丹参酮IIA对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

目的：分析丹参的主要活性成分丹参酮IIA对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织因子（TF）表达的影响。方法将分离的HUVECs随机等分为空白对照组、凝血酶处理组及不同浓度丹参酮IIA处理组。其中凝血酶处理组加入凝血酶（终浓度5U/ml），不同浓度丹参酮IIA处理组加入凝血酶（终浓度5U/ml）和不同浓度的丹参酮IIA（终浓度分别为0.25μg/ml、0.5μg/ml、0.75μg/ml和1.0μg/ml），空白对照组则加入等量的无血清培养基。各组HUVECs均在37℃培养6h后收集细胞。结果各组HUVECs孵育6h后，凝血酶处理组HUVECs中TF mRNA的转录明显强于空白对照组（P〈0.001），不同浓度的丹参酮IIA可不同程度抑制TF mRNA的转录，与凝血酶处理组比较差异均有统计学意义（P〈0.001），且呈剂量依赖关系。HUVECs与凝血酶孵育后，所表达的TF促凝活性（TF：C）和抗原含量（TF：Ag）均明显增加，明显高于空白对照组（P〈0.001）。不同浓度的丹参酮IIA均可不同程度地抑制凝血酶所诱导的TF：C和TF：Ag表达（P〈0.001），且呈剂量依赖关系。结论丹参酮IIA可抑制凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞TF基因的转录和表达，这可能是丹参酮IIA发挥抗血栓形成作用的重要机制。     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织因子和组织因子途径抑制物的基因表达及抗生素的影响

目的 研究创伤弧菌(VV)脓毒症大鼠肝组织的组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)基因表达及抗生素头孢哌酮钠联用乳酸左旋氧氟沙星对其的影响.方法 110只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(NC组,10只)、创伤弧菌脓毒症组(VV组,分5个哑组,每亚组10只)、创伤弧菌脓毒症药物干预组(AA组,分5个亚组,每亚组10只).构建创伤弧菌脓毒症模型及药物干预模型.RT-PCR检测大鼠肝组织TF mRNA和TFPI mRNA的基因表达水平.应用SPSS 12.0进行t检验、方差分析等处理.结果 与NC组相比,VV组染菌后2 h,6 h,9 h,12 h,16 h TF mRNA表达均明显升高(P<0.05),其中染菌6 h表达最高;从组染菌后9 h,12 h的TF mRNA仍明显高于NC组(P<0.05),后逐渐减少.VV组与AA组的肝组织TFPI mRNA与NC组相比,均无明显改变(P>0.05).与相同时间点的VV组相比,AA组16 h TF mRNA明显降低(P相似文献   

核因子-κB对胰腺AR42J细胞肿瘤坏死因子-α表达的调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胰腺腺泡AR42J细胞细胞因子表达的影响及其可能机制,进一步阐明急性胰腺炎的发病机制.方法 用不同质量浓度的LPS(0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L)刺激AR42J细胞18 h,同时用10mg/L的LPS刺激AR42J细胞不同时间(2,6,12,18,24h),RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)P65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化,放射免疫法(RIA)检测培养液上清TNF-α蛋白浓度的改变.对NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-α mRNA的表达进行相关和回归分析.结果 RT-PCR结果表明0.001 mg/L的LPS处理AR42J细胞时即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,且呈量效关系;用10 mg/L的IPS处理后,在2 h后即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,并且呈时效关系.RIA结果表明用0.01 mg/L的LPS处理AR42J细胞后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,且呈量效关系;用10mg/L的LPS处理后,在6 h后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,并且呈时效关系.TNF-α mRNA的表达与P65 mRNA的表达呈正相关.结论 LPS可以以时间剂量依赖方式地刺激AR42J细胞NF-κB(P65)和TNF-α的表达,NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-αmRNA的表达呈正相关.针对NF-κB靶点,抑制其活性,可为包括AP的治疗提供一条新的途径.     

创伤弧菌脓毒症血浆组织因子和组织因子途径抑制物的改变及抗菌药物的影响

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症血浆中组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)的改变以及头孢哌酮钠与乳酸左氧氟沙星联用对其的影响。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),使用ELISA法测定各组大鼠血浆中TF和TFPI的含量。结果与正常对照组(NC组)相比,VV组在染菌后9 h、12 h血浆TF显著升高(P＜0．05),各时间点血浆TFPI含量无显著改变(P＞0．05);9 h、12 h的TFPI/TF比值有显著性下降(P＜0．05)。AA组染菌后9 h、12 h血浆TF明显高于NC组(P＜0．05),TFPI/TF比值在抗菌药物干预后逐渐上升,16 h时点该比值明显高于NC组(P＜0．05)。与相同时间点的VV组比较,AA组染菌后12 h血浆TF明显减低(P＜0．05),12 h、16 h血浆TFPI明显升高(P＜0．05),9 h、12 h、16 h的TFPI/TF比值亦明显升高(P＜0．05)。结论创伤弧菌脓毒症时血浆TF含量显著升高,但同期TFPI并无明显减低或升高,TFPI/TF比值减低;头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星可减低血浆TF含量,提高TFPI/TF比值。创伤弧菌脓毒症时存在明显的促凝和抗凝作用的失衡,抗菌药物干预后可使促凝和抗凝平衡被逐渐恢复。     

中重度烧伤合并脓毒血症患者TFPI、TF、TNF-α的变化

目的通过测定中重烧伤合并脓毒血症患者组织因子途径抑制物（TFPI）、组织因子（TF）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平,了解TFPI、TF、TNF-α与感染及其严重程度的关系。方法选取中重度烧伤合并脓毒血症患者30例（烧伤组）,按病程的前后分为：感染前期组（烧伤后72 h～7 d内）;感染后期组（感染后期组,烧伤后10～14 d）。选取同期健康献血员20例（对照组）。用酶联免疫吸附法测定各组TFPI、TF、TNF-α水平。结果与对照组比较,感染前期组TFPI、TF及TNF-α抗原含量明显升高（P〈0.0...     

心肺复苏后组织因子和组织因子途径抑制物的动态变化和临床意义

目的 观察院内心肺复苏后不同时间点组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)水平的动态变化特点并探讨其临床意义.方法 选择2005年9月至2007年9月温州医学院附属第一医院急诊科收治的年龄>16岁明确心搏停止时间的心肺复苏患者24例,依据是否达到自主循环恢复标准随机分为ROSC和末ROSC两组,分别记录小同患者心搏停止的病因和临床特点,并用ELISA方法 检测心肺复苏(CPR)后30 min,60 min,6 h,24 h,48 h血清TF和TFPI抗原浓度,10例来自健康体检的健康自愿者为对照组.计量数据用均数±标准差((-x)±s)来表示,两组计量数据的比较采用独立样本t检验,三组及以上计量数据比较采用单因素方差分析法,计数数据的比较采用旧格表精确x2榆验,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较,ROSC组患者在CPR 30 min血TF水平显著升高(P<0.01),在CPR 6 h达高峰,在CPR48 h时已下降;与对照组及ROSC组同时点比较,末ROSC组血TF水平更是显著升高(P<0.01).与对照组比较,在CPR后30 min,ROSC和未ROSC两组血清TFPI水平差异无统计学意义(P>0.05),60 min后ROSC组血清TFPI水平逐渐升高并有显著差别(P<0.01或<0.05).与对照组比较,未ROSC组和ROSC组患者在CPR 30 min时的TF/TFPI水平均显著性升高(P<0.01),且前者显著高于后者(P<0.01),在ROSC组IF/TFPI值在CPR后6 h有显著升高(P<0.01),在48 h下降.结论 血清TF和TFPI水平在院内心肺复苏的患者中明显升高,CPR后半小时的TF和TF/TFPI的水平可用于判断预后.     

腔隙性脑梗死患者血浆组织因子和组织因子途径抑制物抗原水平的测定

目的探讨腔隙性脑梗死(lacunarinfarct,LI)患者血浆组织因子(tissue factor,TF)和组织因子途径抑制物(tissuefactor pathwayinhibitor,TFPI)测定的临床意义以及组织因子途径在LI发病中的作用.方法择确诊的LI患者63例,采用酶联免疫吸附的方法测定血浆TF和TFPI相关指标抗原水平,与正常对照组比较并对不同危险因素患者组之间的结果进行分析.结果①与正常对照组比较,LI患者组血浆TF抗原水平显著增高(217.4±101.3pg/ml对140.9±27.1pg/ml,P=0.0003)、游离TFPI抗原水平降低(41.4±16.7 ng/ml对30.0±18.6 ng/ml,P=0.005);②合并高血压、糖尿病和血脂异常LI患者血浆TFPI相关指标的改变不同;③LI患者血浆t-TFPI和tr-TFPI抗原水平与血浆TF抗原水平相关.结论LI患者血浆组织因子途径改变表现为凝血活性增高和抗凝活性减低.     

肿瘤坏死因子样微弱凋亡诱导因子对骨关节炎软骨细胞作用实验研究

目的研究肿瘤坏死因子样微弱凋亡诱导因子（TWEAK）对体外培养骨关节炎（OA）软骨细胞的作用,同时探讨炎性细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）与TWEAK之间的关系。方法体外培养OA患者原代软骨细胞,分别用TWEAK（75ng/mL）,TWEAK（75ng/mL）和IL-1β（5ng/mL）,TWEAK（75ng/mL）和TNF-α（5ng/mL）作用细胞48h,MTT检测细胞因子对软骨细胞的增殖作用影响;ELISA检测细胞培养上清液中MMP-13、IL-6和Fas的分泌表达。结果 MTT结果表明细胞因子刺激软骨细胞后对细胞增殖无明显影响。TWEAK和IL-1β组诱导MMP-13表达增加（P〈0.05）;TWEAK和IL-1β组,TWEAK和TNF-α组均诱导IL-6表达增加（P〈0.05）。3组Fas分泌表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 IL-1β与TWEAK,TNF-α与TWEAK分别诱导OA软骨细胞MMP-13和IL-6表达增加,可能参与关节软骨损伤和OA的病程发展。     

脂多糖对人近曲肾小管上皮细胞表面活性蛋白D及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)表面活性蛋白D(suffactant protein D,SP-D)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法:将体外培养HK-2细胞分为5组,分别给与0、0.1…1、5、10μg/mL LPS刺激8 h.免疫印迹和RT-PCR观察SP-D蛋白及mRNA表达变化,ELISA和RT-PCR观察TNF-α蛋白和mRNA表达变化.结果:1、5、10μg/mL LPS刺激8 h可引起HK-2细胞SP-D蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),1、5、10μg/mL LPS刺激8 h可引起HK-2细胞TNF-α蛋白及mRNA表达显著增加(P<0.05).SP-D与TNF-α的表达呈负相关.结论:LPS刺激下TNF-α表达增加与SP-D的表达降低有关.SP-D可能在肾脏炎症反应中发挥重要作用.     

肿瘤坏死因子α（TNF—α）对SD大鼠胰岛β细胞凋亡的分子机制

目的 探讨TNF—α对体外SD大鼠胰岛β细胞调亡的分子机制。方法 成年雄性SD大鼠胰岛细胞经胶原酶P消化，Ficoll400纯化后，在37℃，5％CO2，RPMI1640培养剂培养7d，铺成单层，用不同浓度TNF-α（0、10、30、50ng／mL）孵育24h。应用放免法测定不同浓度上清夜及葡萄糖刺激时上清液中胰岛素水平；应用RT—PCR检测胰岛细胞Bcl-2和Bax mRNA表达水平。结果 随TNF-α浓度的增加：（1）胰岛β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应逐渐降低；（2）Bax mRNA表达水平表达呈稳步上升趋势，明显高于对照组（P〈0．05）；而Bcl-2mRNA表达水平在10ng／mL时轻度上升．随着剂量的加大（30-50ng/mL）表达开始明显下降，明显低于对照组（P〈0．05）。结论 （1）TNF-α可诱导大鼠胰岛细胞功能缺陷。（2）大鼠胰岛细胞的Bcl-2和Bax mRNA表达水平变化在TNF—α所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用。     

急性心肌梗死患者组织因子及组织因子途径激活抑制物水平的变化

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者组织因子(TF)及组织因子途径激活抑制物(TF-PI)的变化及临床意义。方法用ELISA法分别检测50例AMI患者及20例健康对照的外周血TF及TFPI的抗原水平。比较15例支架手术患者冠状窦内及外周血的TFPI水平。比较并发糖尿病和/或高脂血症AMI患者与无并发症者的TFAg及TFPIAg水平。结果AMI患者的TFAg及TFPIAg较正常人均明显升高(P<0.01);支架患者冠状窦内的TFPI水平明显低于其外周血(P<0.01);有并发症患者的TF及TFPI水平均明显高于无并发症患者(分别为P<0.01和P<0.05)。结论AMI患者外周血凝血活性增高,并发糖尿病和/或高脂血症AMI患者的凝血活性较无并发症患者高,血栓形成使冠状动脉腔内的TFPI消耗而降低。     

子痫前期患者组织因子、组织因子途径抑制物与血清可溶性血管内皮生长因子受体1的相关性

目的探讨子痫前期患者外周血组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)与及可溶性血管内皮生长因子受体1(s Flt-1)水平的相关性。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测健康孕妇、非重度子痫前期孕妇、重度子痫前期孕妇血浆TF、TFPI水平以及血清s Flt-1水平;免疫组化检测各组胎盘TF抗原的表达。结果 3组患者血浆及胎盘TF、血清s Flt-1水平均有显著差异,且随病变程度的增加逐渐升高。3组TF/TFPI比值有显著差异,随病变程度的增加亦逐渐升高。与非重度PE组相比,重度PE组血清s Flt-1水平显著升高(P0.05)。在子痫前期患者中,血浆TF、TF/TFPI比值与血清s Flt-1水平呈正相关。3组中胎盘TF表达与血清s Flt-1水平无相关性。在TF165.9 pg/m L组中,血浆、胎盘TF、血浆TFPI与血清s Flt-1水平呈正相关。结论子痫前期患者血浆TF、TF/TFPI比值与血清s Flt-1水平存在正相关关系。     

不同治疗方法对急性心肌梗死患者血浆组织因子及组织因子途径抑制物的影响

目的 观察急性心肌梗死(AMI)患者血浆组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)水平的变化及不同治疗方法对血浆TF、TFPI的影响,探讨其意义.方法 将80例AMI患者依治疗方案不同分为介入治疗组(40例)和药物(低分子肝素)治疗组(40例),在两组患者入院时及治疗后6 h、24 h、1周采集外周静脉血,以ELISA法测定TF、TFPI水平,分析其动态变化,并以20名健康人作为对照组.结果 AMI患者血浆TF和TFPI水平均高于正常对照组(P<0.01),介入治疗组术后6 h血浆TF水平略有升高,之后出现下降,至术后1周仍高于治疗前(P<0.05);药物治疗组用药后TF 水平呈明显逐渐下降趋势;AMI患者血浆TFPI水平于治疗后均出现升高(P<0.05,P<0.01),且以药物治疗组更显著.结论 AMI发生时TF途径被启动,TFPI随之激活,抑制TF诱发的凝血过程,低分子肝素抗凝治疗较单纯急诊介入治疗促进TFPI发挥抗外源性凝血效果更明显.     

心肺复苏后血浆组织因子和组织因子途径抑制物的变化及银杏达莫的干预研究

目的 探讨大鼠心肺复苏后血浆中组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)含量改变以及银杏达莫干预后对其影响.方法 成年雄性SD大鼠120只,随机分为对照组(A组)、复苏组(B组)、银杏达莫组(8 mL/kg)(C组),再分别按气管切开后(对照组)或自主循环恢复(Rose)后(复苏组和银杏达莫组)0.5、3、6、9和24 h分为五个亚组,每组8只.建立窒息型大鼠心肺复苏模型,分别于各时间点取血,使用ELISA法测定各组大鼠血浆中TF和,TFPI的含量.结果 B组心肺复苏后各时间点血浆TF较A组显著升高(P<0.01),9 h达到峰值;C组心肺复苏后各时间点血浆TF含量较A组显著升高(P<0.01),较B组分别在6、9、24 h显著下降(P<0.01).B组各时间点TFPI含量较A组均无显著变化(P>0.05),C组24 h TFFPI较A组升高(P<0.05).结论 心肺复苏后血浆TF含量显著升高,但同期TFPI并无明显变化,存在明显的凝血和抗凝作用失衡;银杏达莫注射液可降低心肺复苏后血浆TF含量,提高TFPI含量,恢复凝血和抗凝的平衡.     

脂多糖对AR42J细胞核因子-κB、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨NF-κB在急性胰腺炎(AP)发病过程中对TNF-α基因的转录调节作用,以便有助于从基因转录调节的水平寻找AP治疗的新靶点.方法 以10 mg/L脂多糖刺激AR42J细胞构建急性胰腺炎的体外模型,设2 h、6 h、12 h、18 h和24 h共5个时间点,每时间点设3个复孔.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法观察肿瘤坏死因子(TNF-α)/p65亚单位mRNA表达的变化;ELISA法检测TNF-α在细胞上清中质量浓度的变化;链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC)检测p65蛋白在AR42J细胞中的表达.人工碘比色法观察培养液上清中淀粉酶的活性改变.结果 脂多糖刺激后,AR42J细胞以时间依赖方式上调TNF-α和p65 mRNA的表达,并伴随TNF-α蛋白的表达增加;TNF-α与p65表达具有直线相关性(P＜0.01).p65蛋白亦呈时间依赖方式表达增强,24 h表达最强.各组间淀粉酶无明显改变(P＞0.05).结论 在脂多糖诱导的胰腺腺泡细胞AR42J炎性效应中,NF-κB表达且活性增强,调控着致炎细胞因子TNF-α的表达.     

急性心肌梗死大鼠肿瘤坏死因子α表达与室性心律失常的关系

目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对急性心肌梗死大鼠室性心律失常发生的影响.方法 将240只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(Sham组)、急性心肌梗死组(AMI组)和TNF-α拮抗剂-重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白组(rhTNFR:Fc组).Sham组开胸后不结扎冠状动脉;AMI组开胸后结扎冠状动脉左前降支(LAD),建立急性心肌梗死模型;rhTNFR:Fc组结扎前24 h腹腔注射rhTNFR:Fc 10 mg/kg.于结扎前10 min和结扎后10 min,20 min,30 min,60 min,3 h,6 h,12 h,记录心电图,观测各组自发和程序电刺激诱发的室性心律失常;通过免疫组化和实时荧光定量PCR,检测各组结扎前后各时间点心肌TNF-α蛋白和mRNA的表达水平.数据处理采用方差分析和直线相关分析.结果 AMI组和rhTNFR:Fc组LAD结扎10 min后心肌TNF-α的蛋白及mRNA表达开始增多,20～30 min时达到高峰,然后逐渐下降.室性心律失常发牛的时间窗与TNF-α表达的时间窗基本一致.与AMI组相比,rhTNFR:Fc组心肌TNF-α蛋白表达及窜性心律失常发生率均较低(P<0.05),但TNF-α mRNA无明显差异.Sham组整个实验过程中无明显变化.结论 大鼠急性心肌梗死时,心肌表达的TNF-α能促进室性心律失常的发生.     

正常足月产妇羊水组织因子水平与妊娠高凝状态、羊水栓塞的关系研究

目的探讨正常足月产妇羊水中的组织因子(TF)水平与妊娠高凝状态及羊水栓塞的关系。方法选取2013年1月至2014年12月该院待产的正常足月妊娠产妇158例,检测产妇血浆、羊水、羊水上清液及羊水沉渣中的TF和组织因子途径抑制物(TFPI)水平。结果羊水沉渣TF水平为(1 409.36±120.34)ng/L,明显高于血浆、羊水及羊水上清液水平,差异有统计学意义(P0.05);血浆TF水平为(30.17±6.49)ng/L,明显低于羊水各标本水平,差异有统计学意义(P0.05);羊水沉渣TFPI水平为(9.46±1.77)g/L,明显低于血浆、羊水及羊水上清液水平,差异有统计学意义(P0.05);血浆TFPI水平为(22.19±5.16)g/L,明显高于羊水各标本(P0.05);羊水及羊水上清液TF和TFPI水平差异无统计学意义(P0.05);羊水、羊水上清液、羊水沉渣中TF与TFPI呈负相关关系(P0.05),其中羊水沉渣相关性最强(r=-0.903,P0.05),血浆标本TF与TFPI无相关性(P0.05)。结论正常足月产妇羊水TF含量较高,而TFPI较低,可能在羊水栓塞的发生机制中起一定的临床作用。     

罗格列酮对肿瘤坏死因子-α诱导3T3-L1脂肪细胞急性血清淀粉样蛋白A表达的影响

目的:观察罗格列酮时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导3T3-L1脂肪细胞急性血清淀粉样蛋白A(A-SAA)表达的影响.方法:用不同浓度TNF-α(5、10、20μg/mL)处理3T3-L1脂肪细胞48 h,20μg/mL TNF-α处理不同时间(6、12、24、48 h)及罗格列酮预处理的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mL TNF-α作用48 h后,用ELISA法检测各组A-SAA的表达.结果:TNF-α能显著促进3T3-L1脂肪细胞A-SAA的表达,呈剂量和时间依赖方式;罗格列酮能部分减低TNF-α对3T3-L1脂肪细胞A-SAA表达的促进作用.结论:TNF-α可以通过促进3T3-L1脂肪细胞A-SAA的表达和分泌,参与胰岛素抵抗及血管并发症的形成;罗格列酮可部分减低TNF-α对3T3-L1脂肪细胞A-SAA表达的促进作用而发挥其抗炎、抗胰岛素抵抗及抗动脉粥样的作用.     

丹参提取物单体对肿瘤坏死因子诱导内皮细胞组织因子表达的干预作用

背景目前认为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可诱导人内皮细胞(HUVECs)组织因子基因的表达,而丹参提取物单体(764-3)对其干预作用如何?其机制有待于进一步探讨.目的研究764-3对TNF-α诱导HUVECs组织因子基因表达的干预作用,及单个内皮细胞内游离钙([Ca2+]1)水平的影响,以探讨764-3对防止心血管血栓栓塞性疾病的可能机制.设计随机对照的实验研究.单位协和医科大学基础医学研究所病理生理学系的实验室.材料实验于1998-05/1999-09在中国医学科学院,中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系实验室完成.脐带取自北京妇产医院.干预进行体外培养ECV304细胞株和人脐静脉内皮细胞,采用限制性内切酶法构建含有人TF基因不同上游调控序列的荧光素酶报告基因质粒,经脂质体法转染内皮细胞,用TNF-α(100 U/mL)及764-3(30 mg/L)处理细胞.主要观察指标测定细胞裂解物中荧光素酶及β半乳糖苷酶的活性.以Fluo-3/AM为荧光指示剂,用激光共聚焦显像系统观测[Ca2+]i的改变.结果在TF基因上游序列-244/+121 bp存在下,TNF-α可使转染内皮细胞荧光素酶表达量较对照组明显增加,764-3使这种增加有所降低(P＜0.05).而-111/+121 bp存在时,TNF-α组较对照组荧光素酶表达量无明显差异,均比-244/+121 bp存在时明显降低,此时,764-3并未引起荧光素酶表达量明显改变.激光扫描共聚焦显像,TNF-α可引起人内皮细胞[Ca2+]i持续缓慢升高,加入764-3后[Ca2+]i迅速大幅度降低,逐渐恢复到基线水平.结论764-3可抑制TNF-α诱导的HUVECs TF基因表达的增强,这种作用依赖于该基因上游序列-244/+121 bp的存在,推测胞内游离钙离子可能参与此抑制作用.     

脾切除对内毒素诱生肝和肺组织肿瘤坏死因子-α基因表达的影响

目的:观察脾切除大鼠受内毒素攻击后,组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及基因表达的变化规律,探索脾切除对内毒素诱生TNF-α的影响.方法:Wistar大鼠随机分为无脾组(n=36)和有脾组(n=36),动物静脉注射大肠杆菌脂多糖0.1 mg/kg制作内毒素血症模型.采用酶联免疫吸附法测定肺、肝组织TNF-α含量,并应用逆转录聚合酶链(PCR)技术检测组织TNF-α mRNA表达改变.结果:内毒素注射后0.5小时肝、肺组织TNF-α水平开始升高,1.5小时无脾组显著高于有脾组(P<0.01 和P<0.05).肝、肺组织的TNF-α mRNA表达与TNF-α的水平呈正相关,无脾动物肺组织TNF-α mRNA明显高于有脾动物(P<0.05).结论:脾切除动物受内毒素攻击时,其TNF-α的合成与释放明显高于有脾动物.