免疫抑制大鼠模型感染后TNF-α和IL-6的基因表达

目的观察免疫抑制大鼠腹腔感染后组织中TNF-α和IL-6基因表达的变化。方法60只SD大白鼠建立正常对照、免疫抑制两组动物模型,用盲肠结扎加穿刺法(CLP)形成腹腔感染,分别测定术后不同时段肝、肺组织中TNF-αmRNA和IL-6mRNA的相对表达量并加以比较。结果(1)CLP前,免疫抑制大鼠肝、肺组织内TNF-αmRNA和IL-6mRNA的表达均低于对照组(P<0.05)。(2)CLP后,两组大鼠肝、肺组织内TNF-αmRNA,IL-6mRNA的变化基本一致,于CLP后3h升高,而后平稳上升,24h达最大值;免疫抑制大鼠肝、肺组织内TNF-αmRNA和IL-6mRNA的表达始终低于对照组。(3)IL-6mRNA在CLP后24h平均升高8.97倍,TNF-αmRNA则为3.96倍。结论(1)免疫抑制大鼠腹腔感染后发生MODS可能系机体处于CARS状态的结果,这种状态下细胞因子基因变化的规律类似于因SIRS导致MODS时的变化。(2)机体免疫功能的改变可能发生于细胞因子转录水平,IL-6mRNA可作为严重感染的预警指标。     

七氟醚预处理对脓毒症小鼠炎性体的影响

【】目的 研究七氟醚预处理对脓毒症小鼠炎性体的影响。方法 将84只C57BL/6N小鼠随机分成四组：七sham组、七CLP组、氧sham组、氧CLP组,分别进行脓毒症造模后比较四组小鼠的生存率;肝、肺以及肾脏组织的炎性评分;腹腔灌洗液、肺灌洗液及血液中NALP3、Caspase1以及ASC mRNA表达水平。 结果 七CLP组与氧CLP组小鼠的生存率明显的低于七sham组与氧sham组(P＜0.05),但七CLP组与氧CLP组之间比较无显著的差异(P＞0.05);与氧sham组和七sham组比较,氧CLP组和七CLP组小鼠的肺、肝、肾组织炎症评分明显的升高,但七CLP组明显的低于氧CLP组,比较差异具有显著性性(P＜0.05);与氧sham组和七sham组比较,氧CLP组和七CLP组小鼠的NALP3、ASC、Caspase1表达明显的升高,且七CLP组明显的低于氧CLP组,比较差异具有显著性性(P＜0.05)。结论 七氟醚预处理能有效的降低脓毒症小鼠炎症水平,通过调节NALP3炎性体的活性实现的。     

受体相互作用蛋白140在脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其作用

目的 探讨受体相互作用蛋白140 (receptor interacting protein140,RIP140)在脓毒症急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用.方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组和盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症肺损伤3、6、12、24 h组.HE染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测RIP140在肺组织的表达分布;Western blot及免疫荧光观察肺泡巨噬细胞RIP140的表达变化及定位;RT-qPCR测定肺泡巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平变化.结果 CLP组可见明显肺损伤病理改变且随时间进展逐渐加重.RIP140在脓毒症肺损伤大鼠肺组织中主要表达于炎性渗出细胞,且随时间进展,表达RIP140的细胞数量逐渐增多.CLP术后6h大鼠肺巨噬细胞RIP140蛋白表达水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,且主要表达于细胞核.CLP术后3h大鼠肺巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,下调肺泡巨噬细胞RIP140的表达可明显抑制IL-1 β、TNF-α、IL-6 mRNA的表达.结论 脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞可通过上调RIP140表达增强肺组织炎症反应,从而参与早期急性肺损伤的炎症应答.     

青蒿素对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察青蒿素(artemisinin, ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72 h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide, LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P＜0.05,P＜0.01),24 h肺组织的病理损伤明显减轻.结论 青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤.     

沙利度胺对内毒素刺激大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响

目的探讨沙利度胺对内毒素刺激大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。方法分离、培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞，贴壁后的腹腔巨噬细胞分为空白对照组、内毒素（LPS）组、沙利度胺处理组、沙利度胺对照组。空白对照组不予任何处理；沙利度胺处理组提前2h加入不同浓度的沙利度胺，2h后加入内毒素；LPS组加入LPS，沙利度胺对照组仅加入沙利度胺80μg／mL。细胞培养4h后取上清液测TNF-α和IL-6浓度。结果空白对照组大鼠腹腔巨噬细胞上清TNF-α和IL-6含量均很低，沙利度胺对照组与空白组无显著性差异。大鼠腹腔巨噬细胞经LPS诱导后，细胞上清中TNF-α及IL-6含量显著增高，提前2h沙利度胺预处理后，TNF-α和IL-6的释放明显受到抑制，抑制作用随沙利度胺预处理浓度的增大而增强。结论沙利度胺能抑制大鼠巨噬细胞对TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的释放，可能是其对抗脓毒症的机制之一。     

内毒素性急性肺损伤小鼠肺组织中炎症介质的表达

目的 探讨内毒素性急性肺损伤过程中两类炎性介质的相互关系及其变化规律.方法 腹腔注射脂多糖(LPS)(20mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型.用放射免疫(ELISA)法分别测定各组各时相点肺组织匀浆上清液中TNF-α、IL-8、IL-10 3种细胞因子的含量,同时观察肺组织形态学改变,进行肺湿/干重比(W/D)测定.结果 与对照组比较,ALI组各时相点小鼠肺组织中3种炎症因子水平及W/D值均明显上升,差异有统计学意义(P＜0.05),表达峰值时间:TNF-α为4h,IL-8为2h,而IL-10为8h.结论 内毒素性急性肺损伤过程中相继发生了促炎反应和抗炎反应,促炎/抗炎失衡,炎症反应失控,可能是内毒素肺损伤的重要机制.     

骨髓间充质干细胞对巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-10、TNF-α的影响.方法 体外分离、培养、鉴定骨髓间充质干细胞与巨噬细胞,分PBS、BMSCs、Macrophage、Macrophage+ BMSC、BMSCs+ LPS、Macrophage+ LPS、Macrophage+BMSCs+LPS 7组进行细胞共培养实验.收集不同时间点培养基上清液,ELISA检测其炎症因子IL-10、TNF-α的含量.结果 B(BMSCs)组与E(BMSCs+LPS)组相比,IL-10与TNF-α的含量没有明显变化;F(Macrophage+LPS)组IL-10、TNF-α的含量均高于C组(Macrophage);G(Macrophage+BMSCs+LPS)组与F(Macrophage+LPS)组相比,TNF-α明显降低、IL-10明显升高.结论 BMSCs可以减轻LPS对巨噬细胞分泌炎症因子的刺激作用,减轻炎症反应的程度.     

白藜芦醇对小鼠肺泡巨噬细胞释放IL-6、TNF-α的影响

目的:探讨白黎芦醇(Res)对小鼠肺泡巨噬细胞释放细胞因子IL-6,TNF-α的影响。方法:经从小鼠支气管肺泡灌洗中获得肺泡巨噬细胞,分5组进行培养,A组(LPS 10mg/L),B组(LPS 10mg/L+Res 50μg/ml),C组(LPS 10mg/L+Res 100μg/ml),D组(LPS 10mg/L+Res 150μg/ml),E组(LPS 10mg/L+Res 200μg/ml).各组在培养4,6,12,24h提取上清液,应用ELISA法测定上清液中IL-6,TNF-α含量。结果:在LPS刺激下IL-6于12h达释放高峰,在高峰期随着白黎芦醇浓度的逐步加大,IL-6的含量相应逐渐降低,E组IL-6含量明显低于只有内毒素刺激的A组(P<0.05)。同样在LPS刺激下TNF-α于6h达释放高峰,在高峰期随着白黎芦醇浓度的逐步加大,TNF-α含量也相应逐渐降低,而C组、D组、E组TNF-α含量明显低于A组(P<0.05)。结论:白黎芦醇对小鼠肺肺泡巨噬细胞过度释放炎症性细胞因子IL-6,TNF-α具有明显抑制作用。     

谷氨酰胺对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究谷氨酰胺(Gln)体内作用对脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子分泌的影响.方法 昆明小鼠60只,随机分为假手术组(Sham组,n=20)、手术对照组(Con组,n=20)、术后Gin处理组(Gln组,n=20).Gln组和Con组小鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型,建模后即刻经尾静脉分别注射Gln 0.75 g/kg和等量生理盐水;Sham组小鼠仅开腹翻动盲肠,术后处理同Con组.三组均于6 h后采血收集血清,腹腔灌洗分离巨噬细胞;ELISA法测定巨噬细胞裂解液及血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的水平;RT-PCR测定巨噬细胞TNF-α mRNA表达;Western blotting检测巨噬细胞热休克蛋白72(HSP72)表达.结果 Gln组腹腔巨噬细胞裂解液中TNF-α和IL-6水平明显低于Con组(P＜0.01或0.05),而与Sham组相比无显著差异(P＞0.05).Gln组血清中TNF-α水平明显低于Con组(P＜0.05),但两组TNF-α、IL-6和IL-10水平均高于Sham组.Gln组小鼠腹腔巨噬细胞HSP 72表达较Con组和Sham组显著升高(P＜0.01).Con与Gln组巨噬细胞TNF-α mRNA表达无显著差异,但均明显高于Sham组(P＜0.01).结论 Gin体内作用可以抑制脓毒症小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,同时增加其HSP 72的表达.     

Nodosin对脂多糖刺激RAW264.7细胞分泌NO及细胞因子的影响

[目的]观察nodosin对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞NO和炎症细胞因子的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定nodosin对体外培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞增殖的影响;采用LPS刺激RAW264.7细胞使细胞分泌细胞因子,以不同浓度(1.25、2.5、5 mmol/L) nodosin干预,Griess法检测培养上清液中NO水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量. [结果]Nodosin在10 mmol/L内对RAW264.7细胞增殖无显著影响;可呈一定剂量依赖关系地抑制LPS刺激RAW264.7细胞后NO、IL-6、TNF-α的表达,促进IL-10的表达.[结论]Nodosin的抗炎作用与其能抑制炎症细胞因子NO、IL-6、TNF-α表达,促进IL-10的表达有关.