瑞香素对脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的 以LPS刺激N9小胶质细胞建立神经炎症模型,探索瑞香素对其的保护作用和机制,为瑞香素在神经退行性疾病的防治方面提供依据.方法 用MTT法检测瑞香素对N9细胞的毒性作用;硝酸还原酶法测定瑞香素对LPS刺激N9细胞产生一氧化氮(N0)的抑制作用;一氧化氮合酶分型法检测瑞香素对LPS刺激N9细胞产生一氧化氮合酶(iNOS)酶活力的影响;Western Blot法检测iNOS、COX-2、TLR4蛋白的表达情况.结果 1～10 μg·ml-1的瑞香素对炎症因子一氧化氮(N0)的产生有一定抑制作用,且能抑制一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达,其作用机制可能与抑制Toll样受体4(TLR4)的表达有关.结论 瑞香素1～10 μg·ml-1剂量下可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化产生的炎症因子,其发挥药效的分子机制可能与其调控小胶质细胞TLR4信号转导通路有关.     

瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制。方法以0.1μg·mL~(-1)LPS刺激BV-2细胞24 h构建神经炎症模型,以酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基上清中的白介素1β(IL~(-1)β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,以Griess法检测一氧化氮(NO)的浓度;以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法或免疫印迹法(Western Blot)检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的蛋白、mRNA表达,以及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。结果PGSF(10,1μmol·L~(-1))可明显降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α(P0.01)和IL~(-1)β(P0.05)浓度,同时下调细胞内iNOS蛋白(P0.05)和mRNA(P0.01,P0.05)表达;PGSF(10μmol·L~(-1))可降低NO的浓度(P0.05)、下调COX-2的蛋白和mRNA(P0.05)表达,并逆转TLR4 mRNA表达的上调(P0.05)。结论PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎性介质的释放和炎性蛋白酶的表达,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导。     

瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活作用

摘要: 目的 观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F, PGSF）对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制。方法 以0.1μg?mL LPS刺激BV-2 细胞构建炎症模型,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养基上清中的白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度、以Griess法检测一氧化氮（NO）的浓度;以免疫印迹法（Western Blot）或逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2 ）的蛋白和mRNA表达,以及其炎症信号受体TLR4 mRNA表达。结果 PGSF（10、1、0.1μmol/L）可浓度依赖性地降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α（P<0.01、P<0.01）、IL-1β（P<0.05、P<0.05）和NO的浓度（P<0.05）,同时下调细胞内iNOS蛋白（P<0.05、P<0.05）和mRNA（P<0.01、P<0.05）表达以及COX-2的蛋白（P<0.05）和mRNA（P<0.05）表达,此外逆转TLR4 mRNA表达的上调(P<0.05)。结论 PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放炎性介质,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导。     

木犀草素对LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响

目的:探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响。方法:酶免疫测定法(EIA)检测木犀草素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2及mPGES-1 mRNA的表达。免疫印迹法(Western blotting)检测COX-2及mPGES-1蛋白的表达。结果:木犀草素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成,同时下调LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1 mRNA和蛋白的表达。结论:木犀草素可以抑制PGE合成途径中两个诱导酶COX-2和mPGES-1的表达。     

毛蕊花糖苷抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究

探究毛蕊花糖苷(acteoside,ACT)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的抑制作用及潜在机制。该实验以LPS诱导BV-2细胞作为炎症模型,将BV-2细胞分为正常对照组、模型组、给药组,ACT按指定浓度(12.5,25,50μmol·L-1)作用于细胞。采用NO试剂盒检测NO炎症因子的释放量,ELISA法检测TNF-α和IL-6的表达量,Western blot法检测炎症相关蛋白(i NOS,COX-2,p-IKKβ,IKKβ,p-IκB,IκB)的表达。此外,通过检测细胞核/浆中NF-κB p65的表达以及借助免疫荧光技术,阐明ACT对炎症转录因子NF-κB p65核转位的作用。结果显示,ACT可显著降低LPS诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症,且呈剂量依赖性。具体表现在:显著降低炎症因子NO,IL-6和TNF-α的释放量,抑制炎症相关蛋白i NOS和COX-2的表达。同时,ACT可明显抑制NF-κB信号通路中关键蛋白IKKβ和IκB的磷酸化,且明显抑制NF-κB p65的细胞核转位。以上结果表明,毛蕊花糖苷可显著降低LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其潜在机制是通过抑制NF-κB信号通路实现的。     

黄连解毒汤含药血清对脂多糖诱导BV2小胶质细胞神经炎症反应的保护作用

目的探讨黄连解毒汤含药血清对神经炎症反应的保护作用和可能机制,为黄连解毒汤在阿尔茨海默病的防治方面提供依据。方法 LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症模型,用Griess法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测黄连解毒汤含药血清对体外神经炎症模型产生一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制作用;用蛋白质印迹法(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测黄连解毒汤含药血清对LPS诱导BV2小胶质细胞TLR4、COX-2蛋白和mRNA的表达。结果不同浓度黄连解毒汤含药血清(5%、10%、20%)能抑制炎症因子NO和TNF-α的产生,且在实验浓度范围内抑制作用呈浓度依赖性;同时对COX-2 mRNA和蛋白的表达有抑制作用,其作用机制可能与TLR4的表达相关。结论黄连解毒汤含药血清5%～20%浓度范围内可以抑制LPS诱导BV2小胶质细胞活化产生的炎症因子,其发挥药效的分子机制可能与TLR4信号通路有关。     

独活挥发油对N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的抑制作用及抗炎作用研究

目的:研究独活挥发油对内源性大麻素水解酶N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase,NAAA)水解活性的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型的抗炎作用.方法:采用水蒸气蒸馏法提取独活挥发油,GC-MS检测化学成分;采用LC-MS检测NAAA水解活性;采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型;采用LC-MS检测细胞内棕榈酸乙醇胺(N-palmitoylethanolamine,PEA)水平;采用实时定量PCR检测肿瘤坏子因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量;采用Griess法检测一氧化氮(NO)含量.结果:独活挥发油可抑制NAAA水解活性,升高LPS诱导的RAW264.7细胞内PEA水平;独活挥发油可下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α,iNOS,IL-6 mRNA表达;独活挥发油可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO释放.结论:独活挥发油能够抑制NAAA水解活性,升高细胞内PEA水平,降低炎症因子表达,具有一定的抗炎作用.     

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞Ras和Raf表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人活化的BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达的影响,揭示雷公藤内酯抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖的分子机制。方法:免疫组化法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达,RT-PCR法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达。结果:免疫组化结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与对照组相比显著增加(P0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与海人酸组相比显著降低(P0.05)。RT-PCR结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与对照组相比显著增加(P0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与海人酸组相比显著降低(P0.05)。结论:雷公藤内酯可能通过下调BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖。     

基于TLR4-MyD88-TRAF6信号通路的儿茶素没食子酸酯抗小神经胶质细胞炎性损伤作用

[目的]研究儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小神经胶质细胞（BV-2）炎性损伤的保护作用,并探讨其对TLR4-MyD88-TRAF6信号通路活化的影响。[方法]采用脂多糖（LPS,1 mg/L）体外诱导BV-2细胞炎性损伤,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量（50 μmol/L）EGCG组、LPS+中剂量（100 μmol/L）EGCG组、LPS+高剂量（200 μmol/L）EGCG组;CCK8法检测BV-2细胞相对存活率,ELISA法检测炎性因子白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,Western Blot方法分析诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素内氧化酶还原酶（COX-2）、Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）及TNF-α相关受体因子6（TRAF6）蛋白表达。[结果]与LPS诱导组相比,不同浓度EGCG干预的BV-2细胞相对存活率明显升高（P<0.05）,细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低（P<0.05）,细胞中炎性蛋白iNOS及COX-2表达水平显著降低（P<0.05）;细胞中TLR4、MyD88及TRAF6蛋白表达也显著降低（P<0.05）,并表现出剂量依赖性。[结论]EGCG能显著抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制TLR4-MyD88-TRAF6信号通路活化。     

对羟基苯甲醛可预防大鼠急性脑缺血后神经炎症

目的探讨对羟基苯甲醛(天麻乙酸乙酯提取物中有效成分)减轻大鼠急性脑缺血损伤后神经炎症的作用并探讨其作用机制。方法采用大鼠颈内动脉注射花生四烯酸诱发多发性脑血栓模型,造模后3 h后处死动物,检测脑内前炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)为指标,评价对羟基苯甲醛的脑组织的保护作用;采用脂多糖(LPS)刺激BV-2小胶质细胞复制神经炎症模型,探讨对羟基苯甲醛的抗炎作用机制。结果对羟基苯甲醛能显著降低脑内前炎症因子TNF-α和IL-1β的含有量,降低LPS刺激BV-2小胶质细胞炎症模型细胞上清液中炎症介质NO、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和炎症因子TNF-α的水平,提高正常BV-2小胶质细胞中白介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factors-β,TGF-β)的水平。结论天麻中的对羟基苯甲醛可减轻脑缺血后小胶质细胞过度激活和促进小胶质细胞向抗炎表型转化。     

基于ICP-MS法的桂枝茯苓胶囊中无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立桂枝茯苓胶囊(GFC)中29种无机元素(Li、Be、B、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sn、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法 GFC样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中29种无机元素含量。结果待检测的29种无机元素在各的自线性范围内线性关系良好,r≥0.999 4;各元素的检出限在0.012~4.105μg/L,定量限在0.045~14.500μg/L,平均加样回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Na、Mg含量较高,均超过300μg/g;Fe、Mn、Sr含量也相对较高,而有害元素Be、As、Cd、Sb、Hg、Tl、Bi含量相对较低,均在0.030μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于GFC中无机元素的测定。     

10 Jahre Akupunktur mit Stoßwellen

In 2002, an already available shock wave device was modified according to my suggestions to enable its use for the stimulation of acupuncture points. Since then, the device has been used in the treatment of more than 1 000 patients.     

基于ICP-MS法的麝香保心丸中26种无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立麝香保心丸中26种无机元素(Li、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法麝香保心丸样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中26种无机元素的量。结果待检测的26种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 4,各元素的检出限在0.010~2.987μg/L,定量限在0.035~10.000μg/L,回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Mg、Na、Fe量较高,均超过1.000 mg/g;Mn、Cu、Zn、Al、Ga量也相对较高,而Sb、Hg、Tl、Bi量相对较低,均在0.050μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于麝香保心丸中无机元素的测定。     

基于ICP-MS法分析九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素(Li、Mg、Cd、Sn、Al、Mn、Fe、Ti、V、Co、Zn、Ga、Cr、Ni、Tl、Pb、Cu、As、Be、B、Sb、Ba、Sr、Hg、Bi)的测定方法。方法九味熄风颗粒样品经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法进行测定。结果检测的25种元素线性关系良好,相关系数R2≥0.999 2,各元素的检出限在0.009~16.051μg/L,回收率在70.75%~107.66%,RSD≤6.44%。测定的6批样品中Cr、Sn、Hg、Pb均未检出,Tl、Cd、As、Cu的量均较低或未检出,Cd≤0.011μg/g,Cu≤0.373μg/g,Tl≤0.021μg/g,As≤0.571μg/g。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于九味熄风颗粒中重金属及微量元素的测定。     

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定脉络宁注射液中25种矿物质元素

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)直接稀释测定脉络宁注射液中25种矿物质元素(Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V、As、Cd和Hg)的方法。方法分别对微波消解条件和测试条件进行考察;样品经微波消解后,采用电感耦合质谱仪测定25种矿物质元素,并对测定方法学进行考察。结果确定最佳消解条件为3步缓慢升温:400 W 80℃升温10 min,保留5 min;600 W 120℃升温10 min,保留5 min;900 W 200℃升温20 min,保留20 min;25种矿物质元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.999 6,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均符合定量分析要求;加标回收率为94.7%~106.1%,RSD在0.34%~2.79%。脉络宁注射液中检测出Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V,未检出As、Cd和Hg。结论该方法简便、迅速、准确,适用于脉络宁注射液中25种矿物质元素的同时测定。     

蜂蜜炼制前后黄酮类成分种类和含量变化分析

目的研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化。方法参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制。供试品经固相萃取法富集黄酮类成分。采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温30℃。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析。结果蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元。黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素。不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异。6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加。结论炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变。     

5th Asia Pacific ISSX Meeting Held on May 9-12, 2014, in Tianjin,China

正The 5th Asia Pacific ISSX Meeting was organized by International Society for Study of Xenobiotics(ISSX)and Chinese Society for Study of Xenobiotics(CSSX)and co-organized by Tianjin Institute of Pharmaceutical Research and Committee of Pharmaceutical Engineering of Chinese Pharmaceutical Association(CPECPA).Professor Changxiao Liu was a co-Chair of     

State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)

正The State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)was fbrmally established on January 25,2011 upon approval from the Ministry of Science and Technology of China.It is so far the only State Key Laboratory(SKL)specifically ill the field of TteditiMial Chinese Medicine(TCM)over the country.It is It also is also thejoined-laboratory the joined-labo]partner of the State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs at the Peking     

基于ICP-MS法分析银杏叶系列品种中25种无机元素

目的建立银杏叶制剂中25种无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同剂型银杏叶制剂中无机元素量进行比较分析。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定25种无机元素量,绘制无机元素指纹谱图,并进行方法学考察。结果 25种无机元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.950 0,精密度、稳定性和重复性试验的RSD值均符合定量分析要求;加样回收率为91.35%～108.86%,RSD在0.05%～4.45%。银杏叶制剂中检测了25种无机元素量,并绘制无机元素指纹图谱,发现其谱图具有一定的特征性;银杏叶片中元素Hg、Al、Cr的量较高,有害无机元素的量超标应引起关注。结论通过无机元素在银杏叶制剂中的组成分布及其量的变化规律研究,为银杏叶制剂的质量控制及安全性评价提供依据,同时为临床使用提供一定参考。