塞来昔布延缓Han:SPRD大鼠肾衰竭进展的实验研究

目的 通过观察塞来昔布（CXB）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）动物模型Han:SPRD大鼠的作用,从而研究CXB延缓肾衰竭进展的机制。 方法 选取3周龄杂合（cy/+）Han:SPRD大鼠共57只,随机分成3组（每组19只）进行实验。按照CXB在饲料中的含量分为对照组（0 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1）、小剂量组（3 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1）和大剂量组（10 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1）。在大鼠4、6、8、10、12和16周龄时测定血清BUN、Scr。ELISA法检测16周龄大鼠血浆6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF-1α）和血栓烷B2（TXB2）的含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肾组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）的mRNA水平。免疫荧光共聚焦显微镜检测TNF-α和环氧化酶2（COX-2）的蛋白表达。Western印迹检测16周龄大鼠TNF-α的蛋白表达量。 结果 对照组BUN、Scr持续升高,分别于6、8周龄时即大于正常范围;至16周龄时,ＢＵＮ为（26.56±9.19） mmol/L,Ｓｃｒ为（95.08±67.54） μmol/L;CXB小剂量组和大剂量组均能减缓BUN、Scr上升速度,减小其上升幅度。16周龄大鼠CXB小剂量组血浆中6-keto-PGF-1α和TXB2[（1831.68±233.31） ng/L和（156.62±9.29） ng/L]和大剂量组两者的含量[（1148.57±105.80） ng/L和(157.87±10.16） ng/L]均显著低于对照组[（2792.26±830.48） ng/L和（248.88±93.72） ng/L]（均P < 0.05）。实时荧光定量PCR结果示,16周龄大鼠肾组织小剂量组和大剂量组TNF-α　mRNA水平均显著低于对照组（均P < 0.05）。免疫荧光共聚焦显微镜显示,对照组TNF-α和COX-2在小管间质区高表达,小剂量组和大剂量组荧光强度显著减弱。与对照组比较,CXB小剂量组和大剂量组大鼠肾组织蛋白表达量显著减少,差异有统计学意义（均P < 0.05）。 结论 CXB可能通过抑制COX-2的活性,阻止膜磷脂释放花生四烯酸代谢产物6-keto-PGF-1α和TXB2,减少炎性因子TNF-α的含量,正反馈避免诱导COX-2的高表达,发挥抗炎作用来延缓肾衰竭的进展。     

塞来昔布对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质重塑的影响

目的 研究塞来昔布（CXB）对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质（ECM）重塑的影响,探讨其抑制多囊肾肾间质纤维化的作用机制。 方法 选取杂合（cy/+）交配后第4代雄性、3周龄、体质量（68.5±16.6） g的Han：SPRD大鼠共57只,随机分成对照组（CXB：0 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）、CXB小剂量组（CBX：3 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）、CXB大剂量组（CBX：10 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）,每组19只。另选19只SD大鼠作为正常对照。饲料中加入CXB喂食13周后,处死动物。倒置显微镜下分析肾组织纤维化指数;实时荧光定量PCR检测肾组织胶原Ⅳ（COLⅣ）、基质金属蛋白酶（MMP）2、金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP）和转化生长因子（TGF）β1 mRNA的表达;免疫荧光共聚焦扫描法检测COLⅣ、MMP-2、TIMP-2、TGF-β1与PCNA共染的蛋白丰度;蛋白免疫印迹法检测TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,小剂量组和大剂量组均能显著减少肾囊肿指数（42.90±6.56和47.10±7.28比64.80±62.71,均P < 0.05）、纤维化指数（11.20±2.63和10.10±3.30比16.30±4.16,均P < 0.05）和间质炎性细胞的浸润（2.60±0.26和2.80±0.31比3.70±0.33,均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ、TIMP-2和TGF-β1 mRNA的表达量显著低于对照组（均P < 0.05 ）,而MMP-2 mRNA的表达量显著高于对照组（均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ荧光强度较对照组显著减弱,差异有统计学意义（20.30±5.11比61.40±4.51,P < 0.01;27.50±6.73比61.40±4.51,P < 0.05）。小剂量组和大剂量组MMP-2/TIMP-2比值较对照组增高,差异有统计学意义（4.88±1.52 和3.63±1.67比0.35±0.13,均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组TGF-β1蛋白表达比对照组均显著减少。 结论 塞来昔布可能通过下调TGF-β1、增加MMP-2/TIMP-2比值、促进胶原Ⅳ的降解来抑制肾小管间质的纤维化。     

醛固酮-WNK4途径参与盐负荷对上皮钠通道的调节

目的 通过建立生理条件下的盐负荷饮食大鼠模型,观察醛固酮和WNK4在水盐代谢调节中的作用。 方法 将SD大鼠分为5组：高盐组（H,4% NaCl）、正常盐组（N,0.4% NaCl）、低盐组（L,0.07% NaCl）、高盐加醛固酮组（H+A,4% NaCl+1 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1醛固酮）、低盐加螺内酯（L+S,0.07% NaCl+0.1 g&#8226;kg-1&#8226;d-1螺内酯）,所有大鼠自由饮水,喂养2周。用放射免疫法检测血浆醛固酮的变化。应用实时定量PCR和Western印迹法检测大鼠肾脏上皮钠通道γ亚基（γENaC）、WNK4的mRNA和蛋白的变化。 结果 H组大鼠血浆醛固酮水平低于N组（P < 0.05）,H+A组高于H组（P < 0.05）;L组大鼠血浆醛固酮水平高于N组（P < 0.05）,显示SD大鼠造模成功。L组大鼠肾脏γENaC蛋白表达高于N组,但是L+S低于L组;同时H组低于N组,H+A组高于H组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。mRNA变化趋势和蛋白变化趋势一致。H组肾脏WNK4的蛋白表达高于N组,但是H+A组低于H组;同时L组低于N组,L+S组高于L组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。mRNA的变化趋势和蛋白的变化趋势一致。 结论 饮食中的盐可以调节γENaC在肾脏的蛋白表达,醛固酮和WNK4都参与了机体对盐的调节,WNK4受到醛固酮的负调节作用。     

急性马兜铃酸肾损伤大鼠血清分泌型磷脂酶A2的变化

目的 通过测定急性马兜铃酸肾损伤大鼠血清分泌型磷脂酶A2（sPLA2）活性的变化,探讨sPLA2在马兜铃酸肾病（AAN）发病机制中的作用。 方法 将Wistar大鼠按随机数字表法分为两组：模型组给予关木通水煎剂（相当于生药30 g&#8226;kg-1&#8226;d-1）灌胃7 d,停药后正常喂养至第14天;对照组以自来水灌胃。光镜观察肾脏病理变化并用半定量方法评价肾小管间质损伤程度;生化法测定肾小球及肾小管功能;巯基显色法分别检测血清sPLA2活性;Western印迹法测定肾皮质和肾髓质环氧化酶2（COX-2）蛋白表达;放射免疫法分别测定血清和尿液中前列腺素类（PGs）代谢产物6-keto-PGF1α与血栓烷B2（TXB2）水平并计算二者的比值。 结果 给药后模型组大鼠出现明显的肾小管间质损伤和肾功能下降,并在第8天达高峰,肾小管间质损伤指数（8.14±2.55）较对照组（1.50±0.71）显著升高（P < 0.05）,Scr水平显著增高[（0.24±0.10）比（0.19±0.02） μmol/g,P < 0.05]。给药第8天时模型组血清中sPLA2活性（μmol&#8226;min-1&#8226;mg-1）（133.15±17.05）较对照组（101.3±16.07）显著增强（P < 0.05）,同时肾皮质COX-2蛋白表达也显著增加（1.16±0.36 比0.69±0.28,P < 0.05）,但肾髓质的COX-2蛋白表达无变化。尽管模型组血清中6-keto-PGF1α、TXB2及其比值无变化,但其尿液中6-keto-PGF1α和TXB2水平显著升高,分别为对照组的2倍和3倍（P < 0.05）,二者的比值显著降低（207.53±17.52比296.64±51.31,P < 0.05）。上述变化除肾小管间质损伤指数外,均在第14天时恢复,与对照组差异无统计学意义。 结论 在急性马兜铃酸肾损伤大鼠模型中,血清sPLA2呈激活状态,伴随出现的肾皮质COX-2表达增加及尿液中缩血管类PGs代谢产物增加,提示肾脏缩血管反应增强,可能是马兜铃酸肾损害时组织缺血改变的机制之一。     

Gitelman综合征的表型特点及性别因素对表型的影响

目的 探讨中国人Gitelman 综合征（GS）的表型特点以及性别因素对GS表型的影响。 方法 分析了28例GS患者的临床表现以及血、尿电解质、血pH、血管紧张素、血醛固酮、血压等水平，比较男性、女性GS患者两组之间的差异。临床表现症状通过问卷调查获得，肾小球滤过率（GFR）通过简化MDRD公式（成人）、Schwartz公式（18岁以下青少年）或同位素法评估。 结果 男性患者中夜尿增多的比例显著高于女性患者（P < 0.05），但发病年龄、四肢乏力、软瘫、手足抽搐等症状的发生差异无统计学意义。男性患者血肌酐明显高于女性患者[（82.7±43.3） μmol/L比（58.7±12.7） μmol/L]，但经体表面积校正后的肾小球滤过率差异并无统计学意义[（143.0±48.4） ml&#8226;min-1&#8226;（1.73 m2）-1比（138.0±38.9） ml&#8226;min-1&#8226;（1.73 m2）-1]。男性GS患者尿钾排泄分数和尿氯排泄分数显著高于女性患者(33.0%±22.9%比17.0%±4.7%；2.30%±1.59%比1.23%±0.39%，均P < 0.05），但两组间血钾、血氯、血镁、血碳酸氢根离子、血管紧张素、血醛固酮、尿pH、24 h尿钾、尿氯离子排泄总量差异均无统计学意义。3例肾功能受损的患者均为男性。 结论 男性GS患者的夜尿发生要多于女性患者，男性GS患者的肾功能可能更易受损，性别因素对表型的影响可能与雌激素影响钠氯共转子在远端小管的密度有关。     

低蛋白饮食对腹膜透析患者氮平衡的影响

目的 观察低蛋白饮食对腹膜透析（腹透）患者氮平衡及营养状况的影响,同时探寻保持腹透患者氮平衡的最低膳食蛋白摄入量（DPI）。 方法 将34例规律性腹透1个月以上、情况稳定的患者随机分为A、B、C 3组,DPI分别为1.2、0.9和0.6 g&#8226;kg－1&#8226;d－1。在研究第1、第7和第10天检测各组的氮平衡状况以及白蛋白、前白蛋白、钙、磷等指标。 结果 在第7、10天,A、B、C组平均DPI分别为（1.18±0.05）、（0.87±0.02）、（0.66±0.03） g&#8226;kg－1&#8226;d－1（P < 0.01）;平均能量摄入量（DEI）分别为129.29（117.57～133.89）、111.71（100.42～133.47）、146.8（128.03～163.18） kJ&#8226;kg－1&#8226;d－1;3组均呈正氮平衡,分别为2.99（2.15~4.72）、1.20（0.59~1.89）、0.24（－0.87~1.27） g。A组BUN和血磷有升高趋势,但差异无统计学意义。C组BUN在第7、10天显著下降（P < 0.01）。氮平衡与蛋白摄入量呈正相关（r = 0.712,P < 0.01）。 结论 在保证足够热量的基础上,规律腹透患者每天摄入0.65 g/kg的蛋白加上腹透液中丢失的蛋白量,既能保持氮平衡,又不增加透析的负荷。     

PPARγ激动剂对腹膜透析相关性急性腹膜炎大鼠PPARγ、Toll样受体4表达及STAT1信号活化的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮和15脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹膜透析相关性急性腹膜炎模型腹膜组织PPARγ、Toll样受体4（TLR4）表达、STAT1活化及腹腔局部炎性反应的影响。 方法 24只雄性SD大鼠随机分成4组，每组6只。对照组：腹腔注入4.25%葡萄糖乳酸盐腹膜透析液（简称腹透液，90 ml/kg）；LPS组：LPS 1 mg/kg腹腔注入4 h后，再注入腹透液；罗格列酮+ LPS组（罗格列酮组）：罗格列酮20 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃预处理3 d，注入LPS及腹透液；15d-PGJ2 + LPS组（15d-PGJ2组）：15d-PGJ2 0.3 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1腹腔注入预处理3 d，注入LPS及腹透液。注入腹透液4 h后处死大鼠，留取腹水、壁层及脏层腹膜组织。ELISA法检测腹水中IL-6浓度。常规行腹膜组织Masson染色和腹水白细胞计数。RT-PCR检测腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA的表达；Western印迹法检测腹膜组织PPARγ、TLR4、磷酸化（p）-STAT1、STAT1蛋白的表达。 结果 LPS组大鼠腹水IL-6浓度[268.53（201.87～335.19） ng/L]高于对照组[147.62（130.60～164.64） ng/L）]（P < 0.01）；罗格列酮组大鼠腹水IL-6浓度[110.20（77.60～142.80） ng/L]低于LPS组（P < 0.05）。与对照组比较，LPS组大鼠腹膜组织明显水肿，腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA及蛋白表达均显著增强（P < 0.05）。与LPS组相比，罗格列酮组大鼠腹膜组织水肿明显减轻，PPARγ、TLR4 mRNA表达显著增高（P < 0.05），但其蛋白表达显著减弱（P < 0.05）。15d-PGJ2组大鼠腹膜组织水肿明显减轻，PPARγ mRNA及其蛋白表达均显著减弱（均P < 0.05），TLR4 mRNA表达显著增强（P < 0.01），但其蛋白表达减弱（P < 0.05）。各组间腹水白细胞计数差异无统计学意义。罗格列酮、15d-PGJ2均明显上调LPS诱导的p-STAT1表达（P < 0.01）。 结论 罗格列酮和15d-PGJ2可负性调节LPS诱导的大鼠急性腹膜炎性反应，并对LPS信号通路中相关功能蛋白起一定的调控作用。     

尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用

目的 研究尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、尿毒清组、贝那普利组,每组12只。采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法建立阿霉素肾病模型。术后1周尿毒清组给予尿毒清3 g&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃,贝那普利组予贝那普利4 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃。用药4、8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白量、血生化及光镜、电镜下肾脏病理变化,应用免疫组化方法测定肾组织骨调素（OPN）、纤连蛋白（FN）、胶原蛋白Ⅳ（COLⅣ）的表达。 结果 模型组大鼠24 h尿蛋白量、BUN、Scr、胆固醇（Cho）、三酰甘油（TG）水平及系膜肾小球系膜基质比（M/G）均显著高于正常对照组（P < 0.01）;血白蛋白（Alb）水平显著低于正常对照组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV的表达亦显著高于正常对照组（P < 0.01）。尿毒清组24 h尿蛋白量、BUN、Scr、Cho、TG水平及M/G均显著低于模型组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV表达亦显著低于模型组（P < 0.01）。 结论 尿毒清可减少蛋白尿的排泄,纠正脂代谢紊乱,改善肾功能,加强FN、COLIV的降解,抑制肾小球细胞外基质的过度积聚,从而减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用。     

糖基化终产物对肾间质成纤维细胞DNA损伤的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGE)对肾间质成纤维细胞DNA损伤的影响及抗氧化剂的干预作用&#65377; 方法 不同浓度AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用于NRK-49F细胞24 h,普通培养基和牛血清白蛋白 (BSA)作为对照&#65377;N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞以观察抗氧化剂的干预作用&#65377;AlamarBlue还原法测定细胞增殖活力,单细胞凝胶电泳(彗星实验)测定细胞DNA损伤&#65377; 结果 与对照组比较,AGE作用后的细胞增殖活力下降;DNA迁移距离(彗星尾长)增加,差异有统计学意义,且2者呈剂量依赖关系&#65377;各浓度BSA作用后对细胞增殖活力无明显影响;彗星尾长无明显变化&#65377;与相同浓度BSA相比, 400&#65380;800 mg/L AGE分别使AlamarBlue还原率下降14%和15%(P < 0.05);200&#65380;400&#65380;800 mg/L AGE组彗星尾长分别为BSA组的1.45&#65380;2.12&#65380;2.71倍(P < 0.05)&#65377;与未用NAC预处理组相比,NAC预处理可使AlamarBlue还原率上升[(45.15±0.93)% 比(38.40±0.81)%,P < 0.05];彗星尾长变短[(10.02±4.54) μm比(13.48±5.32) μm,P < 0.05]&#65377; 结论 AGE可导致肾间质成纤维细胞DNA损伤,使用抗氧化剂可有效减轻AGE导致的DNA损伤&#65377;细胞内氧化应激增强可能是AGE引起肾间质成纤维细胞DNA损伤的作用机制之一。     

金属蛋白酶1组织抑制剂在慢性肾衰竭大鼠钙化动脉中的表达

目的 探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）是否参与慢性肾衰竭大鼠动脉钙化形成。 方法 雄性Wistar大鼠按随机数字表法分组,其中健康对照组8只,实验组36只。用2%腺嘌呤250 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1灌胃制备动脉钙化模型。von Kossa染色观察主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉钙化情况。RT-PCR和Western印迹检测主动脉TIMP-1表达。免疫组织化学方法检测TIMP-1、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α1（Cbfα-1）在主动脉的表达。 结果 实验组大鼠给药2周后出现明显慢性肾衰竭表现,BUN、Scr、血磷、钙磷乘积和全段甲状旁腺素（iPTH）显著高于对照组（P < 0.01）;给药6周后主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉中层出现不同程度的钙化。RT-PCR和Western印迹结果显示,实验组大鼠主动脉TIMP-1表达较对照组上调（P < 0.05）,随时间延长呈上升趋势。免疫组化的结果显示,给药后第2、4、6、8周主动脉平滑肌细胞TIMP-1蛋白表达均显著高于对照组（P < 0.05）;钙化主动脉出现Cbfα-1的阳性表达;OPN表达显著增多（P < 0.01)。TIMP-1的表达和OPN及Cbfα-1表达均呈正相关（r = 0.317,P = 0.000;r = 0.485,P = 0.000）。 结论 大鼠腺嘌呤肾衰竭模型血管钙化的病理变化与人类慢性肾衰竭血管钙化相似,是研究慢性肾衰竭血管钙化周期较短、较好的动物模型。TIMP-1高表达和慢性肾衰竭动脉血管钙化相关。     

蔗糖铁注射液治疗维持性血液透析患者肾性贫血的前瞻性、随机对照多中心研究

目的比较蔗糖铁(森铁能)与右旋糖酐铁(科莫非)静脉注射液治疗维持性血液透析(MHD)患者缺铁性贫血的疗效与安全性。方法采用前瞻性、随机对照的多中心研究。 80例MHD患者分为试验组(蔗糖铁组)与对照组(右旋糖酐铁组),每组各40例。治疗前,两组患者男女性别比例、年龄、维持透析时间、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)、铁蛋白(SP)和转铁蛋白饱和度(TSAT)等均无显著性差异。将100 mg蔗糖铁和100 mg右旋糖酐铁分别稀释于 100 ml生理盐水,于每次血透时使用。每周治疗2次,治疗时间为5周,观察时间共8周。两组患者的总补铁量均为1000 mg。全部病例都合并使用红细胞生成素(FPO)治疗,剂量为120～150 U·kg-1·周-1,皮下或静脉应用。观察并比较两组患者治疗贫血的效果、铁代谢指标变化及不良反应发生情况。结果经治疗后,试验组与对照组的Hb均较治疗前显著升高,分别为[(98．85± 17．45)g／L比 (75．20±9．66)g／L,P<0．01]和[(94．93±14．03)g／L比(75．53±10．61)g／L,P< 0．01];Hct也较治疗前明显升高(P<0．01),而试验组的上升幅度大于对照组,但差异无统计学意义。治疗后两组铁蛋白和转铁蛋白饱和度均明显高于治疗前,试验组铁蛋白为[(399．92± 200．90)μg／L比(106．61±78．24)μg／L,P<0．01];转铁蛋白饱和度为[(27．28±11．87)μg／L比 (17．95±9．17)μg/L,P<0．01]。试验组的上升幅度大于对照组,但两组相比差异无统计学意义。两组患者血清BUN、Scr、ALT和AST等均无明显变化。两组患者均无严重不良反应发生,对照组有1例发生下肢肌肉酸痛。结论蔗糖铁是治疗伴有缺铁的血液透析患者肾性贫血的一种安全而有效的药物。     

胃袖状切除术对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的调控作用

目的 探讨胃袖状切除术对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的作用.方法 将24只11周龄的Goto-Kakizaki大鼠按随机数字表法分为空白组（不进行任何手术,仅保持相同进食）、假手术组（仅与手术组对应位置切开缝合）和手术组（胃袖状切除术）,每组8只;分别检测各组大鼠各时相点体质量、进食量、糖代谢、激素和脂代谢变化情况.多组比较采用方差分析,两两比较采用LSD检验.结果 术后6周,空白组大鼠体质量、进食量分别为（320±12）g、（25.1±0.8）g,假手术组分别为（318±12）g、（25.5 ±1.3）g,手术组分别为（299±9）g、（21.9±1.3）g,3组比较,差异有统计学意义（F=8.50,10.02,P＜0.05）.术后16周,空白组大鼠空腹血糖、葡萄糖耐量试验曲线下面积、胰岛素耐量试验曲线下面积、胰岛素抵抗指数、饥饿素、游离脂肪酸、瘦素分别为（11.4±1.1） mmol/L、（3 220±460） mmol/L·min-1、（2 317±715）mmol/L·min-1、4.2±0.4、（1 513±75） ng/L、（2.16±0.20） μg/L、（6.2±0.8）μg/L,假手术组分别为（12.9±1.3） mmol/L、（3 554±272） mmol/L· min-1、（2 078±367）mmol/L· min-1、4.2±0.8、（1 510±72） ng/L、（1.95±0.31） μg/L、（6.3±0.7） μg/L,手术组分别为（5.5 ±0.3）mmol/L、（2 077±221）mmol/L·min-1、（946±330） mmol/L·min-1、2.2±0.5、（986±75） ng/L、（1.44±0.13） μg/L、（2.5±0.7）μg/L,3组比较,差异有统计学意义（F =84.19,7.33,9.93,18.81,99.79,79.02,238.30,P＜0.05）.术后16周葡萄糖灌胃后60 min,空白组大鼠血清胰高血糖素样肽-1、酪酪肽、胰岛素、脂连素分别为（11.3±2.3）pmol/L、（70±13） ng/L、（7.8±1.0）mIU/L、（4.9±1.2） μg/L;假手术组分别为（11.2±1.7） pmol/L、（72±14） ng/L、（9.9±1.9） mIU/L、（5.0±0.9）μg/L;手术组分别为（14.7±2.4） pmol/L、（128±20） ng/L、（21.7±2.1）mIU/L、（7.8±1.1） μg/L,3组比较,差异有统计学意义（F=4.22,20.91     

新型铁螯合剂CHGN2957对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察新型铁螯合剂CHGN2957对大鼠肾缺血再灌注损伤(I/R)急性期的保护作用.方法 选用雄性SD大鼠90只,随机分成5组(n=18):假手术组、CHGN2957高剂量组、低剂量组、溶剂组和阳性对照组.建成大鼠急性肾I/R模型.药物干预均从手术前2 d开始,直至术后12 d结束.观察大鼠死亡率、体质量变化,测定肾功能和肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽(GSH)还原酶活力和丙二醛(MDA)含量并进行肾组织病理切片观察.结果 术后第3天CHGN2957溶剂组的体质量(242.1±16.2)g、SOD活力(1.23±0.13)U/mg、GSH还原酶活力(336±15)U/L明显低于其他各组(P＜0.05),而血清尿素氮(62.3±3.1)mmol/L、血清肌酐(310.00±21.02)μmol/L、MDA含量(186.5±16.7)nmol/mg明显高于其他各组(P＜0.05).肾组织病理评分显示CHGN2957溶剂组的肾小管损伤明显重于其他各组(P＜0.05).结论 CHGN2957作为一种新型铁螯合剂,在大鼠急性肾I/R过程中能有效减轻大鼠肾I/R,并对肾起保护作用.

Abstract：

Objective To observe the protecgive effects of CHGN2957 on acute renal ischemia/reperfusion injury (I/R) model in rats. Methods Ninety Sprague-Dawley male rats were randomly divided into five groups ( n = 18 each): sham-operative group, high-dose CHGN2957 group, low-dose CHGN2957 group, CHGN2957 vehicle group and positive group. The administration lasted from two days before operation to twelve days after operation. After seccessful establishment of the model, mortality,weight changes, the renal function, superoxide dismutase ( SOD ) activity, glutathione ( GSH ) reductases activity and malondialdehyde (MDA) content in renal tissue were recorded, and the pathological changes were observed. Results Weight (242. 1 ± 16. 2) g, SOD activity (1. 23 ±0. 13) U/mg and GSH reductases activity (336 ± 15 U/L) in CHGN2957 vehicle group were reduced significantly as compared with other groups three days after I/R (P ＜0. 05), but SUN (62. 3 ± 3. 1) mmol/L, SCr (310. 00 ± 21. 02)μmol/L, MDA content ( 186. 5 ± 16. 7 ) nmol/mg were higher than others obviously ( P ＜ 0. 05 ). Pathological observation showed renal tubular injury was more serious in CHGN2957 vehicle group (P＜0.05).Conclusion CHGN2957 as a new iron chelator was effective to ameliorate renal I/R in rats.     

去乙酰毛花甙与依那普利拉单用及配伍应用对烫伤大鼠脏器早期损害的影响

目的 了解去乙酰毛花甙与依那普利拉单用及两药配伍应用对严重烫伤大鼠心、肝、肾、肠早期损害的影响. 方法 将40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假伤组(模拟烫伤)、烫伤对照组、去乙酰毛花甙组、依那普利拉组、去乙酰毛花甙+依那普利拉组,每组8只.大鼠麻醉后给予背部30%TBSAⅢ度烫伤,伤后30 min腹腔注射乳酸钠林格液(4 mL·kg-1·1%TBSA-1)复苏治疗.补液同时去乙酰毛花甙组静脉注射去乙酰毛花甙0.2 mg/kg;依那普利拉组静脉注射依那普利拉1 mg/kg;去乙酰毛花甙+依那普利拉组静脉注射去乙酰毛花甙及依那普利拉,剂量同前.伤后6h,以多道生理信号采集处理系统记录各组大鼠心肌力学指标;以激光多普勒血流仪记录肝、肾、肠血流量;取大鼠静脉血检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)、总胆汁酸(TBA)、β2微球蛋白(β2-MG)、二胺氧化酶(DAO). 结果 与假伤组比较,烫伤对照组大鼠各项心肌力学指标均显著降低;肝血流量为(158±32)血流灌注单位(PU)、肾(156±46)PU、肠(119±30)PU,亦显著降低(P＜0.05);血清cTnl(5.0±0.3)μg/L、TBA(82±23)μmol/L、β-MG(2.55±0.15)mg/L、DAO(1.52±0.08)kU/L,明显高于假伤组(P＜0.05).与烫伤对照组比较,去乙酰毛花甙组和依那普利拉组心肌力学指标均有不同程度提升,肝、肾、肠血流量增加(P＜0.05),血清cTnl、TBA、β2-MG浓度和DAO活性降低(P＜0.05).去乙酰毛花甙+依那普利托组大鼠心肌力学指标全部升高,血流量分别为肝(240±49)PU、肾(239±75)PU、肠(194±55)PU,明显升高(P＜0.05),血清cTnI为(3.4±0.2)μg/L、TBA(47±8)μmol/L、β2-MG(2.01±0.16)mg/L、DAO(1.17±0.15)kU/L,均明显降低(P＜0.05). 结论 严重烫伤后早期单用去乙酰毛花甙或依那普利拉,均能改善大鼠心功能,对肝、肾、肠损害有一定防治作用,两药配伍应用可产生协同作用.     

线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂对在体大鼠肺缺血后处理的作用及其机制

目的 探讨缺血后处理(IPO)对大鼠在体肺缺血-再灌注损伤(I/R)的保护作用及线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)在缺血后处理效应中的作用.方法 将Wistar大鼠35只随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、缺血再灌注损伤+5-羟基葵酸盐组(I/R+5-HD组)、缺血后处理+5-羟基葵酸盐组(IPO+5-HD组).观察各组肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、湿/干比值(W/D)以及病理形态学改变.结果 I/R组与Sham组比较MDA含量增加[(5.07±1.60)nmol/mg prot比(1.43±0.41)nmol/mgprot,P＜0.01],SOD活性减低[(12.38±2.24)U/mg prot比(45.51±5.42)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(5.45±0.82比3.05±0.47,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO+5-HD组与IPO组比较MDA含量增加[(3.74±0.71)nmol/mg prot比(2.60±0.43)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性减低[(22.91±2.71)U/mg prot比(28.74±2.03)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值增高(4.64±0.79比3.89±0.60,P＜0.01),肺组织形态及超微结构明显受损;IPO组与I/R组比较,肺组织MDA含量减少[(2.60±0.43)nmol/mg prot比(5.07±1.60)nmol/mg prot,P＜0.01],SOD活性增高[(28.74±2.03)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＜0.01],W/D比值减低(3.89±0.60比5.45±0.82,P＜0.01),肺组织病理形态学改变轻于I/R组;I/R+5-HD组与I/R组比较,肺组织MDA含量[(5.14±1.30)mol/mg prot比(5.07±1.60)mol/mg prot,P＞0.05)、SOD活性[(11.65±1.82)U/mg prot比(12.38±2.24)U/mg prot,P＞0.05]、W/D比变化(5.54±0.61比5.45±0.82),差异无统计学意义(P＞0.05),肺组织病理形态学改变无明显差异.IPO+5-HD组的各项指标介于IPO组和I/R组之间.结论 缺血后处理能减轻大鼠在体肺缺血再灌注损伤,mitoKATP参与了肺缺血后处理效应.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of ischemic postconditioning (IPO) on lung ischemic reperfusion (L/R) in rats in vivo and the mechanism of mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mitoKATP) blocker in the ischemic postconditioning. Methods Thirty five Wistar rats were randomly divided into 5 groups: sham group, I/R group, ischemic postconditioning (IPO) group, I/R +5-hydroxydecanoate (I/R + 5-HD) group, IPO + 5-HD group. The concentration of malondialdehyde (MDA) and activity of superoide dismutase (SOD) were determined in the lung homogenate, wet to dry weight ratio (W/D) was measured and pathological changes were also observed. Results The levels of MDA[(5.07±1.60) vs (1.43 ±0.41) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (5.45 ±0.82 vs 3.05 ±0. 47,P ＜0. 01 ) were increased significantly in I/R group as compared with sham group, while the activity of SOD[( 12. 38 ±2. 24) vs (45.51 ±5.42) U/mg prot,P ＜0. 01]was decreased, and the injury of lung tissues was significantly aggravated in IPO + 5-HD group as compared with IPO group[MDA: (3.74 ±0. 71 ) nmol/mg prot vs (2. 60 ± 0. 43 ) nmol/mg prot , P ＜ 0. 01]; W/D: 4. 64 ± 0. 79 vs 3. 89 ± 0. 60,P＜0.01; SOD:[(22.91 ±2.71) U/mg prot vs (28.74±2.03) U/mg prot,P＜0. 01]. The levels of MDA[(2.60±0.43) vs (5.07 ±1.60) nmol/mg prot,P＜0. 01]and W/D (3.89 ±0.60 vs 5.45 ±0. 82,P ＜0. 01 ) were decreased significantly in IPO group as compared with I/R group, the activity of SOD[(28.74±2.03) vs (12.38 ±2.24) U/mg prot,P＜0. 01]increased and lung tissue histological damage attenuated. The difference in MDA[(5.14 ± 1.30) vs (5.07 ± 1.60) nmol/mg prot, P ＞ 0. 05],W/D (5.54±0.61 vs5.45 ±0.82,P＞0.05) and SOD[(11.65 ±1.82) vs (12.38 ±2.24) U/mgprot,P ＞ 0. 05]levels had no statistical significance between I/R + 5-HD group and I/R group, and the injury of lung tissues had no significant difference too. Each index in IPO + 5-HD group was between IPO and I/R groups. Conclusion Ischemic postconditioning can attenuate the lung I/R injury, and mitoKATP plays a vital role in the protective procession of ischemic postconditioning on lung ischemic reperfusion.     

西罗莫司对双侧输尿管梗阻大鼠水电解质代谢紊乱的保护作用

目的 探讨西罗莫司对双侧输尿管梗阻(BUO)大鼠水电解质代谢紊乱及肾脏上皮钠通路γ(γ-ENaC)、Na+-K+-ATP酶及水通道蛋白2(AQP2)蛋白的影响.方法 Wistar大鼠48只,随机分为假手术组、BUO组和西罗莫司组,每组16只.BUO组和西罗莫司组大鼠结扎双侧输尿管制作BUO模型,假手术组仅游离双侧输尿管后缝合.BUO组及西罗莫司组双侧输尿管梗阻24 h后解除梗阻.西罗莫司组每天西罗莫司口服液(2.5 ml/次)灌胃,假手术组及UUO组用同体积生理盐水灌胃.于术后4、7d测量3组大鼠尿量并留取尿液进行生化分析;术后4、7d抽取动脉血化验,同时取出双侧肾脏,采用免疫组化及蛋白质印迹法检测肾脏γ-ENaC、Na+-K+-ATP酶及AQP2蛋白的表达.结果 BUO组大鼠输尿管梗阻解除后4、7d尿量分别为(85.31±13.15)、( 66.39±10.56)ml,显著多于假手术组( 35.36±7.74)、(33.90±8.03)ml及西罗莫司组(69.81±10.70)、(48.57±9.01)ml;尿钠浓度(42.17±7.35)、(43.63±18.39) mmol/L,显著低于假手术组(170.56±18.39)、(172.52±7.35) mmol/L及西罗莫司组(76.18±13.20)、(134.28±13.20) mmol/L,3组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).西罗莫司组4、7d肾脏γ-ENaC表达量分别为2.09±0.32、2.27±0.35,Na+ -K+ -ATP酶分别为2.41±0.48、2.67±0.43,AQP2分别为2.17±0.45、2.63±0.28,显著高于同时间点的BUO组(1.28±0.21、1.45±0.17,1.99±0.28、2.18±0.24,0.93±0.22、1.31±0.16),低于同时间点假手术组(2.58±0.51、2.60±0.56,2.89±0.53、2.97±0.66,3.05±0.63、3.10±0.67),3组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 γ-ENaC、Na+-K+-ATP酶及AQP2蛋白水平降低可能是泌尿系梗阻后肾小管性钠回吸收障碍、低渗性尿量增多的主要原因之一.西罗莫司可以通过抑制肾小管γ-ENaC、Na+-K+-ATP酶及AQP2蛋白丢失,减轻术后肾脏钠回吸收障碍及低渗性尿等水电解质代谢紊乱,保护肾脏功能.     

选择性环氧化酶2抑制剂抑制尿毒症大鼠甲状旁腺异常增生

目的 评价环氧化酶2(COX2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对尿毒症大鼠甲状旁腺(PG)异常增生的影响.方法 通过5/6肾大部分切除结合高磷饮食(P 1.2％,Ca 1.2％)建立尿毒症甲状旁腺功能亢进症(甲旁亢)大鼠模型,存活大鼠按随机数字表法分成尿毒症甲旁亢非用药组(Nx-HP组,n=17)、塞来昔布预防组(Prey组,n=18,建模后1d起给塞来昔布100 mg· kg-1· d-1)和塞来昔布治疗组(Ther组,n=18,建模1个月后给塞来昔布100 mg·kg-1·d-1),并以假手术组作为对照(Sham组,n=14).12周后检测各组大鼠肾功能、血甲状旁腺激素(iPTH)水平、PG大小以及PG中增殖细胞核抗原(PCNA)、COX2表达.结果 Nx-HP组大鼠血清iPTH水平较Sham组显著升高[(100.73±4.35) ng/L比(34.77±0.83) ng/L,P＜0.01],塞来昔布干预后iPTH水平显著下降[Prev组(87.36±2.18) ng/L,Ther组(87.47±1.76) ng/L](均P＜ 0.05).计算显微镜下PG最大面积显示,Nx-HP大鼠PG最大面积显著增大,是Sham组的5.28倍[(2.436±0.372) mm2/kg比(0.461±0.089) mm2/kg,P＜0.01];而Prey组[(0.987±0.254)mm2/kg]和Ther组[(1.270±0.305) mm2/kg]PG分别缩小59.47％(P＜0.01)和47.87％ (P＜0.05),两组间差异无统计学意义.PCNA在Sham组PG中仅少量表达,Nx-HP组显著增多,塞来昔布干预后PCNA阳性细胞明显减少,Prey组和Ther组蛋白表达水平分别降低52.91％和34.68％(均P＜0.05).COX2在Sham组PG中几乎未见表达,但在尿毒症大鼠中明显增多,Nx-HP组、Prey组和Ther组分别为Sham组的2.47倍、2.34倍和3.04倍(均P＜0.05),而3组间差异无统计学意义.实时定量PCR检测PCNA和COX2基因水平显示同样变化趋势.结论 选择性COX2抑制剂塞来昔布可以显著抑制尿毒症大鼠甲旁亢和甲状旁腺增生.     

胰岛素对急性重症胆管炎脓毒症大鼠骨骼肌代谢的影响

目的 探讨胰岛素对大鼠急性重症胆管炎（ACST）脓毒症状态下泛素系统介导骨骼肌蛋白质分解的调理作用。方法 20只雄性SD大鼠按月龄、体重同窝饲养,随机分为假手术组（SO）、ACST脓毒症模型组（AS）、低剂量胰岛素ACST脓毒症模型组（LIAS,胰岛素给予量为2.4 mU·kg-1·min-1）、高剂量胰岛素ACST脓毒症模型组（HIAS,胰岛素给予量4.8 mU·kg-1·min-1）,每组5只。所有大鼠均行正常血糖钳夹模型制备,并通过调节25%葡萄糖的输注率（GIR）将血糖维持在5～6 mmol/L的稳态;只有当血糖超过11.9 mmol/L时才需加用胰岛素。采用高效液相-色谱分析法检测伸趾长肌内3-甲基组氨酸（3-MH）;RT-PCR法检测伸趾长肌内编码泛素、蛋白酶体C2亚基的mRNA表达变化。结果 AS组大鼠伸趾长肌内3-MH含量为（3.69±0.20）nmol/g,较SO组（2.07±0.13）nmol/g显著升高（P＜0.001）;且显著高于HIAS组（2.39±0.21）nmol/g（P＜0.001）和LIAS组（2.87±0.19）nmol/g（P＜0.001）。HIAS组大鼠伸趾长肌内3-MH含量较LIAS组显著降低（P＜0.001）。AS组大鼠伸趾长肌内泛素mRNA表达较SO组明显升高,其相对表达量增加了19.70倍。LIAS组泛素mRNA相对表达量为6.96（范围为4.17～11.67）、HIAS组相对表达量为1.89（范围为1.43～2.48）,与AS组比较均明显下降（P=0.028,0.009）。HIAS组泛素mRNA表达水平低于LIAS组（P=0.009）。AS组大鼠伸趾长肌内蛋白酶体C2亚基mRNA表达较SO组明显升高,其相对表达量增加了191.34倍。LIAS组蛋白酶体C2亚基mRNA相对表达量为31.12（15.74～61.39）、HIAS组蛋白酶体C2亚基mRNA相对表达量为7.67（4.08～14.50）,与AS组比较表达均明显下降（P值均为0.009）。HIAS组C2亚基mRNA表达水平低于LIAS组（P=0.009）。结论 急性重症胆管炎脓毒症状态下,胰岛素可抑制骨骼肌蛋白降解,该作用可能是在基因水平通过抑制泛素-蛋白酶体通路表达和活化而实现的。     

慢性肾功能衰竭大鼠主动脉核因子κB活化及泛素通路的调节作用

目的　探讨慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素（Ub）-NF-κB通路的表达变化规律。 方法　将大鼠随机分为假手术对照组（CON）、肾功能衰竭组（CRF）、肾功能衰竭加 MG-132干预组（CRF+M），观察6个月。采用部分肾动脉结扎加对侧肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型。ELISA法测定血液中炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。RT-PCR半定量测定主动脉中NF-κB及Ub mRNA表达。免疫组织化学方法检测主动脉中NF-κB及Ub蛋白表达。Western印迹法测定主动脉泛素化蛋白的含量。凝胶电泳迁移率（EMSA）法测定动脉中NF-κB的活化情况。 结果　与CON组比较，CRF组大鼠术后4～6个月时血清中IL-1β[ (9.02±1.29)比(2.74±0.96) mg/L]和TNF-α[(50.02±9.52)比(14.04±1.29) mg/L]水平显著升高（P < 0.01）；主动脉NF-κB、Ub的 mRNA表达升高1.38倍和1.29倍（P < 0.01）；NF-κB、Ub的蛋白质表达升高 3.75倍和20.5倍（P < 0.01）；NF-κB活性增强1.82倍（P < 0.01），术后6个月各指标均有进一步上升趋势。与CRF组比较，CRF+M组大鼠干预治疗4～6个月后，大鼠血清中IL-1β[(2.94±0.33) mg/L]和TNF-α[(12.80±2.12) mg/L]含量显著下降（P < 0.01）；NF-κB 、Ub的mRNA及蛋白质表达显著减少（P < 0.01）；NF-κB的活性显著降低（P < 0.01），与CON组比较，差异已无统计学意义，而主动脉中泛素化蛋白含量显著升高（P < 0.01）。 结论 慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素-NF-κB炎性反应信号明显活化，抑制蛋白酶体活性可能是降低主动脉NF-κB活化的重要药物靶点。