红细胞生成素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfu-sioninjury,IRI)时心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因及蛋白表达的影响。方法35只大鼠随机分成4组:假手术组(SHAM)、缺血再灌注组(IR)、红细胞生成素干预1组(EPO1)和红细胞生成素干预2组(EPO2)。以左冠脉穿线结扎法制备心肌缺血再灌注模型,造模前24h开始给药。以缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞,S-P免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,RT-PCR对Bcl-2、Bax的mRNA做半定量分析。结果与IR组相比,EPO干预组的凋亡细胞指数[apoptoticindex,A1,A1(%)=平均光密度×阳性细胞百分比×100]有明显下降。EPO2组的Bcl-2基因及蛋白表达均明显高于IR组[(0.29±0.04)vs(0.10±0.02),P=0,P<0.01;(4.97±1.82)vs(2.12±1.24),P=0.01,P<0.05)];而EPO干预组的Bax基因及蛋白表达与IR组之间并无显著差异。结论EPO干预对大鼠心肌IRI具有显著的抑制细胞凋亡的作用,其机制可能与诱导Bcl-2基因及蛋白表达,提高了Bcl-2/Bax的比值有关。     

急性白血病患者红细胞生成素及EPOR的表达及其临床意义

目的分析急性白血病患者红细胞生成素(EPO)及红细胞生成素受体(EPOR)的表达及其临床意义。方法选取本院2018年2月至2019年7月收治的急性白血病患者80例,其中急性髓系白血病患者(AML组)与急性淋巴细胞白血病(ALL组)各40例,并选择同期收治的40例非血液系统疾病患者作为对照组。比较3组EPO、EPOR表达情况。结果ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO表达明显高于对照组,EPOR表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平均明显高于对照组(P<0.05);ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO、EPOR蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。结论急性白血病患者的EPO、EPOR呈高表达,可根据EPO、EPOR表达量判断患者预后。     

促红细胞生成素及其受体在大鼠视网膜光损伤后的表达

目的 观察大鼠视网膜光损伤后促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）的表达变化。方法 选用32只雄性SD大鼠,其中29只建立视网膜光损伤大鼠模型（光损伤组）,另3只作为正常对照组。取正常对照组大鼠视网膜组织以及光损伤组大鼠光损伤后0、6、12、24、48、72 h和7、14 d的视网膜组织,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测EPO、EPOR蛋白和mRNA的表达,并采用免疫组织化学法定位观察EPO和EPOR蛋白表达。结果 Western blotting检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR蛋白表达增加,光损伤后48 h达到高峰;光损伤组EPO蛋白的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR蛋白的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。RT-PCR检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR mRNA表达增加,分别于光损伤后24 h和48 h达到高峰;光损伤组EPO mRNA的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR mRNA的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学定位观察显示：视网膜光损伤后24 h,光感受器内外段EPOR蛋白表达略增强,EPO蛋白表达相对较弱。结论 大鼠视网膜光损伤后EPO和EPOR蛋白及mRNA表达增加,有一定的时效性,提示内源性EPO和EPOR参与视网膜光损伤的修复机制。     

非造血组织中EPO/EPOR作用的研究进展

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是促进红系祖细胞增殖、分化和成熟必须的细胞因子,通过与促红细胞生成素受体(EPOR)结合,发挥其生理功能.人类EPO于1977年被首次成功分离纯化,并于1985年获得了人类EPO的重组基因(rhEPO),近二十多年,rhEPO一直被广泛应用于临床相关疾病引发贫血的治疗,包括慢性肾病、恶性肿瘤以及化疗等.近年来EPO/EPOR在非造血组织中的作用引起了新的关注,已成研究热点.     

促红细胞生成素对新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的:观察促红细胞生成素(EP0)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EPO神经保护作用的分子机制。方法:42只7d龄新生Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组、EPO干预组,其中EPO干预组又分大、中、小剂量3组。建立HIBD模型后,立即一次性腹腔注射不同剂量(10000U/kg、5000U/kg、1000U/kg)的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),用免疫组织化学方法观察给药24h后脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果:大鼠缺氧缺血后,脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达均显著增高,Bcl-2/Bax显著降低,EPO干预后Bcl-2蛋白表达增加,Bcl-2/Bax显著增高,Bax蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义。结论:EPO可以通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用,为临床治疗新生儿HIBD提供了更有意义的理论依据。     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的脑保护研究

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的神经保护作用。方法:40只7 d龄新生大鼠随机分为HIBD模型组、EPO干预组、生理盐水对照组、假手术组,每组各10例。在建立HIBD模型后,EPO干预组立即一次性腹腔注射5 000 U/kg剂量的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),生理盐水对照组注射等量生理盐水;于处置24 h后用原位缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞计(FCM)检测受损局部神经元细胞的凋亡情况,用RT-PCR检测神经元细胞凋亡相关信号分子的改变。结果:与假手术组比较,HIBD模型组在术后24 h神经元出现Bcl-2/Bax比值倒置,神经元凋亡增加;与HIBD模型组比较,EPO干预组神经元Bcl-2表达相对增加,而Bax表达相对受抑制,Bcl-2/Bax比值升高,神经元凋亡明显减少并且增殖增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EPO可以通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用。     

大鼠促红细胞生成素重组腺病毒载体的构建及其在大鼠SGNs中的表达

目的构建大鼠促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)重组腺病毒载体,并转染于体外培养的大鼠螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)。方法全基因合成大鼠EPO基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-EPO。经酶切、PCR及测序鉴定,再经PacⅠ酶切线性化后电转化感受态细胞,获得重组腺病毒载体pAdTrack-CMV-EPO,经PacⅠ酶切后转染至293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定及RT-PCR和Western blot鉴定。并转染至体外培养的螺旋神经元,免疫荧光检测及蛋白水平检测螺旋神经元中EPO表达。结果经KpnⅠ、HindⅢ酶切与测序鉴定显示,腺病毒载体pAdTrack-CMV-EPO构建成功,重组腺病毒AdEPO在293细胞中成功包装,扩增后病毒滴度为1.17×1011U/ml;经RT-PCR和Western blot检测EPO在293细胞中成功表达。重组腺病毒载体AdEPO经鉴定均构建正确;免疫荧光及Western blot检测转染腺病毒后螺旋神经元中EPO表达显著增强。结论成功构建了EPO重组腺病毒载体,并成功转染螺旋神经元,可显著增强螺旋神经元中EPO表达水平。     

促红细胞生成素保护糖尿病大鼠心功能的机制研究

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)保护糖尿病大鼠心功能的相关机制?方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组?正常+EPO干预组?糖尿病组?糖尿病+EPO干预组,每组10只?采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病动物模型,建模成功后,给予正常+EPO干预组和糖尿病+EPO干预组大鼠皮下注射EPO 1 000 IU/Kg,正常对照组和糖尿病组皮下注射等量生理盐水,每周1次,共12周?建模前及末次给药后7 d,尾静脉采血,检测血糖?血脂和血常规,超声心动图检测心功能,RT-PCR法分析内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)?肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)和EPO受体(EPOR) mRNA表达水平,Western blot技术检测GRP78?SERCA2a和EPOR蛋白表达?结果:正常对照组和正常+EPO干预组之间,心功能?血糖?血脂?血常规?GRP78?SERCA2a和EPOR蛋白表达水平均无明显差别(P > 0.05)?与正常对照组和正常+EPO干预组相比,糖尿病组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显下降(P﹤0.01),血糖和血脂明显升高(P﹤0.01),左心室心肌组织GRP78 mRNA及蛋白表达明显增加 (P﹤0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显减少(P﹤0.01)?与糖尿病组相比,糖尿病+EPO干预组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显增加(P﹤0.01),左心室舒张末期内径明显减小(P﹤0.05),左心室收缩末期内径明显减小(P﹤0.01),左心室组织GRP78 mRNA及蛋白表达明显下降 (P﹤0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显增加(P﹤0.01)?结论:EPO具有保护糖尿病大鼠心功能的作用,其机制可能是减轻心肌内质网应激,增加糖尿病大鼠心肌SERCA2a和EPOR蛋白表达?     

重度子痫前期患者胎盘中EPO及EPOR的表达

目的：研究重度子痫前期患者胎盘中促红细胞生成素及促红细胞生成素受体的表达。方法：选择重度子痫前期患者20例和正常妊娠孕妇10例,采用免疫组化染色SP法观察两组胎盘中EPO及EPOR的定位和表达量的差异。用逆转录-聚合酶链反应检测两组胎盘组织中的EPO及EPOR的mRNA表达水平的差异。结果：EPO及EPOR主要表达于胎盘合体滋养细胞和血管内皮细胞,绒毛间质无明显的阳性染色。重度子痫前期组患者胎盘中E-PO、EPOR的表达水平与正常孕妇组比较明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。重度子痫前期组中EPO及EPOR表达水平呈正相关（r=0.86,P〈0.05）。结论：重度子痫前期患者胎盘中EPO及EPOR的表达明显高于正常妊娠组,且EPO及EPOR表达呈明显的正相关。EPO及EPOR表达改变在妊娠高血压疾病中有重要的作用。     

EPO心血管作用研究进展

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)主要由肾脏皮髓交界处的肾小管旁细胞分泌,主要作用为促红系祖细胞分化及分裂为成熟红细胞,已广泛用于治疗肾衰竭、化疗及外科手术等多种原因所造成的贫血。研究证实EPO受体(erythropoietin receptor,EPOR)广泛分布于心血管系统,因此EPO在心     

促红细胞生成素对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的预防作用研究

目的:研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)预防阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、模型对照组及不同浓度(6.25、25、100 IU/ml)EPO预处理组,各组预处理24 h后加人5 μg/ml的DOX.24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率,甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:与空白对照组相比模型对照组细胞活力明显减低,凋亡率显著增高.不同浓度EPO预处理的心肌细胞活力较模型对照组显著增高,细胞凋亡率显著降低,并且凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达增高,凋亡蛋白Bax的表达降低.结论:EPO对DOX诱导的心肌细胞的损伤具有预防作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax有关.     

促红细胞生成素对β-淀粉样肽诱导的PC-12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC-12细胞凋亡的保护作用.方法 PC-12细胞分为空白对照组、模型组、EPO组.细胞培养24 h后,EPO组加入终浓度为25 U/ml的EPO预处理8 h,再与模型组同时加入终浓度为10 μmol/L Aβ25-35,继续培养48 h,采用MTT比色法分析细胞存活率,利用电镜观察线粒体超微结构的变化,运用Western blot检测细胞色素C(Cyt-C)和Bcl-2蛋白表达.结果 MTY显示EPO组细胞存活率明显高于模型组(P<0.05),并且中剂量存活率最高;电镜结果显示模型组线粒体数量和形态发生了明显的改变,而EPO组线粒体数量多,结构比较完整;Western blot显示EPO组Bcl-2蛋白表达较模型组明显增加(P<0.05);模型组胞浆Cyt-C表达较EPO组明显增加(P<0.05).结论 EPO可以提高细胞的存活率,其机制为稳定线粒体结构和功能,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制Cyt-C释放,从而抑制细胞凋亡.     

EPO通过抑制心肌细胞凋亡保护糖尿病心肌病大鼠的心功能

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对糖尿病心肌病(diabetes cardiomyopathy,DCM)大鼠心脏的保护作用及机制。方法将25只SD大鼠随机分为3组:对照组(n=5)、DCM组(n=10)、DCM+EPO组(n=10),DCM组及DCM+EPO组应用链脲佐菌素60 mg/kg一次性腹腔注射构建DCM大鼠模型,饲养4周后,DCM+EPO组另外给予rhEPO 2 000 U/kg腹腔注射。行心脏超声心动图检测心功能,心肌HE染色、电镜检查,TUNEL染色测定细胞凋亡,Western Blot检测Caspase-3的表达,RT-PCR检测Bcl-2及Bax的mRNA的相对表达量。结果与对照组比较,DCM组和DCM+EPO组心功能降低(P<0.01),rh EPO能改善DCM+EPO组的心功能(P<0.01)。与对照组比较,DCM组及DCM+EPO组心肌细胞凋亡指数明显增加(P<0.001),rh EPO能改善DCM+EPO组的心肌细胞凋亡(P<0.001)。DCM组大鼠心肌的Caspase-3的蛋白表达量较正常组增加(P&l... 更多     

骨髓增生异常综合征患者EPO水平的测定及其受体的表达

目的 研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓促红细胞生成素受体(EPOR)的表达以及血清促红细胞生成素(sEPO)水平与临床的关系,为MDS患者贫血采用EPO治疗提供理论依据.方法 对45例MDS患者采用RT-PCR法检测EPOR的表达,以夹心酶联免疫法(ELISA)测定sEPO含量,按照WHO分类诊断标准分类,其中...     

重组人促红细胞生成素对3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体表达及下游信号通路的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素( rHuEPO)对正常和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体(EPOR)表达及其下游信号通路的调控作用.方法 以1μmoL/L地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛索抵抗模型(模型组),以分化成熟的正常3T3-L1脂肪细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光法和Western blotting法检测细胞EPOR的蛋白表达,采用Real-TimePCR技术检测细胞EPOR mRNA的表达.分别以rHuEPO、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)及信号转导和转录激活因子5( STAT5)抑制剂对模型组和对照组细胞进行干预,采用Western blotting法检测不同药物干预对EPOR蛋白的表达及其下游分子丝(苏)氨酸蛋白激酶( Akt)和STAT5磷酸化水平(p-Akt和p-STAT5蛋白的表达)的影响.结果 与对照组比较,模型组EPOR蛋白和mRNA的表达均显著下调(P＜0.05).干预实验结果显示:与相应对照组或模型组比较,rHuEPO+对照组或模型组EPOR、p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量均显著上调(P＜0.05);与相应rHuEPO+对照组或模型组比较,rHuEPO+LY29400或STAT5阻断剂+对照组或模型组的p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量显著下调(P＜0.05).结论 正常3T3 -L1脂肪细胞上存在EPOR,胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞EPOR蛋白和mRNA的表达下调,rHuEPO可通过EPOR介导激活PDK-Akt和JAK2 -STAT5信号通路.     

促红细胞生成素后处理减轻大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨促红细胞生成素后处理在减轻肺缺血/再灌注损伤（LIRI）大鼠肺细胞凋亡中的作用及其机制。方法健康雄性成年SD大鼠40只,按随机数字表法分成5组,每组8只,即假手术对照组（C组）、缺血/再灌注(IR)组、促红细胞生成素（EPO）组、EPO+溶剂对照组（PPCES溶液）（P组）和EPO+SP600125（SP组）,通过阻断左肺门制作动物模型并予相应处理。原位末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）;RT-PCR法、免疫组化法测定肺组织Bcl-2、Bax基因和蛋白的表达;光镜下观察肺组织的病理变化及测定肺泡损伤数（IQA）。结果与C组比较,IR组肺组织IQA显著升高,AI显著升高,Bcl-2基因和蛋白表达明显下降,Bax基因和蛋白表达明显上调,Bcl-2/Bax的比值降低（均P＜0.05）,肺组织形态学发生异常改变;与IR组比较,EPO组、P组、SP组的IQA显著降低,AI显著降低,Bcl-2基因和蛋白表达上调,Bax基因和蛋白和表达下降,Bcl-2/Bax的比值增高（均P＜0.05）,肺组织形态学结构异常改变有所减轻;与EPO组比较,SP组的IQA降低,AI显著降低,Bcl-2基因和蛋白表达上调,Bax基因和蛋白表达下降,Bcl-2/Bax的比值增高（均P＜0.05）,SP组的肺组织形态学结构损伤较EPO组减轻。结论EPO后处理能减轻LIRI,其机制可能通过抑制JNK信号转导通路的激活,上调凋亡抑制因子Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax的表达,提高Bcl-2/Bax比值,使肺组织细胞凋亡减少,改善其结构。     

促红细胞生成素的神经保护与视网膜保护作用的研究进展

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO),是一种具有调节血细胞生成作用的细胞因子.它通过与红细胞膜上特异性促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)结合,发挥促红细胞增殖和分化作用.目前在临床上作为一种治疗贫血的制剂而被广泛使用.     

促红细胞生成素及其受体在脑外伤后的表达及意义

目的观察促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在急性重型脑外伤后大脑皮质内的动态表达规律,并探讨其意义。方法将130只Wistar大鼠分为3组:正常组10只、对照组60只(仅行开颅术)和脑损伤组60只(Feeney法)。分别在伤后5、12、24h及3、5、7d断头取脑。采用RT-PCR、免疫荧光法检测EPO和EPOR的mRNA及蛋白的表达。结果正常组和对照组各时间点有微量EPO及EPOR的表达,脑损伤组在伤后5h见少量EPOmRNA和蛋白的表达,12h和24h表达升高,至3d(mRNA0.691±0.035,免疫阳性细胞78.4±6.32)达到高峰,5d时下降,7d时降至正常水平。而EPORmRNA和蛋白在伤后5h见少量表达,12h时表达升高,至24h(mRNA0.736±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.31)达到高峰,3d(mRNA0.641±0.027,免疫阳性细胞74.8±5.49)、5d(mRNA0.656±0.011,免疫阳性细胞69.5±7.21)和7d(mRNA0.771±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.59)时仍维持在高表达水平,未见减弱。结论大鼠急性重型颅脑损伤后大脑皮质内EPO短暂升高,而EPOR持续高水平表达且呈时间依赖性,提示颅脑损伤后外源性EPO能与持续高表达的EPOR结合产生神经保护作用。     

非小细胞肺癌中促红细胞生成素及其受体的表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及肺良性病变组织中促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)和促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPO-R)的表达情况及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测具有完整临床病理资料的31例未经治疗的NSCLC组织EPO/EPO-R的表达情况,以21例肺良性病变组织作为对照,分析EPO/EPO-R的表达水平与各临床病理因素的关系.结果 NSCLC组织中EPO和EPO-R的表达高于肺良性病变组织(P＜0.05),但EPO/EPO-R的表达与非小细胞肺癌患者的pTNM分期、病理类型、组织分化程度及有无淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 NSCLC患者高表达EPO/EPO-R,提示EPO/EPO-R可能参与了肿瘤的发生过程.     

大鼠EPO真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建表达大鼠促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的真核表达质粒pEGFP-NI/EPO,并检测其在体外的表达.方法 从大鼠肾脏获得EPO基因片段并用RT-PCR方法 扩增,将其连接于真核表达质粒pEGFP-NI,测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cels,MSCs),采用免疫组化和RT-PCR检测EPO的表达.结果 经酶切和测序鉴定证实本实验构建的重组表达质粒正确,该质粒在体外转染大鼠MSCs细胞后可表达EPO蛋白.结论 成功构建的pEGFP-NI/EPO重组质粒能在体外表达EPO蛋白.