假病毒在中和抗体检测中的应用研究进展

目前成功的病毒性疫苗大多通过诱导广谱有效的中和抗体来保护机体免受感染,因此检测血清中和抗体水平对疫苗的免疫效果评价具有重要意义.中和抗体检测的传统方法包括微量细胞病变效应抑制法、蚀斑减少试验等,均需进行活病毒操作.近年来,随着逆转录病毒载体和重组病毒表达技术的发展,假病毒得到越来越多的研究,并被广泛应用在新型疫苗研发、中和抗原表位鉴定、细胞嗜性研究、抗病毒药物筛选、中和抗体检测、基因治疗等方面.此文主要对假病毒在中和抗体检测中的应用进行综述,并总结相关领域的研究进展.     

假病毒的应用及其动物模型的研究进展

随着新型高危病毒的出现，使用野生型病毒株进行研究的传统方法显示出局限性，迫切需要一种新方法。体外构建假病毒具有安全稳定、宿主嗜性广等优点，已被广泛应用于中和抗体检测、抗原表位研究、病毒与宿主细胞间相互作用研究、抗病毒药物筛选等领域，是一种安全有效的研究手段。为了进一步评价疫苗、抗体、抗病毒药物的体内保护效果，建立便捷可靠的假病毒动物模型显得尤为重要。此文对假病毒的应用、假病毒动物模型的建立等方面做一综述，总结相关领域的研究进展。     

肠道病毒71型假病毒荧光定量检测方法在疫苗中和抗体检测中的应用

目的假病毒荧光定量方法（PVLA）应用于EV71疫苗动物样本和人体样本检测的适用性研究。方法分别采用细胞病变法（CPE）和PVLA方法检测82份EV71试验小鼠血清以及27份疫苗临床试验人体血清样本,比较两者检测的一致性。结果应用两种方法检测82份疫苗免疫小鼠血清,EV71中和抗体滴度的相关系数为0．842,Bland—Altman分析显示高度一致性;检测27份EV71临床试验人体血清样本的中和抗体,两种方法具有高度一致性。结论PVLA与CPE方法具有高度一致性,适用于疫苗免疫动物样本和临床评价人体样本EV71中和抗体的检测。     

SARS灭活疫苗毒种特性和效力试验方法的研究和建立

目的 验证SARS灭活疫苗生产用毒种和建立疫苗效力试验方法和评价疫苗有效性的方法和初步标准。方法 将SARS灭活疫苗进行系列稀释后免疫小鼠、原液疫苗免疫家兔，用异株病毒作为攻击毒以蚀斑减少法测定血清中和抗体，并与一组SARS病人恢复期血清的中和抗体水平进行比较。初步建立疫苗的效力试验方法和评价标准。结果 疫苗以不同稀释度免疫小鼠，能产生随不同稀释度疫苗相应梯度的中和抗体滴度。用原倍疫苗免疫的小鼠血清中和抗体可达495．2；原倍疫苗免疫家兔所产生的中和抗体GNT为55．0～79．9。无论是小鼠或家兔所产生的中和抗体对广东分离的病毒均较北京分离的病毒为高。南北不同区域的SARS病人恢复期血清中和抗体GMT为50．12～54．95，且发现北方人群样本的抗体高于南方人群样本。结论 用小鼠和家兔作疫苗的效力试验模型具有较好的敏感性和重复性，且产生的抗体水平较高：选用的攻击病毒对多批用不同毒株生产的疫苗免疫后的动物抗体具有较高的一致性，可用于评价疫苗的效力。     

献浆员中新型冠状病毒SARS-CoV-2中和抗体检测分析

目的： 静注人免疫球蛋白（IVIG）和新冠肺炎恢复者的血浆已被推荐用于重症新冠肺炎患者的治疗。因此,血浆中新型冠状病毒（SARS-CoV-2）中和抗体水平需要得以及时评价。本研究利用不需要在生物安全三级实验室操作的SARS-CoV-2假病毒中和抗体检测方法,建立了快速检测中和抗体的策略。方法： 采用新型冠状病毒SARS-CoV-2假病毒,对1080份健康献血员血浆及26批次IVIG的SARSCoV-2中和抗体进行检测。初筛采用1：30倍稀释检测;对初筛阳性（抑制率≥ 50%为阳性）的样本进行复试,复试采用1：30、1：90和1：270三个梯度;对于复试阳性的样本进行中和特异性分析,进一步检测针对水疱性口炎病毒（VSV）、严重急性呼吸道综合征冠状病毒（SARS-CoV）和中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）的中和活性。结果与结论： 在1：30倍稀释时,26批次IVIG的SARS-CoV-2中和抗体均为阴性,1080份献血员血浆中SARS-CoV-2中和抗体阳性率为0.6%（6/1180）;对6份阳性血浆的特异性分析显示均为对VSV、SRAS-CoV或MESR-CoV假病毒的非特异中和作用。本研究表明该假病毒中和抗体检测方法和快速检测策略可以用于IVIG、健康献血员和感染者恢复期血浆中的中和抗体检测,发现IVIG针对SARS-CoV-2无特异的中和抗体活性,IVIG在临床重症治疗中发挥的是非病毒特异的辅助治疗作用。     

新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制和评价标准的研究

目的 研究建立新型肠道病毒71型(EV71)疫苗质量控制标准和评价体系,为EV71疫苗研发提供基础.方法 根据创新型疫苗研发的要求,充分发挥技术优势,开展EV71疫苗质控标准、标准品和评价方法研究.结果与结论 建立EV71灭活疫苗的中和抗体和抗原定量测定标准品,统一不同企业疫苗的质控标准,规范疫苗的评价体系,为EV71疫苗的研发提供保障.     

HIV免疫预防的抗体基因转移策略

 将编码强效广谱中和抗体的基因转移至人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）的抗体基因转移（antibody gene transfer）策略,有望成为预防HIV感染的新型免疫策略。2012年9月疫苗研究基金会（The Foundation for Vaccine Research）在波士顿召开的艾滋病疫苗大会上组织了一次卫星研讨会,主要讨论了腺相关病毒载体在转移广谱中和抗体基因上的应用,以及强效抗体的改良。     

多包膜HIV疫苗对小动物和黑猩猩的安全性和免疫原性

作者评价了多包膜人类免疫缺陷症病毒(HIV)疫苗诱生 HIV特异性抗体的能力 ,证实了 DNA重组体 -痘苗病毒 (VV)重组体 -纯化蛋白三阶段免疫方案是诱导保护性免疫应答的较佳方案 ,同时还对单包膜疫苗和多包膜 VV重组疫苗进行了比较。　　为分析 HIV感染者的抗体应答 ,作者研究了单克隆抗体的决定簇和中和能力 ,结果显示 :大多数抗体具有一定程度的交叉反应性 ,但单一决定簇仅能诱生部分交叉反应性抗体。因此 ,或许只有寡聚包膜疫苗混合物才能更好地代表异源 HIV,表现各种中和决定簇 ,从而在志愿者中诱导保护性免疫。作者首先进行了 HI…     

艾滋病疫苗替代品腺相关病毒介导抗体基因的研究进展

重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的抗体基因治疗药物,可为宿主直接提供中和抗体而使其免受艾滋病毒感染,有望成为艾滋病预防及治疗疫苗的替代品。综述人免疫缺陷病毒(HIV)专属性广谱中和抗体发现过程的文献资料,介绍了rAAV介导的抗HIV抗体基因治疗的试验结果,并对rAAV在艾滋病预防及治疗的研究进展作了分析。     

新型HIV疫苗技术进入临床

美国Chiron公司在本国开始其人免疫缺陷病毒( HIV)疫苗的临床试验。试验检测了新一代HIV疫苗,这种疫苗试图诱生细胞免疫应答及能中和病毒的广泛抗体应答。 期临床试验将评估疫苗的安全性和免疫原性。　　接种策略包括先由DNA免疫诱导免疫应答,然后以寡聚体基因工程包膜蛋白来增强广泛的中和抗体的产生。DNA初免采用的接种系统是在微粒中负载DNA。这种DNA疫苗是Chiron公司第一种用于人体试验的疫苗。　　Chiron公司的疫苗不是由活HIV或HIV感染细胞制备,不含活或灭活的HIV。试验将包括约1 6 8名参加者,为期两年。新型HIV疫苗技…