补肾行气活血法对骨髓基质干细胞诱导成软骨细胞作用的影响

[目的]观察补肾行气活血法对诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)成软骨细胞作用的影响.[方法]将传至第3代的BMSCs分为阴性对照组和治疗组,分别采用软骨细胞诱导培养基加体积分数为10%的空白对照血清和诱导培养基加体积分数10%的骨炎定含药血清培养诱导成软骨细胞,观察软骨细胞的生长状况及细胞表型特征.[结果]治疗组在细胞贴壁、生长形态及成软骨特性方面明显优于对照组,细胞表型的免疫组化染色均为阳性.[结论]以补肾行气活血法为组方依据的骨炎定含药血清既可促进BMSCs的增殖,又可促进诱导的软骨细胞分化.     

补肾方含药血清对软骨细胞增殖的影响

【目的】观察补肾方含药血清对白细胞介素1(IL-1)抑制软骨细胞增殖及诱导软骨细胞产生一氧化氮(NO)作用的影响【方法】新西兰兔4只，每只均灌服1．15kg/L的补肾方2．5mL，连续3d，制备含药血清；取体外培养的兔软骨细胞，分别加入含1、10、20μg/L IL-1的培养液，确定IL-1对软骨细胞增殖的抑制浓度；补骨方组分别加入20μg/L的IL-1和不同浓度的补肾方含药血清．模型组加入20μg/L的IL-1及不同浓度的空白血清，培养3d后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测软骨细胞的增殖，Griess法检测NO的产生。【结果】选择20μg/L浓度的IL-1抑制软骨细胞的增殖；不同浓度的补肾方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，抑制IL-1诱导软骨细胞产生NO。【结论】补肾方能直接拮抗或通过NO介导间接拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，这可能是补肾方治疗骨性关节炎(OA)的机制之一。     

趋化素样因子1(CKLF1)对关节软骨细胞增殖及代谢的影响

目的：研究趋化素样因子1(CKLF1)对兔关节软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法：采用体外细胞培养技术及同位素参入法，检测CKLF1真核表达载体转染293T细胞所得条件培养基对软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖合成能力的影响。结果：在含5％(体积分数)胎牛血清(FCS)的DMEM培养条件下，转染后293T细胞表达的CKLFl可抑制兔关节软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖的合成，并可促进诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的转录。结论：CKLF1可能通过提高iNOS的表达抑制关节软骨细胞增殖、胶原及蛋白多糖的合成。     

复方肝毒清对免疫性肝损伤模型小鼠的保护作用

[目的]观察复方肝毒清对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠肝损伤的保护作用。[方法]昆明种小鼠60只,随机分为空白对照组,模型对照组,肝毒清高、中、低剂量组(20、10、5g/kg),联苯双酯组(150mg/kg);除空白对照组外,所有小鼠2次尾静脉注射ConA(20mg/kg)复制肝损伤模型,各组均按设计剂量灌胃给药,空白对照组和模型对照组给予等容积生理盐水,共给药3次;取血清检测谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),取肝组织检测TNF-αmRNA表达,并进行肝组织病理学检查。[结果]肝毒清高、中、低剂量组均能降低血清ALT、TNF-α水平,抑制肝组织TNF-αmRNA表达,与模型对照组比较具有显著性差异(均P<0.01),并能一定程度改善肝组织病理变化。[结论]复方肝毒清对ConA所致小鼠肝损伤具有一定的保护作用。     

低强度脉冲超声对兔关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原表达的影响

目的 探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对体外培养兔关节软骨细胞增殖及其合成Ⅱ型胶原的影响.方法 选取生长状况良好的第3代兔膝关节软骨细胞,随机分为空白组及3种强度的LIPUS干预组,其超声强度分别为40、50、80mW/cm2,其余作用参数相同,中心频率:1.0 MHz,脉冲重复频率:1.0 KHz,脉冲宽度:200 μs,作用周期:50.各LIPUS干预组每日照射20 min,连续照射3d后,采用CCK-8比色法检测软骨细胞增殖情况,免疫组化染色分析Ⅱ型胶原表达量的变化.结果 强度50、80 mW/cm2的LIPUS干预组软骨细胞增殖较空白组显著增多(P＜0.01),且50 mW/cm2LIPUS的作用最为明显,而40 mW/cm2 LIPUS促软骨细胞增殖效应与空白组相比差异无统计学意义(P =0.249);各强度LIPUS组Ⅱ型胶原表达量均高于空白组(P＜0.01),尤以50 mW/cm2 LIPUS组Ⅱ型胶原表达量增加最为显著,优于40、80 mW/cm2 LIPUS的效应(P＜0.01).结论 LIPUS能够促进体外培养关节软骨细胞增殖,增加软骨细胞Ⅱ型胶原的分泌,且强度为50 mW/cm2时效应较为明显.     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖影响的实验研究

目的：观察中药白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：取1月龄的SD大鼠膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,甲苯胺蓝染色鉴定后,取体外培养第3代软骨细胞随机分为6组,分别加入不同浓度空白血清（5％、10％、15％）,不同浓度白附片含药血清（5％、10％、15％）,继续培养24、48、72h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖的变化。结果：白附片含药血清组吸光度值（OD值）显著高于空白血清组,两组比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）。结论：白附片含药血清能有效促进大鼠膝关节软骨细胞的增殖。     

骨炎定促进血管内皮细胞增殖的血清药理学研究

【目的】观察补肾益气活血方骨炎定对血管内皮细胞增殖的影响。【方法】将新西兰兔随机分为空白组和骨炎定低、中、高剂量组(剂量分别为2.5、5、10 g/kg);以骨炎定高剂量灌胃给药,连续7 d,于最后1次给药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h分别取血,分离含药血清,作用于人脐静脉内皮细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同时相的骨炎定含药血清对血管内皮细胞的增殖作用;并取给药后2 h含药血清,部分灭活,比较灭活血清与不灭活血清对血管内皮细胞增殖的影响,以及检测不灭活含药血清不同作用时间(12、24、36 h)对内皮细胞增殖的影响;以骨炎定低、中、高剂量灌胃给药,连续7 d,取最后1次给药后2 h含药血清,观察不同剂量骨炎定对血管内皮细胞增殖的影响。【结果】高剂量骨炎定给药后0.5~4 h制备的含药血清对血管内皮细胞增殖均有显著促进作用(均P<0.01),其中以给药后2 h者作用最强;灭活与不灭活血清均对血管内皮细胞增殖具有促进作用(P<0.01),且后者作用强于前者(P<0.05);不灭活含药血清作用12、24、36 h后均对血管内皮细胞增殖具有促进作用(P<0.01),且呈时效关系;低、中、高剂量骨炎定含药血清均对血管内皮细胞具有促进作用(P<0.01),并呈量效关系。【结论】补肾益气活血方骨炎定对血管内皮细胞增殖具有促进作用。     

化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究

目的 探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制.方法 将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(kg·d),化湿补肾法组灌胃化湿补肾法中药7.38 g/(kg·d),连续灌胃28 d,于第28天对大鼠进行取材,取右侧股骨行HE染色观察软骨形态,取右侧胫骨平台滑膜、关节液用ELISA检测前列腺素-2(PGE-2)、环氧化和酶-2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,取右胫骨平台软骨用qPCR检测p38、p53、Ⅱ型胶原的表达.结果 HE染色形态结果表明化湿补肾法组、龟鹿二仙胶组、化湿定痛汤组均优于模型组.与龟鹿二仙胶组相比,化湿补肾法组PGE-2、COX-2、IL-1β、TNF-α表达量下降(P<0.05),软骨的p38、p53表达降低(P<0.05),Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05).结论 化湿补肾法可有效减轻滑膜和关节液中炎症因子表达,增加软骨细胞合成代谢,抑制软骨细胞凋亡,从而促进关节软骨的修复,延缓KOA的进程.     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的：探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法：收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neu ECD阳性患...     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素与血脂检测结果分析

目的:探讨血清胆红素浓度与四种动脉粥样硬化( AS)性疾病的关系。方法:观察组分为四组,单纯性高血压组、冠心病组、糖尿病组、脑梗死组,对照组为同年龄段健康查体者,检测空腹血清总胆红素、直接胆红素、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,计算间接胆红素,并对检测结果进行统计学分析。结果:与对照组比较,观察组中直接胆红素均有所下降,但差异无显著统计学意义( P>0 .0 5 ) ,总胆红素与间接胆红素除脑梗死组外,其他各组均明显降低( P<0 .0 5 ) ;除脑梗死组HDL - C与对照组无显著差异外,其他观察组血脂各指标与对照组比较均有显著统计学差异( P<0 .0 5 ) ,且糖尿病组三酰甘油及冠心病组低密度脂蛋白胆固醇与对照组比较有极显著统计学差异( P<0 .0 1 )。结论:高血压、冠心病、脑梗死、糖尿病等动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素浓度有不同程度降低,其中,间接胆红素降低更明显,提示可将胆红素水平作为AS患者体内氧化活性增加的一个临床监测指标     

黄体不健的生殖内分泌变化

黄体不健是不孕症的重要原因之一。本文对52例黄体不健者采用放射免疫法测定其早卵泡期血请FSH、LH、PRL、E_2和黄体中期血清PRL、E_2,P_0水平,并与正常对照组进行比较。结果表明:黄体不健组早卵泡期FSH、LH、E_2及黄体中期P_0水平较正常对照组低,而PRL水平则高于正常对照组,其差别均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。由此说明,黄体不健与卵泡发育障碍有关。因而认为对黄体不健的治疗,如果采用补充黄体酮的方法仅是“治标”,而促进卵泡发育成熟才是“治本”。并认为中医药的周期疗法可能为此打开一条有效途径。