基因工程乙肝—百白破四联疫苗稳定性研究

三批基因工程乙肝（中华仓鼠卵巢细胞表达）－百白破四联疫苗（ｒＨＢ（ＣＨＯ）－ＤＴＰ）经自检和中国药品生物制品检定所检定，各项指标均达到国家制检规程的要求。通过３７℃热稳定试验和２～８℃存入１２及２２个月长期稳定性的观察，百日咳、白喉、破伤风抗体的水平与稳定性试验之前比较，无显著性差异（Ｐ均〉０．０５），基因乙肝ＥＤ５０比值至２２个月时在１．５１～２．１３之间。表明试制的四联疫苗具有较好的稳定性。     

冻干麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗的研制

由麻疹病毒沪 191株和腮腺炎病毒 WM84株在 SPF鸡胚成纤维细胞上制备的单价病毒液 ,在特定的工艺流程中 ,按比例配制后加入适宜的保护剂 ,经冻干而制备成冻干麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗。 6批冻干二联疫苗经自检和中国药品生物制品检定所检定 ,结果提示 :冻干疫苗的基础滴度与热稳定性等指标均符合 WHO规程和《中国生物制品规程》 (1995年版 )中对单价麻疹疫苗和单价腮腺炎疫苗的规程要求 ;冻干二联疫苗在 2～ 8℃保存 18个月的滴度稳定性与单价疫苗一致。     

樟树市2011年学龄前儿童乙型肝炎疫苗免疫接种效果分析

目的了解樟树市2011年学龄前儿童按0、1、6免疫程序接种乙型肝炎疫苗3剂后的乙肝免疫水平,为进一步做好乙肝防治工作提供依据。方法采用随机抽样的方法。以2011年樟树市疾病预防控制中心门诊(按0、1、6免疫程序接种乙型肝炎疫苗3剂)完成乙型肝炎疫苗接种的1 422名儿童作为研究组,以2000年在樟树市疾病预防控制中心门诊已预防接种乙型肝炎疫苗的1 629名儿童作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法、使用酶标分析仪检测2组儿童乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和抗乙肝病毒表面抗体(Anti-HBs)水平。结果 1 422名儿童中,Anti-HBs阳性率为83.68%(1 190/1 422)。<1岁儿童Anti-HBs阳性率为95.14%(196/206),最高;≥4～6岁儿童Anti-HBs阳性率为67.36%(291/432),最低;<1、≥1～<2、≥2～<4岁儿童Anti-HBs阳性率均显著高于≥4～6岁儿童(均P<0.05)。男性Anti-HBs阳性率与女性比较差异无统计学意义(P>0.05),城区儿童Anti-HBs阳性率显著高于农村儿童(P<0.05),已加强乙型肝炎疫苗接种儿童Anti-HBs阳性率显著高于未加强乙型肝炎疫苗接种儿童(P<0.05),研究组男、女性Anti-HBs阳性率均显著高于对照组(均P<0.05)。研究组男、女性HBsAg阳性率均显著低于对照组(均P<0.05),研究组男性Anti-HBs、HBsAg阳性率与对照组女性比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。研究组接种乙型肝炎疫苗的儿童Anti-HBs阳性率显著高于对照组(P<0.05),HBsAg阳性率显著低于对照组(P<0.05)。结论 Anti-HBs阳性率有随年龄增长而呈显著下降趋势,农村儿童Anti-HBs阳性率明显较城区儿童低。做好儿童乙肝表面抗体监测,适时加强乙型肝炎疫苗接种,可减少乙肝感染机会,保护儿童健康。     

国产乙型肝炎基因工程疫苗阻断母婴传播3年免疫水平变化

为了解国产乙型肝炎 (乙肝 )基因工程疫苗阻断母婴传播 3年免疫水平变化规律 ,为何时需要加强免疫提供依据。对 83名HBsAg和HBeAg均阳性产妇所分娩的婴儿 ,按 0、1、6月程序 ,5 μg/次接种国产乙肝基因工程疫苗。于免疫后 3、9、12、2 4和 3 6个月采血 ,由卫生部药品生物制品检定所用美国Abbott(RIA)试剂检测婴儿HBsAg ,抗HBs阳转率及抗HBs水平 (GMT)的变化。结果 :免疫后 3～ 3 6个月婴儿的HBsAg阳性率为 7.2 3 %。抗HBs阳转率 3、9、12、2 4和 3 6个月分别为 78.6%、92 .0 %、88.2 %、85 .7%和 76.9%。抗HBs水平 (GMT) 3、9、12、2 4和 3 6个月分别为 5 2 .1MIU/ml、10 0 .3MIU /ml、87.7MIU/ml、5 7.6MIU /ml和 5 0 .0MIU /ml。呈冲高—下降—稳定的趋势。认为国产乙肝基因工程疫苗3剂免疫后 3年内不需要加强免疫。     

乙型肝炎病毒基因重组（CHO）疫苗阻断母婴传播的研究

目的：研究乙型肝炎病毒基因重组(CHO)疫茵对HBsAg和HBeAg双阳性母亲所生婴儿的阻断效果。方法：选70例生于母亲为HBsAg和HBsAg双阳性的婴儿,随机分为A组(31例)和B组(39例),A组为单纯疫苗组,注射3次疫苗(0、1、6月,10μg／次);B组为疫苗加乙肝免疫球蛋自(HBIG)组,注射3次疫苗(同A组),并于出生时注射半支(50IU)HBIG。全程2～6个月采血,用固相放射免疫(RIA)法检测抗-HBs、HBsAg和抗-HBc。结果：抗抗-HBs阳转率为83．87％,阻断率为83．87％,疫苗加半量乙肝免疫球蛋白(50IU)组分别为93．10％和93．59％。结论：乙肝基因重组(CHO)疫苗有良好的阻断乙肝母婴传播的效果,如果出生时加注半支HBIG效果更好。     

52例支气管哮喘患儿HbsAb产生情况调查

1临床资料 调查组为2005年1月-2006年12月本科收治首次确诊的支气管哮喘患儿52例,按哮喘诊断标准确诊;男性28例,女性24例;11个月～2岁9例,2～4岁24例,4～7岁19例,平均年龄4岁零9个月.对照组为同期收治的急性下呼吸道感染患儿82例,均无反复呼吸道感染史,无药物及食物过敏史;男性40例,女性42例;3个月～2岁31例,2～4岁30例,4～7岁21例,平均年龄4岁零2个月.两组年龄比较差异无显著性,均按时预防接种乙肝疫苗.父母均未感染乙肝.在住院治疗期间采用酶联免疫吸附试验--双抗体夹心法检测乙肝系列.组间比较采用x2检验.结果:调查组HbsAb( )9例,其中＜2岁1例,2～4岁3例,4～7岁5例;HbsAb(一)43例.对照组HbsAb( )72例,其中＜2岁27例,2～4岁27例,4～7岁18例;HbsAb(一)10例.两组HbsAb阳性率比较,X2=63.23,P＜0.05,差异有显著性.     

经胸膜外入路一期植骨融合前路内固定治疗胸椎结核

目的探讨经胸膜外入路一期病灶清除植骨Ventrofix单棒内固定治疗胸椎结核的可行性。方法2000年11月至2004年5月采用上述手术方式治疗胸椎结核12例，发病部位T4～T9，均为相邻二椎体受累，病程10～22个月，平均14．1月，脊柱后凸角14°～32°。，平均24．4。术前常规应用链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇四联抗痨治疗2～4周．纠正贫血。术后持续四联抗痨治疗，链霉素应用3个月后停药，共持续用药12个月。结果手术时间2．5～3、5h，平均2．8h。手术失血量300～550ml，平均380ml。随诊1．5～5年，平均3．2年，所有病例均治愈，脊椎后凸角平均矫正至8．5°。结论经胸膜外入路一期病灶清除植骨前路单棒Ventrofix内固定治疗胸椎结核安全有效，创伤小，操作简单。     

北京株水痘减毒活疫苗病毒滴度稳定性的初步考察

目的初步考察北京株(VZV84-7)水痘减毒活疫苗病毒滴度的稳定性。方法将成都生物制品研究所有限责任公司(简称成都公司)连续生产的3批北京株水痘减毒活疫苗分别置2~8℃、25℃、37℃保存不同时间,采用蚀斑形成单位(PFU)试验检测不同时间点疫苗的病毒滴度,考察其稳定性。结果疫苗在2~8℃条件下保存18个月,25℃保存12个月,病毒滴度均符合《中华人民共和国药典》的要求;疫苗在37℃保存4周,虽然病毒滴度均符合质量标准的要求,但部分批次从第3周开始,热稳定性已不符合质量标准的要求。结论成都公司生产的北京株水痘减毒活疫苗病毒滴度的稳定性良好。     

TRFIA与ELISA法对乙肝两对半测定的比较分析

目的研究酶联免疫吸附试验法(ELISA)与时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)两种方法检测乙肝两对半的符合程度,了解两种方法的灵敏度、特异性,探讨TRFIA定量测定乙肝两对半的临床应用价值。方法用TRFIA与ELISA对1340例临床标本同时检测,并进行对比分析。结果两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种方法在检测准确性等方面均较好,而TRFIA技术具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、定量、试剂稳定、无放射性污染等优点。     

116例儿童麻疹脊髓灰质炎乙肝免疫抗体分析

目的:了解和掌握儿童免疫水平,为预防和控制疫苗所针对传染病提供技术支撑.方法:随机抽取长治市郊区北中部地区2个乡镇116例年龄在1～10岁常住儿童血清,应用酶联免疫吸附试验法进行检测.结果:脊髓灰质炎疫苗抗体阳转率100.0％;麻疹疫苗抗体阳转率97.1％;乙肝表面抗体阳转率43.1％,各年龄之间存在显著性差异.结论:当地农村儿童脊髓灰质炎、麻疹抗体分别实现了“十二五”时期卫生事业规划中≥90.0％的目标,但是乙肝表面抗体阳转率仍较低,需进一步加强.     

HBsAg消失后的转归和免疫干预接种效果

目的观察HBsAg消失后的转归及对乙肝疫苗和乙肝疫苗加免疫激动剂干预免疫的效果。方法连续收集感染HBV后HBsAg消失，以后未出现抗-HBs者97名，年龄18～68（41．9）a，分三组。1组57（22名来自组2对乙肝疫苗无反应者）名，予CHO乙肝疫苗30gg，三角肌内注射，1次／wk，共4针；于同侧近腋皮下注射胸腺因子α1（Tα1）1．6mg，2次／wk，共4wk。2组35名，只接种乙肝疫苗，剂量、方法同1组。3组27名，仅作定期复查。结果末针后1mo五项均阴性、抗-HBe＋和抗-HBc＋、抗-HBc＋者中抗-HBs阳转者组1为12／16（75．0％）、14／19（73．1％）、14／22（63．0％）名，组2仅五项全阴性者中1名（1／10，10．0％），组3无1名，差异显著（P〈0．01）。来自组2的22名抗-HBs阳转率（59．1％）亦高于组2和3（P〈0．01）。随访4．7（2-6）a组1和3抗-HBc消失各1名，平均年消失率为0.3％。平均抗-HBs年阳转率为1．4％。组2、3各有1名出现HBsAg复阳（2．4％）。结论HBsAg消失后年抗-HBs自发性阳转率和抗-HBc消失率很低，甚至有逆转为HBsAg的可能；较大剂量乙肝疫苗加Tα1干预免疫是一有效的方法，对HBV血清学标志物全阴者效果尤佳。     

不同剂量重组乙肝疫苗的免疫效果评价

目的：了解不同剂量重组（酵母）乙肝疫苗和重组（CHO）乙肝疫苗在大学生中的乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）应答,为成人乙肝疫苗接种剂量的确定提供依据。方法： 238例新入校大学生随机分为4组,按照0、1和6个月免疫程序分别接种两种不同剂量(酵母)乙肝疫苗和(CHO)乙肝疫苗,全程免疫后1个月,检测血清抗-HBs阳转率和抗-HBs平均几何滴度（GMT）,同时观察4组的不良反应。结果： 接种10 μg(酵母)乙肝疫苗组、10 μg(CHO)乙肝疫苗、20 μg(CHO)乙肝疫苗及20 μg(酵母)乙肝疫苗组的抗-HBs 阳转率分别为98.3%、95.0%、96.7%及96.5%,4组重组乙肝疫苗的抗-HBs阳转率之间比较差异无显著性 (χ²=1.034,P>0.05);4组疫苗之间抗-HBs GMT比较差异有显著性（Kruskal-Wallis χ² =18.301,P<0.05）,其中10 μg（酵母）乙肝疫苗组的抗-HBs GMT高于10 μg（CHO）乙肝疫苗组(P<0.05);2种20 μg乙肝疫苗组之间的抗-HBs GMT比较差异无显著性(P>0.05);20 μg(CHO)乙肝疫苗组的抗-HBs GMT高于10 μg组 (P<0.05); 10 μg与20 μg（酵母）乙肝疫苗组抗-HBsGMT比较差异无显著性（P>0.05)。男女性别间不同剂量乙肝疫苗抗-HBs GMT比较差异无显著性(Mann-Whitney U=6 512.000,P>0.05)。未发现明显的不良反应。结论： 重组乙肝疫苗对成人具有较好的免疫原性和安全性,建议成人接种10 μg重组乙肝疫苗。     

PEG6000修饰的流感疫苗脂质体的制备和稳定性

目的 筛选出PEG6000流感疫苗脂质体的最佳制备工艺并且评价其稳定性.方法 将小鼠免疫7d,通过MTT法确定加入PEG6000的最佳摩尔百分比和最佳制备工艺.采用冻融冻干法制备PEG修饰的流感疫苗脂质体,将样品分别储存于不同温度[4℃、(25±2)℃、(37±2)℃]下,在设定时间取样测定包封率、胸腺指数和抗体滴度,...     

不同乙型肝炎疫苗预防接种效果比较

目的:比较不同乙型肝炎(乙肝)疫苗预防接种的效果。方法:将282例乙型肝炎疫苗预防接种对象随机分为重组乙肝疫苗(CHO细胞)组和重组乙肝疫苗(汉逊酵母)组,每组141例,比较两组人群的抗体阳转率和几何平均浓度。结果:汉逊酵母组抗体阳转率为95.7%,显著高于CHO细胞组的85.8%,几何平均浓度为(2463.7±149.6)IU/L,显著高于CHO细胞组的(1576.7±123.2)IU/L,组间差异均有统计学意义(P<0.05),两组患者接种期间无严重不良反应发生。结论:重组乙肝疫苗(汉逊酵母)预防接种效果好,安全性高,值得临床进一步推广使用。     

Clinical evaluation in healthy adults of a hepatitis B vaccine made by recombinant DNA

A vaccine formulated from hepatitis B surface antigen (HBsAg) produced by a recombinant strain of the yeast Saccharomyces cerevisiae was administered to two groups of human volunteers composed of 37 healthy, low-risk adults. Each subject received a 10-micrograms dose of HBsAg at 0, 1, and 6 months. By one month, 27% to 40% of the vaccinees had antibody to HBsAg, and by three months 80% to 100% were antibody positive. Large boosts in titer followed the third dose at six months. The antibody formed is predominantly specific for the a determinant of HBsAg. There have been no serious reactions attributable to the vaccine. The most frequent complaint has been transient soreness at the injection site. As far as we know, this is the first reported use in man of a vaccine prepared by recombinant DNA technology.     

重组EGFR-γFc融合DNA疫苗联合热疗抗肿瘤免疫的实验研究

目的构建EGFR-γFc融合DNA疫苗并观察其联合41℃热疗对小鼠移植肿瘤的抑制作用。方法以异种同源鸡EGFR膜外部分与IgG的γFc段的基因片段为基础构建真核表达质粒PVAX1／cEGFR-γFc,免疫荧光法检测融合蛋白在真核细胞中的表达,随后将Lewis肺癌移植瘤小鼠随机分为疫苗组、热疗组、合并组和对照组。疫苗组于每只小鼠双侧股四头肌注射100Ixg重组质粒,每5d重复1次,共3次;热疗组对荷瘤小鼠行局部41℃热疗,每5d重复1次,共3次;联合组小鼠按疫苗组小鼠的同样方法注射质粒后同时行局部热疗;对照组小鼠注射生理盐水。末次处理5d后ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞上清液中细胞因子IL-2和IFN-γ的水平,流式细胞仪测定脾细胞淋巴细胞亚群;观察小鼠荷瘤后的生存率;末次处理后14d部分成瘤动物处死,取出瘤体称重,计算抑瘤率。结果联合组小鼠脾淋巴细胞TH1型细胞因子IL-2和IFN-γ浓度较其他各组明显升高（P〈0．01）,CD8^＋T淋巴细胞数目增加（P〈0．01）,接瘤后14d联合组平均瘤重低于其他各组（P〈0．01）,抑瘤率达70％,接瘤后30d联合组动物生存率也高于其他各组。结论41℃热疗可能通过细胞免疫增强EGFR靶向DNA疫苗的抗肿瘤效果,热疗联合EGFR靶向DNA疫苗可能是一种有希望的抗肿瘤途径。     

Construction and expression of human alpha-fetoprotein recombinant plasmid]

OBJECTIVE: To construct AFP-expressing plasmid and study the expression in eukaryotic cells. METHODS: Total RNA was isolated from fetal liver tissue. Full-length human AFP cDNA was obtained by RT-PCR amplification and then recombined into eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1. The AFP sequence of the recombinant plasmid phAFP was determined. The AFP expressions in CHO transfected with phAFP and in muscle after injection phAFP were investigated by immunohistological methods. RESULTS: The restriction endonuclease mapping of recombinant plasmid showed 1.8 kb fragment as well as full-length human AFP cDNA, and the sequence is consistent with that from GenBank. The phAFP was successfully expressed in CHO and in muscle tissues. CONCLUSION: These results suggested that AFP can be used as a target gene of DNA vaccine in heptocellular carcinoma therapy.     

人AFP全长基因编码序列的克隆及表达

目的 构建人AFP全长基因编码序列的真核表达质粒,并在CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法 从人胎肝组织中提取AFP基因,以全长基因序列为目的基因片段,真核表达质粒pcDNA3．1( )为载体,构建AFP重组质粒phAFP,经酶切分析和DNA测序对phAFP进行鉴定。重组质粒phAFP经脂质体转染真核细胞CHO以及直接注射小鼠胫前肌,并采用免疫荧光染色及免疫组化对其表达产物进行检测。结果 获取的AFP基因片段与GenBank报道的序列一致,确认为人AFP基因的全长编码序列,构建的重组质粒phAFP能在体外真核细胞CHO、体内肌细胞中有效表达。结论 成功构建了能在真核细胞中表达的重组质粒phAFP,为AFP DNA疫苗治疗肝癌的研究打下基础。     

不同物理和化学因素对重组人角质细胞生长因子2稳定性的影响

目的:研究重组人角质细胞生长因子2 (rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法: rhKGF-2在不同温度(－20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH 4～9)、缓冲溶液（柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、吉斐氏缓冲溶液）及反复冻融条件下分别保存,采用RP-HPLC法检测rhKGF-2纯度,同时观察外观性状。结果：－20℃、4℃分别保存时,rhKGF-2的各项性质在观察期内都无明显变化;25℃时,rhKGF-2存放28 d纯度较0 h(100.00%)下降至(68.20±0.14)%;40℃时,rhKGF-2存放9 h纯度较0 h(100.00%)下降至(4.80±0.39)%。rhKGF-2(pH　6.0)在25℃条件下保存90 d纯度较0 h(100.00%)下降至(79.20±0.12)%,与对照组(0 h)比较差异有显著性(P<0.05);pH值为4.0、9.0的rhKGF-2液体在25℃条件下分别保存120　h纯度较0 h(100.00%)下降至(15.60±0.30)%和(67.30±0.10)%,与对照组(0 h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2在柠檬酸缓冲液中25℃条件下保存60　d纯度较0 h(100.00%)下降至(79.20±0.15)%,与对照组(0 h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2原液反复冻融后其纯度变化差异无显著性(P>0.05)。结论：rhKGF-2在低温和pH 6.0～7.0中性条件下稳定。高温、偏酸性和偏碱性条件下均不利于rhKGF-2稳定。柠檬酸缓冲液有利于rhKGF-2稳定。反复冻融对rhKGF-2稳定性影响不明显。     

Recombinant glycoprotein vaccine for the prevention of genital HSV-2 infection: two randomized controlled trials. Chiron HSV Vaccine Study Group.

CONTEXT: In the last 3 decades, herpes simplex virus type 2 (HSV-2) infection seroprevalence and neonatal herpes have increased substantially. An effective vaccine for the prevention of genital herpes could help control this epidemic. OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of a vaccine for prevention of HSV-2 infection. DESIGN: Two randomized, double-blind, placebo-controlled multicenter trials of a recombinant subunit vaccine containing 30 microg each of 2 major HSV-2 surface glycoproteins (gB2 and gD2) against which neutralizing antibodies are directed, administered at months 0, 1, and 6. Control subjects were given a citrate buffer vehicle. Participants were followed up for 1 year after the third immunization. SETTING AND PARTICIPANTS: We enrolled 2393 persons from December 10, 1993, to April 4, 1995, who were HSV-2 and human immunodeficiency virus seronegative. One trial with 18 centers enrolled 531 HSV-2-seronegative partners of HSV-2-infected persons; the other, with 22 centers, enrolled 1862 persons attending sexually transmitted disease clinics. A total of 2268 (94.8%) met inclusion criteria and were included in the analysis with 1135 randomized to placebo and 2012 to vaccine. MAIN OUTCOME MEASURE: Time to acquisition of HSV-2 infection, defined by seroconversion or isolation of HSV-2 in culture during the study period by randomization group. RESULTS: Time-to-event curves indicated a 50% lower acquisition rate among vaccine vs placebo recipients during the initial 5 months of the trial; however, overall vaccine efficacy was 9% (95% confidence interval, -29% to 36%). Acquisition rates of HSV-2 were 4.6 and 4.2 per 100 patient-years in the placebo and vaccine recipients, respectively (P =.58). Follow-up of vaccine recipients acquiring HSV-2 infection showed vaccination had no significant influence on duration of clinical first genital HSV-2 episodes (vaccine, median of 7.1 days; placebo, 6.5 days; P>.10) or subsequent frequency of reactivation (median monthly recurrence rate with vaccine, 0.2; with placebo, 0.3; P>.10). The vaccine induced high levels of HSV-2-specific neutralizing antibodies in vaccinated persons who did and did not develop genital herpes. CONCLUSIONS: Efficient and sustained protection from sexual acquisition of HSV-2 infection will require more than high titers of specific neutralizing antibodies. Protection against sexually transmitted viruses involving exposure over a prolonged period will require a higher degree of vaccine efficacy than that achieved in this study.