腹腔镜"蘑菇状"剜除术治疗外生性肾血管平滑肌脂肪瘤的临床应用

目的对比研究腹腔镜下外生性肾血管平滑肌脂肪瘤"蘑菇状"剜除与标准肾部分切除术的安全性及有效性，为肾血管平滑肌脂肪瘤腹腔镜下"蘑菇状"剜除术术式的建立提供临床依据。 方法选取海南医学院第二附属医院与解放军总医院2018年1月至2019年5月期间，接受腹腔镜手术的肾血管平滑肌脂肪瘤患者53例，其中25例沿肿瘤假包膜行"蘑菇状"剜除术(A组)、28例行肾部分切除术(B组)。比较两组手术患者的肾动脉阻断时间、手术时间、术中出血量、术后24 h血红蛋白、术后eGFR(estimated glomerular filtration rate,估计肾小球率过滤)的变化、术后住院时间和术后肿瘤复发率。 结果53例手术无术中转开放，无死亡病例。肾动脉阻断时间：A组(11.9±2.2)min、B组(21.5±6.5) min(P<0.001)。手术时间：A组(87.9±24.8)min、B组(114.3±38.9) min(P<0.001)。术中出血量：A组20 ml(20～40)ml、B组50 ml(50～100)ml(P<0.001)。术后24 h血红蛋白变化：A组(7.4±4.3) g/L、B组(12.4±8.8) g/L(P＝0.013)。术后24 h eGFR变化：A组(6.2±7.2 )ml(min·1.73 m²)，B组(12.7±12.8)ml(min·1.73 m²)(P＝0.027)。术后6个月eGFR变化：A组(1.5±3.7)ml(min·1.73 m²)、B组(6.5±5.6)ml(min·1.73 m²)(P<0.001)。术后住院时间：A组4.0 d(3～4)d、B组4.5 d(3～6)d(P＝0.023)。术后随访两组术后肿瘤均无复发。 结论采用腹腔镜"蘑菇状"剜除术治疗外生性肾血管平滑肌脂肪瘤在肾动脉阻断时间、术中出血量、术后24 h血红蛋白、术后eGFR变化、术后住院时间等方面均优于传统肾部分切除术，两组术后肿瘤均无复发；该方法安全、有效，适于临床推广。     

hTGF-β1基因增强组织工程化髓核修复退变腰椎间盘的实验研究

目的：探讨人转化生长因子-β1（hTGF-β1）基因修饰山羊骨髓基质干细胞（BMSCs）为种子细胞构建的组织工程化髓核对山羊退变腰椎间盘的修复作用。方法：用粗针穿刺山羊L1/2～L5/6纤维环抽取髓核制作椎间盘退变模型,同时体外培养山羊自体BMSCs并分为3组：实验组以携hTGF-β1基因重组腺病毒（Ad/hTGF-β1）转染;阴性对照组以携lacZ基因腺病毒（Ad/LacZ）转染,空白对照组为未转染细胞。抽取髓核后15d,收集3组细胞与透明质酸（HA）复合为组织工程化髓核,以细针从椎间盘原穿刺孔回植入髓核中央。L1/2至L3/4依次植入实验组、阴性对照组及空白对照组细胞;L4/5注入不含细胞的HA;L5/6不注入任何物质。术后观察24周,定期行放射学、组织学和生化检测。结果：X线片椎间隙测量显示,24周时L1/2～L4/5的椎间隙狭窄均较L5/6明显延迟（P〈0.05）;4周以内L2/3间隙的X-gal染色保持阳性;组织学评估示L1/2～L4/5退变均较L5/6为轻;免疫组化示L1/2在4周内高表达hTGF-β1、CollagenⅡ和Aggrecan,但8周后L1/2至L4/5未见显著性差异;GAG定量显示整个观察期内L1/2～L4/5均高于L5/6,其含量依次为L1/2〉L2/3=L3/4〉L4/5;对4周时L1/2至L3/4髓核组织的RT-PCR显示,L1/2的hTGF-β1、CollagenⅡ及Aggrecan的mRNA表达显著增强（P〈0.05）。结论：体外构建的组织工程化髓核回植可延缓椎间盘早期退变的进程,经hTGF-β1基因增强的组织工程化髓核对退变延缓作用尤为显著,但均无法完全逆转整个椎间盘退变进程。     

成骨细胞异种移植的免疫观察

目的 探讨异种成骨细胞移植及组织工程骨构建的可能性。方法 用二步酶消化—组织块联合接种法行SD大鼠骨细胞原代培养，传代后用碱性磷酸酶(ALP)染色法进行细胞鉴定；再将28只大耳白兔分为3组：自体移植组(A组)、异种移植组(B组)、正常对照组(C组)，分别于腹直肌袋内注入自体软骨细胞悬液、SD大鼠成骨细胞及生理盐水，于1、2、4及8周行免疫学及组织形态学检测。结果 细胞原代接种后5天成单层，经鉴定为成骨细胞；实验兔各组移植后受体无明显全身及局部排异反应；B组移植后2、4周检测到特异性抗体，2周检测到细胞介导的细胞毒反应，4周达高峰，8周开始减退，HE染色见大量炎性细胞浸润，至8周无明显异位成骨现象。A、C两组移植后末见明显体液及细胞免疫反应。结论 单纯异种成骨细胞不能作为细胞移植及组织工程骨构建的可靠细胞来源。     

股骨转子间骨折手术方式与术后早期康复干预对患肢功能恢复的影响

目的:探讨股骨转子间骨折的手术方式及术后早期康复干预对患肢功能恢复的作用。方法:对36例股骨转子间骨折病例中的21例行Richard钉板内固定,15例行解剖型钢板内固定,术后进行康复治疗,包括持续被动运动(CPM、主动抗引力运动、关节屈伸运动及关节抗阻力运动。过渡性部)分负重行走,直至完全负重行走。结果:36例患者随访6个月～5年,患髋关节屈伸范围为伸至180°,屈至60°,骨折全部愈合,5例行走轻度跛行,Richard钉板固定组2例股骨头缺血性坏死。结论:股骨转子间骨折内固定术后行早期康复干预,可减轻肌肉萎缩及关节挛缩,有利于患肢关节功能恢复。     

纤维蛋白在软骨组织工程中的应用

纤维蛋白是纤维蛋白原经激活后形成的聚合物凝胶，作为软骨组织工程研究的载体材料，在相关的生物学和物理特性上具有其一定的优势。对纤维蛋白在软骨组织工程中应用的现状和发展方向进行综述。     

幽门螺杆菌UreB单克隆抗体的制备及尿素酶活性抑制能力的研究

目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力。方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Westernblot检测mAb的特异性。将尿素酶与单克隆抗体预孵育后加入含有尿素和酚红的缓冲液,于550nm测定单克隆抗体对尿素酶活性的抑制能力。结果得到5株稳定分泌抗UreB的单克隆抗体的杂交瘤细胞1D5、9E1、3A2、1D6、6E6。测定抗体亚型1D5,9E1,3A2为IgG1,1D6、6E6为IgG2a,亲和常数分别为4×108、4.6×108、2.8×108、2×109、3×109L/mol。Westernblot鉴定5种单克隆抗体均能和重组UreB及全菌蛋白中的UreB抗原发生特异性结合,且均不与肠道常见菌发生交叉反应。5株单克隆抗体中只有6E6具有对尿素酶活性的抑制作用,且抑制率与单克隆抗体剂量相关。结论制备了5株稳定分泌抗UreB抗体的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体效价高且特异性好,其中6E6能抑制尿素酶活性。本研究为探讨尿素酶的作用机制、UreB的纯化及Hp的临床诊断和治疗奠定了基础。     

人载脂蛋白E基因型测定方法的建立

目的：建立一种准确、简便和经济的适用于大范围测定载脂蛋白Ｅ基因型的方法。方法：自中血中采用ＴＫＭ法提取人基因组ＤＮＡ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ确定载脂蛋白Ｅ的基因型,硝酸银染色聚丙烯酰胺凝胶,若银染效果不佳可用硝酸脱色后重染。结果：ＴＫＭ法获得ＤＮＡ在产量和质量上均能满足ＰＣＲ需求;电泳凝胶经银染可得清晰的ＤＮＡ特异带,据此能准确确定样品载脂蛋白Ｅ的基因基因型;用硝酸溶液脱色后的凝胶经重染仍可得到清晰的图     

幽门螺杆菌感染动物模型的研究

幽门螺杆菌为一种感染率极高的病原菌,动物模型的建立对疫苗研制、临床治疗及致病机制的研究有着重要的作用。本文综述了近年来国外幽门螺杆菌感染动物模型的研究进展,并对几种成功的动物模型及存在的问题作了介绍。     

恶性上腔静脉综合征的坐位急诊放射治疗

目的回顾性分析不能常规卧位放疗的恶性上腔静脉综合征坐位急诊放疗的疗效。方法12例患者先坐位急诊放疗6MV—X DF300CGY／次／天；总剂量DT3000CGY／10次／2周。待症状明显缓解已基本能平卧后再改用常规卧位放疗补量DT3000—4000CGY／15—20次／3—4周。结果2周内总缓解率92％(11／12)，整个放疗计划完成后总有效率100％(12／12)。结论病情较重、病期较晚无法耐受化疗和常规卧位放疗的患者先坐位急诊放疗待症状部分缓解后再改常规卧位放疗能迅速改善症状，提高生活质量，为下一步治疗创造有利条件。     

突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达

目的：建立突变型人白细胞介素-2（rhIL-2）基因大肠杆菌表达系统，为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法：自人胎盘组织中提取总RNA，逆转录PCR（RT-PCR）扩增突变型人IL-2基因cDNA，通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸（c125）的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2，温度诱导表达．表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及WesternBlot鉴定。结果：DNA序列分析证实，重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示，诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16．5ku的外源蛋白产生。经Western印迹（WesternBlot）证明为rhlL-2。结论：成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。