胃癌中p-Stat3活化和SOCS3表达的临床病理意义及其对预后的影响

目的：探讨胃癌及癌旁组织中信号传导与转录激活因子3（Stat3）的活化及细胞因子信号转导抑制蛋白3（SOCS3）的表达水平对胃癌的发生、发展以及预后的影响。方法应用免疫组织化学Envision法检测53例胃癌以及其中27例相应癌旁组织中活化的Stat3（p‐Stat3）的活化及SOCS3的表达水平,并结合患者的临床病理及随访资料进行分析。结果胃癌组织细胞核中p‐Stat3的活化水平显著高于癌旁组织,细胞质中SOCS3的阳性表达明显低于非癌组织（P＜0．05）。胃癌组织中p‐Stat3活化水平与肿瘤浸润深度、分化程度和TNM分期呈明显正相关,SOCS3的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期及淋巴结转移存在明显的负相关（P＜0．05）。胃癌中p‐Stat3活化水平与SOCS3表达水平呈明显负相关（r＝－0．492,P＜0．05）。Kaplan‐Meier生存分析结果显示,p‐Stat3的活化水平与患者生存率呈显著负相关（χ2＝－5．05,P＜0．05）;相反,SOCS3表达水平则与患者生存率呈显著正相关（χ2＝10．852,P＜0．05）。结论p‐Stat3水平增高及负调节分子SOCS3的表达减少可能参与胃癌的发生、发展,可为评估胃癌预后的潜在临床指标。     

热休克蛋白gp96在人胃癌组织中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白gp96在人胃癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化S-P法检测对60例胃癌手术根治标本及癌旁组织进行HSP gp96检测。结果HSP gp96在胃癌和癌旁组织中阳性表达率为65％和31．7％,差别有统计学意义（P〈0．05）。HSP gp96阳性表达率随着肿瘤病程进展（TNM分期）而增加（P〈0.05）;在低分化型胃癌中的阳性表达率高于中、高分化型胃癌（P〈0.05）;在伴淋巴结转移肿瘤中的表达率高于无淋巴结转移者（P〈0.05）;但HSP gp96阳性表达率与肿瘤的大体形态、侵犯深度不同之间的差别无统计学意义（P〉0．05）。结论热休克蛋白gp96可作为早期胃癌的诊断,临床治疗,手术成功率,和胃癌预后判断的新的综合参考指标。     

原发性肝细胞癌P53、P16和c-erbB-2蛋白表达意义

目的：研究P53、P16和c-erbB-2蛋白表达与原发性肝细胞癌发生物学行为的关系。方法：应用免疫组化链霉素抗生素蛋白－过氧化物酶连结法（LSAB）检测60例原发性肝细胞癌和癌旁肝组织P53、P16和c-erbB-2蛋白表达。结果：P53、P16和c-erbB-2在原发性肝细胞癌中的阳性率分别为41．6％、35％和58．33％，癌旁肝组织的阳性率分别为8．33％、88．33％和21．67％，差异有显著性（P＜0．01或P＜0．05）。P53和c-erbB-2与肝细胞癌的病理组织学分级具有一定程度的相关性，P16蛋白与病理组织学分级有显著差异（P＜0．05）。P16、c-erbB-2和P53均与转移有关。P53蛋白表达与c-erbB-2蛋白表达具有显著的协同性（P＜0．05），与P16蛋白表达呈负相关性（P＜．05）。结论：肿瘤的多因素分析比单因素分析更有价值，癌基因c-erbB-2和抑癌基因P53、P16蛋白的表达异常及协调作用在原发性肝癌的发生、发展中起重要作用。     

胃癌组织中P53及P21蛋白的表达及意义

目的：探讨P53和P21蛋白异常表达在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化技术检测38例胃癌及相应癌旁组织中P53和P21蛋白的表达。结果：胃癌组织P53蛋白表达率84．21％（32／38）,癌旁组织P53蛋白表达均为阴性。胃癌组织P53蛋白表达率明显高于癌旁组织,差别具有显著性（χ^2=55．27,P〈0．05）。胃癌组织P21蛋白阳性表达率52．63％（20／38）,癌旁组织P21蛋白阳性表达率89．73％（34／38）,胃癌组织P21蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,差别有显著性（χ^2=12．546,P〈0．05）。胃癌组织中P21与P53蛋白共同阳性表达率为47．36％,但两者无相关性（P〉0．05）。结论：P53和P21蛋白表达异常与胃癌发生有着密切关系。     

肝外胆管癌组织中HSP70的表达意义

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）在肝外胆管癌组织中的表达及其临床意义。方法：以兔抗人HSP70多克隆抗体为试剂，应用免疫组织化学方法（SP法），检测30例肝外胆管癌组织中HSP70的表达水平，并与癌旁非癌组织作对照。结果：在肝外胆管癌30例中，HSP70表达阳性率为77％，而癌旁非癌组织阳性率则为13％，二有显性差异（P＜0．05）。癌组织中HSP70阳性表达率与病理分级有关，组织学分级I，Ⅱ级与Ⅲ，Ⅳ级阳性经分别为56％和100％，二有显性差异（P＜0．05）。原发癌灶直径≥2cm及＜2cmHSP70阳性表达率分别为95％及50％，二有显性差异（P＜0．05）；肿瘤伴转移与无转移HSP70阳性表达率分别为100％及59％，二有显性差异（P＜0．05）。结论：肝外胆管癌组织HSP70表达明显增,且与组织学类型、癌灶大小及癌转移有关。     

大肠癌组织胃泌素与P53蛋白表达及PCNA的相关性研究

目的：探讨大肠癌组织胃泌素与P53蛋白表达的关系及其对肿瘤增殖活性的影响。方法：放免法检测32例大肠癌血清及癌组织胃泌素含量。免疫组化标记癌组织有癌近旁黏膜胃泌素、P53蛋白、PCNA表达。结果：癌组织胃泌素与P53蛋白表达强度呈正相关（r＝0．4666，P＜0．01），且二者均与肿瘤PCNA表达强度呈正相关（r＝0．8483，r＝0．5668，P＜0．025）。二者共同表达肿瘤PCNA较各自增高。P53蛋白表达与血清、癌组织胃泌素水平升高有关。癌近旁黏膜P53蛋白表达组较未表达组PCNA表达强度增高（P＜0．05），但与血清胃泌素水平无关。结论：大肠癌胃泌素、P53蛋白独自或共同表达均可提高大肠癌增殖活性；癌近旁黏膜增殖状态与P53基因突变有关，但与胃泌素表达及血清胃泌素水平无关。     

SATB1和COX-2在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨特异AT序列结合蛋白1（SATB1）及环氧化酶-2（COX-2）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测30例胃癌组织及30例癌旁组织中SATB1、COX-2的表达。结果SATB1、COX-2在胃癌组织中的阳性表达率为66．67％和46．67％,癌旁组织中的阳性表达率为0和10％,2种蛋白在癌组织中的阳性表达显著高于癌旁组织（P〈0．05）;胃癌组织中SATB1、COX-2的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期及是否淋巴结转移有关（P〈0．05）,2种蛋白的表达均与患者性别、年龄、肿瘤分化程度无关（P〉0．05）。胃癌组织中SATB1与COX-2的表达呈正相关（r=0．52,P〈0．05）。结论SATB1和COX-2基因的表达与胃癌的发生和转移有关,二者具有协同作用。联合检测SATB1和COX-2蛋白的表达,有利于评估胃癌的生物学行为。     

胰腺癌组织中HSP60、HSP70和P53的表达及意义

[目的]了解HSP60、HSP70及P53在慢性胰腺炎组织及胰腺癌组织中的表达及其意义。[方法]应用免疫组织化学ABC法检测HSP60、HSP70及P53在慢性胰腺炎12例、癌旁组织及胰腺癌63例（其中高、中、低分化各为14、23、26例）中的表达,结果进行卡方检验及相关性分析。[结果]在慢性胰腺炎、癌旁组织及胰腺癌中,HSP60的过表达率17％、10％、70％（P〈0．01）;HSP70的过表达率25％、13％、75％（P〈0．01）。在高、中、低分化胰腺癌中,HSP60的过表达率43％、70％、85％（P〉0．05〉;HSP70的过表达率36％、78％、92％（P〈0、01）。HSP70的过表达率与是否发生淋巴结转移有显著关系（P〈0．05）;P53在胰腺癌中的表达率59％,与HSP60、HSP70在胰腺癌中的表达呈正相关（P〈0．01）。[结论]胰腺癌是HSP60、HSP70高表达肿瘤,HSP70与胰腺癌临床病理特征和生物学行为有更密切的关系。P53与HSP60、HSP70在肿瘤中的表达密切相关。     

胃癌中hMSH2和PTEN的表达及临床意义

目的：探讨人类 mut-s同系物2（human mut-s homologue 2,hMSH2）和抑癌基因人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN）在胃癌组织中的蛋白表达及与临床病理特征之间的关系。方法采用 SP 免疫组织化学法检测42例胃癌组织及其相应的近端癌旁组织（距癌组织3cm）、远端癌旁组织（距癌组织＞10cm）及15例正常胃组织 hMSH2和 PTEN蛋白表达;采用Western Blot半定量检测42例胃癌组织及相应远端癌旁组织（距癌组织＞10cm）hMSH2和PTEN蛋白表达。分析 hMSH2和PTEN在胃癌组织中的蛋白表达与临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织中 hMSH2和PTEN蛋白表达缺失率明显高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组织（P＜0．05或＜0．01）。PTEN蛋白表达缺失率与肿瘤分化程度负相关（rs＝-0．707,P＜0．05）,与 TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关（rs＝0．748、0．979、0．850、0．877,P＜0.05）。hMSH2和PTEN蛋白表达在胃癌中呈正相关。在胃癌组织中错配修复基因 hMSH2蛋白表达缺失伴有PTEN蛋白表达下调。结论 PTEN表达与胃癌临床病理特征相关;在胃癌发生发展过程中错配修复蛋白 hMSH2表达缺失伴有PTEN蛋白表达下调。     

CXC 趋化因子受体5及其配体 CXCL13在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究 CXC 趋化因子受体5（CXCR5）及其配体 CXCL13在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法（FQ －PCR）和蛋白印记法（Western blot）检测37例 NSCLC患者癌组织及癌旁组织和21例非炎性正常肺组织 CXCR5及其配体 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达。结果FQ －PCR 及 Western blot 结果显示,癌组织中 CXCR5及其配体 CXCL13 mRNA 及蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织（mRNA：2．92±0．31 vs．1．16±0．18 和2．46±0．28 vs．1．07±0．20,P ＜0．01;蛋白：1．93±0．21 vs．0．93±0．11和2．13±0．33 vs．1．07±0．21,P ＜0．01）。 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达呈正相关（mRNA：r ＝0．648,P ＜0．01;蛋白：r ＝0．669,P ＜0．01）。癌组织 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白阳性表达率显著高于相应癌旁组织（P ＜0．01）,且癌组织 CXCR5及 CXCL13 mRNA 和蛋白的表达与肿瘤类型、肿瘤分化程度、是否有淋巴结转移和肿瘤 TNM分期有关（P ＜0．05）;而正常肺组织中均无 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达。结论CXCR5与 CXCL13在NSCLC 患者癌组织、癌旁组织中均高表达,其协同作用可能参与 NSCLC 的发生及发展过程。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及意义

目的　探讨肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 6 2例肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达。结果　肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达阳性率分别为 5 3.2 %和6 4 .5 % ,PCNA蛋白表达阳性肺癌Fhit蛋白阳性率明显低于PCNA蛋白表达阴性肺癌 (P <0 .0 1)。Fhit蛋白和PCNA蛋白在肺癌中表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移、3年生存期均密切相关 ,PCNA蛋白与肺癌病理类型亦有关。结论　Fhit蛋白和PC NA蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关 ,二者相互抑制 ,呈明显负相关     

Survivin、Her-2、P16和PTEN在膀胱癌中的表达及意义

目的研究Survivin、Her2、P16和PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法检测43例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中以上4种蛋白的表达。结果4种蛋白在膀胱癌中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有显著性意义(均为P<0.01)。不同临床分期间Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05);不同病理分级间Survivin、Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。Her2和Survivin蛋白表达间存在正相关(r=0.821,P<0.05)。结论Her2和Survivin的高表达是膀胱癌预后不良的指征;P16可作为早期诊断的标记物;PTEN则可作为膀胱癌预后不良的独立性指标。     

子宫腺肌病中PTEN和Akt的表达及其相关性研究

目的探讨子宫腺肌病病灶中10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(PTEN)和蛋白激酶B（PKB/Akt）的蛋白表达情况,旨在为子宫腺肌病的发生发展以及治疗提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜（27例）、正常子宫内膜(20例)的腺上皮细胞和间质细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt （P Akt）蛋白的表达并进行比较。结果PTEN蛋白在腺上皮细胞中的表达,正常子宫内膜表达高于在位内膜和异位内膜（P＜0.05,P＜0.01）,子宫腺肌病在位内膜的表达高于子宫腺肌病异位内膜的表达（P＜0.01);Akt、P Akt蛋白在子宫腺肌病异位内膜的腺上皮细胞中的表达强度高于在位内膜（P＜0.05）和正常子宫内膜(P＜0.01),其在位内膜腺上皮细胞中的表达强度高于正常子宫内膜(P＜0.01)。PTEN蛋白在间质细胞中的表达,正常子宫内膜明显高于子宫腺肌病的在位内膜和异位内膜（P＜0.05）,但在位内膜与异位内膜之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Akt、P Akt蛋白在间质细胞中的表达,异位和在位内膜明显高于正常内膜,异位内膜和在位内膜两组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PTEN与Akt、PTEN与P Akt在子宫腺肌病异位内膜、在位子宫内膜和正常子弓内膜中的表达均呈负相关（r＝-0.444;r＝-0.546）。结论PTEN蛋白表达在子宫腺肌病的在位、异位内膜中减少;Akt、P Akt蛋白表达增加。PTEN蛋白低表达不能有效的抑制Akt的激活,从而对子宫腺肌病的发生与发展起重要的作用。     

星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达及意义

目的研究人脑星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白的差异表达，探讨它们之间、它们与病理分级及复发之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测了50例星形细胞瘤中不同级别的FHIT、、PCNA蛋白的表达水平，以10例非肿瘤脑组织作对照。结果非肿瘤脑组织FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为100％、0，星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为40％、86％；尽管在星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达总体差异有显著性（P〈0．05），Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅳ级间比较差异有显著性（P〈0．05），但Ⅲ级与Ⅳ级比较差异无显著性（P〉0．05）；经统计学分析FHIT、PCNA蛋白呈皿著负相关（P〈0．01）；8例复发病例中复发前后FHIT、PCNA蛋白表达差异有显著性（P〈0．05）。结论星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达之间的显著负相关，提示FHIT、蛋白可能对细胞增殖具有负性调控作用。FHIT、PCNA蛋白的表达水平可能与星形细胞瘤的病理分级和复发有关，推测FHIT、PCNA蛋白的表达可能与星形细胞瘤的肿瘤侵袭性相关。     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

P53、Caspase-3和凋亡调节蛋白FasL在乳腺癌的表达及其意义

目的:通过在人乳腺癌组织和癌旁(相对正常)乳腺组织中观察p53、Caspase-3和FasL凋亡调节蛋白的表达,探讨p53、Caspase-3及FasL在乳腺癌疾病发生、发展过程中的作用及关系,为提高生物治疗乳腺癌疾病提供一定的实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检测21例收集于手术切除患者的乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织中的p53、Caspase-3及FasL。结果:P53蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为61.9%明显高于癌旁组织(相对正常)乳腺组织的0%;而Caspase-3蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.0%明显低于癌旁乳腺组织的80.9%;FasL蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为57.1%明显高于癌旁乳腺组织的19.0%。结论:在乳腺癌发生、发展过程中p53、Caspase-3和FasL蛋白发挥着既独立又协同的作用。     

WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义

目的研究WWOX与c-jun在胃癌中表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测60例原发性胃癌及其癌旁组织中WWOX与c-jun蛋白的表达情况。结果胃癌组织中WWOX蛋白阳性表达率(28.3%)显著低于在癌旁组织中的表达率(81.7%)(P<0.01)。胃癌组织中c-jun蛋白阳性表达率(68.3%)显著高于其癌旁组织中的表达率(23.3%)(P<0.01)。WWOX蛋白的阳性表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),与其他临床病理参数无关。c-jun蛋白阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。两者的表达存在相关性(χ2=4.96,P<0.01)。结论WWOX蛋白和c-jun蛋白在胃癌组织和癌旁组织的表达均有明显的差异,WWOX蛋白在胃癌中低表达,而c-jun蛋白在胃癌中高表达。     

cAMP—依赖性蛋白激酶的提纯及活性测定

用ＤＥＡＥ－纤维素层析和羟基磷灰石层析方法,从牛心中提取了ｃＡＭＰ－依赖性蛋白激酶。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定分子量为３８ｋＤａ,并测定了其活性,为ｃＡＭＰ代谢途径的研究打下了基础。     

肾上腺皮质肿瘤细胞中Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白的表达及其意义

目的观察Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白在肾上腺皮质肿瘤中的表达，探讨其在肾上腺皮质肿瘤免疫逃逸中的作用及意义。方法采用免疫组化SP法检测55例肾上腺皮质腺瘤和17例肾上腺皮质腺癌Fas、Fas—L、HLA-DR蛋白的表达，应用Mias99图像分析系统对检测结果进行分析。结果①Fas、HLA-DR在肾上腺皮质癌中表达减少，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显低于肾上腺皮质腺瘤（P〈O．01）；②Fas-L在肾上腺皮质癌中表达增多，其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显高于肾上腺皮质腺瘤（P〈0．01）。结论①Fas／Fas-L系统与HLA—DR可能在肾上腺皮质肿瘤的免疫逃逸机制中发挥重要作用；②Fas、HLA—DR可作为判别肾上腺皮质良、恶性肿瘤的指标。