PMA协同IM刺激新生儿脐血淋巴细胞增殖及钙离子浓度的变化

本文比较新生儿脐带血和成人外周血淋巴细胞对抗CD3单克隆抗体、PMA和IM刺激的增殖反应及细胞内钙离子浓度的变化 ,了解新生儿出生时淋巴细胞功能缺陷可能的环节。结果表明应用抗CD3单克隆抗体或PMA协同IM刺激 ,脐带血淋巴细胞增殖反应及细胞内钙离子浓度明显增强 ,PMA协同IM刺激 ,脐带血淋巴细胞的增殖反应更接近于成人。由于PMA协同IM刺激可部分改善新生儿脐带血淋巴细胞增殖反应的缺陷 ,提示细胞信号传导的上游缺陷可能为新生儿出生时淋巴细胞功能低下的原因之一。     

CD3抗体诱导的新生儿脐带血淋巴细胞信号传导的研究

目的：从TCR／CD复合物信号传导的角度，研究CD3抗体、PMA和ionomycin对新生儿脐带血淋巴细胞增殖及胞内钙离子浓度的影响，以及与磷脂酶Cγ1（PLCγ1）表达的关系。方法：利用^3H-TdR渗入法检测淋巴细胞的DNA合成；利用荧光分光光度法检测淋巴细胞内钙离子浓度；利用蛋白印迹法检测PLCCγ1的表达。结果：应用CD3抗体或PMA＋ionomycin协同处理新生儿脐带血和成人外周血淋巴细胞，其DNA合成和胞内钙离子浓度均明显增高，并且新生儿脐带血淋巴细胞的DNA合成和胞内钙离子浓度明显低于成人外周血水平，但是，与CD抗体相比，PMA＋ionomycin协同所诱导的新生儿脐带血淋巴细胞的增殖接近成人外周血水平，用CD3抗体处理前后的新生儿脐带血淋巴细胞PLCγ1的表达均明显低于成人外周血水平，结论：新生儿脐带淋巴细胞信号传导发育的不完善可能主要存在于细胞活化的早期阶段，并且这种不完善的原因可能与PLCγ1表达降低以及不能有效地被激活有关。     

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

尘螨诱导新生儿脐血单个核细胞ICOS与转录因子表达的研究

为了解尘螨(HDM)抗原对新生儿脐血单个核细胞(CBMC)及成人外周血单个核细胞(PBMC)CD3+ICOS+细胞阳性率、转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3 mRNA表达水平以及培养上清中IL-4、IL-10、IFN-γ表达水平的影响。用流式细胞术,检测新生儿CBMC、成人PBMC体外经PHA和/或HDM抗原刺激前、后CD3+ICOS+细胞阳性率;用RT-PCR法检测细胞体外经PHA和/或HDM抗原刺激前、后T-bet、GATA-3以及Foxp3 mRNA表达水平;用ELISA法,检测细胞在体外经PHA和/或HDM刺激前、后培养上清液中IL-4、IL-10、IFN-γ表达水平。结果表明,高剂量HDM抗原显著下调CBMC经PHA刺激后的CD3+ICOS+阳性率(P<0.05),同时也显著上调PHA刺激前其T-bet mRNA表达(P<0.05),而显著下调该类细胞经PHA刺激后的Foxp3 mRNA的表达(P<0.05)。也显著增加其PHA刺激前的IFN-γ分泌(P<0.01),减少其PHA刺激后IL-10分泌(P<0.05)。高剂量HDM抗原对CBMC的作用强于PBMC,可下调CD3+ICOS+阳性率,显著上调PHA刺激前CBMC T-bet mRNA表达,增加PHA刺激前IFN-γ的分泌,减少PHA刺激后IL-10分泌,提示早期接触高剂量HDM抗原对机体免疫功能的影响较强,可促进新生儿Th1样反应,高剂量HDM抗原可能通过作用于下调Foxp3 mRNA的表达而下调CD4+CD25+调节性T细胞的功能。     

霉酚酸及其衍生物对人T淋巴细胞及混合淋巴细胞免疫应答的影响

目的探讨霉酚酸及霉酚酸衍生物对人T淋巴细胞和混合淋巴细胞免疫应答的影响。方法从正常人外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),在抗CD3刺激下和混合淋巴细胞反应体系中,加入或不加霉酚酸及其衍生物共培养,应用ELISA和流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子的产生、细胞活化和增殖情况。结果经抗CD3刺激后,PBMC产生的细胞因子明显增加,加入霉酚酸及其衍生物后,IFN-γ及TNF-α明显降低,IL-2产生略有增加。在混和淋巴细胞反应体系中,3种细胞因子产生皆被抑制。抗CD3刺激和混和淋巴细胞反应后,T细胞表面活化分子CD25及CD69表达增加,加入霉酚酸及其衍生物共培养24、48 h后,T细胞CD25及CD69的表达并未被抑制。霉酚酸及其衍生物可抑制抗CD3刺激下和混和淋巴细胞反应后T细胞的增殖。结论霉酚酸及其衍生物对T淋巴细胞和混合淋巴细胞体系中因子的产生和细胞增殖都有抑制作用,为其在临床自身免疫疾病及移植排斥中的广泛应用提供了理论依据。     

BrdU掺入与T细胞的活化和细胞因子表达的关系

目的:探讨利用流式细胞术(FCM)检测细胞增殖(BrdU掺入)与T细胞的活化及细胞因子表达的关系.方法:正常人PBMC经PMA Ionomycin刺激不同时间,在培养结束前1 h加入BrdU,利用抗BrdU以及多种抗细胞表面和抗细胞因子抗体标记,FCM检测.结果:体外刺激PBMC 48 h后,可见T细胞有BrdU掺入,但随着时间的延长,掺入率没有明显增加.对比分析BrdU掺入与活化分子表达的关系表明,CD69在刺激后8 h达高峰,而CD25则需要24 h后达到高峰.另外,BrdU掺入与细胞因子表达没有明显关系,当PBMC刺激后8 h,即有大量IFN-γ的表达,而当培养时间延长到24、48和72 h后,IFN-γ的表达没有明显改变.OKT3 antiCD28刺激T细胞后BrdU的阳性率高于PMA Ionomycin刺激的T细胞,CD8 T细胞掺入率高于CD4 T细胞.结论:利用FCM检测BrdU 细胞可以用于评价T细胞的增殖反应,但在多克隆刺激的条件下,只有少数细胞发生增殖,并且BrdU掺入率受刺激剂种类和时间的影响,BrdU掺入与活化分子和细胞因子的表达均没有明显关系.     

人脐血非造血干细胞免疫原性的实验研究

目的 探讨人脐血非造血干细胞免疫原性,为脐血非造血干细胞的应用提供依据.方法 通过流式细胞术检测人脐血非造血干细胞的免疫表型;体外混合淋巴细胞培养观察人脐血非造血干细胞原代、P1代、诱导分化细胞及干扰素-γ(IFN-γ)刺激异种T淋巴细胞增殖活化作用.结果 人脐血非造血于细胞表达HLA-ABC,微弱表达HLA-DR,经IFN-γ处理后,未明显改变HLA-ABC、HLA-DR的表达水平.混合淋巴细胞培养未见各处理组人脐血非造血干细胞明显刺激T淋巴细胞的增殖.结论 人脐血非造血干细胞无论原代、传代细胞、分化细胞及IFN-γ处理的细胞免疫原性均较弱.     

年龄、性别在幼鼠胸腺T细胞增殖中的作用

目的：分析年幼小鼠性别、年龄与CD3、CD4、CD8免疫参数表达的关系。方法：分离3—9周小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞，FACS分析细胞表面CD3、CD4、CD8的表达；CFSE标记后细胞，加入ConA、抗TCR抗体、PMA IONO刺激剂培养72小时，流式细胞仪分析的方法比较不同刺激剂作用下雌、雄小鼠T细胞的增殖。结果：结果胸腺和脾脏表面CD3、CD4、CD8的表达与性别无明显关系，6-9周小鼠脾脏CD3^ 细胞明显多于3—4周小鼠；胸腺细胞的增殖与年龄、性别无关，而3周雌性小鼠脾细胞对PMA IONO刺激后的增殖应答比雄性明显，4-6周雄性小鼠脾细胞的增殖能力强于雌性小鼠，7—8周雌性小鼠脾细胞对抗TCR抗体的应答能力明显减小。结论：免疫系统的雌雄异型可能早于青春期。     

新生儿和成人PBMC中IL-4基因表达和NF-AT活性的比较

通过比较新生儿脐血单个核细胞 (CBMC)和成人外周血单个核细胞 (PBMC)中IL 4基因表达水平和活化T细胞核因子(NF AT)活性 ,探讨新生儿IL 4基因表达水平低下的机制。用ELISA和RT PCR法测IL 4及其mRNA水平 ;电泳迁移率转换试验 (EMSA)测NF AT活性。结果显示 :抗CD3+PMA刺激后 ,CBMC培养上清液中IL 4水平较PBMC明显低下 (P <0 0 1) ;CBMC产生的IL 4mRNA较PBMC明显减少 ;CBMC核蛋白内几乎测不出NF AT活性 ,而PBMC核蛋白内NF AT活性较强。表明在转录水平上缺乏NF AT调控可能使新生儿IL 4基因转录减少 ,从而导致新生儿IL 4基因表达水平低下。     

环孢素A对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响

目的研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3mAb 抗CD28mAb及抗CD3mAb rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响。在单个细胞水平上,用流式细胞仪检测CsA对脾细胞表面CD25和CD69表达及IFN-γ产生的影响。结果CsA对不同条件下诱导的小鼠脾细胞IFN-γ产生,均表现为剂量依赖性的抑制作用,其抑制机制与细胞的活化有关。结论CsA可以剂量依赖的方式抑制小鼠脾细胞表达CD25、CD69及产生IFN-γ。