集成毛细管电泳芯片技术及其应用

Manz和Harrison 1992年首先提出将毛细管缩微制作成毛细管芯片进行电泳分离,此后该技术得到很大的发展.集成毛细管芯片技术(integrated capillary electrophoresis chips, ICE-chips)是将毛细管缩微移植到很小芯片上,将样品进样、反应、分离、检测等过程集成在一起的多功能快速、高效、低耗的缩微实验技术.首先毛细管被蚀刻在硅片上,用于蚀刻的基质材料随后从硅片扩展到石英、玻璃和塑料等聚合物上,再用激光诱导荧光、电化学、化学等多种检测系统检测[1～3]以及与质谱等[4～8]等分析手段结合进行样品分析,广泛用于生物医药和临床实验中.     

利用 RNAi阻抑 hTERT 和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的：利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶（hTERT）和Bax inhibitor‐1（Bi‐1）基因设计并构建的质粒载体转染至CNE‐2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT 和Bi‐1基因表达的效果。方法收集CNE‐2Z细胞,设未处理组、pEGFP‐N1组、pEGFP‐N1／Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE‐2Z细胞的转染能力,RT‐PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi‐1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE‐2Z细胞的质粒和Lip最佳组合：质粒为2．5μg ,Lip为6．25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi‐1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi‐1基因的表达。     

RNA干扰阻抑Bax inhibitor-1(bi-1)基因表达对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的： 研究RNA干扰(RNAi)效应对人卵巢癌细胞株HO8910PM和HO8910中bi-1基因表达的抑制作用和凋亡诱导作用。 方法： 把表达bi-1 shRNA的各重组干扰质粒转染到HO8910PM和HO8910细胞中,RT-PCR和Western blotting法检测bi-1基因mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术和Hoechst 33258/PI荧光染色检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果：与对照组细胞相比较,转染4种候选干扰质粒组细胞中bi-1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降（P<0.05）,以转染pmU6-b4组细胞的表达抑制率最高,在HO8910PM细胞中的抑制率分别为 (45.50±3.04）%和(51.08±4.96）%,在HO8910细胞中的抑制率分别为 (37.29±3.69）%和(44.96±4.28）%;流式细胞术结果表明,与对照组细胞相比较,转染pmU6-b4质粒24 h、48 h、72 h、96 h的HO8910PM细胞中亚二倍体峰比值明显升高 (P<0.05),以转染72 h组细胞的比值最高,达到 (25.89±5.63）%,而HO8910细胞中无亚二倍体峰出现;荧光显微镜下可见转染pmU6-b4质粒72h的HO8910PM细胞出现细胞核缩小、染色质固缩和核断裂,而HO8910细胞核无明显变化。 结论： 针对bi-1的siRNA能特异有效地下调HO8910PM和HO8910细胞中bi-1基因的表达,不同序列特异性的siRNA下调bi-1基因表达的能力不同;瞬时转染质粒pmU6-b4能有效诱导HO8910PM细胞凋亡,但不能诱导HO8910细胞凋亡。     

12种香豆素类化合物抑制鼻咽癌活性的筛选

目的探讨12种香豆素类化合物体外抑制鼻咽癌细胞的活性。方法利用CCK-8法测定不同浓度的12种香豆素类化合物对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1体外抑制生长的活性,利用两点法求算对应的半数抑制浓度（Half maximal inhibitory concentration,IC50）。随后选定1、10、100μmol/L浓度的蛇床子素及秦皮乙素分别处理两鼻咽癌细胞,利用CCK-8法绘制5 d的生长曲线,并观察其对克隆形成能力的影响。结果在CNE-2细胞中,蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯的IC50分别是（44.8±5.2）μmol/L、（129.6±8.9）μmol/L及（143.7±9.7）μmol/L;在HONE-1细胞中的IC50分别是（38.6±6.3）μmol/L、（62.7±7.0）μmol/L及（73.4±7.2）μmol/L。蛇床子素和秦皮乙素在选定的浓度下均对鼻咽癌细胞的生长曲线产生持续抑制的效果,并能显著抑制鼻咽癌细胞的克隆形成能力（P〈0.01）。结论蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯具有具有较为显著的体外抑制鼻咽癌细胞活性。     

HHT对鼻咽癌细胞caspase-8蛋白和mRNA表达的影响

为探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的caspase 8蛋白和mRNA表达的影响 ,分别用HHT 0 (对照 )、0 12 5、0 2 5、0 5和 1mg/L处理CNE 2Z细胞 8h ,采用Westernblot分析caspase 8的蛋白表达变化 ,半定量RT PCR检测caspase 8mRNA的表达改变。结果显示 :随HHT处理浓度的增加 ,caspase 8酶原 (32ku)的表达水平具有统计学意义的降低 (P <0 0 1) ,而caspase 8mRNA的表达水平具有统计学意义的增高 (P <0 0 1) ,当HHT浓度为1mg/L时出现活性裂解片段 (2 0ku)。结果提示 :HHT可使caspase 8酶原裂解 ,浓度依赖性地下调caspase 8酶原的蛋白表达和上调caspase 8mRNA的表达 ,HHT处理CNE 2Z细胞可能有caspase 8的活化     

杂交捕获法和PCR-RDB法检测妇女HPV感染的比较

Objective To compare hybrid capture-Ⅱ(HC2)to polymerase chain reaction(PCR)-reverse dot-blot(RDB)for detecting HPV infection in women.Methods HC2 method and PCR-RDB were applied to detecting human papillomaviral infection in female genital duct,and the test results were analyzed.Results Concordant results were found in 81.14%(400/493)samples(Kappa=0.63;95%CI,0.57-0.69).The high risk type HPV positive rate detected by PCR-RDB were 1.60%(3/187),29.85%(20/67),69.88%(58/83),86.52%(77/89)and 91.04%(61/67),respectively,when the HC2 RLU/CO of samples were＜1.00,1.00-9.99,10.00-99.99,100.00-999.99 and≥1000.00.Statistical differences were found among the five groups(χ2=289.3,P＜0.01).Cross reactions were found between HC2 high risk probe and HPV53,66,11,cp8304 and other genotypes.Conclusion There is good concordance between HC2 and PCR-RDB,though cross reaction exists in HC2.Relatively speaking,there are more influential factors for PCR-RDB.     

流式细胞仪检测52例鼻咽癌外周血T淋巴细胞亚群

用流式细胞仪检测５２例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群，与２５例正常人作对照；并将ＮＰＣ患者作分期比较。结果ＮＰＣ组较对照组ＣＤ３有下降趋势，但无统计学意义；ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８比值均下降，有高度显著性差别（Ｐ＜００１）；ＣＤ８升高，亦有显著性差别（Ｐ＜００５）。与早期ＮＰＣ相比，晚期ＮＰＣ患者ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８比值均下降，亦有显著性差别。     

对新世纪检验医学教育的思考

检验医学是现代实验室科学技术与临床医学在高层次上的结合,是一门多学科交叉、相互渗透的新兴学科.进入21世纪,随着基础医学、临床医学、生物工程学、电子学以及信息技术等学科的发展及新的检验技术和自动化仪器的应用,检验医学得到了迅速发展.由于新技术的应用及方法学上的革命性变革,检验科开展项目的增多,检验质量和水平显著提高,越来越多的临床医生依靠检验信息综合分析,进行诊断、治疗和预后判断,检验医学正发挥着越来越重要的作用.面对新世纪检验医学学科的发展和人才的培育,大家要从目前的实际需要出发,着眼检验医学未来的发展进行理性的思考.为此,笔者就检验医学教育谈几点看法.