骨桥蛋白反义寡核苷酸对微缺氧下人结肠癌细胞HT-29增殖活性及侵袭力的影响

目的 观察靶向骨桥蛋白(OPN)的反义寡核苷酸(ASODN)对微缺氧下HT-29细胞增殖活性、侵袭转移潜能等的影响,探讨OPN与微缺氧诱导的肿瘤恶性表型的关系.方法 合成ASODN,以Lipofectamine为载体,将其转染入微缺氧下高表达OPN的HT-29细胞.用RT-PCR和Western blot法分别检测转染细胞微缺氧下OPN mRNA和蛋白的表达,MTT检测转染的HT-29细胞微缺氧下的增殖活性,MTT比色试验测定HT-29细胞的异质性黏附能力,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/9活性变化.结果 微缺氧诱导的OPN mRNA和蛋白表达被靶向OPN的ASODN特异性地抑制,表达量分别是对照组的31.5%和35.4%.ASODN组HT-29细胞的吸光度值(A570)明显低于各对照组(P<0.01),生长抑制率(IR)达(41.6±1.2)%.ASODN组HT-29细胞在各时限点的黏附率均明显降低,明胶酶活性下降71%,与各对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPN mRNA和蛋白表达,显著拮抗微缺氧诱导的细胞增殖、异质性黏附,并显著下调微缺氧诱导的细胞分泌MMP2/9的活性.OPN在微缺氧促进肿瘤向恶性表型转化中起着重要作用.     

骨桥蛋白反义寡核苷酸对体外微缺氧诱导的肿瘤新生血管的影响

目的 观察靶向骨桥蛋白(OPN)的反义寡核苷酸(ASODN)对微缺氧下HT-29细胞体外促进新生血管形成能力的影响,探讨OPN与微缺氧诱导的肿瘤新生血管的关系.方法 合成靶向OPN的ASODN,以Lipofectamine为载体,将其转染入微缺氧下高表达OPN的HT-29细胞.RT-PCR和Western blot分别检测转染细胞微缺氧下OPNmRNA和蛋白的表达;明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/MMP-9活性变化;内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力.提取胞核蛋白,Western blot检测胞核内NF-kB/p65蛋白表达.结果 微缺氧诱导的OPNmRNA和蛋白表达被靶向OPN的ASODN特异性地抑制,表达量分别是对照组的35.4%和31.5%.ASODN组HT-29细胞明胶酶活性下降71.0%,内皮细胞形成管状结构的数仅为(12.4±1.8);胞核内的NF-κB/p65蛋白表达下调了61.2%.与各对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPNmRNA和蛋白表达,显著下调微缺氧诱导的HT-29细胞分泌MMP-2/MMP-9的活性,显著桔抗新生血管形成.阻抑OPN的表达,胞核内NF-κB/p65表达、MMP-2/MMP-9的活性随之下调,提示NF-κB和MMP-2/MMP-9也可能参与微缺氧诱导的恶性转化,并且是OPN的下游调控基因.     

低氧对人结肠癌细胞HT-29增殖、血管生成能力的影响及其机制探讨

目的观察HT-29细胞在低氧下的增殖、血管生成能力,NF-κB的表达水平,初步探讨低氧与肿瘤恶性演进的关系。方法参照体内肿瘤的氧分压,建立低氧模型。MTT检测低氧对HT-29细胞增殖的影响,描绘细胞生长曲线;内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力。将HT-29细胞低氧处理不同时段,提取细胞核蛋白,Western blot检测细胞核内NF-κB的表达。结果低氧组HT-29细胞的形态与对照组相似,而A570值则显著高于对照组。低氧组内皮细胞形成的管状结构数为(28.5±3.6),明显多于对照组(12.4±2.8),其差异具有统计学意义(P<0.01)。低氧12 h,HT-29细胞胞核内NF-κB的表达逐渐上调,24 h达顶峰。结论在适度低氧下,HT-29细胞增殖加快,并诱导促进新生血管形成,促进其向恶性表型转化,可能与细胞核内NF-κB的表达上调有关。     

微缺氧对人结肠癌细胞HT-29血管生成能力及分泌基质金属蛋白酶2/9活性的影响

目的 观察HT-29细胞在微缺氧下的血管生成能力,检测OPN的表达和MMP-2/MMP-9的活性变化,以探讨其向恶性表型转化的潜在机制.方法 参照体内肿瘤的氧分压,建立微缺氧模型.内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力.将HT-29细胞微缺氧处理0、6、12、24和48 h,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/MMP-9活性变化,RT-PCR和Western blot检测OPN的mRNA和蛋白表达.结果 微缺氧组内皮细胞形成的管状结构数为(28.5±3.6),明显多于对照组(12.4±2.8),其差异具有显著性(P<0.01).微缺氧6h,MMP-2/MMP-9活性无明显变化,随着微缺氧时间的延长,其活性逐渐上调,24h达顶峰,48 h与24 h差异无显著性.HT-29细胞在微缺氧的诱导下,其OPN mRNA和蛋白的表达趋势与MMP-2/9活性变化趋势类同.结论 微缺氧能诱导HT-29细胞促进新生血管形成,上调MMP-2/MMP-9活性而促进其向恶性表型转化.该实验检测到在微缺氧下OPN和MMP-2/MMP-9普遍上调,且时限同步.因此,笔者推测:OPN可能是微缺氧下继HIF-1α之外的另一重要调控因子,该调控因子与微缺氧诱导的恶性表型密切相关.     

缺氧与肿瘤恶性演进的关系及其机制探讨

目的：观察HT‐29细胞在低氧下分泌的基质金属蛋白酶2／9（MMP‐2／9）活性,检测NF‐κB的蛋白表达,初步探讨低氧与肿瘤恶性演进的关系。方法参照体内肿瘤的氧分压,建立低氧模型。将 H T‐29细胞低氧处理不同时段,明胶酶谱分析检测其分泌的MMP‐2／9活性变化;提取细胞核蛋白,Western blot测定胞核内NF‐κB的表达。结果低氧12 h ,HT‐29细胞分泌的MMP‐2／9活性逐渐上调,24 h达顶峰。在低氧的诱导下,HT‐29细胞核内NF‐κB的表达趋势与MMP‐2／9活性变化趋势基本一致。结论低氧能诱导 HT‐29细胞分泌高活性的 MMP‐2／9而促进其向恶性演进,可能与细胞核内 NF‐κB的表达上调有关。     

人结肠癌细胞HT-29血管生成能力与微缺氧的关系

目的观察HT-29细胞在微缺氧下的血管生成能力,检测OPN的表达,以探讨其向恶性表型转化的潜在机制。方法参照体内肿瘤的氧分压,建立微缺氧模型。内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力。将HT-29细胞微缺氧处理0、6、12、24、48小时,RT-PCR和Western blot检测OPN的mRNA和蛋白表达。结果微缺氧组内皮细胞形成的管状结构数为（28.5±3.6）,明显多于对照组（12.4±2.8）,差异具有统计学意义（P〈0.01）。微缺氧6h,HT-29细胞OPN的mRNA和蛋白无明显变化,随着微缺氧时间的延长,其表达逐渐上调,24h达顶峰,48h与24h无显著差异。结论微缺氧能诱导HT-29细胞促进新生血管形成,而促进其向恶性表型转化。微缺氧下OPN普遍上调,OPN可能是微缺氧下继HIF-1α之外的另一重要调控因子,该调控因子与微缺氧诱导的恶性表型密切相关。     

白藜芦醇对乳腺癌患者基质金属蛋白酶 9 活性的影响

目的观察白藜芦醇对乳腺癌细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养MCF7细胞,用不同浓度的白藜芦醇刺激。小室侵袭实验检测MCF-7细胞的迁移与侵袭;明胶酶谱实验检测MMP9活性;荧光素酶报告基因分析MMP-9和NF—κB活性。结果50nM白藜芦醇孵育24h后,其迁移与侵袭率分别降低了34％和30％;明胶酶谱实验显示,125～100μmol／LM白藜芦醇孵育24h后,MMP-9活性随着浓度的增高而降低,其中白藜芦醇为100μmol／LM时,其活性降低了56％。蛋白质印迹显示,白藜芦醇能抑制P65核转位;此外,白藜芦醇能以剂量依赖性方式抑制MMP-9的转录活性,NF—κB突变后报告基因活性明显降低。结论白藜芦醇对MMP的表达很大程度上与抑制NF—κB信号通路活性有关。     

肿瘤坏死因子α对肠上皮细胞株HT-29的核转录因子κB信号通路的激活作用研究

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞株HT-29的核转录因子κB(NF-κB)信号通路的激活作用及鼠尾草酚对TNF-α诱导HT-29的NF-κB激活的影响。方法:将HT-29细胞分为空白对照组、TNF-α组和低、中、高剂量鼠尾草酚组。用CCK-8法检测HT-29细胞活力;Western-blot方法检测IκBα、Pi-IκBα和PiIKKα/β蛋白表达;用NF-κB转录活性试剂盒检测HT-29细胞NF-κB转录活性。结果 :实验各组的HT-29细胞活力比较无显著性差异(P>0.05);TNF-α刺激可诱导HT-29的IκBα磷酸化及降解;鼠尾草酚能使TNF-α诱导HT-29的IKKα/β和IκBα磷酸化显著受抑制(均P<0.05),并且可显著降低NF-κB的转录活性(P<0.05)。结论:TNF-α可激活HT-29的NF-κB经典信号通路,鼠尾草酚对TNF-α诱导的NF-κB激活有抑制作用。     

β-AR信号通路介导去甲肾上腺素提高 HT-29细胞侵袭能力的研究

目的 探讨去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对结肠癌侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法 以人结肠癌细胞株HT-29为研究对象,采用Transwell观察去甲肾上腺素对HT-29细胞侵袭能力的影响,同时观察加入非选择性β-AR阻断剂普萘洛尔后,HT-29细胞侵袭能力的变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测去甲肾上腺素通过β-AR信号通路对HT-29细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的表达及ERK1/2活性的影响。结果 0.1、1、10μmol/L去甲肾上腺素组处理后,HT-29细胞的侵袭能力显著高于空白对照组,并且随着去甲肾上腺素浓度的提高,细胞的侵袭能力逐渐增强。而普萘洛尔可逆转去甲肾上腺素对HT-29细胞的促侵袭作用。与空白对照组比较,10μmol/L去甲肾上腺素可显著上调HT-29细胞MMP-2、MMP-9、VEGF mRNA和MMP-2、MMP-9、VEGF、pERK1/2蛋白表达水平。普萘洛尔可拮抗去甲肾上腺素的作用,下调MMP-9和VEGF表达,并减弱去甲肾上腺素对HT-29细胞ERK1/2活性的影响。结论 去甲肾上腺素可通过β-AR信号通路提高HT-29细胞的体外侵袭能力。     

核因子κB与肝脏疾病

细胞核因子κB又称κ基因结合核因子（nuclear factor kgene binding,NF—κB）,是一种广泛存在于细胞中的具有多向调节作用的蛋白质分子,参与细胞激酶、趋化因子、生长因子、细胞黏附因子及早期反应的蛋白质分子基因的转录,其活性受到一个NF—κB抑制蛋白（inhibitor of κB,IκB）的抑制。近年来研究结果表明：NF—κB能介导广泛的生物学作用,参与多种疾病的发生发展过程,尤其在肝脏疾病中发挥着不可忽视的作用,本文就核因子κB与肝脏疾病之间的关系作一综述。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。     

骨淋巴管瘤病1例报告

患者女,19岁,体检发现全身多处固执破坏4个月。影像学检查：平片及CT平扫检查：双侧髂骨、耻骨、股骨颈及股骨上段均可见多发大小不等的低密度影,略呈膨胀性,边界清楚,部分可见硬化边。双侧肱骨上段、肩胛骨近关节盂处骨质及股骨下段、右胫骨近端、左腓骨中上段可见多个囊性骨及右侧锁骨亦可见多发局限性低密度减低区、略呈膨胀性（图1、5）。MRI平扫：脊柱可见多个囊状长T1长T2信号,部分略呈膨胀性。（图2～4）     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

胃镜诊断胃癌107例分析

1986年1月至1991年6月经内窥镜检查发现胃癌107例,其中100例经内窥镜活检病理证实,阳性率93.5％,7例阴性者均经手术证实。本文分析了胃癌的内镜特征(中、晚期胃癌、一点癌)和病理特点,并就临床意义进行分析、讨论。认为在胃角、胃窦部的溃疡、糜烂、结节状及粘膜粗糙不平应仔细观察并进行活检。