血液透析患者血流感染CRKP耐药性及耐药基因型

目的 分析血液透析患者血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药情况及耐药基因型。方法 收集2017年11月-2020年5月于湖州市中心医院血液净化中心治疗的血液透析患者血液标本分离的200株肺炎克雷伯菌，对分离的CRKP菌株进行药敏试验，采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因、血清荚膜分型以及毒力基因，并采用多位点序列分型(MLST)分析CRKP分型。结果 200株血流感染肺炎克雷伯菌中CRKP菌株为53株(26.50%),53株CRKP对几乎所有碳青霉烯类和其他β-内酰胺类抗菌药物耐药，对氨基糖苷类抗菌药物耐药率>45.00%; 53株CRKP共检出48株携带KPC-2、NDM-1、CTM-M9基因菌株，未检出携带碳青霉烯酶基因菌株5株；53株CRKP仅检测到4株K1型菌株，共有58.49%(31/53)CRKP携带毒力基因，rmpA2、iutA为两种主要的毒力基因；53株CRKP中50株为ST11型，ST550、ST1517、ST2230各1株。结论 血液透析患者血流感染CRKP耐药现象较为严峻，其主要耐药机制是携带耐药基因KPC-2,主要毒力基因为rmpA2、iutA,以ST11型为流行序列型。     

重症耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌肺部感染影响因素及分子流行病学

目的分析重症耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)肺部感染影响因素及分子流行病学特点。方法选取海南西部中心医院及三亚市人民医院肺炎克雷伯菌培养阳性的375例重症肺部感染患者,根据临床标本中是否分离出CRKP分为CRKP组、碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)组。分析重症肺部感染患者CRKP感染危险因素,以改良Hodge试验初筛CRKP碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)、质粒接合试验测定碳青霉烯基因携带与耐药基因水平转移,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析克隆相关性。结果 375例患者中共分离出非重复CRKP 105株,合并2种以上慢性病、感染前住院时间≥3周、留置插管2种、应用碳青霉烯类药物≥1周、近3个月应用三代/四代头孢菌素为CRKP感染的独立危险因素(P0.05);105株CRKP中,91株改良Hodge试验阳性(86.67%);91株改良Hodge试验阳性的CRKP菌株中79株携带bla_(KPC-2)基因(86.81%),33株携带bla_(NDM-1)基因(36.26%),3株携带bla_(IMP-4)基因(3.30%),未发现bla_(VIM)、bla_(OXA)基因;91株CRKP菌株血清型均为阴性,但携带毒力基因uge 87株、mrk D88株、ybtS 84株、kpn 86株、ent B91株,91株CRKP质粒接合试验成功;PFGE聚类结果显示91株CRKP可分为7个克隆型(ST),ST11为主要ST型(58株,63.74%)。结论引起医院重症肺部感染患者CRKP感染的因素较多,而携带bla_(KPC-2)及bla_(NDM-1)基因是主要机制,ST11是其主要克隆型,需尽早制定防控措施。     

KL47型和KL64型ST11碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学特征

目的 探究KL47型和KL64型ST11碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)分子流行病学特征。方法 收集2018年12月-2019年6月徐州医科大学附属医院87株非重复CRKP菌株，通过多位点序列分型技术确定菌株分型，最终纳入62株ST11型CRKP进行研究。基于wzi基因测序将62株CRKP分为KL47和KL64两组。PCR检测5种常见的碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、VIM、IMP、OXA-48)、6种超广谱β内酰胺酶基因(ESBL)(SHV、TEM、CTX-M1、CTX-M2、CTX-M8、CTX-M9)和8个毒力基因(rmpA、rmpA2、iucA、iroN、entB、ybtS、fimH、mrkD),统计分析比较ST11-KL47型菌株和ST11-KL64型菌株在耐药和毒力基因携带模式上的差别。结果 38株为ST11-KL47型菌株，24株为ST11-KL64型菌株。所有菌株均为多药耐药菌，对β内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物表现为100.00%耐药，对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和阿米卡星耐药率均高于50%,对多黏菌素和替加环素完全敏感。两组菌株药敏结果无统计学差异。ST11型菌株均产KPC-2酶，携带的ESBL基因均以bla_(TEM-1)检出率最高。对于基因bla_(SHV),ST11-KL47型菌株以携带bla_(SHV-11)为主，ST11-KL64型菌株主要携带bla_(SHV-12)。ST11-KL64型菌株rmpA的检出率高于ST11-KL47菌株(P<0.05)。结论 本地区CRKP多为ST11型多药耐药菌，且ST11-KL64型肺炎克雷伯菌相比ST11-KL47型肺炎克雷伯菌携带更多的毒力基因和耐药基因，应合理使用抗菌药物并加强医院感染防控措施。     

患儿分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因分析

目的分析临床患儿分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性和耐药基因。方法收集2015年6月-2018年6月医院的住院患儿分离非重复的CRKP 29株,对最小抑菌浓度(MIC)进行检测,PCR扩增常见的碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC),bla_(SME),bla_(GES),bla_(VIM),bla_(IMP),bla_(NDM),bla_(OXA-48))、超广谱β-内酰胺酶耐药基因(bla_(SHV),bla_(TEM),bla_(CTX-M-1group),bla_(CTX-M-2group),bla_(CTX-M-8group),bla_(CTX-M-9group))、头孢菌素酶耐药基因(bla_(MOX),bla_(CIT),bla_(DHA),bla_(ACC),bla_(EBC),bla_(FOX))。结果29株CRKP对美罗培南和亚胺培南完全耐药,对阿米卡星,米诺环素,左氧氟沙星,氨曲南的耐药率分别为3.45%,10.34%,17.24%,93.10%,对头孢类和酶抑制类药物均耐药,对多黏菌素和替加环素均敏感。29株CRKP均携带碳青霉烯类耐药基因,以bla_(NDM-5)基因阳性率最高为51.72%(15/29),bla_(NDM-1)基因阳性率为31.03%(9/29),bla_(KPC-2)基因阳性率为17.24%(5/29),1株既携带bla_(KPC-2)又携带bla_(IMP-4)。结论本地区分离的患儿CRKP菌株均为多药耐药菌,患儿临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药的机制主要是产NDM-5型碳青霉烯酶。     

儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药机制

目的 探讨儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行病学特征及耐药机制。方法 收集徐州医科大学附属医院2018年3月-2022年3月临床首次分离的儿童感染的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌24株，改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶，聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因，多位点序列分型(MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法检测其同源性。结果 2018年3月-2022年3月分离出24株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌，其中发现NDM-5型CRKP 15株，检出率62.50%,这15株CRKP感染患儿均有基础疾病和抗菌药物使用史；15株NDM-5型CRKP菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类和头孢他啶/阿维巴坦均耐药。MLST分型以ST2735型(25.00%)为主，PFGE分析显示6株ST2735型CRKP具有高度同源性，且均来自于新生儿重症监护室(NICU)。结论 医院NICU存在ST2735型产NDM-5 CRKP的克隆流行，应当加强院感监测及预防，防止其产生新的流行危害。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学研究

目的分析武汉两所医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分离株产碳青霉烯酶的情况,以及分子流行病学特征。方法收集武汉两所医院2018年1—10月临床分离的42株非重复CRKP,采用Carba NP试验方法对菌株产碳青霉烯酶情况进行初筛,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因携带情况,采用质粒接合试验分析耐药基因的水平转移情况,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行亲缘关系分析。结果 42株CRKP菌株中14株Carba NP试验阳性,其中有10株扩增出NDM-1基因,3株扩增出KPC-2基因。共13株CRKP碳青霉烯基因检测阳性,其中12株质粒接合试验成功。PFGE分析结果显示,携带NDM-1基因的CRKP菌株共分成6型,无明显优势型;携带KPC-2基因的CRKP菌株为同一型别。结论检出产NDM-1和KPC-2的CRKP菌株,质粒接合试验提示质粒介导的水平传播在碳青霉烯酶基因的播散过程中可能起重要作用。     

血流感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力因子研究

目的对临床血流感染分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药机制及毒力特点进行分析。方法连续收集2013年1月-2016年12月衢州市人民医院临床血流感染分离的CRKP 28株,采用Micro Scan Walk Away-96对菌株进行鉴定和药敏试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验分别检测碳青霉烯酶和金属酶,PCR方法检测耐药基因、荚膜血清型及毒力基因,多位点序列分析(MLST)进行细菌同源性分析。结果 28株血流感染的CRKP对大多数抗生素保持较高的耐药率。未发现膜孔蛋白编码基因Omp K35和Omp K36缺失株,检出KPC-2型27株(96.4%),为ST11。检出荚膜血清K5型1株,为ST1049,该菌未检测到常见的耐药基因。CRKP菌株普遍携带fim H、mrk D、ent B和ybt S毒力基因,其他毒力基因的阳性率较低。结论本院临床血流感染分离的CRKP主要耐药机制是携带KPC-2基因,序列型ST11是全国范围主要的流行序列型。CRKP个别菌株携带多种毒力因子,应引起临床重视。     

NICU耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药及多位点序列分析

目的分析NICU耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药及同源性,为临床防控CRKP提供实验依据。方法收集2016年1-12月某教学医院NICU首次分离的CRKP,使用PCR方法检测常见ESBLs基因(SHV、TEM、CTX-M1、CTX-M2、CTX-M8、CTX-M9)、AmpC酶基因(HAD、CMY)、碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、SME、GES、VIM、IMP、OXA-48)和多粘菌素耐药基因MCR-1等,并采用多位点序列分析(MLST)方法分析同源性。结果共收集44株CRKP,KPC-2基因携带率为100%,DHA-1携带率为70.5%,CTX-M基因携带率为68.2%,MLST共有4类分型,ST11型35株,ST48型6株,ST134型1株,未分型4株。结论 NICU病区分离CRKP均为多重耐药,NICU以携带KPC-2基因的ST11型菌株流行为主,应规范抗菌药物使用,加强消毒隔离措施,控制流行传播。     

携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌的流行克隆研究

目的揭示我国携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌的流行克隆特征,并与国外菌株进行比较。方法对2012-2017年全国40个城市的61家医院分离的100株携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌进行多位点序列分型(MLST);通过检索文献获取国外携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌MLST数据;使用BioNumerics构建最小生成树。结果 100株携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌被分为14个ST型。优势型别为ST11型,包含分离自38个城市的77株菌;其次为ST15型,包含分离自6个城市的7株菌;其余12个型别为ST147、ST1、ST65、ST23、ST25、ST37、ST258、ST395、ST412、ST449、ST502、ST685型,分别包含菌株1-3株。检索文献显示,欧美分离株的优势型别是ST258。结论自2007年我国第一次报道ST11型携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌以来,ST11型菌株持续作为优势克隆群,并已扩散至全国大部分地区。应加强该类菌株的分子分型实验室监测,获得系统全面的数据揭示其流行规律,制定针对性防控措施控制其传播。     

ICU血流感染CRKP耐药基因和分子流行病学特征

目的 调查医院各重症监护室(ICU)中血流感染患者血液中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)主要耐药机制和克隆株流行现状。方法 收集2017-2019年复旦大学附属中山医院ICU患者血培养中分离CRKP共32株。使用Vitek MS对菌株进行鉴定,并使用全自动药敏分析系统检测常见抗菌药物对其的最低抑菌浓度(MIC)。聚合酶链式反应(PCR)扩增并测序检测CRKP中碳青霉烯酶基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)检测不同菌株间的同源性。结果 CRKP菌株对三、四代头孢菌素、加酶抑制剂类、氟喹诺酮类和氨基糖苷类耐药率均超过50%,仅对替加环素和黏菌素的耐药率为0%。32株CRKP中含bla_(KPC-2)基因31株(96.88%),含bla_(NDM-1)基因1株(3.13%),MLST将32株共分为3个不同ST型,其中ST11型29株占(90.6%),ST15型2株占(6.25%),ST2237型1株占(3.13%)。PFGE结果显示共有8个PFGE型别,其中以PFGE C型为主,16株(50.00%),D型5株(15.63%),A型4株(12.50%)。不同ICU内流行主要PFGE型别各有不同,肝脏外科监护室以PFGE-D型为主,占50.00%;心脏外科ICU、呼吸内科ICU和急诊ICU均以PFGE-C型为主,其中急诊外科监护室PFGE-C型占100.00%。结论 2017-2019年医院存在CRKP在各ICU内和ICU间克隆传播,流行的主要克隆株以PFGE C-ST11-KPC-2型为主,亟需加强临床意识和感染控制措施。