育,进而富集保元汤对应的心肌保护靶点群。针对靶点群进行蛋白质组学分析,共发现46个潜在结合靶点蛋白,且大多数定位于线粒体。KEGG分析发现这些靶点蛋白主要与三羧酸循环和氨基酸代谢信号通路关系密切,提示保元汤可能主要通过调控线粒体功能及ATP能量产生进而发挥心肌保护作用。此外JC-1荧光染色实验也证实,保元汤对线粒体损伤具有明显的保护作用。综上所述,该研究通过"钩钓"直接作用靶点蛋白从源头上解释了保元汤发挥心肌保护作用的潜在药理机制,进而从分子细胞水平上诠释了保元汤的传统功效。此外,该研究也提供了一种用于研究中药复杂方剂多靶点作用机制的新方法,有助于进一步推动传统中药药理机制的现代科学解析。     

基于细胞色素C氧化酶基因(COI)和核糖体16S rDNA条形码的中药海蛇品种鉴定

海蛇是我国名贵药材之一,新鲜捕捞的海蛇不易保存,一般立刻晒制保存,晒干后海蛇外观变化大,不宜再用外观鉴定,而基因条形码作为一种较新的分子鉴定方法则不再受外观变化困扰,适用于海蛇晒干制品的品种鉴定。该以平颌海蛇Lapemis hardwickii、环纹海蛇Hydrophis fasciatus、尖尾海蛇Aipysurus eydouxii、贝尔切海蛇H.belcheri和兰伯特海蛇H.lamberti等5种海蛇为研究对象,通过提取实验和基因测序技术测定了这5种海蛇的COI和16S r DNA基因序列,对这些序列进行互相比对并用相似性搜索算法评价5条序列的鉴定成功率。研究显示,16S r DNA基因条形码能初步区分海蛇种属,COI基因条形码序列种内种间差异明显,能进一步区分海蛇品种。因此表明COI序列可以作为海蛇晒干制品的品种鉴定方法。