HIV抗体阳性人免疫球蛋白的代谢和安全性分析

医疗卫生市场对静注免疫球蛋白(Intravenous Immunoglobulin,IVIg)的需求日渐增长,保障安全供血一直以来是一项严峻挑战。作为一种无法根治的血液传播病毒,人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)严重威胁着供血安全。HIV抗体是HIV既往感染的指标,然而HIV抗体并不具有感染性,含有HIV抗体的制品也不一定具有感染性。本文从抗体代谢、输入性HIV抗体代谢和不同来源HIV抗体的安全性等角度,综述了HIV抗体阳性的血液制品的安全性。     

16型人乳头瘤病毒（HPV16）中和表位及型内变异分析北大核心CSCD

世界范围内,宫颈癌是妇女第二位高发肿瘤.高危型人乳头瘤病毒（human papilloma-virus,HPV）持续感染是引发宫颈癌的主要原因,在所有高危型HPV中,HPV16流行最广泛.HPV主要衣壳蛋白（major capsid protein,L1）可以自组装成病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）,其形态及抗原性与天然病毒类似,可以刺激机体产生高效价保护性中和抗体.中和表位是HPV VLPs疫苗的结构基础,疫苗的效力主要取决于中和表位的完整性.目前基于中和单抗的HPV16表位研究取得了极大进展.随着免疫压力的增加,HPV16的型内变异株越来越多.1204条HPV16 L1氨基酸序列构建的进化树可以分为4个进化分支.同时,将其与114K参考序列相比,共挑选出8个＂高频突变位点＂,6个＂特有突变位点＂和20个＂表位相关位点＂.HPV诱导的中和抗体绝大多数都是型特异性的,但同一型别内的HPV所诱导的中和抗体对型别内的所有L1变异株是否都能保护尚无定论.剖析HPV16型的抗原表位及型内变异情况对设计高效价、高覆盖率的预防性疫苗至关重要.     

痘苗病毒弱毒株广9株对动物的致病力研究

目的了解经痘苗病毒天坛株(VTT)3次挑斑纯化筛选出的痘苗病毒减毒株广9株(VG9)的神经毒性和致病性。方法对痘苗病毒VG9和其亲代病毒VTT进行小鼠和乳鼠及家兔脑内毒力测定、裸鼠腹腔毒力测定及家兔皮内反应性实验,并观察实验动物的发病率和死亡率及皮肤坏死情况。结果两株病毒对小鼠和乳鼠的脑内毒力(icLD50)值显示,VTT株较VG9株分别强约100倍和18倍;对家兔脑内的毒力虽然icLD50值显示两株病毒相同,但VTT致家兔发病的数量较VG9多,其50%发病剂量较VG9多32倍。家兔皮内接种病毒后,较低病毒滴度(6.63 lg PFU)的VTT接种点出现严重的皮肤坏死,而VG9仅在较高滴度(7.54 lg PFU)接种点皮肤出现轻微坏死。结论通过不同途径接种几种实验动物均显示VG9的毒力较其母株VTT明显减弱。可以预测VG9痘苗在人体可能产生的不良反应较VTT痘苗低,并且有可能比VTT更适合作为痘苗病毒载体应用于新的重组疫苗(如HIV疫苗)的研发。     

乙型肝炎病毒全基因克隆及序列分析发现一D/C基因型重组株

目的 构建含有adr、adw、ayw3个血清型的HBV全基因组质粒，并进行测序及序列分析。方法 从HBsAg携带者的血清中扩增出S区克隆，筛选出adr、adw、ayw血清型的血清，然后扩增HBV的全基因组，对扩增产物进行克隆测序。利用DNAStar的MegAlign，Phylogenetic tree对HBV全基因序列以及分段序列进行比较和进化树分析。结果 构建了含有adw、adr、ayw 3种血清型的HBV全基因组质粒，代码分别为：H1、H2、H3，对3株完成序列测定，按照S区核苷酸顺序划分基因型分别为B、C、D，全序列分型显示H1、H2为B、C基因型，与按S区的分型一致，但H3为C基因型，与按S区的分型不同，进一步的序列分析表明H3为一株异常的基因型，按照S区和preS2区分型为D基因型，但是全基因组／C／P／X区的进化树分析，H3株均位于C基因型，提示该异常的基因型可能是由于D／C基因型间基因重组引起，对重组位点进行了分析：3181nt-10nt、799-834nt为可能的重组位点所在区。结论 H3病毒株的发现进一步证明了HBV基因型间的基因重组，但澄清该问题需要在HBV感染的高流行区进一步的积累HBV异常基因型的全序列，以及发现新的基因型资料。     

呼吸道合胞病毒融合蛋白变异及其对抗体和药物效果的影响

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是造成婴幼儿与老年人下呼吸道感染和住院的主要原因之一。目前开发疫苗、抗体及药物成为防控RSV的热点,其主要靶点是融合蛋白(fusion glycoprotein, F)。本文分析了现有RSV病毒株融合蛋白的变异情况,剖析了融合蛋白的结构特点,并针对融合蛋白的单克隆抗体及小分子药物的结合部位及逃逸情况进行了综述,以期为设计广谱、高效的RSV疫苗及药物提供参考。     

乙型肝炎病毒S和前S1基因的融合构建及其在P. pastoris酵母中的表达

目的构建含有乙型肝炎病毒(HBV)S和前S1(preS1,10～50AA)表位的ss1融合基因,并在P.pastoris酵母中表达SS1融合蛋白。方法以HBV全基因组质粒为模板,扩增出目的区段:S(1～222AA)、preS1(10～50AA),以酶切-PCR的方法将其连接为ss1融合基因,然后克隆入表达载体pPIC3.5k;电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115,筛选后进行诱导表达并对表达产物进行检测。结果表达产物的相对分子质量为30000左右,与抗HBs抗体和抗preS1抗体均有特异反应。结论ss1融合基因能够在P.pastoris酵母中高效表达,而且表达产物具有HBVS蛋白和preS1蛋白的抗原性,为进一步研究其免疫原性打下基础。     

肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

乙型肝炎病毒核酸检测试剂临床应用的分析

目的 了解HBV/HCV/HIV联合核酸检测的临床应用.方法 使用Abbott Architecti2000化学发光检测盒对534份血浆样品进行血清学检测,Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqManHBV Test试剂定量检测分别与2种联合核酸检测结果 进行比较分析.结果 81份HBsAg、HBeAg、抗-HBc 3项均阳性样品联合核酸检测均为HBV阳性,200份HBsAg阴性的样品中联合核酸检测试剂分别有11、19份检测为HBV阳性.HBV DNA定量检测>500 IU/ml的193份样品联合核酸检测试剂阳性符合率分别为96.9%、94.3%,117份样品<500 IU/ml阳性符合率分别为40.2%、45.3%,151份HBV DNA阴性样品联合试剂阴性符合率为99.3%、96.0%.结论 中国人群中存在一定比例低载量HBV携带者,联合核酸试剂作为献血员筛查的补充方法 在提高血液及其制品使用的安全性方面具有一定的临床使用意义.     

DNA疫苗的不同构象在体内外表达差异研究

目的:研究DNA疫苗构象对体内和体外表达的影响。方法:分别构建绿色荧光蛋白表达质粒(pcDNA3.1-EGFP)和萤火虫荧光素酶表达质粒(pDRVISV1.0-Fluc),对其存在的3种拓扑形式(包括超螺旋、线性、闭环切刻等)和反复冻融状态对表达效率的影响进行分析,前者用脂质体介导转染293FT细胞,用流式细胞仪检测EGFP的表达情况;后者通过接种BALB/c小鼠,用活体成像技术监测荧光素酶的表达情况。结果:对pcDNA3.1-EGFP质粒,流式细胞仪检测其转染293FT细胞48 h后显示,4种处理组的质粒表达EGFP的效率和荧光强度有所差异,依次为新鲜制备质粒(89.76%,2682.68)>反复冻融处理质粒(76.35%,2313.48)>闭环切刻质粒(68.45%,1245.95)>线性质粒(38.28%,929.5)。对pDRVISV1.0-Fluc质粒,采用小鼠活体成像技术持续观察接种后28 d的体内荧光素酶的荧光信号强度情况,结果显示:接种后0.2 d观察到荧光,之后强度持续开始增强,至第5 d达到平台期,维持至18 d。质粒各处理组的荧光强度组间有显著差异,依次为新鲜制备质粒(108.6)>反复冻融处理质粒(108.4)>线性质粒(108.3)>切刻质粒(108.0)。2种质粒不同构象的体内体外表达中,均是新鲜制备质粒的表达量最高,因其中超螺旋为其主要构象。结论:质粒中超螺旋比例高时其转染效率及表达量最高,提高超螺旋比例是DNA疫苗质量控制的关键。