基于体外染色体畸变试验评价纳米银敷料遗传毒性的研究

目的:通过体外染色体畸变试验来检测纳米银敷料引起遗传毒性的可能性,为临床前安全性评价提供资料与提示。方法:根据《GB/T16886.3-2008/ISO 1099-3:2014》中推荐的方法选用中国仓鼠肺细胞(CHL)进行体外哺乳动物细胞染色体畸变试验(CAT),在代谢活化系统(+S9)与非代谢活化系统(-S9)条件下,检测纳米银敷料浸提液在+S9/6h、-S9/6h、-S9/24h三种处理条件下诱发CHL细胞的染色体畸变率。结果:纳米银敷料各处理组的染色体畸变率与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05)。在与CHL接触24h后,细胞出现了明显形态改变。结论:在该试验条件下,纳米银敷料浸提液对CHL细胞的染色体无明显损伤作用,在24h接触组中出现了明显的细胞毒性。     

碲化镉量子点对CHL细胞染色体畸变作用研究

目的探讨碲化镉量子点(CdTe QDs)对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变作用。方法用体外方法检测CdTe QDs在1.6、3.2、6.3、12.6、25.2μl/ml染毒浓度范围内,在代谢活化条件下(+S9)及非代谢活化条件下(-S9)CHL细胞的染色体畸变率。结果 CdTe QDs的代谢活化组(+S9)在染毒浓度为2.6μl/ml和25.2μl/ml浓度组CHL细胞染色体畸变率与对照组比较,显著增加(P<0.01),染色体畸变类型主要是染色体断裂、交换和碎片等。结论 CdTe QDs在代谢活化条件下(+S9)可能导致CHL细胞染色体畸变。     

顺爽滋养去屑型洗发露CHL细胞体外染色体畸变试验

目的:检测顺爽滋养去屑型洗发露对CHL细胞染色体致畸变作用。方法:用体外方法检测顺爽洗发露在0.5 mg/ml、0.25 mg/ml、0.125 mg/ml时,代谢活化组(含S9mix)及非活化组(不含S9mix)CHL细胞的染色体畸变率。结果:顺爽洗发露代谢活化组(含S9mix)及非活化组(不含S9mix)的染色体畸变率均低于5%。结论:在本实验条件下顺爽滋养去屑型洗发露未诱发CHL细胞染色体畸变率增加。     

亚硝酸钠对中国仓鼠肺细胞染色体畸变率的影响

[目的]研究亚硝酸钠(NaNO2)致中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变的作用. [方法]测定NaNO2对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行正式实验,分别观察不加及加S9后的染色体畸变情况,根据标准进行结果判定. [结果]NaNO2染毒在不加S9时,128、12.8和1.28μg/ml 3个剂量组的染色体畸变率均＞5%而≤10%,为可疑阳性,而高剂量组(1.28 mg/ml)畸变率＞10%而＜20%,为阳性反应.NaNO2染毒在加入活化系统S9后,各剂量组引起CHL细胞染色体畸变率在12.8和1.28 μg/ml 2个剂量组的染色体畸变率均＞5%而≤100%,为可疑阳性,而中(128μg/ml)和高(1.28 mg/ml)剂量组畸变率均＞10%而＜20%,为阳性反应. [结论]NaNO2在1.28 mg/ml剂量下可引起CHL细胞染色体畸变率增高.     

1，1-二氨基2，2-二硝基乙烯对哺乳动物细胞致突变性研究

在非代谢活化（-S9）和代谢活化（+S9）条件下，以1，1-二氨基-2，2-二硝基乙烯（FOX-7）处理小鼠淋巴瘤L5178Y细胞和中国仓鼠肺CHL细胞，进行体外哺乳动物细胞TK基因突变试验和染色体畸变试验。结果显示，分别以500、250、125 μg/ml浓度的FOX-7处理L5178Y细胞，各剂量组突变频率与溶剂对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05），且具有剂量相关性；分别以300、200、100 μg/ml浓度FOX-7处理CHL细胞，各剂量组染色体畸变细胞率与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。提示FOX-7可能对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因具有致突变性，对中国仓鼠肺CHL细胞染色体无致突变性。     

重组葡激酶致突变作用研究

目的研究重组葡激酶的致突变作用.方法CHL细胞染色体畸变试验(±S9),剂量为4125、8250、16500AU/ml、Ames试验(±S9),剂量为16.5、165、1650、16500、165000AU/ml)和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验(肌肉注射剂量为83.5、167.0、334.0mg/kg).结果CHL细胞染色体畸变率均小于5%;各剂量组TA97、TA98、TA100、TA102各试验菌株MR＜2;各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率均小于2.00‰.结论重组葡激酶在本试验条件下无致突变作用.     

医用胶原膜浸提液对CHL细胞染色体畸变作用的研究

目的：研究医用胶原膜用于医学领域的遗传毒性。方法：在代谢活化和非代谢活化测试系统下对胶原膜浸提液进行中国仓鼠肺（CHL）细胞的染色体畸变试验。结果：胶原膜浸提液终浓度在31.25～250μl/ml时,观察24h和48h收集的染色体,畸变率均在正常范围（〈5%）。直接诱变剂丝裂霉素C（0.20μg/ml）,在非代谢活化时染色体畸变率为31%～40%,间接诱变剂环磷酰胺（60μg/ml）在S9代谢活化时染色体畸变率为37%～46%,均使染色体畸变率增加。结论：在本实验条件下医用胶原膜浸提液未诱发CHL细胞染色体畸变率增加。     

育发剂对中国仓鼠肺细胞活力和染色体畸变的影响研究

目的评估2种育发剂对中国仓鼠肺细胞(CHL)细胞活力的影响及其诱导染色体畸变的能力。方法在非代谢活化和代谢活化情况下,采用MTT法和体外哺乳动物细胞染色体畸变试验检测2种(编号A和B)育发剂对CHL细胞活力和染色体畸变率的影响。结果 A育发香波在不含S9的系统中,受试物终浓度为0.156μl/ml时细胞存活率为54.9%;在含S9的系统中,受试物终浓度为0.313μl/ml时细胞存活率为52.4%;B育发膏在不含或含S9的系统中,受试物终浓度为5 mg/ml时细胞存活率均超过90%。与对照组比较,A育发香波各剂量组的染色体畸变率差异无统计学意义(不加S9的体系下Pearson Chi-Square值=0.341,P=0.952,在S9体系下的Pearson Chi-Square值=0.687,P=0.876),B育发膏在加S9和不加S9试验体系下高剂量组的染色体畸变率与阴性对照组相比,有显著性差异(不加S9的体系下Pearson Chi-Square值=16.611,P=0.000,在S9体系下的Pearson Chi-Square值=11.971,P=0.01;重复试验不加S9的体系下Pearson Chi-Square值=15.457,P=0.000,在S9体系下的Pearson Chi-Square值=15.341,P=0.000),低、中剂量组的染色体畸变率无显著性差异(不加S9的体系下Pearson Chi-Square值=0.000,P=1.000,在S9体系下的Pearson Chi-Square值=0.687,P=0.709)。结论在本实验条件下,A育发香波无致突变性,B育发膏有致突变性。     

盐附子遗传毒性研究

[目的]选用目前新药遗传毒性评价中推荐使用的3种试验方法(小鼠骨髓微核试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、体外CHL细胞染色体畸变试验)研究盐附子的遗传毒性. [方法]小鼠骨髓微核试验设3个盐附子给药剂量组(15.45、7.73、3.86 g生药/kg)、阴性对照组和阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg).Ames试验选用两种方法:直接法和代谢活化法.试验菌株为鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535,盐附子在试验中设6个剂量组(5.000、2.500、1.250、0.625、0313、0.156 mg生药/皿),同时设自发回复突变对照组、阳性对照组.体外CHL细胞染色体畸变试验也选用两种方法:直接法和代谢活化法.盐附子不加S9时处理终浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml,加S9时处理终浓度为2.5、1.25、0.625、0.313、0.156 mg生药/ml. [结果]小鼠骨髓微核试验盐附子各剂量组小鼠骨髓多染红细胞微核率与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).Ames试验盐附子在加或不加肝微粒体酶(S9)时均未见引起TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535试验菌株基因突变,即Ames试验阴性,试验重复一次,所得结论相同.体外CHL细胞染色体畸变试验盐附子在加或不加S9时均未引起CHL细胞的染色体畸变,试验结果为阴性,试验重复一次,所得结果相同.[结论]在实验室条件下,盐附子在小鼠骨髓微核试验、Ames试验及体外CHL细胞染色体畸变试验中均为阴性结果,故认为盐附子无遗传毒性.     

溴硝醇的致突变作用

目的研究常用化学添加抗菌剂溴硝醇的致突变性。方法通过CHL细胞染色体畸变试验、CHO细胞正向基因突变试验、Ames试验及小鼠骨髓微核试验等4个致突变生物学试验对溴硝醇进行致突变性研究。细胞染色体畸变试验,选用CHL细胞,设暴露浓度为30、10、5、2.5mg/L(-S9)和50、20、10、3mg/L(+S9)。正向基因突变试验,选用CHO细胞,设暴露浓度为20、10、5、2.5mg/L。Ames试验,选用TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535菌株,暴露浓度为50、25、12.5、6.25、3.125μg/皿(+S9),30、15、7.5、3.75、1.875μg/皿(-S9)。小鼠骨髓微核试验,60只小鼠随机分成6组,雌雄各半,雄性小鼠染毒剂量为20、40、80mg/kg;雌性小鼠为25、50、100mg/kg。结果 CHL细胞染色体畸变试验结果显示,各剂量组溴硝醇诱发的染色体畸变率均≤4.5%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。正向基因突变试验结果显示,各剂量组溴硝醇对CHO细胞突变频率,与阴性对照比较差异无统计学意义(P0.05)。Ames试验结果显示,各剂量组溴硝醇的回变菌落数均阴性对照组的自发回变菌落数的2倍,亦无剂量反应关系。小鼠骨髓微核试验结果显示,溴硝醇3个剂量组均未引起微核出现率增加。结论本研究条件下,溴硝醇无明显致突变作用。