CpG ODN联合光动力疗法对肝癌移植瘤生长及局部CD8+细胞毒性T细胞的影响

目的 探讨以CpG寡脱氧核苷酸(ODN)为免疫佐剂联合光动力疗法(PDT)的光免疫疗法(PIT)对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.方法 92只ICR小鼠皮下接种肝癌Heps细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、PDT组、CpG ODN组和PIT组,治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率.免疫组化法计数肿瘤局部CD8+细胞毒性T细胞(CD8+CTLs).结果 (1)与埘照组相比,PDT组、CpG ODN组和PlT组治疗后16d肿瘤体积均明显缩小(P<0.01),抑瘤率分别为73.88%、20.09%、84.47%.PIT组肿痛体积较单纯PDT组明显缩小(P<0.05).(2)免疫组化染色结果显示,PDT组、CpG ODN组和PIT组治疗后2、24h肿瘤局部CD8+CTLs数量较对照组无明显变化(P>0.05),治疗后72h肿瘤局部CD8+CTLs数量,均明显高于对照组(P<0.05);PIT组肿瘤局部CD8+CTLs数量明显高于单纯PDT组(P<0.01).结论 CpG ODN能激活宿主免疫应答而有效增强PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.     

光动力疗法联合瘤体输注树突状细胞对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究

目的探讨光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）联合瘤体内输注树突状细胞（dendritic cell,DC）的光免疫疗法（photody-namic immuno-therapy,PIT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应。方法体外培养昆明小鼠骨髓源性DC,4,＇6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）荧光染色液标记DC备用。128只昆明小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立肿瘤模型,随机分为对照组、PDT组、DC组和PIT组。对照组小鼠瘤体内注射生理盐水,PDT组单纯PDT治疗,DC组小鼠瘤体内注射DAPI标记的DC,PIT组PDT联合瘤体内注射DAPI标记的DC细胞。治疗后定期测量各组肿瘤体积,记录各组小鼠生存时间,荧光显微镜下计数DC组及PIT组小鼠淋巴结中荧光细胞数目,流式细胞仪测定各组小鼠外周血T细胞亚群,LDH释放法测定各组小鼠脾细胞杀伤活性。结果 （1）与对照组相比,PDT组与PIT组治疗后肿瘤生长明显受抑;（2）PDT组与PIT组小鼠生存时间延长;（3）高倍镜视野下DC组较PIT组荧光细胞数增多（P〈0.05）;（4）治疗后72 h,PDT及PIT组小鼠外周血CD8＋T细胞百分率均明显高于对照组和DC组（P〈0.01、P〈0.01）,其中PIT组较PDT组增高明显（P〈0.01）,（5）PDT组与PIT组小鼠脾脏细胞杀伤活性较对照组和DC组明显增强（P〈0.01,P〈0.01）。结论 PDT疗法能够抑制肿瘤生长并激发宿主免疫应答,联合输注DC可增强PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应。     

光动力联合DC对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究

目的：探讨光动力（photodynamic therapy,PDT）联合瘤体内输注树突状细胞（dendritic cell,DC）的光免疫疗法（photodynamic immuno-therapy,PIT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应的研究。     

《中国激光医学杂志》2007年(第16卷)文题索引

基础研究激光免疫疗法对小鼠H22肝癌的长期抗瘤效应(论著)曾超英罗芳洪黄萍16(1):1激光间质热疗法中光纤终端形状对加热区域影响的研究(论著)李振新李世普16(1):4竹红菌素B的两种剂型对小鼠S180肉瘤的光动力作用观察(论著)黄乃艳顾瑛刘凡光等16(1):8 He-Ne激光照射对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF—κB基因表达的作用     

腺病毒载体介导mIL-12基因治疗联合放射治疗小鼠肝癌的研究

目的：观察腺病毒介导白介素－12基因治疗联合放射治疗协同抗小鼠肝癌作用。方法：荷肝癌动物模型,肿瘤局部γ射线照射后,瘤内注射AdmIL-12腺病毒,取组织标本进行ELISA及CTL活性检测,免疫组化染色等分析。结果：联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50％的小鼠肿瘤完全染色等分析。结果：联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50％的小鼠肿瘤完全消退,疗效显著优于单纯照射组和瘤内注射AdmIL-12及其其他对照组（P＜0．01）。而单纯瘤内注射AdmIL-12组的疗效并不优于单纯照射组（P＞0．05）。联合治疗组小鼠血清和脾细胞的培养上清中可见INF-γ水平的显著提高,并诱导产生特异性的CTL活性。免疫组化结果显示,联合治疗组肿瘤组织中见有大量CD4^ 、CD8^ 阳性淋巴细胞的浸润。结论：腺病毒介绍导白介素12基因治疗与放射治疗的联合具有协同抗肿瘤作用,并诱导产生特异性抗肿瘤免疫反应。     

131I标记的抗肝癌血管内皮细胞单克隆抗体对肝癌治疗的实验研究

目的运用131I标记的抗肝癌血管内皮细胞单克隆抗体,研究靶向血管内皮细胞治疗肝癌的可行性.方法 建立裸小鼠人肝细胞癌动物模型,取30只裸鼠随机分为3组,分别为实验A组、实验B组和对照组,每组各10只.实验A组在接种肝癌细胞的同时,经腹腔注射抗肝癌血管内皮细胞的单克隆抗体,每只200μg/200μl,2次/周;实验B组在接种肝癌细胞的同时,经腹腔注射同剂量的131I标记的抗肝癌血管内皮细胞的单克隆抗体;对照组在接种肝癌细胞的同时,经腹腔注射等量的生理盐水.观察肿瘤的生长情况,计算肿瘤的体积,计算抑瘤率.结果 实验A组的抑瘤率为74.55%,实验B组为86.36%;实验A、B组与对照组比较肿瘤明显受抑(P<0.05).实验B组与实验A组比较显示了明显的放疗作用(P<0.05).HE及免疫组化染色观察证实,经单抗治疗后肿瘤区微血管内血栓形成,血管内皮细胞变性、坏死,血管周围大片肿瘤细胞坏死,瘤内血管密度明显降低.结论 抗肝癌血管内皮细胞单克隆抗体在动物实验中有明显的抑瘤作用,以此抗体为载体与核素相结合,可明显提高治疗肿瘤的疗效.     

瘤内注射153Sm-树脂微球治疗肝癌的实验研究

目的：观察瘤内注射^153Sm-树脂微球（RTMS）在荷人肝癌小鼠模型体内的药代动力学和治疗作用。方法：建立荷人肝癌小鼠模型，60只为体内分布研究组，每只小鼠瘤内注射^153Sm-RTMS 18．5MBq，连续计算10d内小鼠血液、肿瘤和各脏器组织的每克组织百分注射剂量（％ID／g)。30只为治疗实验组，再分瘤内注射370 MBq ^153Sm-RTMS和0．1mL生理盐水3个亚组，计算20d内肿瘤缩小率，计数外周血细胞，并作肿瘤病理检查。结果：（1）^153Sm-RTMS瘤内注射后30min的滞留率为94．34％，第8天时仍高达62．21％。（2）少量^153Sm可弥散入血，其全身分布以肺脏为最高，肝脏次之。（3）370和555MBq治疗量均有明显疗效，尤以555MBq组更好。（4）治疗量^153Sm-RTMS对小鼠造血功能无明显影响。结论：^153Sm-RTMS标记牢固、稳定性好，瘤内注射后可长时间滞留在肿瘤组织内，全身扩散量很小，大剂量注射的疗效明显。     

鼠移植胶质瘤手术加光敏治疗的实验研究

为探讨提高肿瘤手术疗效的方法，通过对昆明小鼠移植的传代Ｇ－４２２胶质瘤，进行手术切除加瘤床光动力学治疗的生存观察。实验研究证实：手术切除加瘤床光动力学治疗组的小鼠生存时间明显长于单纯手术切除组和带瘤自然生存组。说明Ｈｅ－Ｎｅ激光作实验光源的光动力学治疗能杀伤切除后残留术野的瘤细胞，导致术后复发率降低和生存期延长，为光动力学疗法用于脑胶质瘤手术的辅助治疗提供依据     

顺铂联合光动力疗法增加肝癌细胞敏感性的研究

正目的:探讨顺铂联合光动力疗法(PDT)对小鼠H22肝癌移植瘤抑制的增敏作用及其机制。方法:将皮下种植H22肝癌细胞的小鼠随机分为对照组、DDP组、PDT组、DDP+PDT组。观察治疗后各组荷瘤小鼠生活状态、移植瘤形态及体积变化;治疗第14d后各组处死4只小鼠,计算肿瘤抑制率及脾脏指数;行常规HE染色观察病理形态;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及周期     

二氢卟吩e4甘氨酸酰胺对小鼠S180移植肉瘤的光动力学效应

目的 探讨630 nm及661 nm激光激发不同剂量的二氢卟吩e4甘氨酸酰胺(e4),对荷S180肉瘤小鼠的光动力学效应.方法 昆明小鼠54只单侧腋下接种S180肉瘤,待肿瘤长至直径为6～8mm时,随机分为空白对照组和PDT组.PDT组又分设e4 5 mg/kg和10 mg/kg两剂量组.小鼠尾静脉注射光敏剂后3 h,分别用630 nm或661 nm激光以150mW/cm2的功率密度垂直照射瘤体20 min,即能量密度180 J/cm2,光斑直径1.5 cm.照光1周后取瘤组织称重并计算抑瘤率.结果 630 nm和661 nm激光照射组均表现出光动力抑瘤效果.经630 nm激光照射,e4 5 mg/kg和10 mg/kg组的抑瘤率分别为35.5%和39.0%,两者差异无显著性意义(P>0.05).而经661 nm激光照射,e4 5 mg/kg和10 mg/kg组的抑瘤率分别为50.49%及61.18%,两者差异有显著性意义(P<0.01).而在同-e4浓度下,波长661 nm组较630 nm组的抑瘤率高(P<0.01).结论 二氢卟吩e4甘氨酸酰胺-PDT对小鼠S180肉瘤有明确的抑瘤作用,且661 nm激光的动力学抑瘤效应大于630 nm激光.     

光动力作用对活体肝组织损伤研究

目的 研究光动力作用对活体肝组织的损伤,探讨光动力治疗肝癌的可行性,为临床治疗提供实验依据。方法 动物实验：将小鼠分成光动力疗法（ＰＤＴ）组、单血卟啉衍生物（ＨｐＤ）组、浙江组和空白对照组。光敏药物选用血卟啉衍生物,给药量每公拆体重１０ｍｇ,药物用１ｍｌ生理盐水稀释,于实验前４８ｈ将药物注射入ＰＤＴ组和ＨｐＤ组小鼠腹腔内,避光饲养。将ＰＤＴ组和激光组小鼠固定于褓反上。麻醉后,剖腹暴露右肝前叶,激光     

高压氧对小鼠肿瘤生长、转移及化疗的影响

目的　观察高压氧 ( HBO)对小鼠肿瘤生长、转移及化学治疗的影响。方法　用 HBO对小鼠 H2 2 肿瘤、S- 180肉瘤和 L ewis肺癌及注射顺铂 ( DDP)治疗者分别进行处理 ,观察其对 S- 180肉瘤抑制、H2 2 肿瘤淋巴道转移及 L ewis肺癌肺转移的影响。结果　 HBO DDP对 H2 2 和 S- 180肿瘤的抑瘤率分别为 5 1.91%和 46 .99% ,高于单用 DDP的 32 .2 6 % ( P<0 .0 5 )和 2 6 .2 8% ( P<0 .0 5 )。单用 HBO的小鼠肿瘤生长及转移与对照无明显差异。结论　 HBO对 DDP治疗小鼠 H2 2 和 S- 180肿瘤有增效作用 ,对小鼠 H2 2 和 S- 180肿瘤的生长无影响 ,对小鼠 H2 2 肿瘤的淋巴道转移及小鼠 L ewis肺癌的肺转移无促进作用     

9401对H22肝癌小鼠放射增敏效应的研究

目的 探讨9401对H22肝癌小鼠的放射增敏作用。 方法 建立H22肝癌小鼠模型,按照给药和照射的不同,分为空白对照组、单纯照射组、烟酰胺联合照射组、9401高剂量联合照射组、9401中剂量联合照射组和9401低剂量联合照射组。照射后观察H22肝癌小鼠的肿瘤生长情况、记录肿瘤照射后的生长时间,并计算肿瘤生长的延迟时间和各组的放射增敏系数。照射后28 d处死小鼠,剥瘤称重,计算抑瘤率。 结果 9401高、中、低各剂量联合照射组均能延缓肿瘤生长,其中9401高、中剂量联合照射组与烟酰胺联合照射组相比,差异有统计学意义（t=24.7和7.5,P均＜0.01）,且9401高、中剂量组辐射敏感性均显著增高,增敏系数分别为2.13、1.73,明显高于烟酰胺联合照射组的增敏系数1.61,差异有统计学意义（t=2.26和9.04,P均＜0.05）;9401高、中、低各剂量联合照射组的抑瘤率分别为64.5%、50.9%、42.6%,烟酰胺联合照射组的抑瘤率为53.2%,9401高剂量组抑瘤效果显著高于烟酰胺联合照射组,差异有统计学意义（t=2.8,P < 0.05）。9401高、中、低各剂量组与单纯照射组相比,抑瘤率差异有统计学意义（t=5.7,4.0和2.2,P均＜0.05）。 结论 9401对H22肝癌小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,抑制肿瘤作用随给药剂量的增加而逐步增强,放射增敏效果显著,临床应用前景广阔。     

光动力疗法对荷瘤小鼠血清中TNF-α含量影响的实验研究

目的探讨光动力疗法（PDT）抑瘤效应的免疫机制,以及PDT联合肿瘤局部注射卡介苗（BCG）的治疗效果。方法建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型72只,随机分为对照组、PDT组、BCG组和联合组,每组18只。观测各组移植瘤体积的变化。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）,测定各组PDT治疗后2、24 h和7 d荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α的变化。结果 1.各治疗组治疗后7 d的移植瘤体积较对照组均明显缩小（P〈0.01）。治疗后7 d联合组的肿瘤体积较PDT组明显缩小（P〈0.05）。2.ELISA结果显示,治疗后2、24 h和7 dPDT组和联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量均明显高于对照组和BCG组（P〈0.01）,联合组荷瘤小鼠血清中TNF-α的含量明显高于PDT组（P〈0.05）。结论 PDT可增强荷瘤小鼠全身的免疫力,肝癌移植瘤体积明显缩小。PDT联合局部注射BCG的疗效优于单用PDT和单用BCG。     

棘刺锚参抗肿瘤因子抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究棘刺锚参抗肿瘤因子(Protankyra Bidentata anti-tumor factor,PBATF)在动物水平的抗肿瘤作用.方法 采用小鼠H22肝癌模型、大鼠Walker-256癌肉瘤模型、人体LAX肺腺癌模型、人体QGY肝癌模型,分别测定PBATF对不同肿瘤生长的抑制效应.各种模型分别设PBATF高(5 mg/kg)、中(1 mg/ks)、低(0.5 mg/kg)剂量组、阳性对照组(CTX)和阴性对照组.试验组及阳性对照组昆明种小鼠或Wiser大鼠每组均10只,裸小鼠每组均6只,阴性对照组每次各为2组.腹腔注射给药,每天1次,连续7～10 d.采用常规方法测定PBATF腹腔注射的LD50.结果 PBATF对大鼠Walker-256癌肉瘤的抑瘤率,高剂量组62.63%、中剂量组52.31%、低剂量37.49%.PBATF对人体LAX肺腺癌的抑瘤率,高剂量组56.02%、中剂量组50.60%、低剂量组40.36%.PBATF对人体QGY肝癌的抑瘤率,高剂量组52.07%、中剂量组45.56%、低剂量组33.14%.PBATF对小鼠H22肝癌的抑瘤率,高剂量组59.25%、中剂量组57.74%、低剂量组45.28%.PBATF腹腔注射给药,小鼠的LD50为1.973 g/kg.结论 获得了高纯度的PBATF,能够显著抑制体内外肿瘤生长.     

Optimal light dose and drug dosage in the photodynamic treatment using PHOTOCYANINE

Background

To explore the effective dose range of PHOTOCYANINE, the intensity and duration of irradiation using a 670-nm laser, and changes of local tissues after photodynamic therapy (PDT) in mice with S180 tumors to provide evidence for the clinical application of PDT.

Basic methods

Kunming mice were administered the photosensitizer PHOTOCYANINE. After the administration of PHOTOCYANINE, irradiation with 670-nm laser had a remarkable inhibitory effect on the growth of the grafted tumor S180.

Main results

Within the power densities 36–144 J/cm², the irradiation dose showed a significant dose–response relationship; under the same drug dosage, an increase in irradiation dose could enhance the inhibitory effect on tumor growth. In the groups administered PHOTOCYANINE and irradiated with a 670-nm laser, the temperature of the local surface did not increase remarkably, an effect also seen in the negative control group. Local swelling around the tumor occurred immediately after PHOTOCYANINE administration and laser irradiation, and could last for about 3 days. Vertical resection of the tumors 72 h after irradiation showed that the depth of local-tissue necrosis after PHOTOCYANINE administration and laser irradiation was 5.7–7.5 mm.

Principal conclusions

The efficacy of PHOTOCYANINE was significantly correlated with its dose; under identical irradiation conditions, the increase in drug dose increased the tumor inhibition rate (TIR) within a certain dose range. The efficacy of PHOTOCYANINE also showed significant irradiation-dependent characteristics.     

131I-17-AAG对荷H460人非小细胞肺癌裸鼠的抗癌效应

目的 观察131I标记17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-KAG)对荷H460人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑癌效应.方法 过氧化氢法制备131I-17AAG.建立荷H460人非小细胞肺癌BALB/c裸鼠模型,28只荷瘤裸鼠按随机数字表法分为7组(n=4),瘤内和尾静脉注药各3组,剂量依次为5.5 MBq×2(间隔8 d)、11.0 MSq和5.5 MBq及空白对照组.另设Na131I瘤内给药对照组.8组分别于注药后2,6,24 h及2,3,7,10,16 d各取2只鼠行γ显像.观察肿瘤生长情况,16 d后处死全部小鼠,计算抑瘤率,并做光学显微镜、电镜及免疫组织化学检测.计量数据以x±s表示,采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 SPECT显像证实131I-17-AAG靶向定位好,能较长时间聚集在瘤体内;各治疗组存在不同程度抑瘤效应,以瘤内间隔给药(5.5 MBq×2)组疗效最好,抑瘤率高达(86.77±4.57)%,尾静脉给药5.5 MBq×2组和11.0 MBq组间差异无统计学意义(q=1.67,P>0.05),余各组间抑瘤率差异均有统计学意义(q=3.16～24.34,P均<0.05);形态学显示抑瘤效应越好,瘤组织破坏越明显;免疫组织化学显示瘤内及尾静脉注药组热休克蛋白90(HSP90)a阳性率[分别为(26.01±3.71)%、(61.57±5.98)%]均较空白对照组[(84.13±5.71)%]下降(t值分别为20.91和6.68,P均<0.05).结论 131I-17-AAG能有效抑制裸鼠非小细胞肺癌的生长,以瘤内注药及间隔给药抑癌效应最佳.     

分次局部照射对H22肝癌移植小鼠肺转移的影响及其机制探讨

目的 研究分次局部照射对H22肝癌移植小鼠肺转移的影响,并探讨其机制。方法建立昆明小鼠皮下H22肝癌移植模型,总计96只小鼠随机分为健康对照组、肿瘤对照组和肿瘤照射组。观察局部肿瘤生长和肺转移情况,并进一步研究肿瘤增殖核抗原计数(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤内微血管密度(MVD)及血浆T细胞亚群变化。结果 肿瘤照射组皮下肿瘤缩小,抑瘤率约为30%,但该组大体和镜下肺转移数及死亡数较肿瘤对照组高(χ²=8.31、4.48、9.60, P<0.05),转移结节大多明显。肿瘤对照组和照射组PCNA、 VEGF、 MVD表达差异均有统计学意义( t =23.78、-2.47、-6.43, P<0.05)。肿瘤照射组血浆T细胞亚群CD4和CD8较健康组有明显下降( t =4.72和3.31, P<0.05)。结论 局部照射H22肝癌移植小鼠模型可使皮下肿瘤缩小,但有可能增加肺转移风险。     

黄芪注射液对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用机制

 目的 研究黄芪注射液对H22荷瘤小鼠的抗肝脏肿瘤作用,并初步探讨其作用机制.方法 应用H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;免疫组化方法检测肿瘤组织的微血管密度(microvessel density,MVD).结果 在12 g/kg、8 g/kg和4 g/kg的剂量下黄芪注射液的抑瘤率分别为51.6%、33.06%和17.81%.免疫组化结果表明,黄芪注射液具有显著的抑制肿瘤血管生成的作用,且呈现剂量依赖关系.结论 黄芪注射液具有较强的体内抗肝脏肿瘤作用,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关.