中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养,探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用.方法 取对数生长期细胞,分为3组:A组(KM3细胞组),B组(RAW264.7细胞组),C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组).分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后,检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例.RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量.ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量.结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后,与对照组相比,M2 型巨噬细胞比例显著增加(P<0.05);予以ACTA处理后M2型巨噬细胞表达明显下降(P<0.05);而予以rIL-6处理后M2型巨噬细胞表达明显上调(P<0.05).与B组(RAW264.7细胞组)相比,C组(RAW264.7细胞+KM3细胞)M2型巨噬细胞相关细胞因子CCL22,IL-10的mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而M1型巨噬细胞相关因子IL-12,TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.05).与A组、B组相比,C组细胞上清液中IL-6含量在24 h、48 h、72 h时间点均明显上调(P<0.05).通过浓度梯度改变RAW264.7细胞或KM3细胞的数量,发现RAW264.7细胞数量的改变显著影响了IL-6的表达水平.结论 将RAW264.7细胞和KM3细胞共培养后,后者能诱导RAW264.7细胞向肿瘤相关M2型巨噬细胞转化, IL-6在上述转化过程中发挥重要作用.     

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的 基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法 RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1α mRNA表达。结果 与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能...     

原花青素对脂多糖诱导RAW2647细胞COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞COX-2酶活性及蛋白表达的影响。方法放射免疫法检测COX-2酶活性，RT-PCR检测COX-2 mRNA表达，Western blotting检测COX-2蛋白表达。结果原花青素(0.8，4和20 mg·L^-1)不影响LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性，可下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA表达；原花青素(4和20 mg·L^-1)下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2蛋白表达。结论原花青素不影响LPS诱导RAW2647细胞COX-2酶活性，但对LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA及蛋白表达抑制作用明显。     

PI3K信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测PI3K蛋白表达水平,RT-PCR法检测PI3K mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养血清中sTREM-1表达水平。用不同浓度PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,观察上述指标变化。结果 LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002可浓度依赖性地抑制PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002阻断PI3K信号转导通路后,LPS对sTREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过PI3K信号通路诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1。     

原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1表达的影响

目的 探讨原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1(mPGES-1)表达的影响.方法 酶免疫测定法(EIA)检测原花青素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mPGES-1mRNA的表达,Western blotting检测mPGES-1蛋白的表达.结果 脂多糖(LPS)可以促进RAW264.7细胞PGE2的生成同时上调mPGES-1mRNA和蛋白的表达,而原花青素(4、20mg·L-1)下调LPS诱导的RAW264.7细胞mPGE-1mRNA和蛋白的表达,从而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成.结论 原花青素在mRNA和蛋白水平抑制LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1表达从而减少PGE2的合成,这可能是原花青素抗炎的机制之一.     

原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1表达的影响

目的探讨原花青素对RAW264.7细胞膜相关前列腺素E2合成酶-1(mPGES-1)表达的影响。方法酶免疫测定法(EIA)检测原花青素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mPGES-1mRNA的表达,Western blotting检测mPGES-1蛋白的表达。结果脂多糖(LPS)可以促进RAW264.7细胞PGE2的生成同时上调mPGES-1mRNA和蛋白的表达,而原花青素(4、20 mg.L-1)下调LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1mRNA和蛋白的表达,从而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成。结论原花青素在mRNA和蛋白水平抑制LPS诱导的RAW264.7细胞mPGES-1表达从而减少PGE2的合成,这可能是原花青素抗炎的机制之一。     

DHA和EPA调控巨噬细胞表型抑制HT-29细胞生长

目的 探讨二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)通过调控巨噬细胞表型对HT-29细胞生长的影响。方法 人单核细胞株THP-1诱导成M2型巨噬细胞后,与人结肠癌细胞株HT-29共培养,分别向共培养体系中加入DHA或EPA 0、10、20、40μmol/L处理48 h。MTT法检测HT-29细胞增殖情况,ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10水平,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)和CD206 mRNA表达,Western blot法检测HT-29细胞磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果 与DHA 0μmol/L比较,DHA 10、20、40μmol/L处理后HT-29细胞存活率降低,共培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高,IL-10水平降低,巨噬细胞中CD86、iNOS mRNA表达升高,Arg1、CD206 mRNA表达降低,HT-29细胞中p...     

黑碳对RAW264.7细胞功能的影响及机制研究

目的探究黑碳(Black Carbon)对小鼠巨噬细胞RAW264.7功能的影响及白细胞介素33(IL-33)产生的相关机制。方法利用含有不同浓度黑碳的DMEM培养液对RAW264.7细胞染毒24 h,染毒结束后采用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞吞噬功能和CD54、CD86表达;实时荧光定量PCR检测IL-33和IL-6 mRNA水平的变化;收集细胞后提取蛋白,采用Western blot检测p-CREB和p-IRF3表达情况。结果高浓度黑碳(40μg/cm~2以上)能产生明显细胞毒性,使细胞存活率低于70%(P0.01);黑碳浓度为40μg/cm~2时细胞吞噬能力明显降低,CD54表达减少,细胞IL-33和IL-6 mRNA水平升高,同时染毒过程中p-CREB、p-IRF3表达也会分别出现降低和升高的趋势。结论黑碳具有一定的细胞毒性,在高浓度下能够降低巨噬细胞的吞噬功能,并使IL-33、IL-6等细胞因子表达水平升高,其中细胞因子的变化可能是黑碳通过影响转录因子p-CREB、p-IRF3表达变化而引起。     

益母草碱抑制NLRP3炎症小体过度激活调控巨噬细胞M1/M2表型分化

目的研究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答影响及相关机制。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖和益母草碱预处理24 h,MMT法检测巨噬细胞活性;Griess法检测NO释放量;ELISA法检测IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的释放量;RT-PCR法检测NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、iNOS、Arg-1和CD206的mRNA表达量;Western blot检测NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达量。结果益母草碱能显著抑制脂多糖引起的巨噬细胞上清液中NO、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的释放。RT-PCR及Western blot实验结果显示,益母草碱可以抑制脂多糖引起的巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA及蛋白表达;益母草碱还能明显抑制脂多糖所诱导的巨噬细胞向M1型分化,并促进巨噬细胞向M2型分化。结论益母草碱能通过抑制NLRP3炎症小体,促进脂多糖诱导的巨噬细胞由M1表型向M2表型分化。     

PPARγ对RAW264.7小鼠巨噬细胞异质性的影响

目的 探讨PPAR γ对缺氧复氧RAW264.7小鼠巨噬细胞异质性的影响.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),制备缺氧复氧模型,用慢病毒包装进行PPARγ过表达和基因沉默,细胞分为对照组、模型组、过表达PPARγ组和PPARγ基因沉默组.用ELISA法、RT-PCR、Western印迹法和免疫荧光法检测各组细胞巨噬细胞亚型M1标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2标志物CD206及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达.结果 与对照组相比,ELISA法检测模型组TNF-α和IFN-γ水平明显升高(均P＜0.01),RT-PCR、Western印迹法和免疫荧光检测均显示TNF-α、IFN-γ、iNOS表达上调,CD206表达下调.与模型组相比,过表达PPARγ显著减轻了IRI导致的TNF-α、IFN-γ和iNOS表达的上调,上调了CD206表达;与此相反,PPARγ基因沉默加重IRI导致TNF-α、IFN-γ和iNOS表达上调,下调了CD206表达.结论 PPARγ在小鼠RAW264.7巨噬细胞缺氧复氧模型中参与调节巨噬细胞表型转换.     

胡黄连素硝酮对大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨胡黄连素硝酮衍生物(AN-1)在保护叔丁基过氧化氢诱导的RAW 264.7细胞中的抗氧化作用及对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用。方法 MTT法测定AN-1对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的RAW264.7细胞损伤的保护作用。活性氧(ROS)敏感的荧光探针2',7'-二氢二氯荧光素(DCFH-DA,20μmol.L-1)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察活性氧强弱。Western blot法检测NADPH氧化酶亚基gp91phox表达。通过气管内滴注LPS建立大鼠急性肺损伤模型,胡黄连素(apocynin)及AN-1治疗两周,HE染色病理切片观察LPS诱导的急性肺损伤模型大鼠的肺组织切片,检测肺组织中总超氧化物岐化酶(SOD)活性变化。结果 AN-1在1和10μmol.L-1时可明显保护t-BHP诱导的细胞损伤,且在10μmol.L-1时作用效果最明显。AN-1呈剂量依赖性地减少t-BHP诱导RAW264.7细胞中ROS的产生,下调NADPH氧化酶亚基gp91phox的表达,病理切片显示AN-1给药两周对LPS诱导的大鼠急性肺损伤有明显的治疗作用并能提高肺组织中SOD的活性。结论胡黄连素硝酮衍生物通过下调NADPH氧化酶亚基gp91phox和清除细胞内ROS保护RAW 264.7细胞的氧化损伤,并且能明显改善LPS诱导的大鼠急性肺损伤,是治疗急性肺损伤潜在的药物。     

香青兰总黄酮对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及炎症反应的调控作用北大核心CSCD

目的研究香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)泡沫化及炎症的影响,进一步阐明TFDM抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用ox-LDL刺激诱导使其成为泡沫细胞,TFDM(25、50、100 mg·L^(-1))及辛伐他汀(10μmol·L^(-1))进行干预,油红O染色法观察胞内脂滴的聚集情况,CCK-8法检测细胞活力,活性氧试剂盒测定ROS的生成,实时荧光定量PCR测定细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测巨噬细胞中IκBα、NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β以及IL-18蛋白的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-10的表达。结果TFDM可以减少泡沫巨噬细胞的形成,降低炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,增加抑炎因子IL-10的表达;并且下调NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,上调IκBα的蛋白表达。结论TFDM能够减轻巨噬细胞的泡沫化,抑制炎症因子的表达,从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程。其作用机制可能是通过抑制NF-κB途径,减少ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症介质的产生。     

线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A对巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A(AMA)对巨噬细胞免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 AMA 0.0005,0.05,0.5,5和10 mg·L-1与RAW264.7巨噬细胞分别作用2,24和48 h后,WST-1法检测巨噬细胞增殖;AMA 0.0005,0.05和0.5 mg·L-1与RAW264.7作用2 h后,定量荧光法检测巨噬细胞产生活性氧水平、线粒体膜电位和对白色念珠菌的吞噬作用;Western蛋白印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)P38蛋白磷酸化水平;Griess法检测细胞培养上清一氧化氮含量。结果 AMA作用2 h对RAW264.7巨噬细胞增殖无明显影响,当作用时间延长到24和48 h后,可显著抑制RAW264.7巨噬细胞增殖(P<0.01)。AMA作用2 h可显著诱导RAW264.7巨噬细胞产生活性氧(P<0.01),降低线粒体膜电位(P<0.01)。AMA可增强RAW264.7巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能,显著降低脂多糖诱导的巨噬细胞炎症介质一氧化氮的产生(P<0.01)。AMA显著诱导MAPK P38磷酸化(P<0.01)。结论 AMA能够诱导RAW264.7巨噬细胞线粒体损伤,增强巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功用,降低脂多糖诱导的炎症反应,可能与激活MAPK P38磷酸化,进而激活MAPK信号转导通路有关。     

非诺贝特对血管紧张素II诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达, 髓过氧化物酶活性及表达的抑制作用

探讨非诺贝特对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ) 诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞Toll样受体4 (TLR4) mRNA、蛋白表达及髓过氧化物酶 (MPO) 活性、mRNA及蛋白表达的影响及其抗炎机制。采用RT-PCR检测TLR4和MPO mRNA水平, Western blotting检测TLR4和MPO的蛋白表达,比色法测定细胞培养上清液中的MPO活性。结果显示,非诺贝特浓度依赖性地减少AngⅡ诱导的RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达,抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性、mRNA及蛋白表达。此外,TLR4阻断剂对AngⅡ诱导的RAW264.7细胞MPO活性有部分的抑制作用,而非诺贝特可增强这一抑制效应。同时非诺贝特明显拮抗TLR4特异性配体脂多糖的促MPO分泌效应。以上结果表明,非诺贝特可下调AngⅡ诱导的RAW264. 7细胞TLR4表达,并通过干预TLR4,影响胞内信号转导途径,抑制MPO分泌,减轻炎症反应,这可能是其新的抗炎机制之一。


     

八肽胆囊收缩素通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白表达;用Western blot检测RAW264.7细胞p38 MAPK的磷酸化水平。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白的表达,分别于刺激后3 h及6 h达到高峰;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无影响;10-8、10-6 mol.L-1CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的p-p38MAPK水平,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平;④p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,与CCK-8共同作用后,抑制作用进一步加强。结论 CCK-8通过抑制p38 MAPK磷酸化而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

染料木素通过TIPE 2负性调控Akt活性促进脂多糖活化的巨噬细胞凋亡

目的探究染料木素(genistein,GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响及其可能的药理学作用机制。方法GEN预孵育RAW264.7细胞或慢病毒介导的肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2,TIPE 2)过表达细胞2 h,再与LPS共孵育24 h,采用CCK 8试剂盒检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测TNF-α、IL-6、caspase-8、caspase-3和TIPE 2 mRNA,Western blot检测iNOS、COX-2、caspase-8、caspase-3、TIPE 2、Akt和p-Akt蛋白表达。结果LPS促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2合成;GEN抑制LPS活化的RAW264.7细胞活力,凋亡细胞增多,并上调caspase-8、caspase-3、TIPE 2 mRNA及蛋白表达;TIPE 2过表达上调活化RAW264.7细胞caspase-8、caspase-3 mRNA及蛋白表达,减少Akt磷酸化,且与GEN具有协同作用。结论GEN可能通过上调TIPE 2抑制Akt活性,激活外源性凋亡途径,促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡。     

八肽胆囊收缩素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞AP-1活性及IL-6表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-6表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-6蛋白及mR-NA表达;用EMSA方法检测RAW264.7细胞AP-1 DNA结合活性。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-6蛋白及mRNA表达;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达无明显影响;10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的AP-1活性,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的AP-1活性。结论 CCK-8通过抑制AP-1 DNA结合活性而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、iNOS表达的影响

目的探讨槐定碱(sophoridine,SRI)在内毒素导致的炎症反应中的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,实验细胞分为5组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱组、SB203580组、SB203580+槐定碱组,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测RAW264.7巨噬细胞p38 mRNA表达量;利用Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-p38与iNOS蛋白的表达量。结果槐定碱组与LPS组比较p-p38蛋白表达量和p38 mRNA表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p-p38蛋白表达和p38 mRNA表达量;与LPS组比较,槐定碱组iNOS蛋白表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),SB203580+槐定碱组iNOS蛋白表达量低于槐定碱组和SB203580组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞P38MAPK信号通路下游iNOS蛋白表达,并且与SB203580有协同作用。结论槐定碱可以通过抑制p38MAPK位点而下调p-p38、iNOS蛋白表达而发挥抗炎作用。     

比卡鲁胺对乳腺癌细胞周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响

目的 探究比卡鲁胺对乳腺癌细胞凋亡周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响。方法 CCK-8检测不同浓度（25、50、100 μmol/L）比卡鲁胺对乳腺癌细胞和巨噬细胞增殖能力的影响。将细胞随机分为RAW264.7细胞组、RAW264.7细胞＋比卡鲁胺100 μmol/L组、MCF-7细胞组、RAW264.7细胞＋MCF-1细胞组、RAW264.7细胞＋MCF-1细胞＋比卡鲁胺100 μmol/L组。流式细胞仪检测极化指标CD86和CD206表达;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）水平;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞中p-p38、p21、p-STAT蛋白表达。结果 卡鲁胺可抑制乳腺癌MCF-7细胞和巨噬细胞RAW264.7细胞增殖能力,且呈剂量相关性（P＜0.05）。与RAW264.7细胞组相比,RAW264.7细胞＋比卡鲁胺100 μmol/L组CD86阳性表达、IL-6和TNF-α水平显著升高,CD206阳性表达和IL-10水平显著降低（P＜0.05）。与MCF-7细胞组相比,MCF-7细胞＋RAW264.7组细胞侵袭能力、S期细胞所占比例及细胞中CDK4蛋白表达明显升高,G₀/G₁期细胞所占比例及细胞中p-p38、p-STAT1、p21蛋白表达降低（P＜0.05）。与MCF-7细胞＋RAW264.7细胞组相比,MCF-7细胞＋RAW264.7细胞＋比卡鲁胺100 μmol/L组细胞侵袭能力、S期细胞所占比例及细胞中CDK4蛋白表达明显降低,G₀/G₁期细胞所占比例及细胞中p-p38、p-STAT1、p21蛋白表达升高（P＜0.05）。结论 比卡鲁胺可通过调控乳腺癌巨噬细胞极化抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,阻滞细胞周期进程,其机制可能和激活p38/p-STAT1信号通路有关。