甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ)的克隆及其过表达转基因载体的构建

目的克隆甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ),构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽(galanin,GAL)的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为制备GAL转基因小鼠做准备。方法通过常规PCR、RT-PCR及重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)扩增出插入GAL第二内含子的GAL全长cDNA的重构基因GAL(intronⅡ),将GAL(intronⅡ)克隆入T载体进行酶切、测序鉴定;同时从psisCAT6α中切下血小板源性生长因子β链(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)启动子片段连接到空载体pUC18上构建出重组载体pUC18/PDGF-β-promoter;然后将GAL(intronⅡ)定向克隆于pUC18/PDGF-β-promoter下游,构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ)。结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ)。通过对重构基因GAL(intronⅡ)的GALcDNA和第二内含子序列测序证实其与GenBank中的标准序列一致,GAL(intronⅡ)中第二内含子插入的位置准确,且无移码。结论使用重叠延伸PCR扩增重构基因GAL(intronⅡ)并成功构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为转基因小鼠制备奠定一定的实验基础。     

大肠杆菌甲基化缺陷DM1菌株与普通DH5α菌株的感受态转化率的比较

目的 观察甲基化缺陷的大肠杆菌DM1菌株与普通DH5α菌株感受态转化效率的差别.方法 用常规氯化钙法制备二者的感受态细胞,质粒转化后计算转化率.结果 DM1菌株感受态细胞转化率为(2.2±0.3)×106 CFU/μg,DH5α菌株感受态细胞转化率为(6.3±0.5)×106 CFU/μg.结论 成功建立一种高效制备甲基化缺陷菌株DM1感受态细胞的方法,虽然该法制备DM1感受态细胞转化效率比DH5α低2-3倍,但其能够高效满足质粒克隆实验中Dam或Dcm甲基化的限制性位点的使用要求.     

小腿骨筋膜室综合征的护理体会

骨筋膜室综合征是由于外伤引起四肢骨筋膜室内压力增高,导致肌肉、神经和血管等组织囚急性严重缺血造成的一种早期综合征,是临床常见且较严重的创伤并发症.常见于前臂和小腿,若不及时诊断和处理,可迅速发展为坏死或坏疽,造成肢体残废,甚至危及生命.护理在其诊治和康复中具有重要作用.本文回顾分析62例小腿骨筋膜室综合征病例,对小腿骨筋膜室综合征的术前观察、术后护理及预防进行总结,现报告如下.     

近交系C57小鼠与封闭群昆明小鼠超排卵数的比较

目的 观察C5786小鼠(近交系)和昆明小鼠(封闭群)超排卵后卵母细胞数量的差别.方法 分别对4周龄和7周龄C5786小鼠与昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG),进行超排卵处理,观察小鼠超排卵母细胞数量.结果 超排卵母细胞数量为:4周龄昆明小鼠(16.2±2.5)个/只,7周龄(25.2 ±3.1)个/只;4周龄C5786小鼠(9.8±1.2)个/只,7周龄C5786小鼠(18.1±2.2)个/只.超排卵母细胞数量在同种小鼠不同周龄间和同周龄不同小鼠间比较,均有统计学差异(P<0.05).结论 昆明小鼠超排卵母细胞数量高于C5786小鼠.