小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾酮合成及机制的影响

目的 探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。 方法 用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0 μmol/L)。分别培养24、48、72 h,每24 h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。 结果 与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP 100.0 μmol/L染毒48、72 h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1 μmol/L、1.0 μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0 μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0 μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβ mRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0 μmol/L、100.0 μmol/L两个剂量染毒组。 结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。     

壁面马赫数分布规律可控的新型内收缩基准流场设计方法

目的探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)。分别培养24、48、72h,每24h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。结果与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP100.0μmol/L染毒48、72h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1μmol/L、1.0μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβmRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0μmol/L、100.0μmol/L两个剂量染毒组。结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。     

旋转通气培养法建立小鼠睾丸体外培养模型

目的通过探索适宜的培养条件,建立小鼠睾丸器官培养模型。方法利用旋转通气培养法在体外培养睾丸,优化培养条
件,并与Transwell小室培养法进行形态学比较。HE染色观察睾丸组织结构的变化,BrdU染色法观察睾丸在体外的细胞增殖,
放射免疫法观察体外培养睾丸的睾酮分泌能力,免疫组化法观察睾丸中功能蛋白的表达。结果通过培养结局的对比,旋转通
气培养法培养的睾丸组织形态更完整。睾丸大小以0.3~0.8 mm3为宜。各组精原细胞增殖指数呈上升趋势,Sertoli细胞增殖指
数呈下降趋势：3 d组精原细胞增殖指数的增加与1 d组相比有统计学差异（P<0.05）,5 d组Sertoli细胞增殖指数的减小与1 d组
相比有统计学差异（P<0.05）。睾酮分泌量随培养天数的增加而减少且差异均有统计学意义（P<0.05）。培养3 d后,Leydig细胞
胞浆内可见3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、细胞色素P450 17α羟化酶（P450c17）、胆固醇侧链裂解酶（P450Scc）蛋白的表达,
Sertoli细胞胞浆内可见波形蛋白（Vimentin）表达。结论利用旋转通气培养法成功建立睾丸器官体外培养的模型。
     

参杞强精颗粒对H2O2诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤的作用

目的 探讨参杞强精颗粒对过氧化氢H₂O₂诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激损伤的作用。方法 以小鼠睾丸间质细胞为细胞模型,用MTT法检测参杞强精颗粒对正常TM3的细胞毒性作用;以500 μmol/L H₂O₂诱导损伤TM3细胞4 h后复制氧化应激损伤模型,采用CCK-8法检测不同浓度参杞强精颗粒对H₂O₂损伤TM3细胞增殖活力的影响;分别给予参杞强精颗粒（0.4、0.8和1.6 mg/mL）干预处理24 h后,用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中睾酮分泌水平、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量及谷胱甘肽-S转移酶（GST）的活性;同时检测细胞内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）及总抗氧化能力（TAOC）的含量;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测睾酮合成酶类固醇合成快速调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、17β-羟基固醇脱氢酶（17β-HSD） mRNA表达。结果 参杞强精颗粒在浓度为0.05～2.50 mg/mL时对正常TM3细胞无毒性作用。与H₂O₂损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高TM3细胞增殖活率（P <0.05）。与H₂O₂模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组提高细胞上清液中睾酮水平和NO含量,增加GST活性,降低LDH和8-OHdG含量（P <0.05）。与H₂O₂损伤模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组降低细胞内ROS、MDA含量,同时增强CAT、SOD和TAOC的活性（P <0.05）。与H₂O₂模型组比较,参杞强精颗粒各剂量组能提高睾酮合成酶StAR、P450scc、17β-HSD mRNA相对表达量（P <0.05）。结论 参杞强精颗粒对H₂O₂诱导睾丸间质细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能通过清除氧自由基、抗氧化应激损伤及促进睾酮合成有关。     

大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制?方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa (10-7 mol/L)分别处理间质细胞6?12?24?36?48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059 (50 μmol/L) 和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化?结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性?GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45% (P < 0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P < 0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平?加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61% (与GnRHa组相比,P < 0.05),睾酮水平也随之显著下降45% (与GnRHa组相比,P < 0.05)?结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成?     

GW4064激活法尼酯X受体抑制结肠癌细胞生长浸润及基质细胞衍生因子1的表达

目的 探讨法尼酯X受体（FXR）特异性激动剂GW4064抑制结肠癌细胞生长浸润的机制。方法 体外培养人结肠癌细胞系HT-29,用浓度为0、0.1、1、3、5、7、10 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞72 h,采用MTT法检测细胞活力;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,用相差显微镜观察细胞形态;用浓度为0、1 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用细胞划痕实验检测细胞浸润的变化;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用PCR检测FXR mRNA和基质细胞衍生因子1（SDF-1）mRNA表达的变化;用浓度为0、1、5、7 μmol/L的GW4064分别处理24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液中SDF-1表达的变化。于裸鼠皮下接种HT-29细胞建立裸鼠成瘤模型,灌胃给予GW4064或溶剂DMSO,16 d后检测肿瘤生长情况及瘤体中FXR与SDF-1 mRNA的表达。结果 GW4064处理HT-29细胞后,细胞生长受到抑制,且呈剂量依赖性,1、3、5、7、10 μmol/L GW4064组HT-29细胞的生长活力与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。用相差显微镜观察可见GW4064处理HT-29细胞后,细胞收缩变圆,从瘦长的细胞向表皮样细胞改变。细胞划痕实验结果显示GW4064处理HT-29细胞后,细胞迁移距离变短,与对照组（0 μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.05）。PCR检测结果显示GW4064处理后FXR mRNA表达呈剂量依赖性增加,而SDF-1 mRNA表达则相反。ELISA检测结果显示细胞培养上清液中SDF-1的表达量随着GW4064浓度的增加而逐渐下降,1、5、7 μmol/L GW4064组与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。给予GW4064后,荷瘤小鼠肿瘤体积变小,与对照组（给予DMSO）相比差异有统计学意义（P<0.05）,并且瘤体内FXR mRNA表达增加、SDF-1 mRNA表达减少。结论 FXR激活后抑制了结肠癌细胞生长浸润,同时抑制了结肠癌细胞SDF-1的表达分泌。     

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响

目的：研究膜联蛋白5（annexin 5）对大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响。 方法：原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10^-9 mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测类固醇急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory,StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD）、17α-羟化酶（17α-hydroxylase,CYP17A）、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅹ型（17β-HSD₁₀）mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法（Western blotting）检测蛋白表达水平的变化。 结果：与对照组相比,在mRNA水平上, annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD₁₀的表达升高了26%（P<0.05）,其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD的表达分别升高55%、69%和59%（P<0.05）,17β- HSD₁₀升高了104%（P<0.01）,17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上, annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%（P<0.05）,而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外, P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%（P<0.05）和47%（P<0.01）。 结论：Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的。     

氯喹对肝癌小鼠肿瘤生长的影响及作用机制

目的 探讨氯喹对肝癌小鼠肿瘤增殖的影响及其作用机理。方法 建立肝癌小鼠肿瘤模型75只,并随机分为对照组、低剂量氯喹处理组和高剂量氯喹处理组,各25只,低剂量和高剂量氯喹处理组小鼠分别腹腔注射不同剂量氯喹（25 μmol/L和50 μmol/L）,对照组注射生理盐水作为对照,连续处理16 d,采用免疫印迹和免疫组化检测3组小鼠肝癌组织中LC3和P62的表达水平,采用MTT法体外检测25 μmol/L和50 μmol/L浓度的氯喹对HepG2肝癌细胞增殖活力的影响。结果 与对照组相比,氯喹处理组小鼠肝癌组织中LC3（3.15±0.29）和P62（6.24±0.41）的含量显著增加,阳性细胞率更高,染色强度更深（P<0.05）;Western blot检测结果显示,与对照组比较,LC3和P62的表达水平随氯喹浓度的提高而增加,细胞自噬活性受到抑制（P<0.05）;体外HepG2肝癌细增殖活性的检测结果显示,较对照组,氯喹处理组肿瘤细胞的增殖活力受到抑制（162.26±18.62）%（P<0.05）,呈现时间、剂量依赖性（P<0.05）。结论 氯喹可能通过抑制肿瘤细胞的自噬活性抑制肿瘤细胞的增殖。     

镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响.方法 镉处理组采用20 μmol/L CdCl2处理TM3细胞,分别在加入CdCl2 4 h和8 h后收集细胞上清液,对照组TM3细胞给予等容积磷酸盐缓冲液(DPBS).采用ELISA法测定细胞上清液中睾酮含量,采用RT-PCR和Western blot技术检测睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平.结果 镉处理组细胞上清液中睾酮含量明显降低(P＜0. 01).与对照组相比,镉显著下调TM3细胞类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)与 17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD) mRNA表达(P＜0.01),镉处理组TM3细胞StAR、P450SCC、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、3β-HSD与17β-HSD的蛋白表达水平也明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,其原因可能与镉抑制间质细胞部分睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平有关.     

利谷隆对大鼠L ey dig细胞睾酮合成影响及其机制研究

目的：探讨利谷隆对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成的影响及其可能的机制。方法采用SD大鼠睾丸间质细胞体外原代培养体系,利谷隆染毒剂量为0、50、100、200μmol／L。放射免疫法测定睾酮水平,实时荧光定量PCR（Real‐time qPCR）检测Leydig细胞的细胞色素 P450侧链裂解酶（P450scc）、3β‐羟基固醇脱氢酶（3β‐Hsd）的 mRNA表达, ELISA检测利谷隆染毒24 h后Leydig细胞P450scc、3β‐Hsd蛋白表达情况。结果利谷隆染毒各组睾酮水平下降,其中100、200μmol／L组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）,并有剂量依赖趋势。与对照组比较,利谷隆染毒各组 P450scc和3β‐Hsd mRNA表达降低,差异有统计学意义（P＜0．05）,有剂量依赖趋势。利谷隆染毒各组3β‐Hsd的蛋白表达降低,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）;但P450scc蛋白表达与对照组比较,利谷隆染毒各组差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论利谷隆可导致大鼠Leydig细胞睾酮分泌量下降,其可能是通过抑制P450scc和3β‐Hsd基因的表达,从而影响睾酮合成所致。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。