胃癌组织中1,25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2蛋白的表达

目的:探讨1,25-二羟维生素D3及TGF-β/Smads信号通路与胃癌的关系。方法:收集93例胃癌组织和30例正常胃黏膜组织,采用免疫组化染色法检测1,25-二羟维生素D3及TGF-β1、Smad2蛋白的表达。结果:胃癌组织中1,25-二羟维生素D3表达水平低于正常胃黏膜组织(t=133.850,P<0.001),TGF-β1、Smad2表达水平高于正常胃黏膜组织(t=71.502、35.988,P<0.001)。1,25-二羟维生素D3、TGF-β1和Smad2的表达水平与胃癌的分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移关系密切(P<0.001)。胃癌组织中1,25-二羟维生素D3与TGF-β1、Smad2的表达呈负相关(r=-0.583,-0.462,P<0.001),TGF-β1与Smad2的表达呈正相关(r=0.425,P<0.001)。结论:1,25-二羟维生素D3可能通过调控TGF-β/Smads信号通路参与了胃癌的发生发展。     

慢病毒介导的microRNA-19b表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响

目的 研究慢病毒介导的microRNA-19b（miR-19b）表达对鼻咽癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测鼻咽癌组织及人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和鼻咽癌细胞系HONE1、5-8F和CNE1中miR-19b表达。构建miR-19b抑制表达（miR-19b inhibitor）、miR-19b过表达和无意义序列（Scrambled）的慢病毒载体（miR-19b mimics）,并设定空白组,转染鼻咽癌细胞系HONE1,qRT-PCR检测慢病毒转染细胞后细胞中miR-19b的表达;MTT法检测慢病毒转染细胞24、48和72?h后的细胞活力;流式细胞仪检测慢病毒转染细胞48?h的细胞凋亡率;Western blotting检测 ki-67、p53、β-连环蛋白（β-catenin）,Cyclin D1和C-myc的蛋白表达。结果 miR-19b在鼻咽癌组织及细胞中表达升高（P?<0.05）。Scrambled组与空白组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）,与空白组比较,miR-19b inhibitor组miR-19b的表达降低,miR-19b mimics组miR-19b的表达升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组在48和72 h的细胞活力降低,而miR-19b mimics组在48和72?h的细胞活力升高（P?<0.05）;与空白组比较,miR-19b inhibitor组细胞凋亡率及p53的表达升高,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达降低,miR-19b mimics组细胞凋亡率及p53的表达降低,ki-67、β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表达升高（P?< 0.05）。结论 抑制miR-19b表达可降低鼻咽癌细胞活力,诱导细胞凋亡及下调Wnt/β-catenin信号通路,而过表达miR-19b则反之。     

新生儿1,25-二羟基维生素D3与CMVI及预后的关系

目的 探讨新生儿血清1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平与巨细胞病毒感染(CMVI)及预后的关系.方法 选取2016年3月至2019年7月于该院就诊的60例初发CMVI新生儿为研究对象(CMVI组),选取同期75例健康新生儿作为对照组,随访后根据CMVI新生儿预后情况,将其分为好转或痊愈组和异常或死亡组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清1,25-(OH)2D3、白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平,流式细胞仪检测γδT细胞和Treg细胞表达水平;分析CMVI新生儿1,25-(OH)2D3与γδT、Treg及IL-17、TGF-β1水平的相关性及影响CMVI新生儿预后的因素.结果 CMVI组γδT、IL-17水平高于对照组,1,25-(OH)2D3、Treg、TGF-β1水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);CMVI新生儿1,25-(OH)2D3水平与Treg、TGF-β1呈正相关(r=0.532、0.498,P=0.002、0.012),与γδT、IL-17呈负相关(r=-0.512、-0.476,P=0.008、0.016);异常或死亡组γδT、IL-17水平高于好转或痊愈组,1,25-(OH)2D3、Treg、TGF-β1水平低于好转或痊愈组,差异均有统计学意义(P<0.05);γδT是CMVI新生儿好转或痊愈的危险因素,1,25-(OH)2D3是CMVI新生儿好转或痊愈的保护因素.结论 血清1,25-(OH)2D3与新生儿CMVI密切相关,可能对评估预后有重要意义.     

miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究

目的探讨微小RNA-34b（miR-34b）促进关节软骨细胞基质退变的分子机制。方法提取10例骨关节炎（OA）患者和7例创伤性截肢者的膝关节软骨组织,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测组织标本中miR-34b表达水平。利用Targetscan基因信息软件预测得到miR-34b靶基因为Smad3,构建Smad3野生型及突变型3′非编码区（3′-UTR）-荧光素酶报告载体,利用荧光素酶报告基因实验检测miR-34b对Smad3基因野生型及突变型3′-UTR荧光素酶活性的影响。体外培养SW1353细胞,分为A、B、C和D组,分别加入等量脂质体、无义序列、miR-34b模拟物（miR-34bmimic）和miR-34b抑制物（miR-34binhibitor）。RT-qPCR法检测miR-34b、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的表达水平。结果OA软骨组织中miR-34b表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调（P＜0.05）。SW1353细胞转染后,与A组比较,C组miR-34b表达水平明显升高（P＜0.05）,D组明显降低（P＜0.05）;A组与B组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。TargetsCan软件预测miR-34b的潜在靶基因为Smad3,荧光素酶报告基因实验证实miR-34b直接靶向抑制靶基因Smad3;转染miR-34bmimic和miR-34inhibitor后,与A组比较,C组Smad3mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）,D组明显升高（P＜0.05）;A组与B组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。转染后,与A组比较,C组Ⅱ型胶原mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）,D组明显升高（P＜0.05）;C组MMP-13mRNA明显升高（P＜0.05）,D组明显降低（P＜0.05）。结论miR-34b可能通过抑制其靶基因Smad3的表达进而诱导人关节软骨细胞基质退变,从而促进OA的发生、发展。     

miR-130a对2型糖尿病患者外周血EPCs黏附、迁移及IL-18、TGF-β1表达的影响

目的 研究miR-130a对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)黏附、迁移能力及白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。 方法 采集2018年4—8月在温州市中医院就诊的60例2型糖尿病患者外周血,分离培养EPCs,采用荧光染色法鉴定EPCs。将EPCs分成3组:对照组、mimics NC组和miR-130a mimics组,对照组细胞正常培养不做任何处理,mimics NC组细胞转染mimics NC,miR-130a mimics组细胞转染miR-130a mimics。采用qRT-PCR法检测各组细胞中miR-130a表达,观察过表达miR-130a对EPCs黏附和迁移能力的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-18和TGF-β1表达。 结果 培养48 h时,可见细胞贴壁生长,呈圆形,体积较小;培养至第4天,细胞体积增大呈椭圆形;培养至第7天,细胞贴壁形成团簇状,细胞呈类圆形或不规则形,细胞Dil-acLDL、FITC-UEA-I、DAPI染色为阳性,证实为EPCs;对照组和mimics NC组EPCs中miR-130a相对表达量、EPCs黏附和迁移数目及IL-18和TGF-β1表达水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与对照组和mimics NC组相比,miR-130a mimics组EPCs中miR-130a相对表达量明显升高(均P<0.05),EPCs黏附数目和迁移数目增多(均P<0.05),IL-18和TGF-β1表达水平降低(均P<0.05)。 结论 miR-130a过表达可改善2型糖尿病患者外周血EPCs黏附和迁移功能,抑制IL-18和TGF-β1表达。      

芦荟大黄素调控miR-30b促进子宫内膜癌细胞自噬的研究

目的探讨芦荟大黄素(AE)调控子宫内膜癌细胞HEC-1-B中miR-30b表达促进细胞自噬的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测miR-30b在正常子宫内膜细胞和不同子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、HEC-1-B、RL95-2中的表达水平。取miR-30b表达水平最高的HEC-1-B癌细胞分为HEC-1-B癌细胞组、miR-30b inhibitor NC组(转染miR-30b inhibitor NC)、miR-30b inhibitor组(转染miR-30b inhibitor)以及AE组(30μmol/L AE,未转染)和AE+转染组:AE+miR-30b mimics NC组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics NC)、AE+miR-30b mimics组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics)。q RT-PCR法检测各组细胞miR-30b表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色法检测各组细胞自噬率;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3-I、LC3-II和p62表达水平。结果与人正常子宫内膜上皮细胞相比,HEC-1-A、HEC-1-B和RL95-2癌细胞中miR-30b表达水平显著升高(P0.05)。其中HEC-1-B癌细胞中miR-30b表达水平最高,所以后续将选择HEC-1-B癌细胞进行转染实验。与HEC-1-B癌细胞组和miR-30b inhibitor NC组相比,miR-30b inhibitor组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与HEC-1-B癌细胞组相比,AE组和AE+miR-30b mimics NC组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与AE+miR-30b mimics NC组相比,AE+miR-30b mimics组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著降低(P0.05)。结论子宫内膜癌细胞中miR-30b表达较高,AE可能通过抑制miR-30b表达,促进癌细胞自噬和凋亡,抑制癌细胞增殖,而过表达miR-30b可逆转AE发挥的作用。     

1,25-（OH）2维生素D3对稽留流产患者蜕膜产生的细胞因子的影响

目的研究1,25-（OH）2维生素D3对稽留流产患者蜕膜产生的细胞因子的免疫调节影响。方法采用ELISA法检测1,25-（OH）2维生素D3干预前后稽留流产患者及对照组蜕膜基质细胞产生白细胞介素-6（IL-6）、IL-8、TGF-β的差异。结果 1,25-（OH）2维生素D3能够下调稽留流产患者和对照组蜕膜细胞产生IL-6、IL-8及对照组产生TGF-β,且促进稽留流产患者TGF-β的产生。结论 1,25-（OH）2维生素D3能够对稽留流产患者蜕膜产生的细胞因子进行免疫调节,考虑母胎界面免疫调节网络系统的复杂性,维生素D3对稽留流产的治疗作用有待进一步临床验证。     

活性维生素D3对人系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 探讨活性维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对人系膜细胞凋亡的影响,并初步探究其作用机制。方法 体外培养人系膜细胞,随机分为4组：正常对照组,表皮生长因子（EGF）组,1,25（OH）2D3组,EGF联合1,25（OH）2D3组,采用流式细胞术检测各组系膜细胞的凋亡率,Western blotting检测各组半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的情况。结果 与正常对照组比较,EGF组系膜细胞凋亡率降低,Caspase-3表达量降低（P＜0.05）,1,25（OH）2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高（P＜0.05）;与EGF组比较,EGF联合1,25（OH）2D3组系膜细胞的凋亡率升高,Caspase-3表达量升高（P＜0.05）;EGF联合1,25（OH）2D3组与正常对照组系膜细胞的凋亡率和Caspase-3表达量间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 1,25（OH）2D3可能是通过上调Caspase-3的表达而诱导系膜细胞的凋亡。EGF可抑制人系膜细胞的凋亡,1,25（OH）2D3可逆转EGF对系膜细胞凋亡的抑制作用。     

1,25（OH）2D3对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞转化的抑制作用

目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/L)+1,25(OH)2D3干预组[1,25(OH)2D3终浓度分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L],培养48 h后收集各组细胞。利用酶联免疫吸附实验检测ColⅠ和FN;Real-time RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达;Western Blot检测肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达。结果实验48 h后,AngⅡ组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达及培养上清中ColⅠ和FN浓度均较对照组显著增高,AngⅡ+10-6mol/L1,25(OH)2D3组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达较对照组明显增高,但细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度仅略有增高,差异无显著性,随着1,25(OH)2D3浓度的降低(10-7mol/L,10-8mol/L),TGF-β1mRNA表达、蛋白表达,细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度也随之显著增高(P<0.05)。结论 1,25(OH)2VD3可以部分抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞EMT,其机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞TGF-β1基因与蛋白表达、减少肾小管上皮细胞ColⅠ和FN分泌实现的。     

miR-15b通过靶向LPAR3抑制子宫内膜癌细胞PI3K/AKT信号通路活化

【摘要】 目的 探讨miR-15b靶向溶血磷脂酸受体3（LPAR3）调控PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞（HEC-1B）增殖的影响。方法 生物信息学分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与LPAR3之间的靶向结合作用;将HEC-1B细胞分为NC组、miR-15b mimic组、miR-15b inhibitor组、siRNA-LPAR3组和miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR 15b、LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（AKT）在HEC 1B和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测HEC-1B的细胞活力;流式细胞术检测HEC-1B的细胞周期分布;Transwell测定法检测HEC-1B的细胞迁移和侵袭能力。结果 LPAR3为miR-15b的靶基因;与HEEC组相比,HEC-1B组中LPAR3、PI3K和AKT mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而miR-15b表达显著降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组细胞PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组细胞LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,抑制miR-15b的表达后,上述现象被逆转(P＜0.05)。与miR-15b inhibitor组相比,miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论 miR-15b可能通过靶向LPAR3抑制HEC-1B的PI3K/AKT信号通路活化,从而抑制HEC-1B细胞的增殖。     

1,25-二羟维生素D3对人系膜细胞增殖作用的影响

目的 通过观察1,25-二羟维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对Ki-67抗原表达的影响,探讨其对人系膜细胞增殖的抑制作用。方法 体外培养人肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、表皮生长因子（EGF）组、1,25（OH）2D3组及EGF联合1,25（OH）2D3组,培养48 h后,应用免疫荧光技术和荧光定量PCR（RT-PCR）检测Ki-67抗原及其mRNA的表达。结果 正常对照组、EGF组、1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组细胞荧光强度分别为（35.958±2.563）、（49.872±2.745）、（22.415±2.277）和（36.567±2.270）,4组比较差异有统计学意义（F=123.429,P＜0.05）。其中,EGF组荧光强度高于正常对照组,1,25（OH）2D3组荧光强度低于正常对照组（P＜0.05）;1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组荧光强度低于EGF组（P＜0.05）。以正常对照组为基准,EGF组、1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量分别为（2.479±0.150）、（0.584±0.031）和（1.176±0.017）,4组比较差异有统计学意义（F=51.107,P＜0.05）。其中,EGF组Ki-67 mRNA相对表达量高于正常对照组,1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量低于正常对照组（P＜0.05）;1,25（OH）2D3组和EGF联合1,25（OH）2D3组Ki-67 mRNA相对表达量低于EGF组（P＜0.05）。结论 1,25（OH）2D3可抑制人肾小球系膜细胞的增殖,并降低EGF对人肾小球系膜细胞增殖的促进作用。     

VEGF逆转miR-200b促进非小细胞肺癌增殖的作用

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)在miR-200b抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法选择2013年2月至2014年5月在本院经手术治疗的65例NSCLC患者的肿瘤组织,qRT-PCR检测NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达,并统计分析NSCLC组织中miR-200b与VEGF表达的相关性;常规培养A549、H460及16HBE细胞,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b与VEGF的表达;将常规培养的A549细胞随机分为四组,即 miR-200b mimics+vector、miR-200b mimics+VEGF组、miR-200b inhibitor+scramble组、miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组,其中miR-200b mimics+vector组与miR-200b inhibitor+scramble组作为阴性对照,采用MTT法检测各组吸光度值(OD值)。结果 qRT-PCR结果显示,miR-200b在NSCLC组织的表达水平为(0.682±0.106),VEGF在NSCLC组织的表达水平为(2.731±0.597),相关性分析显示在NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达呈负相关(r=-0.514,P<0.001);miR-200b在A549、H460细胞中的表达显著低于16HBE细胞,差异有统计学意义(P=0.000),而VEGF在A549、H460细胞中的表达明显高于16HBE细胞,差异有统计学意义（P=0.000）;MTT结果显示,miR-200b mimics+VEGF组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显高于miR-200b mimics+vector组, miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显低于miR-200b inhibitor+scramble组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-200b与VEGF在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;VEGF逆转miR-200b对NSCLC细胞增殖的作用。     

miR-214靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路对糖尿病肾病大鼠的保护机制

目的 探讨微小RNA（miR-214）靶向磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）介导磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠的氧化应激和肾间质纤维化的作用和机制。方法 将40只SD雄性大鼠分为对照组（control组）、模型组（DN组）、miR-214阴性对照组（DN+miR-NC组）和miR-214模拟物组（DN+miR-214 mimics组）,每组10只;qRT-PCR检测各组大鼠肾组织中miR-214的表达;电子天平称量各组大鼠体质量和肾质量,计算肾指数;血糖仪测定各组大鼠的空腹血糖（FPG）;双缩脲法测定各组大鼠24 h尿蛋白（UP）水平;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐（Scr）和血清尿素氮（BUN）的水平;HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化;Masson染色观察各组大鼠肾组织间质纤维化;ELISA检测各组大鼠血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的表达;免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达;生物信息学工具预测靶基因;双荧光素酶报告基因检测基因或蛋白之间的相互作用;Western blot检测各组大鼠肾组织中PTEN、p-PI3K、p-AKT和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表达。结果 miR-214在DN大鼠肾组织中呈低表达,在DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中表达显著上调（均P＜0.001）;miR-214 mimics使大鼠的体质量升高,肾指数、FPG、UP、Scr及BUN水平下调（均P＜0.05）;DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中肾间质中的炎性细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少（P＜0.01）;miR-214 mimics使大鼠血清中MDA的水平降低,SOD、GSH、GSH-PX的水平升高（均P＜0.05）,大鼠肾组织中TGF-β1的表达水平下降（P＜0.05）;miR-214与PTEN存在靶向关系;miR 214 mimics使大鼠肾组织中PTEN蛋白表达下调,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达上调（均P＜0.05）。结论 miR-214在DN大鼠肾组织中低表达,过表达miR-214对DN大鼠的肾组织有保护作用,可能与降低肾组织的氧化应激水平、TGF-β1蛋白表达和抑制PI3K/AKT通路激活有关。     

miR-495-3p调控BUB1表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探究miR-495-3p调控BUB1表达水平对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法：qRT-PCR法测定人肝内正常胆管上皮细胞（HIBEpiC）、胆管癌细胞RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1中miR-495-3p和BUB1mRNA表达水平;将SNU-869细胞分为空白对照组、阴性对照组、miR-495-3pmimics组、miR-495-3p mimics+pcDNA组、miR-495-3p+pc-BUB1组,比较各组SNU-869细胞增殖、迁移和侵袭能力情况、miR-495-3p及BUB1 mRNA表达水平以及BUB1、ki-67、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况。结果：与HIBEpiC细胞相比,RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1细胞中miR-495-3p表达水平降低（P<0.05）,BUB1表达水平升高（P<0.05）。与空白对照组相比,miR-495-3p mimics组SNU-869细胞中miR-495-3p表达升高（P<0.05）,增殖能力、侵袭细胞数、迁移细胞数、ki-67、MMP-2、BUB1表达降低（P&l...     

MicroRNA-124对喉鳞状细胞癌细胞自噬、侵袭和迁移的影响

目的探讨microRNA-124(miR-124)在人喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及其对LSCC细胞自噬、侵袭和迁移的影响。方法选取2016年1月至2018年9月新乡医学院第一附属医院手术切除的LSCC组织及癌旁组织(距离肿瘤边缘1～2 cm)标本各12例,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LSCC组织和癌旁组织中miR-124表达;体外培养人Hep-2细胞,将其分为miR-124类似物(miR-124 mimics)组、miR-124抑制剂(miR-124inhibitor)组、类似物阴性对照(mimics NC)组、抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,进行细胞转染;采用qRT-PCR检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组细胞中miR-124的表达水平,Western blot法检测LSCC组织、癌旁组织和mimics NC组、miR-124 mimics组、inhibitor NC组、miR-124 inhibitor组细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ的表达,Transwell小室法检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-MA组细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-MA组细胞的迁移能力。结果 LSCC组织中miR-124相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。LSCC组织中LC3B-Ⅱ蛋白表达显著高于癌旁组织(P <0. 05)。miR-124 mimics组细胞中miR-124相对表达量显著高于mimics NC组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组细胞中miR-124相对表达量显著低于inhibitor NC组(P <0. 05)。miR-124 mimics组细胞LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著低于mimics NC组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组细胞LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著高于inhibitor NC组(P <0. 05)。miR-124 mimics组侵袭细胞数显著少于mimics NC组和mimics+西罗莫司组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组侵袭细胞数显著多于inhibitor NC组和inhibitor+3-MA组(P <0. 05)。划痕培养72 h后,inhibitor NC组和inhibitor+3-MA组细胞的划痕愈合率低于miR-124 inhibitor组(P <0. 05);培养96 h后,mimics NC组和mimics+西罗莫司组细胞的划痕愈合率高于miR-124 mimics组(P <0. 05)。结论人LSCC组织中miR-124表达显著下调,人LSCC组织和miR-124过表达细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ表达显著上调,miR-124可能通过抑制自噬而抑制LSCC细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-1247-3p激活TGF-β1信号介导肝星状细胞与肝纤维化的关系

目的 探讨miR-1247-3p对肝纤维化的影响,分析其对肝星状细胞增殖与活化的作用及分子机制。方法 四氯化碳（CCl₄）制备肝纤维化大鼠模型,并分离大鼠原代肝星状细胞。慢病毒转染处理细胞,分为空白对照组、miR-1247-3p mimic组和miR-1247-3p inhibitor组。检测miR-1247-3p、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及细胞增殖能力,并采用荧光素酶报告实验验证miR-1247-3p靶基因。结果 与对照组比较,CCl₄腹腔注射后大鼠肝组织出现纤维化增生,结构破坏,炎症细胞浸润,且随时间延长肝纤维化程度加重（P<0.05）;与对照组比较,模型组大鼠肝组织miR-1247-3p和TGF-β1表达水平均显著增加（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组肝星状细胞增殖能力和肝星状细胞α-SMA蛋白表达水平显著增加,miR-1247-3p inhibitor组显著降低（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组...     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

下调LncRNA KCNQ1OT1对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

【摘要】 目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1（KCNQ1OT1）对喉癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。 方法 细胞按转染质粒不同分组为：siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组;mimics NC组、miR-138 mimics组;KCNQ1OT1 wt+mimics NC组、KCNQ1OT1 wt+miR-138 mimics组、KCNQ1OT1 mut+mimics NC组、KCNQ1OT1 mut+miR-138 mimics组;pcDNA-3-1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、miR-138 mimics+pcDNA-3.1(+)组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-138 mimics组;FAK wt+mimics NC组、FAK wt+miR-138 mimics组、FAK mut+mimics NC组、FAK mut+miR-138 mimics组;Control组、Y15组、inhibitor NC组、miR-138 inhibitor组、miR-138 inhibitor+Y15组。分别采用CCK-8实验、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞增殖、侵袭和EMT能力。RT-qPCR检测KCNQ1OT1在Hep-2和HLEC细胞中的表达;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析KCNQ1OT1和miR-138之间的关系;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-138和FAK的关系;采用Western blot检测过表达及下调miR-138后Hep-2细胞中FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平;检测下调miR-138激活FAK/Src/MAPK信号通路对Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT的影响。 结果 Hep-2细胞中KCNQ1OT1表达量明显上升（P＜0.01),miR-138表达量下降（P＜0.05);敲低KCNQ1OT1抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。KCNQ1OT1 3′UTR靶向miR-138。敲低miR-138促进了Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-138则起到抑制作用。与过表达miR-138相比,同时过表达KCNQ1OT1和miR-138能部分逆转miR-138上调对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miR-138靶向FAK,敲低miR-138使FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平升高,过表达miR-138则降低FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平。沉默miR-138能够激活FAK/Src/MAPK通路促进细胞增殖、侵袭和EMT。 结论 下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-138/FAk/Src/MAPK轴抑制喉癌的增殖、侵袭和EMT。     

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。 结果与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P < 0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P < 0.05),TET2蛋白表达水平降低(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P < 0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P < 0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P < 0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P < 0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。     

脂氧素A4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE⁃12的保护作用

目的：探讨脂氧素A4（LipoxinA4, LXA4）对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护作用及机制。方法：体外传代培养MLE-12细胞,随机分为：空气组、高氧组、高氧+LXA4组、高氧+转化生长因了（TGF）-β1中和抗体组、高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组。倒置相差显微镜下观察各组MLE-12形态学变化;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、肌腱蛋白C（tenascin-C）、TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平。Western blot检测TGF-β1/Smads信号（TGF-βR1、Smad2、Smad3、Smad4、p-Smad2 和p-Smad3）蛋白表达。结果：①细胞形态：高氧组MLE-12明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数增多,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似;②细胞外基质（extracellular matrix,ECM）mRNA表达：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的collagenⅠ和tenascin-C mRNA的表达量升高（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组作用最为显著（P < 0.05）;③TGF-β1/Smads信号mRNA和蛋白含量：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平以及下调TGF-β1/Smads信号相关蛋白的表达量（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组细胞的表达量下调最为显著（P < 0.05）。结论：LXA4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护可能与调控TGF-β1/Smads信号以及collagenⅠ和tenascin-C的表达有关。