利用超数排卵技术进行优化C57BL/6J小鼠生物净化体系的研究

目的以近交系C57BL/6J小鼠为实验对象,通过注射不同剂量的孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促进腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵、体外授精和胚胎移植,确定最佳超排剂量,从而完善以C57BL/6J小鼠为背景的转基因小鼠的生物净化体系。方法将5周龄的C57BL/6J雌鼠进行5 IU、10 IU、7.5 IU、15 IU四个剂量组的超数排卵,通过超数排卵与剖宫取胎、胚胎移植两种净化方法相结合,确定C57BL/6J小鼠的净化方法所需的最佳剂量。结果剖宫取胎方法中,注射5 IU剂量组的C57BL/6J小鼠超排后合笼见栓率最高,为(89.00±19.05)%,产仔数和见栓率与其它三组均差异不显著;胚胎移植方法中,10 IU剂量组平均卵母细胞数为30.33±0.89枚,平均体内2-细胞胚胎数为23.78±0.19枚,均显著高于其它三组。结论剖宫取胎法生物净化时,5 IU剂量组可以提高C57BL/6J小鼠的交配成功率;胚胎移植法生物净化时,10 IU剂量组可以获得最多的体内和体外2-细胞胚胎,为C57BL/6J小鼠最佳超排剂量。     

近交系小鼠超数排卵的研究

近交系小鼠超数排卵(简称超排)的研究可为小鼠胚胎库的建立提供大量胚胎。以孕马血清促性腺激素(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)为主,按不同品系小鼠的特点,加前列腺素(PGF_(2α))1μg/只以上。超排BALB/c系小鼠,平均每只雌鼠取可用胚胎22枚,C 57 BL/6 A系小鼠为23枚,对照组分别取得7枚和8枚,实验组与对照组差异显著(P<0.05)。超排处理后的雌鼠交配受孕率较高。实验结果提示改进的超排方法可提高国产激素制品的超排效果。     

一种高效的成年小鼠同步诱导多细胞胚胎及受精卵的双排卵实验方案

目的：探讨二次超排方案对提高成年小鼠超排效果和胚胎发育潜能的可行性。方法：首先比较常规双排卵方案与自然排卵、随机超排实验方案所获总卵数的差异,然后在初步研究外源孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）对自然受孕一次胚胎发育影响的基础上,进一步对常规双排卵实验方案进行优化。结果：优化后的双排卵实验组单只鼠平均总卵数高达61.7枚,与自然排卵组、随机超排组和常规双排卵组差异显著,提升了成年小鼠的超排卵效果。结论：优化后的超数双排卵方案为同步大量获得小鼠多细胞胚胎及受精卵提供了一种新的、高效的技术方法。     

不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响

目的探讨不同时间注射孕马血清激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）对小鼠超排卵效果的影响。方法选用40只6周龄F1昆明小鼠,随机分成4组,分别在同一天的11：00,13：00,15：00,17：00注射PMSG5IU,48h后注射HCG5IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者于当日10：00处死取卵,计数受精卵的数量。结果11：00,13：00,15：00和17：00组平均每只获取可用受精卵9．8枚、24．8枚、11．5枚、4．7枚。结论在13：00注射PMSG,48h后注射HCG对小鼠超排效果最好。     

促性腺激素作用下豫医无毛小鼠超排卵效果观察

目的 :探讨近交系豫医无毛小鼠超排卵的最佳条件 ,提高超排卵效果。方法 :30只近交系豫医无毛小鼠随机分为 3组 ,分别用 5IU、8IU、10IU的孕马血清促性腺激素 (PMSG)和人绒毛膜促性腺激素 (HCG) ,间隔 4 8h注射 ,比较排出卵母细胞的数量。结果与结论 :腹腔间隔 4 8h各注射 8IU的PMSG和HCG超排卵效果最好 ;各剂量组右侧卵巢比左侧卵巢超排卵效果好 (P <0 .0 5 )。     

近交系C57小鼠与封闭群昆明小鼠超排卵数的比较

目的 观察C5786小鼠(近交系)和昆明小鼠(封闭群)超排卵后卵母细胞数量的差别.方法 分别对4周龄和7周龄C5786小鼠与昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG),进行超排卵处理,观察小鼠超排卵母细胞数量.结果 超排卵母细胞数量为:4周龄昆明小鼠(16.2±2.5)个/只,7周龄(25.2 ±3.1)个/只;4周龄C5786小鼠(9.8±1.2)个/只,7周龄C5786小鼠(18.1±2.2)个/只.超排卵母细胞数量在同种小鼠不同周龄间和同周龄不同小鼠间比较,均有统计学差异(P<0.05).结论 昆明小鼠超排卵母细胞数量高于C5786小鼠.     

不同超排方法对家兔超数排卵效果的影响

目的 探讨家兔稳定高效的超数排卵方法, 旨在获得充足的优质兔卵母细胞,为随后的相关试验提供可靠的物质保障.方法 尿促性素(HMG)+人绒毛膜促性腺激素(HCG)组:雌兔颈部皮下注射HMG 35 IU/只,每隔24 h注射1次,共2次;孕马血清促性腺激素(PMSG)超排组:雌兔颈部皮下一次性注射PMSG促卵泡生长发育,每...     

补肾法通过三羧酸循环酶改善重复控制性卵巢刺激模型小鼠2-细胞胚胎发育潜能

目的 通过观察胚胎合子基因组激活期(ZGA)三羧酸循环(TCA)酶和表观遗传修饰的关系，研究补肾调经方改善重复控制性卵巢刺激(COS)模型小鼠的2-细胞胚胎发育潜能。方法 将动情周期正常的雌性小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、补肾低剂量组和补肾高剂量组，每组25只。除正常组外，其余各组小鼠建立COS模型。模型组和补肾低、高剂量组每日上午9时分别灌胃蒸馏水、补肾调经方低剂量(25.6 g/kg)和高剂量(51.2 g/kg),连续10 d。于第11天16时腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10 IU/只，第13天16时腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10 IU/只；正常组注射生理盐水0.1 mL。灌胃及腹腔注射连续3个周期，每个周期间隔4 d。各组小鼠第3次腹腔注射后立即与同品系雄性小鼠合笼。次日清晨见栓或阴道涂片见精子的雌鼠记为妊娠。妊娠小鼠于末次腹腔注射hCG后44～46 h处死，在倒置显微镜下取出2-细胞胚胎观察形态并计数。免疫荧光法检测2-细胞胚胎丙酮酸脱氢酶(PDH)、柠檬酸合成酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(IDH3A)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、组蛋白3第...     

促性腺激素及雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨取卵前给予孕马血清(PMSG)或人绒毛膜促性腺激素(HCG)以及在培养液中添加不同浓度雌二醇对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)及胚胎发育的影响。方法:将雌性小鼠随机分成5组,即24 h PMSG组(取卵前24 h给小鼠腹腔注射PMSG)、48 h PMSG组(取卵前48 h给小鼠腹腔注射PMSG)1、6 h HCG组(取卵前16 h给小鼠腹腔注射HCG)、PMSG+HCG组(给小鼠腹腔注射PMSG 48 h后腹腔注射HCG 16 h取卵)和未用药组。取未成熟卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置入含不同浓度E2(0,0.5,1.0,2.0 mg/L)培养液中培养24 h,并行卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)及胚胎培养。比较各组之间卵母细胞成熟率、受精率和卵裂率。结果:①24 h PMSG组和48 h PMSG组COCs的卵母细胞成熟率明显高于未用药组或16 hHCG组,差异有统计学意义(P<0.05)。PMSG+HCG组的受精率和卵裂率明显高于其他4组(P<0.01)。②与对照组比较,1.0 mg/L E2组和1.5 mg/L E2组中COCs的卵母细胞受精率和卵裂率明显增高(P<0.05)。各浓度17β-E2组间以及与对照组比较DO的成熟率和受精率无显著差异(P>0.05),但极少数受精卵发生卵裂。结论:①取卵前给予小鼠PMSG或者联合给与HCG均可促进卵母细胞体外成熟,但不能提高其早期胚胎发育能力;取卵前给予小鼠HCG不能提高卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育能力。②在培养液中添加一定浓度E2可促进未成熟卵母细胞胞质成熟,但不能促进核成熟。     

超排卵对着床的影响及中药帮得孕的改善作用

目的:观察超排卵对小鼠着床的影响和中药帮得孕的改善作用。方法:仿照临床超排卵方案,运用腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU,于48h后注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU的方法造模。观察妊娠第8天正常组、超排卵组、不同剂量帮得孕组小鼠胚泡着床率和平均胚泡着床点数。伊文思蓝染色观察妊娠第5天子宫内膜血管通透性情况,HE染色观察妊娠第5天子宫内膜蜕膜化情况,免疫组化和Western blot方法观察妊娠第5天子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:与正常组相比,超排卵组着床率明显下降(P<0.05),与超排卵组相比,帮得孕各剂量组着床率均明显提高(P<0.05);超排卵抑制小鼠子宫内膜血管渗透性,延缓子宫内膜蜕膜化,抑制子宫内膜MMP-9表达,中药帮得孕则有利于促进子宫内膜血管渗透性、促进内膜蜕膜化、促进MMP-9表达。结论:超排卵可致着床障碍,与超排卵药物抑制血管渗透性、抑制子宫内膜蜕膜化和抑制内膜基质降解有关,帮得孕可以一定程度上降低和抵消超排卵这种不良的影响,有利于胚泡成功着床。     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的免疫组织化学观察

目的观察海风藤酮对小鼠胚泡着床的影响。②方法未经产雌性昆明小白鼠于妊娠第２天,一侧子宫角内分别注射不同剂量海风藤酮（５,１０,２０,４０,６０μＬ）作为实验组,另一侧子宫角注射相应剂量的生理盐水为对照。于妊娠第８天及第１０天,取子宫组织做常规石蜡切片,ＨＥ及免疫组织化学染色,光镜观察。③结果注入海风藤酮（≥２０μＬ）组子宫蜕膜变薄,层粘连蛋白（Ｌｎ）免疫阳性物减少,纤粘连蛋白（Ｆｎ）免疫阳性物增多,并伴有不同程度胚胎发育迟缓及退化等改变。大剂量海风藤酮（≥４０μＬ）组部分动物子宫内膜无蜕膜反应,而且胚胎已消失。④结论海风藤酮通过拮抗血小板激活因子影响蜕膜反应,并使Ｌｎ及Ｆｎ的量和分布发生异常改变。这可能是该药抗着床作用的重要途径之一。     

Study of Candida Albicans Vaginitis Model in Kunming Mice

The model of vaginal candidiasis in Kunming mice was constructed in order to search for the optima construction conditions and provide an economic animal model of Candida albicans (C. albicans) vaginitis. Estrogen benzoate (E2) was given to mice at different concentrations ranging from 0.0 to 0.05 mg/mouse (4 levels) beginning 72 h prior to vaginal inoculation, then mice were in- oculated intravaginally with various concentrations of stationary-phase C. albicans blastoconidia (ATCC90028) (5 levels) in 20 μL of phosphate-buffered saline (PBS) in each E2 level. General state, scores of genital pathology, the hyphae and vaginal fungal burden (CFU) in vaginal lavage fluid, the hydrops rate of uterus and vaginal tissues for pathological section in mice were observed and ob- tained at day 2, 4, 7, 14 and 21 after inoculation. The results showed the infection rate in mice was related to the dosage of E2 and concentration of C. albicans blastoconidia. Additionally there was better cross-effect between the two treated factors. The infection rate was about 80% on the day 4, and could reach 100% on the day 7 until the end of experiment after inoculated intravaginally in groups of E2I3, E2 0.025 mg/mouse injected hypodermically and inoculated intravaginally with 5×104 C. albicans blastoconidia, and large amount of hyphae and blastoconidia could be observe in superfi- cial layer tissue and canal of vaginal by PAS. From the results in our experiment it was concluded that E2I3 was the optima construction condition in kunming mice.     

围孕期高血清叶酸水平雌性小鼠模型的建立及高血清叶酸水平对胚胎心脏发育的影响

目的 通过高叶酸含量的配方饲料结合血清叶酸检测，建立围孕期高血清叶酸的雌性小鼠模型，并利用该模型开展围孕期增补叶酸导致血清叶酸水平升高及影响后代发育的相关研究。方法 根据普通小鼠饲料中叶酸以及其它营养成分组成，设计了叶酸含量分别为2mg/kg（正常叶酸）和10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg （高叶酸）的配方饲料。30只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分成5组（每组6只），其中1组继续使用普通饲料喂养，其余4 组分别使用不同的配方饲料喂养。为了排除不同个体叶酸生物利用度差异巨大的影响，喂养2周后，根据血清叶酸水平按照以下标准对4组配方饲料喂养的雌鼠进行重新分组：正常血清叶酸组（NF，血清叶酸水平<2000pg/mL）、高血清叶酸组（HF1，2000 pg/mL <血清叶酸水平<3000pg/mL）、超高血清叶酸组（HF2，血清叶酸水平>3000pg/mL）。重新分组后的雌鼠继续使用相应的配方饲料饲养，并与普通饲料喂养的雄鼠合笼，以发现阴道栓当天作为孕 0.5天（E0.5）计算孕龄。手术获取不同孕龄的胎鼠心脏组织样本，通过组织学、免疫组织化学方法，对心脏发育多个重要时间点（E10.5、E11.5、E13.5）胎鼠心脏发育相关指标进行检测。 结果 随着饲料中叶酸含量的增加，不同组小鼠的平均血清叶酸水平呈现逐渐升高的趋势，但是由于同组雌鼠的血清叶酸水平变异巨大，导致不同组间血清叶酸水平的差异并不显著（P=0.163）。重新分组后，相对于NF 组和HF1组，HF2组胎鼠的心脏表现出间叶组织缺乏（E10.5）、心肌细胞数量显著减少且增殖不活跃（E10.5）、心肌壁厚度减少（E11.5）、磷酸化组蛋白H3（PHH3）阳性细胞比率显著降低（E11.5）、背侧间充质突出（DMP）缺失（E13.5）以及右心耳、心室流出道结构异常和原发孔缺损等房室间隔缺损（AVSD）表现（E13.5）。结论 本研究构建围孕期增补叶酸导致高血清叶酸水平小鼠模型的方法有效。利用所构建模型发现围孕期雌性小鼠增补叶酸导致的血清叶酸水平剧烈升高可能与后代心脏发育异常相关。     

坤泰胶囊对小鼠子宫内膜容受性影响的研究

目的：通过比较溶血磷脂酸受体‐3（LPAR3）在小鼠胚胎着床期子宫内膜的表达,了解坤泰胶囊对小鼠子宫内膜容受性的影响。方法将90只6～8周龄的昆明雌鼠分为3组[A组：控制性超促排卵（CO H ）;B组：坤泰＋CO H ;C组：生理盐水对照）,每组30只],检查合笼次日晨阴栓,于第1～6天每天每组处死5只雌鼠,测定血清中雌二醇（E2）、孕酮（P ）水平,以及腺体数和LPAR3免疫组化光密度值（IOD）。结果 A、B组血清E2、P水平值均高于同期C组（P＜0．05）;HE染色,A组较B、C组腺体数明显减少（P＜0．05）。A组第3天 LPAR3的IOD值高于B、C组（P＜0．05）,而 A组第4天IOD值明显小于B、C组（P＜0．05）,B组较C组略高,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论坤泰胶囊可能通过改善COH小鼠LPAR3正常时空表达,起到改善子宫内膜容受性的作用。     

山莨菪硷对内毒素血症家兔血液微量元素的影响

将健康家兔18只随机分为两组,并造成内毒素血症模型。实验组在注入内毒素前15分钟及注后2小时30分,静脉注入(7mg/kg)山莨菪硷,对照组以相同方式注入生理盐水,两组均在注毒前与注毒后5小时两次取血送检。结果表明:对照组的血清Cr浓度注毒后明显增高,前后差异有显著意义(P<0.05);实验组的血清Zn、Sr浓度明显低于注毒前,前后差异有显著意义(P<0.05),红细胞Pb前后比较下降更显著(P<0.02)。     

臭氧治疗细菌性阴道病132例的临床观察

目的：探讨臭氧治疗细菌性阴道病（BV）的临床疗效.方法：治疗组：在妇女月经干净d3,用浓度为6PPM臭氧水冲洗阴道,治疗BV132例,每天一次,每次5min,疗程7d;对照组：在妇女月经干净d3,用洁尔阴液冲洗阴道后,双坐泰栓1粒塞阴道,每天一次,疗程7d.两组疗程完成后停药4周复查.结果：治疗组治愈111例（84.1%）,显效11例（8.33%）,有效10例（7.58%）,总有效率100%.治愈率跟对照组比较,差别有高度显著性（P〈0、01）.结论：臭氧既能杀菌又能改变阴道内环境,恢复阴道生态系统.治疗BV疗效好,方法简单,副作用少,病人易接受,值得推广.     

α-干扰素1b联合肝炎灵注射液对慢性乙型肝炎疗效的观察

目的 探讨α-干扰素1b联合肝炎灵注射液对慢性乙型肝炎治疗效果。方法 将48例慢性乙型肝炎患者随机分为观察组和对照组,在α-干扰素1b治疗的基础上,观察组另给予肝炎灵注射液4ml肌注,每日一次、三月后为隔日一次、然后观察肝功能,乙肝病毒标记物的变化情况。结果 疗程结束及结束后6个月,观察组肝功能指标ALT、AST、ALB、TBIL均较治疗前有显著改善（P〈0．05或P〈0．01）,对照组ALT、AST改善明显（P〈0．05）。HBV-DNA及HBeAg阴转率,观察组显著高于对照组（P〈0．05）,少数患者出现发热、头痛、肌肉骨酸痛等流感样症候群。结论 α-干扰素1b联合肝炎灵注射液能明显抑制HBV复制,从而有效治疗慢性乙型肝炎,无严重不良反应。     

鞘内注射可乐定和氯胺酮对慢性神经病理性疼痛大鼠的镇痛效应

目的:观察鞘内注射氯胺酮(ketamine) 及可乐定(clonidine) 对慢性神经病理性疼痛的镇痛效应.方法:体质量220～280g的雄性SD大鼠32只,水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉后,制作坐骨神经松弛结扎(CCI)模型,术后第4天随机分为4组,每组8只,每日给药1次,连续7d.对照组于鞘内给0.9%的生理盐水20μL;氯胺酮组于鞘内注射氯胺酮1mg/kg;可乐定组于鞘内注射可乐定20μg/kg;联合用药组给予氯胺酮0.5mg/kg加可乐定10μg/kg.采用BME-410A型热痛刺激仪测试痛阈,给药前及给药后30min各测1次.痛阈测试完毕后处死大鼠,取其腰段脊髓冻存测定其一氧化氮合酶(NOS)和NO的活性及含量. 结果:鞘内联合注射氯胺酮及可乐定的镇痛效应显著大于单独注射氯胺酮(1mg/kg) 或可乐定(20μg/kg).联合注射组大鼠的NOS活性和NO的含量明显低于单独用药组(P＜0.05).4组给药后体质量均较给药前增加(P＜0.05). 结论:氯胺酮与一定剂量的可乐定鞘内联合应用时具有显著的协同镇痛作用,而且能减少各自的副作用.     

p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂对小鼠早胚发育及植入的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对小鼠早胚发育及植入的影响。方法①采用体外胚胎培养技术,将孕2?d小鼠早胚随机分组,接种到添加不同浓度抑制剂的培养液内进行培养,以观察p38MAPK特异性抑制剂对早胚发育的影响;②体内宫腔注射：取孕4?d小鼠,由子宫角注射不同浓度的SB203580,于孕8?d检查胚胎植入数,同时取子宫,观察内膜的组织学变化。结果①添加抑制剂组的早胚不能发育为胚泡,停滞在8～16细胞阶段。但去除抑制剂后继续培养,幼胚仍能发育到胚泡阶段;②注射SB203580组的小鼠,胚胎植入数明显少于对照组（P＜0.01）。镜下可见,其胚胎组织呈退化坏死状态,胚胎周围蜕膜细胞呈明显的空泡样变性,蜕膜及胚胎中均见大量血细胞浸润。结论①p38MAPK在小鼠植入前胚胎发育过程中起作用;②p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制在体小鼠胚泡植入及植入后胚胎和蜕膜细胞的发育。