宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药 相关基因狉狆狊犔和狉狉狊突变研究

摘要：目的　阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因狉狆狊犔和狉狉狊的分子突变特征,为宁波
地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法　从宁波市疾病预防控制中心收集６７例耐多药结核分枝
杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株４０株和链霉素敏感菌株２７株。采用ＰＣＲ 直接测序法分析狉狆狊犔和狉狉狊
基因的分子突变特征。对链霉素耐药与基因突变率关系之间的差异采用χ
２ 检验,犘＜０．０５为差异有统计学
意义。结果　４０株耐链霉素菌株中,３１株（７７．５０％）检测到狉狆狊犔发生突变。突变位点集中在第４３位和
第８８位密码子;６ 株耐链霉素菌株（１５．００％） 检测到２ 种不同类型的狉狉狊基因突变, 分别为Ａ１４０１Ｇ
（７．５０％,３／４０）;Ａ５１４Ｃ （７．５０％,３／４０）。２７株链霉素敏感菌株中有４株（１４．８１％）发生狉狆狊犔突变,突
变位点集中在第１０４位和第１１９位密码子,１株链霉素敏感菌株的狉狉狊基因检测到Ａ１４０１Ｇ 突变。耐多药结
核分枝杆菌中链霉素耐药株狉狆狊犔基因突变率高于链霉素敏感株, 两者之间差异有统计学意义（χ
２ ＝
２５．３８７,犘＜０．０５）。结论　宁波地区耐多药结核分枝杆菌对链霉素的耐药与狉狆狊犔突变高度相关,耐药基
因突变类型存在地域差异。
关键词：耐多药结核;链霉素;狉狆狊犔基因;狉狉狊基因
中图分类号：Ｒ３７８．９１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１６）１０ ０７４４ ０６     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性研究

本文总结我院１９９３年６月～１９９４年７月从临床标本中分离的１７２株金黄色葡萄球菌（金葡菌），１３４株（７７．９％）为耐甲氧西林金葡菌（ＭＲＳＡ），其中８０．６％（１０８／１３４）为医院染株。１３３株（９９．３％）ＭＲＳＡ对林可霉素、青霉素Ｇ耐药；对红霉素、庆大霉素的耐药率亦高达９７％；第一代头孢菌素对ＭＲＳＡ的抑菌作用明显下降，头孢唑啉的抑菌率仅为７．５％，ＭＩＣ５０＞１６ｍｇ／Ｌ；环丙沙星耐药率上升迅速，对ＭＲＳＡ的耐药率达８６．６％，ＭＴＣ５０＞４ｍｇ／Ｌ。ＭＲＳＡ的多重耐药性十分明显，９６．３％（１３０／１３４）对５种以上抗菌药物耐药。甲氧西林对敏感金葡菌耐药率较低。万古霉素对ＭＲＳＡ仍具良好的抗菌活性，抑菌率１００％，ＭＩＣ５０为２．２８ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９０为４．６３ｍｇ／Ｌ。     

耐甲氧西林葡萄球菌感染基因诊断的实验研究

目的探明沈阳地区ＭＲＳＡ感染状况及耐药机理。方法采用酶标－多聚酶链式反应（ＥＤ－ＰＣＲ）方法对沈阳地区３所医院分离的７６株葡萄球菌耐甲氧西林（ＭｅｃＡ）基因进行检测。结果ＭｅｃＡ基因阳性２３株，耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的检出率为３０．３％，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）检出率占金黄色葡萄球菌总数的２１．７％。采用微量液体稀释法、琼脂稀释法以及ＭＲＳＡ鉴别培养法等３种方法与之相比较，经统计学处理ＥＤ－ＰＣＲ法与其它３种方法的一致性非常有意义（Ｐ＜０．０１）。以ＭＲＳＡ鉴别培养法作为诊断ＭＲＳ的参考标准，ＥＤ－ＰＣＲ法敏感性为９５．５％，特异性为９６．３％。结论ＥＤ－ＰＣＲ法与其它３种方法相比，具有简便、快速、敏感性高、特异性强等优点     

本溪地区淋球菌耐药性调查

９５株淋球菌对抗菌药物敏感性测定结果：１９９０年淋球菌１８株，耐药株青霉素Ｇ３８．９０％（７／１８），庆大霉素１６．６６％（３／１８），卡那霉素４４．４４％（８／１８），麦迪霉素４４．４４％（８／１８）。１９９２年淋球菌７７株，耐药株青霉素Ｇ７９．２２％（６１／７７），庆大霉素４９．３５％（３８／７７），卡那霉素８０．５２％（６２／７７），麦迪霉素７０．１３％（５４／７７），氨苄青霉素７２．７２％（５６／７７），红霉素７７．９２％（６０／７７），头孢唑啉２８．５７％（２２／７７），头孢噻肟２３．３７％（１８／７７），结果显示头孢菌素类较敏感，其次为庆大霉素，余者耐药株均超过７０％以上。     

宁波地区耐多药结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药 犲犿犫犅基因突变研究

摘要：目的　分析宁波地区耐多药结核分枝杆菌（ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,ＭＤＲ ＴＢ）临床分离 株的犲犿犫犅基因突变特征,探讨ＭＤＲ ＴＢ 对乙胺丁醇（ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌ,ＥＭＢ） 耐药的产生与犲犿犫犅基因突变 的关系。方法　采用比例法对ＭＤＲ ＴＢ 临床分离株进行ＥＭＢ 敏感性检测, 应用ＤＮＡ 直接测序法检测 ＭＤＲ ＴＢ的犲犿犫犅基因突变情况。结果　１０６株ＭＤＲ ＴＢ 临床分离株中有４９株（４６．２３％） 对ＥＭＢ 耐药, ５７株（５３．７７％）对ＥＭＢ 敏感,５９ 株（５５．６６％） 发生了犲犿犫犅基因突变。在４９ 株ＥＭＢ 耐药菌株中, 犲犿犫犅基因突变的菌株为３４ 株（６９．３９％）, 在５７ 株ＥＭＢ 敏感菌株中,犲犿犫犅基因突变的菌株为２５ 株 （４３．８６％）,ＥＭＢ耐药菌株中的犲犿犫犅基因突变率高于敏感菌株（χ ２＝６．９５８,犘＜０．０５）。犲犿犫犅基因突变 类型有犲犿犫犅３０６,犲犿犫犅３５４,犲犿犫犅４０６,以犲犿犫犅３０６突变最多。犲犿犫犅３０６在ＥＭＢ耐药菌株中的突变率高于 ＥＭＢ敏感菌株（χ ２＝６．２７５,犘＜０．０５）。犲犿犫犅基因和犲犿犫犅３０６位点检测ＥＭＢ耐药的敏感度、特异度和准 确度分别为６９．３９％、５６．１４％、６２．２６％ 和６１．２２％、６３．１６％、６２．２６％。结论　宁波地区ＭＤＲ ＴＢ 对 ＥＭＢ耐药形势较为严峻,犲犿犫犅基因突变与ＭＤＲ ＴＢ对ＥＭＢ耐药相关。 关键词：耐多药结核分枝杆菌;乙胺丁醇;耐药;突变;犲犿犫犅基因 中图分类号：Ｒ３７８．９１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０７ ０５０５ ０４     

中国1993～2000年分离淋球菌的流行病学和细菌学特征

目的：研究中国1993-2000年分离的淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素和头孢曲松的敏感性及其营养分型和携带质粒情况，为制订淋病治疗方案和防治对策的参考依据。方法：用琼脂稀释法测定菌株对抗菌药物的敏感性，用改良Catline法和碱裂解法测定菌株的营养分型和携带耐药质粒的情况。结果：8年来共检测了4976株淋球菌对抗生素的敏感性，发现对青霉素耐药率为71.60％，产青霉素酶淋球菌（PPNG）菌株占15.54；对四环素的耐药菌株占93.02％，由质粒介导的高度耐四环素淋球菌（TRNG）菌株占10.48％；环丙沙星的耐药菌株占53.30％；对大观霉素和头孢曲松的耐药菌株分别占0.36％和0.46％。1995年和1996年南京地区菌株的营养分型原型（proto）占46.4％和47.53％，脯氨酸（pro^-）型占48.4％和50.22％。对40株淋球菌作了质粒分型：30株非PPNG菌株中，2株（15％）不含任何质粒；28株含有4.2kb、4.9kb、5.4kb和39.5kb质粒；10株PPNG株和非PPNG株所含有的5.4kb质粒虽分子量相近，但酶切点不尽相同。结论：1993-2000年分离的淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高，对大观霉素和头孢曲松仍较敏感。南京地区1995-1996年流行的淋球菌的营养分型我大变化。含5.4kb质粒的PPNG和非PPNG菌株所含核苷酸的排列顺序可能有所不同。     

一步法提取RNA反转录－多聚酶链反应检测汉坦病毒RNA

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测汉坦病毒（Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）的基因ＲＮＡ，同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较。用异硫氰酸胍－载体吸附法，一步提取汉坦病毒ＲＮＡ。将脑腔接种汉坦病毒频临死亡的乳鼠脑制成１０％的悬液，并系列稀释，从１０（－１）到１０（－１２）的１２梯度。结果表明，该引物能够扩增出汉坦病毒Ｈ８２０５株的ＲＮＡ，说明汉坦病毒Ｈ８２０５株与７６－１１８株在Ｍ片段上具有共同的保守序列。ＲＴ－ＰＣＲ可以检测出４．６４×１０（－３）ＴＣＬＤ（５０）／ｍｌ的病毒，而用Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞只能分离检测出４．６４×１０（－２）ＴＣＬＤ（５０）／ｍｌ，所以ＲＴ－ＰＣＲ检测病毒比细胞分离检测病毒敏感。     

广州地区2004年淋球菌对5种抗生素耐药性的监测

目的：了解2004年淋球菌对5种抗生素的耐药性及PPNG（四环素高度耐药性）和TRNG（四环素MIG大于等于16MG-L）的流行状况。方法：用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）以及用纸片碘量法检测β-内酰胺酶。结果：127株淋球菌检出PPNG37株（29．1％）、TRNG65株（51．2％）、环丙沙星耐药率达99．2％，青霉素耐药率达89．8％，头孢曲松、壮观霉素没有发现耐药菌株，且抗菌活性最强。结论：持续监测淋球菌的耐药性十分重要。     

233株淋球菌耐药性的监测与分析

目的了解淋球菌对抗菌药物的耐药性及产青霉素酶淋球菌（PPNG）和高水平耐四环素淋球菌（TRNG）的流行情况。方法用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）及纸片酸度法测定p内酰胺酶。结果233株淋球菌中检出PPNG阳性32株（13．73％）,TRNG阳性147株（63．09％）。菌株对头孢曲松和大观霉素均敏感,而对环丙沙星、四环素耐药率为98．28％、100％。结论南宁地区淋球菌株的耐药性以环丙沙星、四环素最为严重,对大观霉素和头孢曲松有较高的敏感性,持续开展耐药监测十分必要。     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV一DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０８例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ一ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｓ、抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２０％（２／１０）；（４）在抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２５％（２／８）；文中就ＰＣＲ检测的结果及临床意义作了扼要的讨论。     

结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药与犵狔狉基因突变的初步研究

摘要：目的　初步了解福建省结核分枝杆菌分离株喹诺酮类药物耐药性与犵狔狉基因突变的关系。方法　对
来源于福建省结核病耐药性监测３０ 个监测点纳入的７５ 株耐多药结核分枝杆菌分离菌株,行包含犵狔狉犃、
犵狔狉犅基因喹诺酮类药物耐药决定区（ＱＲＤＲ）序列测定,以结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒｖ标准株ＤＮＡ 序列为参比
序列进行比较分析。结果　７５株耐多药结核分枝杆菌中,５６株氧氟沙星敏感株均未检测到犵狔狉犃基因发生
突变,１９株氧氟沙星耐药株检测到１６株（８４．２１％,１６／１９）犵狔狉犃基因发生突变,其中９株突变发生在第
９１位密码子,４株发生在第９４位密码子,３株发生在第９５位密码子,发现Ｓｅｒ９５Ａｓｎ为新突变类型;所有
菌株均未检测到犵狔狉犅基因发生突变。结论　犵狔狉犃基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机
制;犵狔狉犃基因的突变主要发生在第９１位、９４位、９５位密码子上。
关键词：结核分枝杆菌;耐药性;喹诺酮;犵狔狉基因;突变
中图分类号：Ｒ３７８．９１１,Ｒ９７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０７ ０６４１ ０３     

HBV家族聚集性感染者HBV前C区基因突变及临床意义的研究

采用ＭｕｔａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃＰＣＲ方法，检测１０例ＨＢＶ家族聚集性感染的乙型肝炎病人及其配偶和家族成员ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位基因Ｇ→Ａ突变情况，并探讨其临床意义。结果：病人及家族成员突变发生率分别为７０％（７／１０），６６．６％（１４／２１）；明显高于病人配偶１０％（１／１０）。且配偶中乙肝抗ＨＢｓ阳性率为６０％（６／１０）。同时，这种突变在慢性乙型肝炎发生率较高，为８５．７％（６／７），在ＨＢＶ携带者为４４．４％（８／１８），慢性重症肝炎为３３．３％（１／３）。提示这种突变的发生可能与ＨＢＶ持续感染有关。     

自贡市肺结核分枝杆菌对一线抗结核 药物耐药性分析

摘要：目的　了解自贡市肺结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药状况,为结核病防控工作提供参考依据。
方法　收集２０１０－２０１４年自贡市结核病防治所及各区县结核病防治机构肺结核患者样本分离培养获得的结
核分枝菌株及其患者背景资料,采用比例法对一线抗结核药物异烟肼（Ｈ）、链霉素（Ｓ）、利福平（Ｒ）、乙
胺丁醇（Ｅ）进行药物敏感性体外试验,分析耐药结果。结果　２０１０－２０１４年共获得结核分枝杆菌临床分
离菌株１２３９株,药物敏感性试验结果显示总耐药率为２７．８５％ （３４５／１２３９）,其中初治患者菌株耐药率为
２４．９８％ （２８３／１１３３）,复治患者菌株耐药率为５８．４９％ （６２／１０６）;历年耐药率分别为２１．８８％、２４．７９％、
３１．３１％、２９．６３％、２６．９８％。对４种抗结核药物Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｅ 的耐药率分别为２０．３４％ （２５２／１２３９）、
１７．２７％ （２１４／１２３９）、１６．５５％ （２０５／１２３９）、８．９６％ （１１１／１２３９）。总耐多药率为１４．５３％ （１８０／１２３９）,
其中初治患者菌株耐多药率为１１．９２％ （１３５／１１３３）,复治患者菌株耐多药率为４２．４５％ （４５／１０６）。耐２种
药耐药率为６．１３％ （７６／１２３９）,耐３种及以上耐药率为１１．７８％ （１４６／１２３９）。结论　自贡市结核分枝杆
菌耐多药率均高于全国平均水平,应加强耐药结核病监测和防治,控制耐药结核病的蔓延。
关键词：肺结核;结核分枝杆菌;抗结核药物;耐药性
中图分类号：Ｒ３７８．９１＋１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１６）１０ ０７５９ ０４     

80株淋球菌分离株青霉素耐药性与penA及ponA基因的关系

目的探讨淋球菌青霉素耐药性与青霉素结合蛋白1基因和2基因（ponA、penA）突变的关系。方法采用琼脂稀释法对淋球菌临床分离株进行青霉素敏感性测定，分别运用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）和PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）对淋球菌penA及ponA基因进行分析。结果在检测出的80株淋球菌临床分离株中，所有菌株的penA基因均发生了（Asp345A）的插入突变，而菌株表现出对青霉素不同程度的耐药性；通过RFLP分析检测出有近93．7％的菌株发生了ponA基因第421位氨基酸由亮氨酸变成脯氨酸（Leu421→Pro）的突变。同时研究还表明所有的PPNG菌株也可同时发生penA基因的突变，除2例ponA基因未突变外，94．4％（34／36）的PPNG可发生ponA基因的突变。结论在淋球菌流行株中染色体介导和质粒介导两种方式协同作用造成了淋球菌对抗生素的高度耐药性。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕妇巨细胞病毒感染及其母婴？…

用套式聚合酶链反应（ｎＰＣＲ）及限制酶分析，病毒分离和特异性抗体测定检测孕妇外周血，脐带血及互胎组织巨细胞病毒（ＨＣＭＶ０。结果３６７例孕妇中，孕早、中、晚期ＨＣＭＶ阳性率分别为８．６％、１．６％和７．０％，ｎＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ〈０．０２５）。６份ｎＰＣＲ阳性母血中，３份配对脐血ｎＰＣＲ阳性。提法：ｎＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣ     

应用多重引物PCR技术检测O157∶H7毒力基因

目的 对江苏省６个不同地区不同宿主动物中分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株进行毒力基因的检测分析。方法 应用肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的多重引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,以志贺祥毒素（ＳＬＴ２和ＳＬＴ１）基因、“粘附抹平”因子ｅａｅＡ基因和溶血素（ｈｌｙ）基因为靶基因进行检测。结果 江苏省分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株毒力基因携带率为５６．５％,不同地区的分离株携带率有所不同,个别地区高达９０％以上,有的地区     

嗜肺军团菌聚合酶链反应检测方法及其应用研究

根据嗜肺军团菌基因组ＤＮＡ的种特异性ＤＮＡ片段序列，合成一对引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。经琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色结果表明，一条８７０ｂｐ的核苷酸区带为嗜肺军团菌１～１４血清型菌株所共有。ＰＣＲ检测水中军团菌，其敏感性为３５０ｃｆｕ／ｍｌ，而用同位素标记探针、斑点杂交法检测，其敏感性为４３ｃｆｕ／ｍｌ。ＰＣＲ检测人工感染嗜肺军团菌的豚鼠组织标本，阳性率为８３．３％，而细菌分离培养的阳性率仅为２６．６％。在现场调查中，用ＰＣＲ法初步验证了一起由Ｌｐ１０引起的军团菌病爆发。上述结果表明，ＰＣＲ法能快速、敏感、特异性检测嗜肺军团菌感染。     

金黄色葡萄球菌对大环内酯、林可酰胺和链阳霉素B类耐药性检测

目的调查医院金黄色葡萄球菌临床分离株对大环内酯类（红霉素）、林可酰胺类（克林霉素）和链阳霉素B类（MLSB）抗菌药物的耐药性，检测克林霉素诱导耐药的发生情况及耐药菌株的耐药相关基因。方法单一纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，再以D-试验检测红霉素诱导克林霉素耐药表型；PCR反应检测各耐药菌株的红霉素耐药相关基因。结果临床分离的金黄色葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药率分别为80．3％和70．2％，对两者同时耐药（结构型MLS。耐药）的菌株占70．2％；克林霉素诱导耐药（D-试验阳性）菌株占所检测菌株的9．6％，占红霉素耐药、克林霉素敏感菌株的95．5％；在所有的红霉素耐药菌株中检出ermA、ermC和msrA基因。结论医院感染金黄色葡萄球菌对MLSB类抗菌药物的耐药性比较严重；在红霉素耐药、克林霉素敏感菌株中克林霉素诱导耐药率很高，临床实验室对该类菌株必须进行D-试验，以指导临床正确使用MLSB类抗菌药物。     

70株浙江省结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因分型研究

目的了解结核分枝杆菌临床分离株相关基因型的分布情况，并分析北京家族菌株与耐药的相关性。方法收集浙江省结核分枝杆菌临床分离株，常规罗氏培养基培养，应用Spoligotyping进行基因分型研究，聚类分析采用BioNumerics软件，统计学分析采用卡方检验。结果70株浙江省结核分枝杆菌临床分离株可分为2个基因群，即北京家族（Beijing family）和非北京家族（Non-Beijing family），分别占70％（49／70）和30％（21／70），18种基因型，其中12株为独特类型，剩余58株分为6簇。北京家族菌株中，89．8％（44／49）为典型北京家族（typical Beijing family），非北京家族菌株表现为高度的基因多态性，可分为13个基因型，9株为独特的基因型。北京家族菌株中表现为全敏感者71．4％（35／49），表现为耐药者为28．6％（14／49）；而非北京家族菌株中表现为全敏感者为66．7％，表现为耐药者为33．3％，经卡方检验，两者问的差异无统计学意义（X^2=0．158，P〉0．05）。结论北京家族菌株为浙江的流行优势菌株。北京基因犁与耐药无明显相关性。     

淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与gyrA和parC基因突变关系的研究

目的 探讨江苏省淋球菌对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系。方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌氟喹诺酮类药物（环丙沙星、左氧氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC），采用PCR法扩增含有喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因片段，并进行测序分析。结果 根据所测MIC，本研究分离的95株淋球菌对环丙沙星100％的耐药；通过测序分析，在54株淋球菌中检测到gyrA和parC的18种突变形式，parC基因突变点越多，MIC相对也较高。结论 parC基因的突变导致淋球菌对喹诺酮类药物的高水平耐药。