革兰阴性菌中16SrRNA甲基化酶基因的检测

目的 了解大连2所医院临床分离革兰阴性菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB的流行情况,并研究其耐药机制.方法 收集临床分离的耐阿米卡星的革兰阴性杆菌134株.PCR法筛选2种甲基化酶基因armA及rmtB;PCR产物进行测序.质粒提取、接合试验及转化试验确定armA及rmtB基因定位.琼脂稀释法测定阳性菌株、结合子和转化产物对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3种氨基糖苷抗生素的MIC值.结果 134株耐药菌株中,21株鲍曼不动杆菌检出armA基因,5株大肠埃希菌和5株肺炎克雷伯菌检出rmtB基因.质粒抽提试验及接合试验rmtB阳性菌获得成功.接合子及转化产物DH5a(pMDarmA)均获得高水平耐氨基糖苷类抗生素的特性. 结论 大连2所医院检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株.armA基因存在于鲍曼不动杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒上.armA和rmtB可以导致细菌对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药.     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因的研究

目的调查16S rRNA甲基化酶基因在我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的表达情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供依据。方法用微量稀释法和纸片扩散法测定菌株的药敏情况。PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因在46株多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况。结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,40株armA基因阳性,未检出rmtB基因,16S rRNA甲基化酶基因携带率为87%(40/46)。结论我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带率很高,可能与氨基糖苷类耐药有关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2007年7—10月间南京地区住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶(armA、rmtB)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性株10株、aac(3)-Ⅱ阳性株1株、aac(6′)-Ⅰb基因阳性株13株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株12株;ant(2″)-Ⅰ基因、aac(6′)-Ⅱ基因及aac(6′)-Ⅰad基因均为阴性。结论南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;尚未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型———aac(6′)-Ⅰad基因和16S rRNA甲基化酶armA、rmtB基因。     

氨基糖苷类耐药的肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的探讨临床分离的对氨基糖苷类耐药的肠杆菌科细菌产16S rRNA甲基化酶状况,分析其分子流行趋势及其耐药性形成和传播的机制。方法采用纸片扩散法筛选庆大霉素和/或阿米卡星耐药的肠杆菌科细菌;采用聚合酶链反应(PCR)扩增16S rRNA甲基化酶基因、氨基糖苷修饰酶基因、β-内酰胺酶基因;采用质粒接合试验验证16S rRNA甲基化酶的转移性;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株进行分型。结果 201株对庆大霉素和/或阿米卡星耐药的肠杆菌科细菌中共检出38株16S rRNA甲基化酶阳性株(armA基因16株,rmtB基因22株)。其中30株可通过接合试验将耐药质粒转移至受体菌。blaCTX-M-14、blaTEM-1和blaSHV-12可连同armA或rmtB分别转移到11、20和7个接合子中。肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌分别被PFGE分为4、21和1个型别。结论本研究分离的肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶以armA和rmtB为主要流行型别,且后者分离率较高。该甲基化酶可导致氨基糖苷类高水平耐药,而且酶编码基因位于质粒上,具有转移性,β-内酰胺酶基因和氟喹诺酮耐药决定因子可随之一同转移。     

耐氨基糖苷类抗生素鲍曼不动杆菌中armA和rmtB甲基化酶基因的检测

目的了解我院临床分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,并检测其耐药基因。方法收集我院2009年1—10月临床分离鲍曼不动杆菌共80株,采用CLSI推荐的纸片扩散法（K-B法）对分离菌株进行抗生素敏感试验。用PCR法筛选2种甲基化酶基因armA、rmtB,并对阳性标本进行测序。结果 80株鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、链霉素和奈替米星的耐药率分别为66.2%、72.5%、87.5%和68.8%,对4种氨基糖苷类抗生素全部耐药52株（65%）,耐药菌株中armA基因阳性48株（60%）,未检出rmtB阳性菌株。结论近年来我院鲍曼不动杆菌分离率逐年增高,16S rRNA甲基化酶基因armA在鲍曼不动杆菌广泛存在,且对多种抗生素耐药,应引起临床医师高度关注。     

阴沟肠杆菌16SrRNA甲基化酶基因分布

目的：了解湖南邵阳地区耐氨基糖苷类抗菌药物的阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因分布特点及其与氨基糖苷类抗菌药物耐药性的关系。方法收集2012年8月至2014年5月邵阳地区新宁县人民医院、武岗市人民医院、邵阳县人民医院和邵阳医学高等专科学校附属医院临床样本中分离的241株阴沟肠杆菌,采用API20E进行菌种鉴定,同时用纸片扩散法进行体外药物敏感性试验。采用聚合酶链反应（ PCR）进行armA、npmA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD基因检测,分析耐药基因与耐药表型的关系。结果241株阴沟肠杆菌中200株对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种氨基糖苷类抗菌药物耐药,其耐药率分别为41．9％、68．5％、70．1％和63．5％。基因检测结果提示,241株阴沟肠杆菌检出2种16S rRNA甲基化酶基因,分别为armA（96株,39．8％）和rmtB（17株,7．1％）,未检出npmA、rmtA、rmtC和rmtD基因。结论16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷类抗菌药物的耐药性有相关性。不同地区分离的对氨基糖苷类药物耐药的阴沟肠杆菌菌株携带16S rRNA甲基化酶的基因型有一定差异,湖南邵阳地区阴沟肠杆菌以携带armA基因为主。     

肠杆菌科细菌对氨基糖苷类的耐药性及16S rRNA甲基化酶基因的检测研究

目的了解氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的分布、耐药情况,及16S rRNA甲基化酶基因型的分布,为临床用药提供参考依据。方法收集宁夏医科大学总医院2017年临床分离的非重复肠杆菌科细菌142株,细菌鉴定采用VITEK-2Compact系统,药敏试验采用肉汤微量稀释法,PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH、npmA)。结果 142株肠杆菌科细菌中72株对氨基糖苷类耐药。这72株菌对头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨曲南的耐药率均≥77.1%,对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率≥51.4%,对头孢他啶-阿维巴坦、替加环素的耐药率10%,对碳青霉烯类耐药率≤40.0%。氨基糖苷类敏感株对多数抗菌药物的耐药率低于氨基糖苷类耐药株。氨基糖苷类耐药株中有71株检出16S rRNA甲基化酶基因,总阳性率为50.0%(71/142),在氨基糖苷类耐药株中的阳性率为98.6%(71/72)。71株中rmtB 54株,占76.1%;armA 14株,占19.7%;rmtA 2株,占2.8%;rmtB+armA 1株,占1.4%。未检出rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH和npmA基因。结论 rmtB和armA 16S rRNA甲基化酶是该院临床分离肠杆菌科细菌对氨基糖苷类耐药的主要机制。     

大肠埃希菌临床分离株质粒介导16S rRNA甲基化酶基因的检测及转移机制研究

近年来,发现一类质粒介导的16S rRNA甲基化酶,该酶能够保护细菌的30S核糖体的16s rRNA不与氨基糖苷类药物结合,造成其对包括阿贝卡星在内的所有的氨基糖苷类药物耐药,并且为高水平耐药~[1-4].目前,在革兰阴性杆菌中已发现ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD和NpmA 6种16SrRNA甲基化酶,且该酶通常和ESBL基因共处一个质粒上,通过质粒在不同的菌株之间播散~[2-3,5-6].我们在前期的研究中发现肺炎克雷伯菌临床分离株中存在rmtB和armA两种16S rRNA甲基化酶基因~[7],16S rRNA甲基化酶基因也可能存在于大肠埃希菌临床分离株中.在本研究中,我们对从温州医学院附属第一医院2006年1月至2008年7月临床标本中分离的680株大肠埃希菌进行了16S rRNA甲基化酶基因筛查,并对其转移机制进行了研究.     

广泛耐药铜绿假单胞菌甲基化酶基因的检测和基因周边结构分析

目的了解16S rRNA甲基化酶基因在广泛耐药(XDR)铜绿假单胞菌临床株中的分布及此类耐药基因周边结构。方法收集XDR铜绿假单胞菌59株,琼脂稀释法测定MIC,PCR方法检测16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmt A,rmtB,rmtC,rmtD,rmtE,npmA),ERIC-PCR方法进行同源性分析,并对检出的16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB进行周边序列分析。结果 59株XDR铜绿假单胞菌临床分离株中,16S rRNA甲基化酶基因总检出率62.7%(37/59),rmtB的检出率略高于armA,未检出其他甲基化酶基因。根据ERIC-PCR结果受试临床株可分为19个型别。17株检出armA基因菌株分布在3个克隆,其中15株(88.2%)集中在一个克隆(克隆D);而rmtB基因散布于9个克隆。基因周边序列分析显示,armA基因位于一个含多种转座酶的移动元件上,其与大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌携带的armA阳性质粒序列一致性达99%;rmtB基因也位于一个含转座酶的移动元件上,其与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带的rmtB质粒序列高度一致。结论 16S rRNA甲基化酶基因在XDR铜绿假单胞菌分离株中分布广泛,均在对庆大霉素高度耐药的菌株中检出。armA在铜绿假单胞菌中存在克隆传播。     

16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研究进展

16S rRNA甲基化酶能够造成对包括阿贝卡星在内的所有氨基糖苷类抗生素耐药,并且为高水平耐药。自2003年在革兰阴性杆菌临床分离株中发现第一个质粒介导的16S rRNA甲基化酶ArmA以来,已发现7种质粒介导的16S rRNA甲基化酶,包括ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE和NpmA。16S rRNA甲基化酶基因通常和ESBL基因位于同一可转移的质粒上,造成多重耐药。世界各地在革兰阴性杆菌临床分离株中检测出16S rRNA甲基化酶,而我国分离的临床分离株中只检测出ArmA和RmtB。16S rRNA甲基化酶是导致革兰阴性杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药及其携带基因的探讨

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药情况和耐药表型及其携带基因的关系。方法收集48株鲍曼不动杆菌,用K-B法和琼脂稀释法检测其对阿米卡星的敏感性,PCR法扩增aac(6′)Ⅰ基因以及3种16SrRNA甲基化酶基因(armA、rmtB及rmtC基因)。结果 72.9%(35/48)菌株对阿米卡星表现为双圈耐药,其中100.0%菌株检出armA基因,未检出rmtB、rmtC基因,77.1%(27/35)菌株检出aac(6′)Ⅰ基因;10.4%(5/48)菌株对阿米卡星普通耐药,均未检出16SrRNA甲基化酶基因,其中80.0%(4/5)菌株检出aac(6′)Ⅰ基因;16.7%(8/48)菌株对阿米卡星敏感,未检出相关耐药基因。结论鲍曼不动杆菌对阿米卡星的耐药情况非常严重;双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关。     

Emergence of ArmA and RmtB aminoglycoside resistance 16S rRNA methylases in Belgium

OBJECTIVES: 16S rRNA methylase-mediated high-level resistance to aminoglycosides has been reported recently in clinical isolates of Gram-negative bacilli only from a limited number of countries. This study was conducted to investigate the occurrence of this type of resistance in clinical isolates of Enterobacteriaceae from two Belgian hospitals and the characteristics of the strains. METHODS: We screened for high-level gentamicin, tobramycin and amikacin resistance in clinical isolates of Enterobacteriaceae consecutively collected between 2000 and 2005 at two laboratories by PCR for the armA, rmtA and rmtB 16S rRNA methylase genes. The beta-lactamase presence in the strains was also determined by phenotypic and genotypic methods. RESULTS: Overall armA genes were detected in 18 Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae and Citrobacter amalonaticus whereas rmtB was detected in a single E. coli isolate. The rmtA gene was not found. All 16S rRNA methylase-bearing strains produced extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs), predominantly type CTX-M-3, as well as various types of beta-lactamases. In the majority of the strains, the armA gene was carried by conjugative plasmids of the IncL/M incompatibility group whereas rmtB was borne by an IncFI plasmid. CONCLUSIONS: This is the first report of the emergence of 16S rRNA methylases in Enterobacteriaceae in Belgium. The rapid spread of multidrug-resistant isolates producing both ESBLs and 16S rRNA methylases raises clinical concern and may become a major therapeutic threat in the future.     

多重耐药不动杆菌16S rRNA甲基化酶和同源性研究

目的 调查2007年7月-2008年5月山西医科大学第二附属医院临床分离的61株多重耐药不动杆菌中介导氨基糖苷类抗生素高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子携带耐药基因的分布.方法 利用blaOXA-51基因及16S rRNA-23S rRNA序列进行菌株鉴定,琼脂稀释法测定12种抗菌药物对61株不动杆菌的MIC,PCR筛选6种16S rRNA甲基化酶基因以及整合子基因盒,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性.结果 61株临床分离不动杆菌中55株为鲍曼不动杆菌、3株为3TU不动杆菌、l株13TU不动杆菌、1株醋酸钙不动杆菌、l株溶血不动杆菌.48株不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素均耐药,其中有47株检出armA基因;未检出rmtA、rmtB、rmtC、mad和npmA基因.armA基因阳性的菌株中Ⅰ类整合子阳性27株,分别携带arr-3、accA4、aacCl、catB8、aadA1和dfrA12基因.PFGE条带分析发现47株armA阳性菌株分为5个克隆,其中A、B为主要克隆,分布在我院多个科室中.结论 16S rRNA甲基化酶基因armA在多重耐药不动杆菌中广泛存在,armA基因不位于Ⅰ类整合子中,不动杆菌Ⅰ类整合子携带耐药基因主要介导对氨基糖苷类及氯霉素的耐药性.PFGE结果显示armA基因阳性菌株在我院呈克隆播散,必须采取有效的措施来控制耐药菌的传播.     

16SrRNA甲基化酶基因在产ESBLs肠杆菌科细菌中的分布

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的革兰阴性肠杆菌科细菌中16SrRNA甲基化酶基因的分布情况。方法对临床分离的70株革兰阴性肠杆菌科细菌用VITEK．32型全自动微生物分析系统进行细菌鉴定,用纸片扩散法检测ESBLs,并用聚合酶链反应（PCR）检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA6种16SrRNA甲基化酶基因,对检测的阳性产物进行测序,并通过GenBank比对DNA序列。结果70株产ESBLs革兰阴性肠杆菌中,9株16SrRNA甲基化酶基因阳性,其中5株检出armA基因,4株检出rmtB基因,2株同时检出armA和rmtB基因,rmtA、rmtC、rmtD、npmA4种基因扩增均为阴性。结论不同地区医院16SrRNA甲基化酶基因的分布情况各不相同。     

Emergence of RmtB methylase-producing Escherichia coli and Enterobacter cloacae isolates from pigs in China

OBJECTIVES: To investigate the occurrence of 16S rRNA methylases conferring high-level resistance to aminoglycosides in Enterobacteriaceae isolated from two pig farms in China. METHODS: Enterobacteriaceae isolated from 151 pig rectal swab samples and 9 environmental samples were screened for the presence of the rmtA, rmtB, armA and rmtC genes by PCR and sequencing. Conjugation experiments were carried out to study the transferability of the 16S rRNA methylase genes. All isolates and their transconjugants were tested for susceptibility to antimicrobial agents. The clonal relatedness of RmtB-producing Escherichia coli was assessed by PFGE with XbaI. RESULTS: Of 152 Enterobacteriaceae isolates recovered from pigs, 49 (32%) were positive for the rmtB gene, including 48 E. coli and a single isolate of Enterobacter cloacae. Of the nine Enterobacteriaceae isolates from environmental samples, no 16S rRNA methylase gene was identified. The 49 rmtB-positive isolates showed resistance to ampicillin, tetracycline and trimethoprim and also carried a bla(TEM) gene. Transfer of the rmtB and bla(TEM) genes by conjugation experiments of all 49 isolates was successful, suggesting that the rmtB-containing plasmids in the E. coli and E. cloacae isolates were self-transmissible. Conjugative transfer frequencies varied from 2.2 x 10(-10) to 1.3 x 10(-6) transconjugants per recipient. The transfer of non-aminoglycoside antimicrobial resistance traits was also observed in most cases. Forty-four rmtB-positive E. coli showed 30 different PFGE types. CONCLUSIONS: The rmtB gene was detected on conjugative plasmids of porcine E. coli and E. cloacae isolates. Both horizontal gene transfer and clonal spread were responsible for the dissemination of the rmtB gene. The emergence of 16S rRNA methylases in Enterobacteriaceae isolates is described for the first time in China. This is also the first report of rmtB-positive Enterobacteriaceae among healthy food-producing animals.     

质粒介导16S rRNA甲基化酶肺炎克雷伯菌临床分离株的检测及分子流行病学研究

目的 调查165 rRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌临床分离株中的流行情况.方法 收集我院2006年1月至2007年9月从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌337株,所有菌株均为非重复株.菌种鉴定采用全自动微生物分析仪,庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的药敏试验采用琼脂稀释法.超广谱B内酰胺酶(ESBLs)检测采用美国临床和实验窒标准协会(CLSI)规定的纸片确证法.使用PCR检测16S rRNA甲基化酶基因、整合酶基因和ESBL基因.接合试验检测质粒的可转移性;脉冲场电泳分析菌株的同源性.结果 337株肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为19.0%(64/337)、8.3%(28/337)和16.3%(55/337).21株16S rRNA甲基化酶基因阳性,阳性率为6.2%(21/337),其中13株rmtB阳性、3株armA阳性、5株rmtB和atmA同时阳性.所有16S rRNA甲基化酶基因阳性株对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星同时耐药且都为高度耐药(MICs≥256μL),21株甲基化酶基因阳性株有19株产ESBLs,ESBL基因主要为CTX-M-14-like、CTX-M-15-like和SHV-12-like.21株均为Ⅰ类整合酶基因阳性.13株通过接合试验把质粒传递给受体菌E. coliJ53.所有接合子Ⅰ类整合酶基因阳性、blaTEM-1基因阳性、产ESBLs及对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和复方磺胺甲噁唑耐药,对其他抗菌药物敏感.接合子ESBL基因型与供菌一致.21株16S rRNA甲基化酶基因阳性株经脉冲场凝胶电泳(PFGE)分成14个基因型,主要为A型和Ⅰ型.结论 armA和rmtB型16S rRNA甲基化酶基因已经在肺炎克雷伯菌中播散,既可通过克隆株播散也可通过接合性质粒在不同菌株间播散.     

Dissemination of 16S rRNA methylase-mediated highly amikacin-resistant isolates of Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter baumannii in Korea

Novel 16S rRNA methylase-mediated high-level resistance to amikacin and arbekacin has been reported recently in clinical isolates of Gram-negative bacilli only from several countries. We tested amikacin- or arbekacin-nonsusceptible Gram-negative bacilli isolated in 2003 and 2005 at a tertiary-care hospital in Korea by polymerase chain reaction to detect 16S rRNA methylase genes. armA alleles were detected in 14 isolates of Klebsiella pneumoniae, 10 other species of Enterobacteriaceae, and 16 Acinetobacter baumannii, whereas the rmtB allele was detected in 1 K. pneumoniae isolate. The resistance 1st detected in 2003 persisted in 2005. 16S rRNA methylase-producing isolates were highly resistant to arbekacin and amikacin, and were mostly coresistant to levofloxacin. Most K. pneumoniae isolates also produced extended-spectrum beta-lactamases and plasmid-mediated AmpC beta-lactamases, and most A. baumannii isolates were nonsusceptible to carbapenems.     

Plasmid-mediated 16S rRNA methylase in Serratia marcescens conferring high-level resistance to aminoglycosides

Serratia marcescens S-95, which displayed an unusually high degree of resistance to aminoglycosides, including kanamycins and gentamicins, was isolated in 2002 from a patient in Japan. The resistance was mediated by a large plasmid which was nonconjugative but transferable to an Escherichia coli recipient by transformation. The gene responsible for the aminoglycoside resistance was cloned and sequenced. The deduced amino acid sequence of the resistance gene shared 82% identity with RmtA, which was recently identified as 16S rRNA methylase conferring high-level aminoglycoside resistance in Pseudomonas aeruginosa. Histidine-tagged recombinant protein showed methylation activity against E. coli 16S rRNA. The novel aminoglycoside resistance gene was therefore designated rmtB. The genetic environment of rmtB was further investigated. The sequence immediately upstream of rmtB contained the right end of transposon Tn3, including bla(TEM), while an open reading frame possibly encoding a transposase was identified downstream of the gene. This is the first report describing 16S rRNA methylase production in S. marcescens. The aminoglycoside resistance mechanism mediated by production of 16S rRNA methylase and subsequent ribosomal protection used to be confined to aminoglycoside-producing actinomycetes. However, it is now identified among pathogenic bacteria, including Enterobacteriaceae and P. aeruginosa in Japan. This is a cause for concern since other treatment options are often limited in patients requiring highly potent aminoglycosides such as amikacin and tobramycin.     

16SrRNA、16S-23SrRNA基因测序分析检测主要血流感染病原菌比较

目的比较细菌16SrRNA、16S-23SrRNA基因测序分析在血流感染病原菌检测中的作用。方法提取临床上血流感染常见的金黄色葡萄菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、化脓性链球菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌、屎肠球菌、粘质沙雷菌、宋内志贺菌、产气肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、腐生葡萄球菌基因组DNA,运用16SrRNA、16S-23SrRNA基因进行PCR扩增。扩增产物经测序后在美国国家生物技术中心（NCBI）上进行比对分析,确定菌种。结果在所分析的19种临床血流感染常见细菌中,16SrRNA基因测序分析可将除粘质沙雷菌外的细菌鉴定到种的水平,但无法完全区分近缘种属;16S-23SrRNA成功鉴定17种细菌,除大肠埃希菌、宋内志贺菌外所有细菌均成功鉴定到单一种的水平。结论16S-23SrRNA基因可作为血流感染细菌检测较好的分子靶标。     

大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶基因的接合传递及其与整合子的相关性

目的 对临床分离的多重耐药（MDR）大肠埃希菌株的16S rRNA甲基化酶基因特征与接合传递效率进行研究,探讨其与整合子的相关性。 方法 136株MDR大肠埃希菌经PCR筛检16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD;对阳性菌株作整合酶基因intI1、intI2和intI3检测,并扩增Ⅰ类整合子可变区插入片段,对扩增产物进行测序与鉴定所含耐药基因盒;以阳性菌株为供体菌,耐叠氮化钠大肠埃希菌J53为受体菌进行接合试验,并结合质粒图谱对16S rRNA甲基化酶基因进行初步定位。 结果 在136株多重耐药大肠埃希菌中,共检出16S rRNA甲基化酶阳性菌12株（8.8%）,其中,armA阳性3株（2.2%）,rmtB阳性10株（7.4%）,未检出rmtA、rmtC、rmtD基因。阳性菌株均只含Ⅰ类整合子,对其可变区扩增片段（1 000～2 300 bp）的测序结果显示,该区域含有多种耐药基因盒,但不含16S rRNA甲基化酶基因。接合试验与质粒图谱结果初步表明armA和rmtB编码基因位于约23 000 bp的质粒上,接合试验的耐药质粒传递率高达83.3%(10/12)。 结论 在MDR大肠埃希菌中,armA和rmtB编码基因位于约23 000 bp质粒上,其中,rmtB为优势基因,接合试验和质粒图谱证明该类耐药质粒很容易在同种菌间传播。Ⅰ类整合子与16S rRNA甲基化酶基因虽然存在于同一菌体内和/或同处于一个质粒上,但整合子基因盒对该类基因的捕获率很低或根本不捕获。