丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠肾脏水通道蛋白-2免疫荧光表达的影响

目的 观察中药丝瓜络（RLF）对慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠尿量和肾脏水通道蛋白-2（ AQP-2）免疫荧光表达的影响,探讨RLF的利尿作用及机制.方法采用异丙肾上腺素（ISO）法制备慢性充血性心衰大鼠模型,实验分为4组：正常组、CHF组、RLF大剂量组（10g·kg-1·d-1）和RLF小剂量组（5g·kg-1·d-1）.连续灌胃给药28d,末次给药后30min,采用足趾肿胀法,测量大鼠后肢足趾容积;代谢笼法,连续记录24h尿量;取肾脏髓质,免疫荧光法检测AQP-2的表达.结果丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量,减少后肢足趾容积（P＜0.05）,并可明显抑制心衰大鼠肾髓质AQP-2免疫荧光的过度表达.结论RLF对心衰大鼠有一定利尿作用,其分子生物学机制可能是通过降低肾脏髓质AQP-2蛋白的表达,从而减少水的重吸收.     

尿毒清胶囊及其拆方对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达的影响

[目的]观察尿毒清胶囊及其拆方对慢性肾功能哀竭(CRF)模型大鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响.[方法]采用5/6肾切除法复制CRF大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分为模型组、黄芪组(剂量1.5 g·kg-1·d-1)、丹参组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、黄芪丹参大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、尿毒清组(剂量为1 g·kg-1·d-1);各给药组灌胃给药6周后,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平,并采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织TGF-β1 mRNA的表达水平.[结果]各给药组均可降低血清BUN、SCr水平,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),其中尿毒清组降低SCr水平作用优于大黄组(P＜0.05);TGF-β1 mRNA在各组肾组织中均有不同程度的表达,其中模型组表达最强烈,尿毒清组和黄芪丹参大黄组表达最轻.[结论]尿毒清治疗CRF的作用与其能下调TGF-β1 mRNA在肾组织中表达有关,且中药复方作用优于单味中药.     

实验性充血性心力衰竭AVP系统和AQP_2的变化及黄芪的作用

目的　利用腹主动脉 下腔静脉瘘所致的慢性充血性心衰大鼠 ,研究心衰时心钠潴留的机制 ,观察精氨酸血管加压素 (AVP)和其V1a、V2 受体与AVP依赖性水通道水孔蛋白 2 (AQP2 )在其中的作用 ,以及黄芪对此的影响。方法　对腹主动脉 下腔静脉瘘所致的心衰大鼠在造瘘后的第一天起给予腹腔注射黄芪 0 .5g/ (kg·d) ,观察 5周后大鼠的心功能、肾功能指标的变化 ,并分别以斑点杂交与以GAPDH相对定量的RT PCR方法检测下丘脑AVP、主动脉与肾脏AVPV1a受体、肾脏AVPV2 受体与AQP2 mRNA的表达。结果　动静脉造瘘心衰大鼠心、肾功能较之假手术对照组明显下降 ,表现为右心房压力 (RAP)、左室舒张末压 (LVEDP)增高、左室 dP/dtmax、GFR、RPF、尿量、尿钠排泄量与自由水清除率降低 ,黄芪可显著改善上述异常。斑点杂交检测表明下丘脑AVPmRNA表达在心衰大鼠上调 ;半定量RT PCR检测显示心衰大鼠主动脉与肾皮质AVPV1a受体mRNA表达减弱 ,在肾髓质表达增强 ;肾皮质V2 受体与AQP2 mRNA表达增强 ,髓质减弱。黄芪可明显改善心衰大鼠的心、肾功能指标 ,并能完全或部分纠正这些基因的异常表达。结论　在腹主动脉 下腔静脉造瘘所致的充血性心力衰竭大鼠中存在有AVP系统和AQP2 表达的异常 ,中药黄芪对心衰的治疗作用部分与改善大鼠     

小剂量异丙肾上腺素致大鼠心衰伴甲状腺功能紊乱动物模型

目的 探索采用小剂量异丙肾上腺素(ISO)制备心衰伴低T3综合征的大鼠模型.方法 根据ISO给药剂量及给药方式将大鼠随机分为6组,另设对照组注射2 ml生理盐水.于给药前和给药后10d各行心脏超声心动图检查,检测血清游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、肌酸激酶、乳酸脱氢酶(FT3、FT4、CK、LDH)浓度.给药后11d处死动物取心脏做氯化三苯基四氮唑(TTC)染色.结果 (1)各组动物存活率,3 mg·kg-1·d-1组全部存活,5mg·kg-1·d-1×3d组、10mg·kg-1 ·d-1 × 3d组、6 mg·kg-1·d-1×7d组存活率分别为50％、60％、80％;(2)与对照组相比,各组左室短轴缩短率(FS)均明显降低(P＜0.01),且6组较其他组下降明显(P＜0.05);(3)CK、LDH较给药前显著升高(P＜0.05),6 mg·kg-1·d-1×7 d组血清FT3浓度明显低10 mg·kg-1·d-1×3d组(P＜0.05);(4)与对照组相比,实验组心梗面积明显(P＜0.05),6 mg·kg-1·d-1×7d组心肌梗死重量百分比明显高于10 mg·kg-1·d-1 ×3d组(P=0.02).结论 (6mg·kg-1·d-1)ISO分2次腹腔注射,给药间隔1h,连续给药7d,可成功制备心衰伴甲状腺功能紊乱动物模型,该方法操作简便,重复性、可控性、稳定性好,死亡率低、成功率高.     

瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍通过调控葡萄糖转运蛋白4表达发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用研究

背景 瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍对糖尿病肾损伤具有保护作用,然而其机制尚不十分明确。 目的 探讨瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍在链脲佐菌素（STZ）诱导的2型糖尿病（T2DM）大鼠肾损伤中的保护作用及机制。 方法 于2021年7—10月将40只清洁级Wistar大鼠随机分为对照组（C组）、二甲双胍组（M组）、二甲双胍+瑞舒伐他汀钙低剂量组（M+RL组）和二甲双胍+瑞舒伐他汀钙高剂量组（M+RH组）,每组各10只。M组、M+RL组、M+RH组大鼠腹腔注射STZ,建立T2DM模型。各组药物灌胃：C组：10 mg·kg-1·d-1 0.9%氯化钠溶液;M组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）;M+RL组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）混悬液+瑞舒伐他汀钙（0.42 mg·kg-1·d-1）;M+RH组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）混悬液+瑞舒伐他汀钙（0.83 mg·kg-1·d-1）。干预6周后处死大鼠,并留取血液及肾脏组织标本。以苏木素-伊红（HE）染色、高碘酸-无色品红（PAS）染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织损伤程度;以实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测各组大鼠肾脏组织葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA的表达情况;以Western-blotting法检测各组大鼠肾脏组织GLUT4蛋白的表达情况。 结果 与C组相比,M组、M+RL组、M+RH组大鼠肾小球结构均出现明显损伤,伴有炎性细胞浸润及间质纤维化。M组、M+RL组、M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA表达水平均低于C组,M组、M+RL组大鼠肾脏组织GLUT4蛋白表达水平均低于C组,M+RL组、M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA、GLUT4蛋白表达水平均高于M组,M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA、GLUT4蛋白表达水平高于M+RL组（P<0.05）。 结论 瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍可减轻T2DM大鼠肾小球及肾小管炎性细胞浸润,缓解肾小球基底膜增厚、肾小管空泡变性及肾间质纤维化进程,增加GLUT4 mRNA与GLUT4蛋白表达,且高剂量瑞舒伐他汀钙效果优于低剂量瑞舒伐他汀钙。提示瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍可能通过调控GLUT4 mRNA与蛋白的表达,实现对T2DM大鼠肾脏的保护作用,其肾脏保护作用可随瑞舒伐他汀钙剂量增加而增强。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织血小板活化因子受体mRNA表达的影响

[目的]观察补阳还五汤对脊髓损伤(SCI)模型大鼠脊髓组织血小板活化因子受体(PAF-R)mRNA表达的影响.[方法]选用SPF级Wistar大鼠,随机分为4组:正常组、模型组、补阳还五汤组(剂量为40 g·kg-1·d-1)、金纳多组(剂量为45.5 mg·kg-1·d-1);采用Allen's法复制中度SCI模型,造模成功后观察1周;连续给药2周后,取各组脊髓组织,采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组脊髓组织PAF-R mRNA表达水平.[结果]模型组大鼠脊髓组织PAF-R mRNA表达显著降低(P＜0.01);补阳还五汤组及金纳多组均可抑制脊髓组织PAF-R mRNA表达,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.01),而两给药组之间比较无显著性差异(P＞0.05).[结论]补阳还五汤对损伤脊髓的保护作用可能与其能减少PAF-R数目,抑制PAF-R活性,从而阻断PAF发挥损伤效应有关.     

肾阳虚型心力衰竭肾脏髓质水通道蛋白的表达的实验研究

目的:观察肾阳虚心力衰竭病证结合动物模型肾脏髓质水通道蛋白(AQP-2)的表达.方法:雄性SD大鼠130只,随机分为2大组,分别进行假手术和冠状动脉结扎术,假手术后组存活的大鼠随机分为证型模型组(A组)和对照组(B组);冠状动脉结扎术后存活大鼠随机分为疾病模型组(C组)和疾病证型模型组(D组).分别应用结扎左冠状动脉,造成心肌梗死心衰模型,羟基脲灌胃建立肾阳虚证模型.观察大鼠的呼吸、体重、体重增加指数、力竭性游泳实验、体温、心功能,应用RT-PCR技术观察大鼠肾虚心力衰竭模型的AQP-2表达.结果:各组动物在造模以及药物干预试验结束后,C组和D组在呼吸、心率、体重增加量、±dp/dtmax方面均明显上升,力竭游泳时间下降,AQP-2水平明显上升;D组更为明显.结论:进行肾阳虚型心力衰竭病证结合动物模型肾脏髓质水通道蛋白的表达研究,可为进一步研究中医药方法在防治慢性心衰中作用机理提供良好的实验基础.     

心康冲剂对慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA表达的影响

目的 观察心康冲剂对慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA表达的影响,探讨其对慢性心衰水潴留的作用机制.方法 70只SD大鼠随机抽取10只为正常对照组,其余大鼠腹腔注射阿霉素（2 mg/kg,1次/周,共10周）造成心衰模型,再随机分为模型对照组,芪苈强心组,心康冲剂低、中、高剂量组.药物干预6周后,各组随机取6只存活大鼠,检测肾脏AQP2mRNA、AVPV2mRNA表达水平的变化.结果 与正常组相比,模型组AQP2mRNA、AVPV2mRNA的表达上升,差异有统计学意义;与模型组相比,芪苈强心组、心康冲剂各组均可显著下调AQP2mRNA、AVPV2mRNA的表达（P＜0.05）;与芪苈强心组相比,心康冲剂各组下调AQP2mRNA、AVPV2mRNA表达更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.心康冲剂各组间比较无显著性差异（P＞0.05）.结论 心康冲剂可下调慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA的表达,可能是其利尿消肿的作用机制之一.     

三棱、莪术含药血清对培养的人脐静脉血管内皮细胞生长和VEGF表达的影响

目的 探讨三棱、莪术含药血清对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的血管内皮细胞增殖和VEGF表达影响.方法 以三棱、莪术含药血清作用于VEGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell-1,HUVEC-1),倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,MTT法观察细胞增殖情况,Western blot和RT-PCR方法分别检测内皮细胞VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 三棱、莪术5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠含药血清可使正常人脐静脉血管内皮细胞排列紊乱,明显梭形化.5.0 g·kg-1·d-1大鼠10%、5%、2.5%含药血清组和2.5 g·kg-1·d-1大鼠10%含药血清组HUVEC-1细胞的增殖显著低于空白血清相同浓度组(P＜0.05).5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠5%的含药血清使HUVEC-1细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达均显著降低.结论 三棱、莪术含药血清可抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖,其机制与抑制血管内皮生长因子表达密切相关.     

不同剂量环氧合酶-2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察环氧合酶-2(COX2)抑制剂塞来昔布对梗阻性肾病大鼠模型肾间质纤维化的影响及其机制。方法:大鼠采用单侧输尿管结扎(UUO)建立梗阻性肾病模型。给药组大鼠自造模前1 d至造模后7 d分别给予塞来昔布5 mg·kg-1·d-1、10 mg·kg-1·d-1、30 mg·kg-1·d-1灌胃,另设模型组和假手术组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃作为对照(n=10)。RT-PCR检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的基因表达,免疫组化技术检测CTGF、平滑肌肌动蛋白(smooth-muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的蛋白表达,放免法检测血浆内血管紧张素-Ⅱ(Angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)的水平。结果:与假手术组比模型组大鼠CTGF mRNA的表达显著上调(P<0.01),Ang-Ⅱ的水平升高(P<0.05)。与模型组比塞来昔布5 mg-1·kg-1·d-1和10mg-1·kg-1·d-1治疗组能显著降低CTGF mRNA的表达,Ang-Ⅱ水平无改变。但塞来昔布30 mg-1·kg-1·d-1治疗组与模型组比Ang-Ⅱ的水平升高(P<0.05)。结论:环氧合酶-2抑制剂对肾脏的保护作用与剂量密切相关,小剂量应用可延缓肾间质纤维化的发生,大剂量应用可能通过升高Ang-Ⅱ的水平而产生对肾脏的不利影响。