碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制

目的研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)对碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制,为临床治疗CRE感染及医院感染的控制提供分子流行病学依据。方法收集2014—2015年临床送检各类标本分离的细菌,使用Microscan Walkaway 40 plus进行细菌鉴定和药敏试验,对分离的CRE进行常见碳青霉烯酶的编码基因(bla_(NDM-1)及bla_(KPC-2))和超广谱β-内酰胺酶编码基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)-like、bla_(CTX-M-2)-like、bla_(CTX-M-8)-like及bla_(CTX-M-9)-like)的检测,同时检测细菌多重耐药相关的Ⅰ类整合子编码基因bla_(inT-1)。结果 2014—2015年共分离7株CRE,检出率为0.30%,1~6号菌株为肺炎克雷伯菌,7号菌株为弗劳地柠檬酸杆菌,7株菌株对β-内酰胺酶抑制剂复合制剂、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类抗生素均耐药,3株菌对阿米卡星及四环素敏感,2株菌对复方磺胺甲口恶唑敏感。3株菌检出bla_(NDM-1),2株检出bla_(KPC-2),5株检出bla_(TEM),7株均可检出bla_(SHV),1株检出bla_(CTX-M-1)-like,4株检出bla_(CTX-M-9)-like,5株检出bla_(inT-1),未检出基因bla_(CTX-M-2)-like及bla_(CTX-M-8)-like。结论 bla_(NDM-1)及bla_(KPC-2)是导致7株CRE对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制,bla_(TEM)、bla_(SHV)及bla_(CTX-M-9)-like是导致对头孢菌素类抗生素耐药的主要原因,bla_(inT-1)在CRE多重耐药及耐药基因传播中发挥着巨大的作用。     

广东地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及分子流行病学特征

目的 分析广东地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药形势及分子流行病学特征。方法 对广东地区2019年收集分离的41株CRKP开展抗菌药物敏感性试验鉴定耐药表型,通过全基因组测序分析确定多位点序列分型(MLST)、耐药基因及毒力因子等分子特征,基于全基因组单核苷酸多态性(wgSNPs)分析菌株同源性及遗传进化关系。结果 41株CRKP均为泛耐药菌。耐药基因及可移动遗传元件(MGEs)种类多样,75.61%(31/41)菌株携带碳青霉烯酶基因,包括bla_(KPC-2)(18株)、bla_(NDM-1)(10株)、bla_(NDM-5)(2株)和bla_(IMP-4)(1株)四种类型。其中儿童CRKP主要携带bla_(NDM-1),而成人则为bla_(KPC-2)。bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)分别主要通过质粒IncX3和IncFII传播。MLST分型共获得16种ST型,以ST11型(51.22%,21/41)为主,且均为非毒力株,而ST65型株则为高毒力特征。系统发育关系表明本地区CRKP流行菌群与全球广泛传播的CRKP具有密切的亲缘关系。结论 广东地区CRKP的耐药形势严峻,产KPC-2型碳青霉烯酶是碳青霉烯类抗菌药物产生耐药性的主要机制。菌株的分子分型多态性较大,存在优势克隆ST11型CRKP在医院及医院间广泛流行和传播。并且由于存在多种MGEs分布,需密切关注获得性高毒力高耐药CRKP的出现,加强耐药基因监测,以识别潜在感染播散风险,提高临床预后。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的药敏结果及耐药基因

目的分析某院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的药物敏感性及耐药基因携带情况。方法收集2017年1月—2018年6月该院临床分离的CRKP,对菌株进行药物敏感性分析,应用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因携带情况。结果共收集57株CRKP,主要来源于呼吸道标本,其中痰34株,肺泡灌洗液11株;来源科室主要为神经内科(20株,35.09%)、呼吸内科(15株,26.32%)、重症医学科(9株,15.79%)。CRKP对大部分抗菌药物耐药,部分抗菌药物耐药率相对较低,其中复方磺胺甲口恶唑耐药率最低(15.79%),其次为替加环素(50.88%)、阿米卡星(57.89%)。共检出2种碳青霉烯酶基因(KPC-2、NDM-1),4种超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因(SHV、CTX-M-9、TEM、CTX-M-1)。57株CRKP均检出ESBLs基因,其中39株(68.42%)检出KPC-2基因,仅有1株检出NDM-1基因。结论临床分离的CRKP耐药形势严峻,并且携带多种耐药基因,其中最常见的产碳青霉烯酶为KPC。     

重症耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌肺部感染影响因素及分子流行病学

目的分析重症耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)肺部感染影响因素及分子流行病学特点。方法选取海南西部中心医院及三亚市人民医院肺炎克雷伯菌培养阳性的375例重症肺部感染患者,根据临床标本中是否分离出CRKP分为CRKP组、碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)组。分析重症肺部感染患者CRKP感染危险因素,以改良Hodge试验初筛CRKP碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)、质粒接合试验测定碳青霉烯基因携带与耐药基因水平转移,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析克隆相关性。结果 375例患者中共分离出非重复CRKP 105株,合并2种以上慢性病、感染前住院时间≥3周、留置插管2种、应用碳青霉烯类药物≥1周、近3个月应用三代/四代头孢菌素为CRKP感染的独立危险因素(P0.05);105株CRKP中,91株改良Hodge试验阳性(86.67%);91株改良Hodge试验阳性的CRKP菌株中79株携带bla_(KPC-2)基因(86.81%),33株携带bla_(NDM-1)基因(36.26%),3株携带bla_(IMP-4)基因(3.30%),未发现bla_(VIM)、bla_(OXA)基因;91株CRKP菌株血清型均为阴性,但携带毒力基因uge 87株、mrk D88株、ybtS 84株、kpn 86株、ent B91株,91株CRKP质粒接合试验成功;PFGE聚类结果显示91株CRKP可分为7个克隆型(ST),ST11为主要ST型(58株,63.74%)。结论引起医院重症肺部感染患者CRKP感染的因素较多,而携带bla_(KPC-2)及bla_(NDM-1)基因是主要机制,ST11是其主要克隆型,需尽早制定防控措施。     

血液透析患者血流感染CRKP耐药性及耐药基因型

目的 分析血液透析患者血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药情况及耐药基因型。方法 收集2017年11月-2020年5月于湖州市中心医院血液净化中心治疗的血液透析患者血液标本分离的200株肺炎克雷伯菌，对分离的CRKP菌株进行药敏试验，采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因、血清荚膜分型以及毒力基因，并采用多位点序列分型(MLST)分析CRKP分型。结果 200株血流感染肺炎克雷伯菌中CRKP菌株为53株(26.50%),53株CRKP对几乎所有碳青霉烯类和其他β-内酰胺类抗菌药物耐药，对氨基糖苷类抗菌药物耐药率>45.00%; 53株CRKP共检出48株携带KPC-2、NDM-1、CTM-M9基因菌株，未检出携带碳青霉烯酶基因菌株5株；53株CRKP仅检测到4株K1型菌株，共有58.49%(31/53)CRKP携带毒力基因，rmpA2、iutA为两种主要的毒力基因；53株CRKP中50株为ST11型，ST550、ST1517、ST2230各1株。结论 血液透析患者血流感染CRKP耐药现象较为严峻，其主要耐药机制是携带耐药基因KPC-2,主要毒力基因为rmpA2、iutA,以ST11型为流行序列型。     

血液分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性研究

目的探究血流感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、耐药机制及同源性,以指导临床合理使用抗菌药物。方法收集某院2015-2017年临床分离自血液标本的非重复性CRKP,拉丝试验筛查高毒力肺炎克雷伯菌。改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测碳青霉烯酶表型,PCR法检测血清型基因(K1、K2、K20、K54等)及碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM)、bla_(OXA-48)等),rep-PCR分析同源性。结果共收集到46株CRKP,主要来源于ICU(43.5%)。CRKP除对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和替加环素有较高的敏感性外,对其余抗菌药物的耐药率均大于60.0%。mCIM试验阳性率为93.5%。bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)、bla_(VIM)基因阳性,检出率依次为65.2%、13.0%、10.9%、4.4%。1株同时携带bla_(KPC)、bla_(IMP),1株同时携带bla_(KPC)、bla_(VIM),1株同时携带bla_(IMP)、bla_(NDM),1株同时携带bla_(IMP)、bla_(VIM)。4种血清型基因被检出,K1、K2、K20、K54的检出率分别为4.4%、4.4%、4.4%、2.2%。rep-PCR结果显示46株CRKP分为A～F 6个型,以A型为主(80.4%),主要分布于ICU。值得注意的是,其中1株CRKP被鉴定为碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant hypervirulent K.pneumoniae, CR-hvKP),血清型基因为K2。结论医院血液分离CRKP的耐药性已十分严重,与其携带bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)密切相关,且可能存在克隆性传播。同时,临床已分离出CR-hvKP,应该引起高度重视。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的研究

目的:研究耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及耐药基因类型,为合理使用抗菌药物及监测院内感染等提供有效的科学指导。方法:对医院收治的肺炎患者分离出的29株CRKP,采用改良碳青霉烯类失活(mCIM)试验法检测肺炎克雷伯菌中的碳青霉烯酶,通过聚合酶链反应(PCR)及测序方法对碳青霉烯酶基因KPC、IMP、NDM型、超广谱β内酰胺酶基因(ESBLs)、TEM、SHV、CTX-M型以及AmpC酶基因DHA进行检测。结果:29株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验中7株改良Hodge实验阳性,18株mCIM试验阳性。20株(占68.97%)菌检测到碳青霉烯酶基因,其中KPC为17.24%(5/29),IMP为13.79%(4/29),NDM为37.93%(11/29)。25株(占86.20%)菌检测到ESBLs菌株的基因,其中TEM型为62.07%(18/29),SHV型为79.31%(23/29),CTX-M型为62.07%(18/29)。3株菌检测到AmpC酶基因,其中DHA为10.34%(3/29)。29株CRKP中有14株既表达了碳青霉烯酶基因又表达了ESBLs的基因,共同表达率为48.28%。对耐药基因抽取其中部分阳性结果进行测序后均为目标基因,其中KPC为KPC-2、NDM为NDM-1。结论:29株CRKP对多种抗生素耐药率均较高,且对碳青霉类抗菌药物的耐药基因型主要为KPC-2和NDM-1,故加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。     

呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学

目的了解呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学特点。方法收集陆军军医大学大坪医院2018年1-12月呼吸与危重症医学病房分离的20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,检测其对常用抗菌药物的敏感性,通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增主要的碳青霉烯酶基因(bla_(KPC-2)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(SPM)、bla_(NDM-1)和bla_(OXA-48)),利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果呼吸与危重症医学病房分离的20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对10种常用抗菌药物的耐药率均40.0%; 20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌中有6株携带bla_(VIM)基因,6株携带bla_(SPM)基因,2株携带bla_(KPC)基因,剩余6株未携带耐药基因; PFGE结果显示,20株碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌可分为A～F共6个谱型,其中E型占35%,C型占20%。结论医院呼吸与危重症医学病房分离的碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌主要以产SPM型和VIM型碳青霉烯酶为主,存在部分耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯铜绿假单胞菌在呼吸与危重症医学病房感染暴发流行。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学研究

目的分析武汉两所医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分离株产碳青霉烯酶的情况,以及分子流行病学特征。方法收集武汉两所医院2018年1—10月临床分离的42株非重复CRKP,采用Carba NP试验方法对菌株产碳青霉烯酶情况进行初筛,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因携带情况,采用质粒接合试验分析耐药基因的水平转移情况,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行亲缘关系分析。结果 42株CRKP菌株中14株Carba NP试验阳性,其中有10株扩增出NDM-1基因,3株扩增出KPC-2基因。共13株CRKP碳青霉烯基因检测阳性,其中12株质粒接合试验成功。PFGE分析结果显示,携带NDM-1基因的CRKP菌株共分成6型,无明显优势型;携带KPC-2基因的CRKP菌株为同一型别。结论检出产NDM-1和KPC-2的CRKP菌株,质粒接合试验提示质粒介导的水平传播在碳青霉烯酶基因的播散过程中可能起重要作用。     

儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药机制

目的 探讨儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行病学特征及耐药机制。方法 收集徐州医科大学附属医院2018年3月-2022年3月临床首次分离的儿童感染的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌24株，改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶，聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因，多位点序列分型(MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法检测其同源性。结果 2018年3月-2022年3月分离出24株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌，其中发现NDM-5型CRKP 15株，检出率62.50%,这15株CRKP感染患儿均有基础疾病和抗菌药物使用史；15株NDM-5型CRKP菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类和头孢他啶/阿维巴坦均耐药。MLST分型以ST2735型(25.00%)为主，PFGE分析显示6株ST2735型CRKP具有高度同源性，且均来自于新生儿重症监护室(NICU)。结论 医院NICU存在ST2735型产NDM-5 CRKP的克隆流行，应当加强院感监测及预防，防止其产生新的流行危害。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌脓毒症患者分离株CRKPⅠ类整合子和插入序列共同区分布

目的 分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)脓毒症患者分离株Ⅰ类整合子、插入序列共同区(ISCR)分布情况。方法 选择2020年1月-2021年1月河南省中医院重症监护病房(ICU)收治的脓毒症患者60例，分离非重复CRKP菌株51株，采用全自动微生物鉴定仪行菌株鉴定和药敏试验，聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因及CRKPⅠ类整合子、ISCR分布情况。结果 51株CRKP菌株对碳青霉烯类完全耐药，对β-内酰胺类耐药率>85%,对替加环素和多黏菌素B具有较高敏感性，耐药率分别为9.80%和7.84%;KPC-2基因阳性菌株51株，阳性率为100.00%,SHV基因阳性菌株49株(96.08%),CTX-M9基因阳性菌株36株(70.59%),NDM-1基因阳性菌株6株(11.76%),CTX-M1基因阳性菌株2株(3.92%),未检出VIM、IMP、OXA48及GES阳性菌株；检出Ⅰ类整合子阳性42株(82.35%),其中可变区阳性38株(74.51%),携带耐药基因aadA2和aadA5,检出ISCR阳性5株(9.80%),其中可变区1株，携带耐药基因sul1,检出同时携带...     

合肥某院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力因子分析

目的探讨合肥地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制及毒力因子的特点。方法收集2015年1月-2017年1月合肥市第一人民医院南区分离的38株CRKP,采用全自动微生物系统、改良Hodge试验和EDTA协同试验、基因测序、膜蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对其药敏、耐药表型、耐药基因、毒力位点、膜蛋白突变进行检验。结果 38株CRKP仅替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星和环丙沙星仍保持>60.0%的敏感性,其余均高度耐药。检出32株(84.21%)菌株携带了碳青霉烯酶耐药基因,其中肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶Ⅱ型(KPC-2)26株(68.4%),新德里β-内酰胺酶Ⅰ型(NDM-1)12株(31.58%);同时携带KPC-2和NDM-1 6株(15.8%);31株(81.58%)携带超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因;25株(65.79%)存在膜孔蛋白基因缺失;选取2株膜孔蛋白缺失和2株膜孔蛋白不缺失的菌株进行菌株膜蛋白SDS-PAGE验证与基因检测结果一致。共检出荚膜K1型5株,K57型1株,其他32株属于尚未分型。黏液表型调控基因(rmpA)阳性16株,气杆菌属编码基因(aerobaction)阳性12株,其中10株两者均阳性。所有菌株Ⅰ型菌毛黏附蛋白编码基因(FimH-1)均阳性。结论本次分离的合肥地区CRKP以KPC和NDM型为主,同时检出了携带KPC的K1荚膜型高毒力菌株,应引起重视。     

改良Hodge与Carba NP和mCIM试验快速检测产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的方法学比较

目的比较改良Hodge试验、Carba NP试验及碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌快速表型筛选的能力。方法以PCR扩增肺炎克雷伯菌中携带的碳青霉烯酶相关耐药基因为金标准,比较改良Hodge试验、Carba NP试验及mCIM试验对202株碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌试验菌的筛选能力。结果 202株试验菌经PCR扩增120株耐药基因阳性,产物测序得知75株只携带bla_(KPC-2)基因,20株同时携带bla_(KPC-2)和bla_(VIM-2)基因,19株同时携带bla_(KPC-2)和bla_(IMP-4)基因,3株只携带blaIMP-4基因,2株只携带bla_(VIM-2)基因,1株只携带bla_(NDM-1)基因;120株产碳青霉烯酶试验组菌株对亚胺培南、厄他培南及头孢菌素类抗菌药物的耐药率均为100.00%,对替加环素和多黏菌素B敏感。82株非产碳青霉烯酶的对照菌株对亚胺培南、厄他培南均敏感,对头孢曲松的耐药率为100.00%。以PCR结果为金标准,试验菌通过改良Hodge试验检测的灵敏度为92.50%,特异性为97.56%;Carba NP试验检测的灵敏度为94.17%,特异性为98.78%;mCIM试验检测的灵敏度为98.33%,特异性为100.00%。与PCR结果相比,改良Hodge试验的一致率为94.55%,Kappa值为0.8885;Carba NP试验的一致率为96.04%,Kappa值为0.9188;mCIM试验的一致率为99.01%,Kappa值为0.9796。结论 Carba NP试验和mCIM试验在快速检测产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌较改良Hodge试验具有更高的敏感性和特异性,并且操作简便,适合在临床微生物学实验室、医院感染控制室及疾病预防控制系统各单位普及应用。     

大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带bla_(NDM-1)基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1—12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行bla_(NDM-1)基因筛查,并对bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对bla_(NDM-1)基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带bla_(NDM-1)基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带bla_(NDM-1)基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带bla_(NDM-1)基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导bla_(NDM-1)基因的水平传播。     

产NDM-1、IMP-4和KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药特点

目的探讨本院临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因的携带情况及对17种常用抗菌药物的耐药特点。方法采用VITEK Compact-2全自动微生物分析系统进行菌株的鉴定和药敏试验,收集耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌24株,采用改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;PCR技术扩增耐药基因,包括碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和Amp C酶基因,并对扩增产物进行测序和BLAST比对分析。结果菌株对头孢菌素类、单环内酰胺类、β-内酰胺酶抑制剂复合物、氟喹诺酮类和呋喃妥因等抗菌药物表现出较高的耐药性,但对氨基糖苷类药物丁胺卡那和妥布霉素的敏感性较好,敏感率分别为100.0%和62.5%。24株耐药菌株中,有16株改良Hodge试验阳性,阳性率为66.7%;PCR扩增结果显示:12株检测出blaKPC-2基因,3株检测到blaIMP-4基因,2株blaNDM-1阳性,所有菌株都携带blaSHV基因,12株携带blaTEM基因,13株携带blaCTX-M基因,7株携带blaDHA基因。结论本院CRKP以产KPC-2为主,但同时还出现了NDM-1和IMP-4金属酶。     

多重PCR检测肠杆菌科细菌碳青霉烯类耐药基因型

目的采用多重PCR技术快速、高效检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药基因型,为CRE的预防和控制提供依据。方法收集北京积水潭医院住院患者分离得到的58株CRE菌株。CRE菌株表型检测采用改良Hodge试验和亚胺培南/亚胺培南联合EDTA E-test协同试验进行。CRE菌株基因型检测采用多重PCR扩增反应体系(包括11对碳青霉烯酶基因引物:A组为bla_(IMP),bla_(SPM),bla_(VIM),B组为bla_(BIC),bla_(NDM),bla_(KPC),bla_(OXA),C组为bla_(AIM),bla_(GIM),bla_(SIM),bla_(DIM))。对bla_(KPC)阳性的肺炎克雷伯菌行全酶基因编码区PCR扩增及产物测序。结果 58株CRE菌株中52株为肺炎克雷伯菌,占89.66%; 3株为大肠埃希菌,占5.17%; 2株为阴沟肠杆菌,占3.45%; 1株为弗劳地枸橼酸杆菌,占1.72%。改良Hodge试验阳性52株(89.66%),亚胺培南/亚胺培南联合EDTA E-test协同试验阳性2株(3.45%)。CRE中检出bla_(IMP)基因型1株(1.72%),为肺炎克雷伯菌;bla_(KPC)基因52株(89.66%),其中肺炎克雷伯菌为50株(86.21%),2株为大肠埃希菌(3.45%);bla_(NDM)基因1株(1.72%),为阴沟肠杆菌; 11种基因检测全阴性为4株(6.90%),分别为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、弗劳地枸橼酸杆菌各1株,基因检测阳性者均无重叠。bla_(KPC)基因阳性的肺炎克雷伯菌全酶基因编码区测序结果为bla_(KPC-2)亚型。结论北京积水潭医院患者检出的CRE中,以肺炎克雷伯菌为主。共检测出3种基因型,其中bla_(KPC-2)型是医院CRE的主要基因型,提示医院感控部门要加强对肺炎克雷伯菌耐药的监控,避免耐药率进一步上升。     

三亚地区医院肠杆菌科细菌分子流行病学研究

目的探讨三亚地区医院耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌(CRE)的耐药性及耐药基因的携带情况。方法收集医院2014年1月-2018年1月临床分离的肠杆菌科细菌标本1 699份,并对其中复苏成功的29株CRE和2株多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-AB)用改良Hodge试验(MHT)检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因NDM-1、KPC-2,并对扩增产物进行测序确认。结果 1 699株肠杆菌中共检出CRE50株,检出率为2.94%。CRE对阿米卡星耐药率较低为38.00%,对其他临床常用抗菌药物均表现出较高的耐药率(≥50.00%)。所研究的29株CRE中2株MHT试验阳性,阳性率为6.90%;26株扩增出碳青霉烯酶基因,检出率89.66%,其中21株携带NDM-1、11株携带KPC-2,6株同时具有NDM-1和KPC-2基因。1株MDR-AB同时含有NDM-1和KPC-2基因。结论医院检出CRE菌株所携带耐药基因以NDM-1为主,本地区的耐药菌流行具有热带地区的特点,具有一定的临床意义。     

血流感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力因子研究

目的对临床血流感染分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药机制及毒力特点进行分析。方法连续收集2013年1月-2016年12月衢州市人民医院临床血流感染分离的CRKP 28株,采用Micro Scan Walk Away-96对菌株进行鉴定和药敏试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验分别检测碳青霉烯酶和金属酶,PCR方法检测耐药基因、荚膜血清型及毒力基因,多位点序列分析(MLST)进行细菌同源性分析。结果 28株血流感染的CRKP对大多数抗生素保持较高的耐药率。未发现膜孔蛋白编码基因Omp K35和Omp K36缺失株,检出KPC-2型27株(96.4%),为ST11。检出荚膜血清K5型1株,为ST1049,该菌未检测到常见的耐药基因。CRKP菌株普遍携带fim H、mrk D、ent B和ybt S毒力基因,其他毒力基因的阳性率较低。结论本院临床血流感染分离的CRKP主要耐药机制是携带KPC-2基因,序列型ST11是全国范围主要的流行序列型。CRKP个别菌株携带多种毒力因子,应引起临床重视。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌产酶耐药机制及同源性分析

目的探讨肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要产酶机制及同源性。方法收集长沙市第一医院2016年12月-2017年12月临床分离的非重复碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,聚合酶链反应(PCR)法检测常见耐药编码基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析同源性。结果共收集到57株CRKP,mCIM试验阳性率为91.23%(52/57)。PCR共检出6种耐药基因,包括blaSHV、blaCTX-M-9群、blaKPC-2、blaTEM、blaCTX-M-1群和blaNDM-1,检出率分别为94.74%、68.42%、68.42%、56.14%、3.51%和1.75%,其中2株携带blaCTX-M-1群的菌株经测序证实为blaCTX-M-80和blaCTX-M-123,blaCTX-M-9群中1株为blaCTX-M-27,2株为blaCTX-M-14,其余均为blaCTX-M-65。PFGE结果显示,57株CRKP可分为A~H共8种不同的型别,以A型为主,占76.79%,其中A6亚型占32.56%。MLST结果显示,共检出ST11和ST29两种型别,以ST11为主,占75.00%。结论该院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制为产KPC-2型碳青霉烯酶,且同时携带多种超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。PFGE和MLST结果表明:该院临床分离的CRKP存在克隆传播,需加强流行病学监控。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC-2与NDM-1基因的研究

目的检测耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况以及KPC-2和NDM-1耐药基因的检出,分析耐碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况;PCR法检测KPC-2及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果 29株分离菌中26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南-EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,占55.17%,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是产碳青霉烯酶。