大肠杆菌在体外快速激活系统血液固有免疫反应中红细胞CD59、淋巴细胞CD4、CD8表达量的性质及意义

目的：探讨CD4、CD8以及CD59分子在系统血液快速固有免疫反应中的作用性质与意义。方法：采用大肠杆菌在体外快速激活全血细胞固有免疫反应的研究体系：实验组0.2mL灭活大肠杆菌（3×108/mL）,加0.2mL全血细胞悬液加0.3mL新鲜血浆,对照组用生理盐水0.2mL取代大肠杆菌悬液,2管放37℃水浴1h后,用直接免疫荧光流式细胞仪法测定红细胞CD59,淋巴细胞CD4和CD8分子表达量变化。结果：全血实验组红细胞CD59,淋巴细胞CD4和CD8分子表达量明显高于全血对照组各测定值（P〈0.05）。结论：红细胞CD59与淋巴细胞CD4和CD8分子共同参与了快速固有免疫反应,红细胞CD59,淋巴细胞CD4和CD8分子同属固有免疫分子,此免疫网络关系属于系统免疫学研究范畴,这一新的认识值得深入研究。     

银屑病患者红细胞及血小板天然免疫分子CR1/CD59表达的相关性变化

目的 研究银屑病患者红细胞、血小板表面天然免疫分子CRl与CD59的表达相关性，并探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法 应用流式细胞仪同时检测寻常型银屑病患者新鲜红细胞、血小板表面CRl、CD59的表达水平。结果 银屑病患者红细胞、血小板CRl与CD59较正常人有所增高，正常人红细胞、血小板CRl与CD59呈明显负相关(γ＝0．603，P＜0．01)，而在银屑病则呈紊乱状态。结论 天然免疫分子CRl与CD59间可能存在某种调控机制，其在机体天然免疫反应和银屑病免疫发病机制中可能起重要作用。     

自体和异体血液在全血分离实验体系中对免疫细胞因子的影响

目的:运用系统血液免疫反应分离实验体系,探讨在抗原激活的情况下异体血细胞对反应体系中细胞因子含量水平影响的变化规律.方法:以S180作为激活抗原,加异体血细胞与自体血细胞对比,37℃孵育1h,取上清液用ELISA法测定IL-8、TNF-α、IFN-γ的分泌量.结果:IL-8的分泌量异体红细胞实验组[(133.92±135.85)%]与自体红细胞对照组[(37.93±27.74)%]相比明显上升(P＜0.05);TNF-α的分泌量异体红细胞实验组[(8.31±3.57)%)]与自体红细胞实验组[(16.55±10.38)%]相比明显下降(P＜0.05);IFN-γ分泌量无明显差异.结论:异体红细胞对自体血液免疫反应细胞因子的分泌具有双向调控作用,提示异体输血对受者的血液免疫反应具有干扰和失平衡的不良影响.     

灭活大肠杆菌在体外快速激活与调控淋巴瘤患者血细胞CD55、CD59分子表达与意义

目的：用系统血液快速固有免疫反应体外系统模式数字化实验研究探讨菌苗治疗淋巴瘤的系统免疫学机理。方法：灭活大肠杆菌（3×10^8/mL）0.2mL加0.6mL淋巴瘤患者枸橼酸抗凝新鲜血,对照组用生理盐水0.2mL取代大肠杆菌悬液加0.6mL全血,两管混匀37℃1h后,用流式细胞仪直接荧光免疫法测定实验组与对照组各种血细胞CD55和CD59分子表达量（平均荧光强度）,并算出大肠杆菌对CD55和CD59分子表达的调控率,求出t值。结果：实验组粒细胞CD55分子的调控率为负（35.18±12.17）%,而血细胞（包括红细胞、血小板、粒细胞、淋巴细胞）CD59分子调控率为正值,以及除粒细胞CD55分子外的其它的细胞CD55分子调控率都为正值,与粒细胞CD55分子负调控率差异非常显著（P〈0.05～0.01）。结论：从体外系统模式数字化实验研究证明菌苗可全方位激活系统血液免疫反应,具体机理尚待深入研究。     

悬浮红细胞对异体T淋巴细胞增殖的影响及机制

目的体外观察悬浮红细胞对异体T淋巴细胞增殖的影响并探讨其可能机制。方法采用Ficoll低密度离心法和免疫磁珠法从人外周血中分离纯化出CD3+T淋巴细胞,给予CD3/CD28抗体共刺激,并分别与异体非去白悬浮红细胞或去白悬浮红细胞混合培养72 h。采用H3-胸腺嘧啶核苷掺入法检测各组T淋巴细胞增殖的情况。采用流式细胞仪检测各组培养体系中CD4+/CD8+及CD4+CD25+/CD4+细胞亚群比例。结果与阴性对照组(细胞培养液组)对比,非去白悬浮红细胞组和去白悬浮红细胞组T淋巴细胞增殖明显受到抑制,CD4+/CD8+细胞亚群比例下降(P0.01),而CD4+CD25+/CD4+细胞亚群比例明显增加(P0.01)。与去白悬浮红细胞相比,非去白悬浮红细胞的作用更明显(P0.05)。结论悬浮红细胞可能通过上调CD4+CD25+调节性T细胞比例抑制异体T淋巴细胞增殖,而这种作用可能主要取决于悬浮红细胞内残留的白细胞。     

磁流体与长春新碱对系统血液免疫功能影响的实验研究

目的:用体外自然实验体系对纳米级FeO磁流体和抗癌药物长春新碱(VCR)体外对系统血液免疫功能的影响进行分子水平的探讨。方法:采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法,检测血细胞表面相关免疫分子的变化情况。结果:使用纳米级Fe3O4磁流体和抗癌药物VCR以后,自然实验组CD4细胞阳性率(38.87±6.37)%较自然对照组(35.52±6.76)%明显增高(P<0.01),自然实验组白细胞CD55阳性细胞平均荧光强度(68.79±8.98)%较自然对照组(74.78±18.60)%明显降低(P<0.05)。与自然对照组相比CD4分子均表现出一定程度的上调,CD8分子均表现出一定程度的下调。结论:VCR(0.2g/mL)和纳米级Fe3O4磁流体对血细胞的免疫功能都没有不良影响,甚至磁流体还可以提高血液免疫反应中白细胞的免疫功能,为红细胞包载磁流体和抗癌药物治疗肿瘤提供实验依据,为抗癌药红细胞载体靶向抗肿瘤免疫提供新的治疗途径。     

自体与异体白细胞、红细胞在全血分离实验体系中对IL-8、IL-10的影响

目的:运用郭氏系统血液免疫反应分离实验体系,探讨在抗原激活的情况下异体白细胞、红细胞与自体白细胞、红细胞对反应体系中IL-8、IL-10影响的变化规律。方法:以人类大肠埃希菌作为激活原,加入异体白细胞、红细胞与自体白细胞、红细胞对比,37℃孵育1h,取上清液用ELISA测定IL-8、IL-10的分泌量。结果:IL-8的分泌量异体白细胞组(199.75970±62.743079)与自体白细胞组(465.92697±111.354713)相比明显下降(P=0.003<0.05),异体红细胞组(119.05455±31.056229)与自体红细胞组(132.63303±35.072837)相比无明显差异(P=0.456>0.05);IL-10的分泌量异体白细胞组(16.93582±2.346794)%与自体白细胞组相比(46.16061±9.180075)%明显下降(P=0.017<0.05),异体红细胞组(22.28497±4.010929)与自体红细胞组(27.58494±4.740832)相比无明显差异(P=0.274>0.05)。结论:同种异体同血型白细胞对自体血液免疫反应细胞因子的分泌具有负向的调控作用,同种异体同血型红细胞无此作用。     

补肾颗粒对慢性再生障碍性贫血患者CD28、CD95表达的影响

目的探讨补肾颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的作用机制。方法将CAA患者分为中药组(60例)和环胞菌素A组(CsA组,16例);中药组以补肾颗粒为主辨证治疗,CsA组以环孢菌素A为主治疗,疗程6个月,另设健康对照组20名,比较健康对照组与CAA各组治疗前后CD3+、CD3+CD28+、CD3+CD95+的表达水平。结果CAA各组治疗前CD3+、CD3+CD28+、CD3+CD95+的表达均较健康对照组高(P0.05),以肾阴虚型表达异常更甚。各组治疗后CD28表达下调,CD95表达上调。结论CAA患者T细胞CD28及CD95表达异常;补肾颗粒可能通过调节CD28及CD95水平调控CAA患者T细胞的异常激活和凋亡,从而促进造血功能恢复。     

血浆对红细胞CD55分子表达影响的实验研究

目的:用自然与分离实验体系探讨血浆对红细胞CD55分子表达的影响规律。方法:采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法,分别将有抗原和无抗原组、有血浆和无血浆组37℃孵育后,检测红细胞CD55分子平均荧光强度。结果:正常血浆对照组红细胞CD55分子平均荧光强度(6.49±1.03)明显高于无血浆对照组(5.66±1.16)(t=2.408,P=0.010),HBsAg阳性血浆对照组(6.26±0.95)也高于无血浆对照组(t=1.809,P=0.039),但不如正常血浆对照组显著。S180激活无血浆实验组红细胞CD55分子平均荧光强度(6.73±1.39)明显高于无血浆对照组(P<0.01)。结论:正常血浆和S180抗原激活均对红细胞CD55分子表达有明显上调作用,而HBsAg携带者血浆对红细胞CD55分子表达上调作用较弱,血浆的调控机理有待深入研究。     

血细胞天然免疫分子CD55、CD59与体液免疫相关性分析

目的探讨血细胞CD55、CD59天然免疫分子与体液免疫的相关性及其意义。方法用流式细胞仪法测定血细胞CD55、CD59,采用全自动蛋白分析仪速率散射比浊法,测定血清C3、C4及IgG、IgA、IgM。结果红细胞CD55与IgA呈正相关性(P<0.05),血小板CD55与IgG、IgM呈正相关性(P<0.05)。红细胞CD59与C3、C4呈负相关性(P<0.05)。结论血细胞CD55、CD59分子参与体液免疫反应调控,具体机理值得深入研究。     

重型再生障碍性贫血CD4+CD25+调节性T细胞的研究

目的:应用流式细胞术检测SAA患者外周血CD4 CD25 T细胞、CD4 CD25highT细胞的数量。结果:10例初治SAA患者外周血CD4 CD25 T细胞占CD4 T细胞的(6.23±1.82)%,明显低于正常对照组(9.20 2.95)%(P<0.01),CD4 CD25highT细胞比例为(1.02±0.11)%,亦明显低于正常对照组(1.43±0.41)%;10例造血恢复SAA患者CD4 CD25 T细胞和CD4CD25highT细胞比例分别为(8.92±1.22)%和(1.41±0.64)%,与正常对照组无明显差异(P>0.01)。认为 CD4 CD25 、CD4 CD25highT细胞水平与SAA密切相关。     

青蒿琥酯片对狼疮样模型小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯片不同剂量对狼疮样小鼠部分免疫调节作用机制。方法:运用不同剂量的青蒿琥酯对8~10周龄的狼疮样小鼠进行干预治疗8 d,观察其对狼疮样小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响。结果:青蒿琥酯片对狼疮样小鼠外周血CD4、CD8的表达有升高的作用,对狼疮样小鼠外周血CD54的高表达有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:青蒿琥酯片可调节狼疮样小鼠的细胞免疫功能,抑制狼疮样小鼠的过度免疫反应。     

芪菊饮对溃疡性结肠炎患者CD_(44)和CD_(54)的影响

通过观察自拟方芪菊饮对溃疡性结肠炎 (Ulcerativecolitis,UC)患者治疗前后外周血吞噬细胞膜糖蛋白 (CD44)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(ICAM - 1,CD54)的影响发现治疗后UC病人血中CD44和CD54含量明显下降 (P <0 .0 1)。故认为中药芪菊饮阻断UC病人粘附分子表达、调节免疫的作用 ,是发挥良好疗效的机理之一     

安胎灵联合西药治疗脾肾亏虚型复发性流产60例

目的：探讨安胎灵与绒毛膜性腺激素／黄体酮合用治疗脾肾亏虚型复发性流产，并对其外周血中Th1／Th2偏倚的调节作用。方法：用安胎灵与绒毛膜性腺激素／黄体酮治疗脾肾亏虚型复发性流产患者，以治疗前后为对照，用流式细胞仪及ABC—ELISA法分别检测血CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋水平。结果：（1）60例复发性流产患者54例治愈，6例无效，治愈率90％。（2）CD4^＋治疗前后差异无显著意义（P〉0．05）。（3）CD8^＋治疗前后差异有极显著性意义（P〈0．01）。（4）CD4^＋／CD8^＋治疗前后比较差异有极显著性意义。结论：安胎灵与绒毛膜性腺激素／黄体酮合用可有效治疗脾肾亏虚型复发性流产，并调节患者外周血的Th1／Th2偏倚，降低流产风险。     

双龙胶囊对哮喘大鼠肺功能的影响及其作用机制

目的：探讨双龙胶囊对哮喘大鼠的肺功能的影响及双龙胶囊治疗支气管哮喘的作用机制。方法：用卵蛋白建立大鼠哮喘模型,实验组给予双龙胶囊,再以卵蛋白作为抗原攻击激发气道高反应性后,测定大鼠肺功能的变化,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数,并做肺组织病理切片观察,用流式细胞仪测定脾脏CD4⁺及CD8⁺淋巴细胞阳性百分率。结果：双龙胶囊可明显降低哮喘大鼠PEF,Fev 0.2,Fev 0.2/FVC,降低哮喘大鼠BALF中嗜酸性粒细胞含量,肺组织病理切片观察可见双龙胶囊可抑制炎性细胞渗出,双龙胶囊还可降低脾脏中CD4⁺,CD8⁺含量。结论：双龙胶囊可明显抑制哮喘大鼠气道高反应,改善呼吸功能,其作用机制可能与双龙胶囊抑制炎性细胞渗出,减轻气道炎症并参与机体免疫调节有关。     

败丹黄液鼻腔灌洗对鼻窦炎术后鼻黏膜CD3、CD69的影响

目的观察败丹黄配方颗粒鼻腔灌洗对慢性鼻窦炎鼻内镜手术(FESS)术后的临床疗效及粘膜CD3、CD69的影响。方法对20例Ⅱ型慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者,在鼻内镜手术后,采用鼻腔灌注抽吸装置进行鼻腔灌洗,患者随机分成两组,治疗组用败丹黄灌洗液,对照组用生理盐水,对病变组织进行流式细胞术检测,分别在术中及术后3月进行检测,观察鼻黏膜CD3、CD69水平变化。结果①治疗组有效率90.0%,对照组80.0%;治疗组治愈率60.0%,对照组50.0%。治疗组有效率及治愈率高于对照组,但无统计学差异。②鼻腔灌洗3个月后,治疗组CD3+细胞比例低于对照组;CD3+/CD69+细胞比例差异无统计学意义。③手术前后CD3+细胞、CD3+/CD69+细胞比例与患者症状、体征进行相关性分析,相关系数r绝对值均偏小,无统计学意义。结论①鼻腔灌洗对鼻窦炎围手术期治疗有积极意义,败丹黄灌洗液能提高鼻窦炎手术愈后疗效。②CD3、CD69能够反映患者鼻腔黏膜的炎症状态,患者术后术腔黏膜炎症长期存在,控制黏膜炎症需要一个长期的治疗过程。③手术后3月治疗组CD3+细胞比例下降,可能和败丹黄灌洗液抗炎作用有关。     

康肠灵对异种抗原诱导的大鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用及机制探讨

目的:观察康肠灵对异种抗原诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用.方法:兔结肠粘膜加完全弗氏佐剂经皮下多点注射大鼠造成溃疡性结肠炎模型.给药治疗2周,观察大鼠精神饮食活动、食量、体重的变化;免疫组化法检测CD4、CD8;放免法检测结肠组织TNF-α含量;肉眼观察结肠组织形态学改变,并取结肠粘膜作病理检查.结果:模型组动物可见软便,个别拉稀便,活动、饮食减少,毛发欠光泽.结肠肉眼可见溃疡形成,粘膜纹理粗糙,甚者纹理消失,肠壁变薄,个别大鼠粘膜层坏死脱落.镜下炎性细胞(以淋巴细胞为主)浸润明显,炎症至粘膜下层,杯状细胞重度减少,可见肉芽肿,甚至可见重度纤维化.外周血CD4、CD8显著下降,组织TNF-α显著升高.康肠灵治疗后大鼠稀便渐停,饮食、活动逐渐恢复正常.结肠肉眼未见溃疡,镜下炎性细胞浸润减少,炎症多局限于粘膜层,杯状细胞轻度减少,未见肉芽组织,尚有一定程度纤维化.外周血CD4、CD8显著升高,结肠组织TNF-α显著下降.结论:康肠灵对异种抗原引发的大鼠溃疡性结肠炎模型有治疗作用,其机制可能与影响免疫,抑制炎症反应有关.     

温补脾肾、泄浊化瘀药对慢性肾功能衰竭患者CD44,CD54,TNF-α表达调节的影响

目的：观察温补脾肾、泄浊化瘀药物对慢性肾功能衰竭(CRF)患者白细胞黏附分子(CD44,CD54)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响,进一步探讨温补脾肾、泄浊化瘀法治疗慢性肾功能不全的作用机制。方法：将50例慢性肾功能衰竭患者随机分为治疗组28例、对照组22例,治疗组口服中药合剂,对照组口服尿毒清冲剂。采用流式细胞仪检测,用微量全血直接单标记荧光染色法、双抗体夹心ELISA法,观察治疗前后患者CD44,CD54,TNF-α及肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(Hb)的水平变化。结果：治疗后2组CRF患者CD44,CD54,TNF-α水平及SCr,BUN均降低；Hb升高。治疗组与对照组比较差异显著(P＜0.05)。结论：温补脾肾、泄浊化瘀药有降低CRF患者CD44,CD54,TNF-α水平的作用,并可改善SCr,BUN,Hb程度,减轻CRF患者的肾功能损害,对肾功能有保护作用。     

调节性T细胞及其中医药研究

调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋regulatory T cell,Treg）是新近才被认识的一类免疫调节细胞,主要发挥抑制性免疫调节功能,在维持机体内环境的稳定、抗感染免疫、抗肿瘤免疫、诱导移植耐受及自身免疫性疾病等方面发挥重要作用,是机体维持自身耐受的重要组成部分。