γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

MSP58沉默对肺癌细胞A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默MSP58基因对肺癌细胞A549增值,细胞周期和侵袭能力的影响。方法:化学合成针对MSP58基因的siRNA,转染肺癌细胞A549,RT-PCR和Western-blot检测MSP58基因的mRNA和蛋白水平,利用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell小室实验观察侵袭能力。结果:针对MSP58基因的siRNA转染A549细胞48h后,与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA组显著降低MSP58的基因表达和蛋白表达,细胞的增值受到抑制,并随着时间延长抑制明显,细胞发生G1期阻滞,细胞的侵袭力下降。结论:利用特异性siRNA沉默MSP58基因的表达,可以显著抑制肺癌A549细胞增值和侵袭能力,MSP58有可能成为肺癌治疗的新靶点。     

应用荧光定量PCR和Western—blot检测RNA干扰肺腺癌A549细胞STAT3基因表达水平的实验研究

目的：研究RNAi技术对人肺腺癌A549细胞系中STAT3基因的阻断效应,探讨STAT3在肺癌中的重要作用,为肺癌的基因治疗寻找新的靶点。方法：将化学合成siRNA用脂质体介导法转染肺腺癌A549细胞,应用荧光定量PCR法检测RNA干扰后STAT3 mRNA表达量,得出抑制率。应用Western-blot检测RNA干扰后对STAT3蛋白表达的影响。结果：成功将siRNA转染肺腺癌A549细胞,荧光定量PCR结果显示,在转染24h、48h、72h后,各干扰组与阴性组比较STAT3基因表达量明显下调（P〈0.05）,Western blot显示转染前后STAT3蛋白的表达水平明显受到抑制,干扰组与阴性组空白组相比具有显著差异（P〈0.05）,内参基因在各组的表达量无明显差异。结论：将合成的STAT3 siRNA能有效抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平,对STAT3有高效和特异的沉默作用,以STAT3为靶点的RNA干扰技术可望成为肺癌基因治疗的新策略。     

RNA干扰HO-1表达对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响研究

目的应用RNA干扰技术特异性抑制血红蛋白加氧酶-1（HO-1）的表达,观察HO-1对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将体外构建的HO-1小分子RNA（siRNA）转染入肺腺癌A549细胞,分为空白对照组（blank组）、脂质体组（mock组）、阴性对照组（NC组）、HO-1siRNA组;应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测HO-1mRNA和蛋白表达水平;分别以CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡率,用Transwell试验检测细胞迁移能力。结果细胞培养48、72h后,与blank组、mock组、NC组比较,HO-1siRNA组细胞存活率均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率均增高（均P＜0.05）,G0期/G1期细胞比例均增高（均P＜0.05）,Transwell试验中穿膜细胞数均减少（均P＜0.05）。结论RNA干扰HO-1基因表达后能有效调控肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为,抑制肺腺癌A549细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞的侵袭能力。     

siRNA沉默Wip1基因对人肺腺癌细胞的影响

目的向肺腺癌A549细胞中导入靶向Wip1的siRNA,研究其对肺腺癌细胞生物学活性的影响。方法设计并合成Wip1基因特异性的siRNA,通过脂质体介导将siRNA瞬时转染肺腺癌A549细胞,用荧光定量PCR检测转染后细胞内Wip1基因的表达水平,流式细胞学检测A549细胞凋亡、增殖以及用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁徙的情况。结果特异转染组中Wip1 mRNA表达明显降低,并且处于G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,侵袭细胞数及迁移率均明显低于非特异转染组,细胞凋亡未见差异性改变。结论靶向Wip1基因的siRNA能有效降低目的基因mRNA的表达水平,抑制A549细胞的生长并引起细胞侵袭力及迁移力下降。     

脂质体转染survivin siRNA对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨脂质体转染survivin siRNA 对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响.方法:人工合成抑制survivin基因的siRNA片段,通过脂质体转染到A549细胞内,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;用四氮唑盐(M1Tr)法观察转染后24h,48h,72h对细胞增生的影响;流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数;RT-PCR检测survivin mRNA的表达.结果:转染siRNA后的A549细胞,细胞增殖受到显著抑制,细胞明显出现凋亡,survivin基因mRNA表达显著下降.结论:应用RNA干扰靶向抑制survivin基因可以显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡.survivin可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点.     

叉头蛋白3对肺腺癌细胞增殖和化疗药物顺铂敏感性的影响

目的：观察叉头蛋白3（FOXP3）在人肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和顺铂敏感性的影响，阐明肺腺癌细胞对顺铂耐药的相关机制。方法：收集肺腺癌患者术后石蜡标本50例和正常肺组织10例。免疫组织化学染色方法检测肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3和Ki-67的表达，分析肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3阳性表达率的差异，Pearson相关分析法分析FOXP3和Ki-67表达的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行siRNA转染，将A549细胞分为Mock组（转染脂质体）、Control-siRNA组（转染Control-siRNA）和FOXP3-siRNA组（转染FOXP3-siRNA）。RT-qPCR法检测各组A549细胞中FOXP3 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平，CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性及不同浓度（0、0.63、1.25、2.50和5.00mg·L^-1）顺铂作用后各组A549细胞生长抑制率，RT-qPCR和Western blotting法检测顺铂作用后各组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平。结果：FOXP3在肺腺癌和正常肺组织的阳性表达率分别为62.0%和13.3%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；FOXP3和Ki-67在肺腺癌组织中表达呈正相关关系（r=0.370，P<0.01）；FOXP3-siRNA组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.01）；顺铂作用48和72 h后，FOXP3-siRNA组A549细胞增殖活性明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25、2.50和5.00 mg·L^-1顺铂作用后，FOXP3-siRNA组A549细胞生长抑制率均高于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25和2.50 mg·L^-1顺铂组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显高于0 mg·L^-1顺铂组（P<0.05）。结论：沉默FOXP3可抑制肺腺癌细胞的增殖，增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

靶向Ku70基因siRNA对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用

目的：研究Ku70与人肺腺癌耐药的相关性,观察调控Ku70表达能否逆转人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）的耐药性。方法：采用RT-PCR、Western Blotting方法比较Ku70在人肺腺癌亲代细胞（A549）与耐药细胞系（A549/DDP）的表达水平。转染靶向Ku70基因siRNA（si-Ku70）的A549/DDP细胞作为实验组,转染非特异性siRNA（si-Scramble）的A549/DDP细胞作为阴性对照组,同时设空白组(A549/DDP细胞)。加药组在转染后48 h给予顺铂。应用MTT法检测各组细胞在顺铂作用下的生存率,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）,采用流式细胞仪定量检测细胞凋亡率;采用分光光度法检测Caspase-3活化程度。结果：Ku70 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞表达水平显著高于其亲代A549细胞（P<0.01）;靶向Ku70的siRNA（si-Ku70)明显下调A549/DDP细胞的Ku70 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）;在不同浓度顺铂作用24 h后,实验组细胞的生存率明显低于阴性对照组和空白组（P<0.01）。6 mg/L顺铂作用24 h后,实验组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于阴性对照组和空白组（P<0.05）。结论：Ku70在人耐药肺腺癌细胞呈现高表达,提示Ku70参与肺腺癌耐药的形成;靶向Ku70siRNA导入人肺腺癌耐药细胞可特异性下调Ku70的表达,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,逆转其耐药性,Ku70可能成为逆转肺癌耐药的一个新的分子靶点。     

用Ku80 siRNA抑制Ku80基因表达以提高肺癌细胞放射敏感性的实验研究

目的探讨用小RNA干扰抑制Ku80基因表达以提高A549肺癌细胞的放射敏感性。方法设计并化学合成Ku80siRNA,转染体外培养的A549肺癌细胞。利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平对转染后的细胞Ku80基因表达情况进行测定,同时上述转染的细胞分别照射2、4、6、8及10Gy,利用克隆形成实验测定放射敏感性的变化。结果 RT-PCR检测显示在A549肺癌细胞转染Ku80siRNA后24、48和72h三个时间点Ku80mRNA含量减少,Western blot分析显示在转染48和72h两个时间点Ku80蛋白含量减少,与对照组比较有统计学差异（P〈0.05）。克隆形成实验提示A549肺癌细胞转染Ku80siRNA后放射敏感性增强。结论 Ku80siRNA转染A549肺癌细胞后能够有效抑制Ku80基因表达,提高其放射敏感性。     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的脉络膜-视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管型形成的影响

研究背景： Delta-like 4 (DLL4)是近年新发现的可由低氧诱导的血管生长调控因子,属特异性表达于血管内皮细胞上的NOTCH受体的配体。最近研究表明DLL4/NOTCH信号在生理性和病理性血管新生过程中起着关键的调控作用,它可抑制新生血管的分支和出芽并促进血管的正常分化,从而阻止过度的血管新生。脉络膜新生血管(CNV)实际上也是一种有低氧参与的病理性血管新生的过程,但DLL4基因在CNV形成中的表达和作用目前报道甚少,本文研究拟在体外细胞水平观察DLL4基因在低氧培养的脉络膜血管内皮细胞中的表达规律,并通过RNA干扰技术抑制DLL4基因表达,进而评估DLL4基因对低氧诱导的脉络膜血管内皮细胞在血管新生中的生物学行为包括增殖、迁移和管型形成能力的影响。 研究方法： 以参与CNV形成的主要细胞--脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞系）作为研究DLL4基因在CNV中表达和作用的体外细胞模型。通过200uM CoCl2化学诱导产生的低氧来模拟CNV体内的低氧环境。分别利用RT-PCR、real-time quantitative PCR和Western blot方法定性和定量检测低氧诱导下的RF/6A细胞中DLL4基因mRNA和蛋白水平的时程表达规律。设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine 2000介导DLL4 siRNA转染低氧培养12h的RF/6A细胞。利用流式细胞仪检测荧光标记的siRNA的转染效率。分5组①空白对照组;②转染液对照组;③100nmol/l DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组;④100nmol/l DLL4 siRNA-duplex1;⑤100nmol/l DLL4 siRNA-duplex2检测RNA干扰后的DLL4 mRNA和蛋白的表达水平,筛选RNA干扰抑制效率高的DLL4 siRNA-duplex用于转染低氧诱导的RF/6A细胞。进一步观察siRNA特异性干扰DLL4基因表达对DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应下游的关键靶基因HES1和HEY1 mRNA表达的调控。通过MTT和流式细胞周期分析技术观察RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞增殖能力的影响;利用transwell小室的体外细胞跨膜迁移实验,检测下调DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞迁移能力的影响;通过Matrigel体外管型形成实验观察RNA干扰后的RF/6A细胞在低氧培养下形成小管样结构的长度,以反映细胞体外管型形成能力的变化。 研究结果：RF/6A细胞中可检测到DLL4基因的表达,且受低氧因素的诱导调控。低氧培养1h后,DLL4 mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高,低氧培养12h时表达水平达到最高峰并持续高表达至24h。相对于DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组,DLL4 siRNA-duplex1和DLL4 siRNA-duplex2转染RF/6A细胞 48小时后低氧培养12h,DLL4基因的mRNA表达抑制率分别为91.4％和82.5％,DLL4蛋白的表达抑制率分别为86.2％和75.3％。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组三组之间的DLL4基因表达水平无显著性差异(P=0.139),DLL4 siRNA-duplex1能特异性抑制DLL4基因表达。HES1和HEY1的mRNA表达水平也相应分别下降75.1％ (P=0.004)和86.3％ (P=0.004),表明DLL4基因具有调控DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应的作用。 MTT结果显示：siRNA转染48h的RF/6A细胞继续低氧培养72h和96h的吸光度（A）值较scrambled 阴性对照组明显增加(P=0.031, P=0.006), 且相应的细胞周期分析显示RF/6A细胞阻滞在S期;转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞低氧培养8h后,迁移过膜的细胞数明显增多,为scrambled 阴性对照组的1.6倍,其细胞数差异具有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的跨膜迁移细胞数无显著变化 (P=0.137)。转染DLL4 siRNA scrambled negative control的RF/6A细胞低氧培养24h后在体外Matrigel上多形成条索状或不连续且稀疏的小管样结构,而转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞可形成环形完整的网状小管样结构,且管型长度明显增加了82.3％,其差异有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的管型长度则无明显差异(P=0.178)。 研究结论：DLL4是受低氧诱导的新生血管分支和出芽的负性调控因子。靶向DLL4基因的siRNA可抑制低氧培养的RF/6A细胞中DLL4、HES1和HEY1基因的表达水平,并促进RF/6A细胞体外增殖、迁移和管型形成。DLL4可望成为脉络膜新生血管治疗策略中的新靶点。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。