活血化瘀方对糖尿病模型新生肉芽组织中TGF-β1mRNA和TGF-β3mRNA的动态影响

目的探讨活血化瘀方对糖尿病大鼠模型创面肉芽组织不同时段(3、11d)转化生长因子-β(TGF-β)中TGF-β1 mRNA和TGF-β3mRNA表达水平影响,为"祛瘀利于生肌"的愈创理论提供科学依据。方法36只SD大鼠分别造成糖尿病溃疡模型和正常创面模型,随机分为活血化瘀组和糖尿病创面生理盐水对照组和正常创面生理盐水对照组。分别于创面修复3、11d取材,采用real-time PCR法检测新生肉芽组织中TGF-β1 mRNA和TGF-β3mRNA水平变化。结果创伤后3d和11d,中药活血化瘀组TGF-β1mRNA和TGF-β3 mRNA拷贝数均高于糖尿病创面生理盐水组(P<0.05),但低于正常创面生理盐水组(P<0.05)。结论活血化瘀方能在创伤后明显上调糖尿病大鼠模型新生肉芽组织中TGF-β1 mRNA和TGF-β3 mRNA表达,有利于创面愈合,证实了"祛瘀利于生肌"的愈创理论。     

祛瘀生肌法对SD大鼠糖尿病溃疡创面修复MAPK信号通路相关基因的调控作用

目的:探讨祛瘀生肌中药对糖尿病难愈合性创面修复MAPK信号通路相关基因的调控作用。方法:以糖尿病溃疡创面为研究平台,将SD大鼠随机分为正常创面组、糖尿病溃疡模型组及生肌化瘀1(生肌方与化瘀方2∶1)、生肌化瘀2(生肌方与化瘀方1∶1)、生肌化瘀3(生肌方与化瘀方1∶2)方组,除正常组外,其余4组以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法制备糖尿病模型。每组给予相应干预措施后,采用Real-Time PCR技术检测MAPK信号通路应激活化蛋白激酶(JNK)、活化蛋白激酶磷酸酶(MKP)以及磷酸化p38、p53、p21 mRNA表达及分布规律。结果:与糖尿病溃疡模型组比较,祛瘀生肌中药组均可下调成模第7、11、15天MKP、JNK mRNA表达,上调p53、p38 mRNA表达,p21 mRNA表达没有明显改变,且各组间无明显的作用规律。结论:MAPK信号通路在促进糖尿病溃疡创面愈合中发挥重要的作用,祛瘀生肌中药可调控MAKP通路相关基因。     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠转化生长因子β1的影响

目的:探讨益气化瘀中药及其拆方(益气方和化瘀方)促进糖尿病溃疡创面愈合的分子机制。方法:将60只大鼠随机分为益气化瘀组、益气组、化瘀组、贝复济组、模型组和正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素和外科方法建立糖尿病大鼠全层皮肤缺损模型,给予不同中药煎剂口服及贝复济外用对照,运用免疫组织化学、图像分析和Western blotting的技术手段分别检测各组治疗后创面新生肉芽组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达水平。结果:糖尿病溃疡模型组TGF-β1表达水平低于正常对照组(P<0.01);各治疗组TGF-β1表达水平高于糖尿病溃疡模型组(P<0.01);益气化瘀组TGF-β1表达水平高于拆方组和贝复济组(P<0.05)。结论:TGF-β1表达水平下降可能是糖尿病创面难以愈合的机制之一,益气化瘀中药可能是通过提高创面TGF-β1的表达水平,促进创面愈合。     

祛瘀生肌法对SD大鼠创面模型新生肉芽组织中转化生长因子-β的动态影响

目的：探讨祛瘀生肌法对SD大鼠愈创模型肉芽组织中转化生长因子-β（TGF-β）水平的动态影响。方法：采用生肌化瘀方干预SD大鼠背部全层皮肤缺损模型，分别于不同干预时段（3d、7d、11d）取材，EnVision二步法免疫组化测定，并图像扫描定量分析TGF-β1、TGF-β3、水平变化。结果：第3、第7天生肌化瘀方组TGF-β1水平均高于生理盐水组（P〈0．05），第11天生肌化瘀方组TGF-β1水平低于生理盐水组（P〈0．05）；第3天生肌化瘀方组TGF—β3水平低于生理盐水组，而第7、第11天TGF-β3水平高于生理盐水组（P〈0．05）。结论：生肌化瘀方有调节创面TGF—β1、TGF—β3分泌的作用，以益于加速创面愈合、减少瘢痕形成。     

复黄生肌愈创油膏对大鼠创面肉芽组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响

目的：动态观察复黄生肌愈创油膏（简称复黄膏）对Wistar大鼠糖尿病创面新生肉芽组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。 方法：雄性Wistar大鼠54只,随机分为创面对照组、模型组和复黄膏组。制备糖尿病合并皮肤创面模型,复黄膏组给予复黄膏外敷,模型组给予生理盐水纱布外敷,1次／d。造模后分别于第3天和第11天分批处死动物,采用免疫组织化学技术观察不同时段创面新生肉芽组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量的变化。 结果：在创面修复的第3天,3组间工型胶原的表达差异无统计学意义;复黄膏组Ⅲ型胶原的表达高于模型组（P〈0．05）,与创面对照组比较,差异无统计学意义。在创面修复的第11天,复黄膏组Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达均高于模型组（P〈0．05）,但与创面对照组比较差异无统计学意义。 结论：复黄膏通过促进难愈性创面组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原增殖及调节二者的平衡,起到促进创面愈合的作用。     

生肌化瘀方及其拆方对大鼠创面修复早期肉芽组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的:探讨生肌化瘀方及其拆方对创面修复早期Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响.方法:将24只清洁级雄性SD大鼠随机分为4组:生肌化瘀方组、生肌方组、化瘀方组和模型组.以大鼠皮肤全层缺损创面为模型,采用免疫组化和图像分析相结合的方法,观察各组大鼠创面修复早期肉芽组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化.结果:在创面修复的第3天,生肌方组和生肌化瘀方组的Ⅰ型胶原水平均高于模型组,化瘀方组则低于模型组(P <0.05);生肌方组、化瘀方组和生肌化瘀方组的Ⅲ型胶原水平均低于模型组(P<0.05),以化瘀方组更为明显;在创面修复的第7天,生肌方组、生肌化瘀方组的Ⅰ型胶原水平均低于模型组(P<0.05);生肌方组和化瘀方组的Ⅲ型胶原水平均高于模型组(P<0.05).结论:祛瘀生肌法可以促进大鼠创面修复,减少瘢痕形成.     

益气化瘀中药对糖尿病大鼠皮肤溃疡组织中P物质表达的影响

目的：探讨益气化瘀中药对糖尿病溃疡大鼠创面组织P物质表达的影响。方法：将100只清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常创面组、模型组、益气组、化瘀组和益气化瘀组。制备糖尿病大鼠背部全层皮肤缺损开放性创面模型。各组分别给予生理盐水、益气中药、化瘀中药及益气化瘀中药灌胃处理,疗程为15d。用药第8及第15天,观察各组大鼠创面愈合率;用药15d后,取大鼠背部创周0.5cm以内组织,应用免疫组织化学技术检测P物质的表达水平,并计算免疫组织化学指数。结果：用药后第8及第15天,正常组创面愈合率明显高于模型组（P〈0.01）,各用药组创面愈合率明显高于模型组（P〈0.05）,且益气化瘀组明显高于各拆方组（P〈0.05）;模型组创面组织P物质的表达水平明显低于正常创面组（P〈0.05）,益气化瘀组和化瘀组P物质的表达水平明显高于模型组（P〈0.05）。结论：糖尿病创面难愈合可能与P物质的低表达有关。益气化瘀中药能明显促进糖尿病溃疡大鼠的创面愈合,上调P物质的表达水平可能是其作用机制之一。     

补虚祛瘀法对创面修复肉芽组织形成期Smad3，TGF-β1的影响

[目的]研究补虚祛瘀法促进慢性难愈性创面愈合的机理。[方法]采用改良付氏大鼠模型为研究对象，分为模型对照组、复黄生肌愈创油膏组、补虚方油膏组、祛瘀方油膏组、康复新阳性对照组，运用免疫组化法分别研究各组第10天时创面瘢痕组织中Smad3，TGF—βi的变化。[结果]第10天时，复黄生肌愈创油膏组Smad3，TGF-β1表达明显低于模型对照组，补虚方油膏组Smad3的表达亦明显低于模型对照组。[结论]提示复黄生肌愈创油膏在创面修复肉芽组织形成期，对TGF-β1→Smad3信号转导通路的调控起着重要作用。     

生肌象皮膏对糖尿病大鼠难治性溃疡愈合速度的影响

目的观察生肌象皮膏对糖尿病大鼠难治性溃疡愈合速度的影响。方法将Wistar大鼠随机分成四组，一组为空白组，其余三组采用STZ尾静脉注射制备糖尿病动物模型。模型成功后，四组动物均于背部打孔，造成溃疡模型。三组糖尿病溃疡动物按照血糖和体重分层随机分为糖尿病空白对照组、凡士林组、生观象皮膏组。生肌象皮膏组外用生肌象皮膏纱条外敷，凡士林组用凡士林纱条外敷，空白组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷，甩照相法记录创面大小，采用计算机图像分析系统进行处理，以计算创面愈合速度。结果生肌象皮膏组在糖尿病溃疡创面的愈合速度上与糖尿病对照组比较于第5、7、14、21天有显著性差异；第5、7、14、21天空白组、生肌象皮膏组与凡士林组比较有显著性差异。结论生肌象皮膏明显缩短糖尿病难治性溃疡的愈合时间。     

复黄生肌愈创油膏对糖尿病大鼠创面肉芽组织中TGF—β1与smad3、smad7 mRNA

目的：探讨复黄生肌愈创油膏（简称复黄膏）对糖尿病创面愈合的促进作用及可能的作用机制。方法：将雄性Wistar大鼠随机分为正常创面对照组、糖尿病模型组、复黄膏治疗组。制备糖尿病合并皮肤创面模型,模型组给予生理盐水纱布外敷,治疗组给予复黄膏外敷,1次／d。造模后分别于第3天和第11天分批处死动物,采用实时荧光定量PCR技术,观察不同时段创面中TGF-β1与smad3、smad7 mRNA含量变化。结果：在创面修复的第3天,治疗组TGF—β1、smad3 mRNA表达均明显高于模型组（P〈0．05）,且与正常组比较无统计学差异;第11天,治疗组TGF-β1、smad3 mRNA表达均明显低于正常组（P〈0．05）,但与模型组比较无统计学差异。第3天时,smad7含量各组比较无统计学差异;而第11天时,治疗组明显高于模型组（P〈0．05）,虽然与正常组比较无统计学差异,但药物干预组smad7 mRNA含量高于正常组。结论：复黄生肌愈创油膏在糖尿病溃疡创面愈合过程中可能动态调节smad3、smad7及TGF—β1 mRNA的表达,从而起到促进创面愈合的作用,同时可一定程度上减少瘢痕形成。     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子的影响

目的:探讨益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法:72只清洁级雄性SD大鼠,除8只作正常对照组外,其他大鼠在背部全层皮肤缺损开放性创面的基础上加造气虚血瘀证糖尿病模型后,随机分为模型组、贝复济组、益气化瘀组、益气组和化瘀组。应用免疫组织化学、图像分析等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中HIF-1α和VEGF水平的变化。结果:模型组HIF-1α水平高于正常对照组(P<0.01),VEGF浓度明显低于正常对照组(P<0.01)。各用药组HIF-1α表达水平明显低于模型组(P<0.01),VEGF表达水平明显高于模型组(P<0.01)。益气化瘀组HIF-1α表达水平明显低于贝复济组、益气组和化瘀组(P<0.05或P<0.01),VEGF表达水平明显高于贝复济组(P<0.01)。益气组与化瘀组HIF-1α和VEGF的表达水平相似,它们与贝复济组之间无明显差异。结论:益气化瘀中药能明显促进糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠的创面愈合,其机制与下调HIF-1α水平、上调VEGF的表达水平和改善局部缺血缺氧状态有关。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡的促愈合作用

目的：研究外用大肠杆菌表达的重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF）对糖尿病大鼠难愈性创面的促愈合作用。方法：雄性Wistar大鼠10只，制备糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡模型；创面局部分别用rhaFGF（90U•cm^-2）及生理盐水喷洒；记录创面面积、伤腔容积及愈合时间，观察创面肉芽组织生长及再上皮化，评价创伤修复情况。 结果：与生理盐水对照组比较，rhaFGF组伤后各时间点的创面面积、伤腔容积均明显缩小﹙P＜0.05﹚，愈合率显著提高﹙P＜0.05﹚，创面愈合时间明显缩短﹙P＜0.05﹚。rhaFGF组的肉 芽组织生长及再上皮化明显加速。 结论：局部应用大肠杆菌表达的rhaFGF对糖尿病大鼠难愈性创面有明显的促愈合作用。     

苦参素抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤作用的研究

目的探讨苦参素注射液对大鼠缺血再灌注肝脏细胞Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响及它们与肝脏细胞凋亡的内在联系。方法健康SD大鼠30只随机分为3组,空白对照组（S组）、缺血再灌注＋生理盐水组（I/R组）、缺血再灌注＋苦参素注射液组（M组）,每组10只。免疫组化检测Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达,每组选24个视野分别测量光密度值（OD值）。结果 I/R组BaxOD值明显高于S组（P〈0.01）,SF组BaxOD值明显低于I/R组（P〈0.01）,且低于S组（P〈0.05）。I/R组Bcl-2OD值高于S组（P〈0.05）,且SF组Bcl-2OD值高于S组（P〈0.01）,但I/R组与SF组比较差异无显著性。I/R组Caspase-3OD值明显高于S组（P〈0.01）,且明显高于SF组（P〈0.01）。结论丹参注射液增加肝脏Bcl-2蛋白的表达,降低Bax及Caspase-3蛋白的表达,抑制肝脏细胞凋亡,保护缺血再灌注肝脏。     

温肾健脾方对大鼠慢性创面愈合的影响

目的:探讨温肾健脾中药对慢性创面愈合的影响及可能作用机制.方法:采用大鼠背部开放性创面模型,用肌注氢化可的松的方法造成慢性难愈性创面,以辛葡康为阳性对照药,应用免疫组化、流式细胞术等方法,观察创面愈合时间、新生上皮宽度、肉芽组织形态学变化、肉芽组织细胞周期、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)及纤维连接蛋白(fibronectin, FN)等指标.结果:温肾健脾方治疗组与辛葡康对照组平均创面愈合时间分别为(17.0±1.9)和(18.8±1.9) d,较模型组及空白组明显缩短(P<0.05);治疗14 d后,治疗组及对照组新生上皮宽度分别为(3.73±0.19)和(3.21±0.15)mm,较模型组及空白组明显增宽(P<0.05);治疗组新生毛细血管丰富,成纤维细胞数量多,而对照组、模型组及空白组新生毛细血管及成纤维细胞数量均较治疗组明显减少(P <0.05);治疗组S期细胞比例较对照组、模型组及空白组明显提高(P<0.05);治疗组及对照组与模型组及空白组比较,EGF、TGF-β1、FN蛋白表达均增强(P<0.05).结论:温肾健脾方有促进大鼠慢性难愈创面修复的作用,其机制与调节细胞周期,上调EGF、TGF-β1细胞因子蛋白表达水平,促进间质FN的表达有关.     

哮喘平对哮喘模型大鼠肺组织细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2、Bax水平的影响

目的:观察哮喘平对哮喘大鼠模型肺组织细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2、Bax水平的影响,研究哮喘平治疗哮喘的作用机制。方法:将60只SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,即空白对照组、哮喘模型组、桂龙咳喘宁组、哮喘平低剂量组、哮喘平中剂量组、哮喘平高剂量组。以卵蛋白致敏复制大鼠哮喘模型,成功复制模型21 d后,空白对照组和模型组每天给予等量的氯化钠溶液灌胃,连续给药2周后处死大鼠,解剖大鼠并取出肺组织。采用免疫组化法测定大鼠肺组织中细胞凋亡相关调控基因蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P0.01),与模型组比较,给药组大鼠Bcl-2表达降低,Bax表达升高(P0.05,P0.01);与桂龙咳喘宁组比较,哮喘平中高剂量组Bcl-2表达显著降低,Bax表达显著升高(P0.01)。结论:哮喘平可以降低抑凋亡基因蛋白Bcl-2的表达,升高促凋亡基因蛋白Bax的表达。     

补益气血方剂对大鼠慢性难愈性创面血管内皮生长因子及血管生成的影响

目的：探讨补益气血方剂四君子汤、四物汤和八珍汤对慢性难愈性创面大鼠创面血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及微血管数（microvessel count,MVC）的影响。方法：在90只雄性SD大鼠背部制造全层皮肤缺损开放性创面。除正常对照组外,大鼠肌肉注射醋酸氢化可的松建立难愈性创面模型,随机分为模型组、四君子汤组、四物汤组和八珍汤组。观察创面愈合时间;通过免疫组化结合图像分析等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中VEGF表达情况和MVC。结果：模型组创面愈合时间较正常组明显延长（P〈0.01）,各治疗组创面愈合时间比模型组缩短（P〈0.01,P〈0.05）,四物汤组和八珍汤组创面愈合时间较四君子汤组延长（P〈0.05）。模型组VEGF表达和MVC明显低于正常对照组（P〈0.01）,各治疗组VEGF表达和MVC高于模型对照组（P〈0.01,P〈0.05）,低于正常对照组（P〈0.01）。四物汤组和八珍汤组VEGF表达和MVC低于四君子汤组（P〈0.05,P〈0.01）,四物汤组和八珍汤组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：补益气血方剂能明显促进慢性难愈性创面大鼠的创面愈合,其机制可能与上调VEGF表达水平,诱导血管新生有关。     

生肌中药内服外用治疗大鼠慢性难愈性创面的疗效

目的：比较生肌中药内服、外用及内外合用治疗大鼠慢性难愈性创面疗效的差异。方法：60只大鼠随机分为正常组、模型组、中药内治组、中药外治组和中药合治组。采用腹腔注射糖皮质激素结合外科方法制备难愈性创面模型。各治疗组分别给予中药煎剂内服、白玉膏外用,观察各组大鼠创面愈合时间及创面愈合率。结果：第7天起模型组创面愈合率较正常组明显降低,总体创面愈合时间明显延长（P〈0．01）。中药内治组、中药合治组第3、7、10、14天创面愈合率均高于模型组（P〈0．05）,中药外治组第3、14天创面愈合率高于模型组（P〈0．05）,且第7、10天内治组、合治组愈合率高于外治组（P〈0．05）。中药内治组、中药合治组创面愈合时间较模型组明显缩短（P〈0．05）,且中药合治组优于中药内治组和中药外治组（P〈0．05）。结论：生肌中药具有良好的促创面愈合作用,中药内外合用效果更佳。内服、外用及内外合用在创面炎症反应期具有良好促愈作用,而内服及内外合治在肉芽增生期及上皮爬生期的促愈作用也较明显。