耐药大肠埃希菌β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因与可移动遗传元件研究

目的调查多药耐药大肠埃希菌β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因与可移动遗传元件的存在情况。方法收集医院2007年1-12月患者标本中分离的20株多药耐药大肠埃希菌,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,分析42种β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因以及10种可移动遗传元件的遗传标记;并对上述检测结果做样本聚类分析。结果 20株多药耐药大肠埃希菌检出β-内酰胺类获得性耐药基因TEM-1及CTX-M-55,检出率为80.0%、50.0%,氨基糖苷类获得性耐药基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aadA5、aph(3′)-Ⅰ,检出率分别为45.0%、5.0%、10.0%、45.0%、5.0%,可移动遗传元件检出intⅠ1、tnp513、IS26、ISEcp1、traA、trbC,检出率分别为55.0%、25.0%、90.0%、65.0%、80.0%、75.0%;其他39种基因未检出。结论 20株多药耐药大肠埃希菌耐β-内酰胺类、氨基糖苷类药物与细菌产2种β-内酰胺类获得性耐药基因、5种氨基糖苷类获得性耐药基因相关;可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播;样本聚类分析提示,该组多药耐药大肠埃希菌尚无克隆传播。     

产ESBLs大肠埃希菌功能基因的样本聚类分析研究

目的调查一组产ESBLs大肠埃希菌株间的亲缘性关系。方法收集医院2013年住院患者标本,从中分离到产ESBLs大肠埃希菌共20株,了解其样本聚类分析的聚集性,为消毒隔离提供依据;采用聚合酶链反应(PCR)分析获得性耐药基因并对检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果 20株大肠埃希菌中,获得性耐药基因共检出6种β-内酰胺类耐药相关基因、4种氨基糖苷类耐药相关基因、1种消毒剂与磺胺耐药重叠基因、7种可移动遗传元件的遗传标记,2种毒力基因均有检出;β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、消毒剂与磺胺耐药重叠基因、可移动遗传元件遗传标记和毒力基因的总阳性率分别为100.0%、95.0%、80.0%、100.0%和40.0%;样本聚类分析显示,本组20株菌可分A与B两大群,A群又可分A1与A2两小群;A1群13个成员每个菌株均携带blaCTX-M-9cluster基因,A2群5个成员或携带blaCTX-M-1cluster基因,或不携带blaCTX-M基因;B群两个成员均携带blaDHA基因。结论本组20株产ESBLs大肠埃希菌的样本聚类分析显示出聚集性,对感染者仍有加强消毒隔离必要性。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与消毒剂抗性的研究

目的了解医院大肠埃希菌的Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因存在状况。方法对临床分离的34株大肠埃希菌,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因。结果 34株大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因阳性有28株(82.4%)。结论 34株大肠埃希菌药敏试验结果显示,β-内酰胺酶和氨基糖苷类抗菌药物耐药性高与Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因高检出率有关。     

大肠埃希菌临床株可移动遗传元件之遗传标记与耐药基因分析

目的了解大肠埃希菌临床株可移动遗传元件及耐药基因存在状况以及菌株的亲缘关系,分析耐药的遗传学背景。方法收集医院2012年1-10月住院患者痰液标本中分离的大肠埃希菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析,可移动遗传元件的10种遗传标记、19种β-内酰胺酶基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16S rRNA甲基化酶基因,并对检测结果作样本聚类分析。结果 20株大肠埃希菌均检出可移动遗传元件之遗传标记、β-内酰胺酶基因与氨基糖苷类修饰酶基因;共检出可移动遗传元件的7种遗传标记、3种β-内酰胺酶基因、3种氨基糖苷类修饰酶基因,且耐药基因的阳性率很高,但16SrRNA甲基化酶基因未检出;traA、trbC、tnp513、IS26、IS903、ISEcp1、intⅠ1、blaTEM、blaCTX-M-1群、blaOXA-1群、aac(6')-Ⅰb、aadA5和aph3′-Ⅰ阳性率分别为95.0%、65.0%、30.0%、100.0%、50.0%、90.0%、100.0%、85.0%、100.0%、25.0%、40.0%、85.0%和5.0%;可移动遗传元件之遗传标记与耐药基因可分为14种阳性模式,样本聚类分析提示菌株可分A与B两群,A群中1、4、17~19号株,14~18、2、12~13号株为3个独立的克隆。结论 20株大肠埃希菌耐药表型与β-内酰胺酶基因与氨基糖苷类修饰酶基因检测结果相符,该组菌株存在医院感染的可能。     

耐药大肠埃希菌湖北监利分离株常见耐药基因研究

目的调查一组耐药大肠埃希菌分离株中β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药基因与可移动遗传元件遗传标记的携带状况及菌株间的亲缘关系。方法收集2016年1-6月医院住院患者痰液标本中分离的耐药大肠埃希菌20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析15种β-内酰胺酶基因、7种氨基糖苷类修饰酶基因、1种16SrRNA甲基化酶基因、4种可移动遗传元件遗传标记;阳性耐药基因测序后直接作BLAST比对,耐药基因检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果 20株耐药大肠埃希菌对头孢类、β-内酰胺类复合制剂、喹诺酮类均耐药,对碳青霉烯类均敏感;20株菌共检出4种β-内酰胺酶基因,4种氨基糖苷类修饰酶基因,4种可移动遗传元件遗传标记,且阳性率较高;样本聚类分析显示20株菌中的18株出现了明显的聚集性,出现4个克隆。结论 20株耐药大肠埃希菌携带的β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因和可移动遗传元件遗传标记是对β-内酰胺类和氨基糖苷类产生耐药的重要原因;本组菌检出的四个克隆高度疑似医院感染,同一克隆菌株携带相同基因。     

大肠埃希菌的耐药性及耐消毒剂基因研究

目的 了解大肠埃希菌的耐药性,同时了解产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1的流行情况,揭示大肠埃希菌的耐药机制.方法 2007年1月-2011年11月医院分离的3688株大肠埃希菌用VITEK-32GNI+鉴定,GNS-448检测对氨基糖苷类、(p-)内酰胺类、喹诺酮类等15种抗菌药物的耐药性,并对其中36株产ESBLs大肠埃希菌用PCR法检测耐消毒剂基因qacE△1-sul1的流行状况.结果 3688株大肠埃希菌中共检出1660株产ESBLs菌株,检出率为45.0％;大肠埃希菌除对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦耐药率较低外,对其他抗菌药物均产生了一定的耐药性,36株产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、庆大霉素全耐药,未检出亚胺培南、美罗培南耐药株;36株产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1检测结果22株阳性,检出率为61.1％.结论 大肠埃希菌耐药性严重,但近几年基本稳定,产ESBLs大肠埃希菌存在多药耐药性;产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1检出率较高,且与多药耐药关系密切.     

大肠埃希菌获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的 调查大肠埃希菌45种获得性耐药基因和7种可移动遗传元件遗传标记基因的存在状况,以及获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记基因的相关性.方法 收集南京医科大学第一附属医院2006年3月-2008年10月患者尿液标本中分离的大肠埃希萄共60株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析45种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和7种整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因,并用指标聚类分析(SPSS法),分析β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类获得性耐药基因与整合子、转座子、插入序列、接合性质粒遗传标记基因的相关性.结果 60株大肠埃希菌共检测到10种获得性耐药基因(包括3种β-酰胺类获得性耐药基因、6种氨基糖苷类获得性耐药基因、1种喹诺酮类获得性耐药基因);且7种可移动遗传元件遗传标记基因均有检出,包括1种整合子基因遗传标记基因、4种转座子和插入序列基因遗传标记基因、两种接合性质粒遗传标记基因,其余35种基因均未检测到;SPSS法将上述阳性检出基因分成A和B两大簇群.结论 大肠埃希菌对抗菌药物的耐药表型与获得性耐药基因相关,且可移动遗传元件的水平转移使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播;获得性耐药基因与可移动遗传元件遗传标记基因的指标聚类分析显示,在A簇群中,aadA5与intⅠ 1、CTX-M-55与ISEcp1、TEM-1与IS26较为相关,并有可能位于携带traA、trbC性毛基因的接合性质粒上,在B簇群中,aac(6')-Ⅰb与Tn21较为相关.     

泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的 了解1株对临床常用18种抗菌药物(包括亚胺培南、美罗培南)均耐药的肺炎克雷伯菌(KPN)所携带的耐药基因状况.方法 对该株KPN进行了9类耐药基因的PCR法检测,包括β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1、2、9群、blaOXA-1、2、10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、金属β-内酰胺酶基因blaIMP、blaVIM、blaKPC,AmpC酶基因blaDHA、blaACT/MIR、blaCMY/MOX、blaCMY/LAT,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,喹诺酮类耐药基因qnrA、TMP耐药基因dfrA1、dfrA17,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sul1,整合子遗传标记基因intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3,转座子遗传标记基因tnpA、merA,共计36种.结果 KPN共检出7种耐药基因,分别为β-内酰胺酶基因blaTEM,blaSHV,金属β-内酰胺酶基因blaKPC-2,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅱ,ant(3")-Ⅰ,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sull,整合子遗传标记基因intⅠ1.结论 在该株泛耐药KPN中发现了少见的blaKPC-2金属β-内酰胺酶基因,该菌对18种抗菌药物的耐药可能与其同时携带有多种耐药基因有关,临床应对此类菌株引起重视.     

泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件指标的聚类分析

目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件携带状况,并分析两者的相关性.方法 收集医院2008年1-12月住院患者送检痰液标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应的方法分析54种β-内酰胺类、喹诺酮炎、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及12种可移动遗传元件遗传标记,并对检测结果作指标聚类分析.结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出获得性β-内酰胺类耐药基因TEM-1、ADC-3和OXA-30,三者阳性率均为100.0％;检出的5种获得性氨基糖苷类耐药基因中,aac(6′)-Ⅰ b、ant(3″)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅰ基因阳性率为100.0％,aac(3)-Ⅰ基因阳性率为75.0％,armA基因为5.0％;外排泵基因qacE△1、adeB和可移动遗传元件遗传标记基因int Ⅰ 1、tnp513、tnpU、ISaba1、IS26的阳性率均为100.0％;其余51种基因未检出.结论 从该组泛耐药鲍氏不动杆菌指标聚类分析中可见,β-内酰胺酶基因 TEM-1、ADC-30、OXA-23,氨基糖苷炎修饰酶基因aac(6’)-Ⅰ b、ant(3")-Ⅰ,抗菌制剂外排泵基因qacE△1和abeB与可移动遗传元件intⅠ 1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1基因遗传标记高度相关.     

耐药大肠埃希菌获得性耐药基因及可移动遗传元件检测分析

目的 了解大肠埃希菌β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因及其可移动遗传元件的存在状况,以探讨菌株的亲缘性.方法 收集医院2010年住院患者痰标本中分离的耐药大肠埃希菌共20株,且该组菌株对一、二代头孢菌素、妥布霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均＞65.0％,再采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析法分析43种β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶、16S rRNA甲基化酶等获得性耐药基因和8种可移动遗传元件,并以这些基因为分子标记,对检测结果作样本聚类分析.结果 大肠埃希菌对环丙沙星、左氧氟沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢呋辛耐药率较高,耐药率分别为80.0％、80.0％、70.0％、70.0％,对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶敏感,耐药率为0、0、5.0％；20株耐药大肠埃希菌共检出3种β-内酰胺类获得性耐药基因(TEMX-1、CTX-M-55、OXA-30),6种氨基糖苷类获得性耐药基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、ant(3")-Ⅰ、aadA5、aph(3')-Ⅰ、rmtB,6种可移动遗传元件；菌株亲缘性分析显示,A簇中的2号株与4号株(2～4克隆),7、8号株(7～8克隆)为克隆播散；3、5、17号株与2-4克隆亲缘关系密切,6、10、12、14、15号株与7～8克隆亲缘关系密切.结论 该组菌株的获得性耐药基因及其载体携带率高,提示菌株在生存环境中也极易输出传播给其他同种或不同种细菌；菌株亲缘性分析证实该组部分菌株分离自医院感染者.