R2细胞用于测定人白介素6受体的生物活性

目的　确定可靠的筛选小分子人白介素 6(IL 6 )受体拮抗剂先导化合物的细胞模型。方法分别用间接免疫荧光法和MTT检测法检测了R2细胞的人IL 6受体蛋白表达水平和对重组人白介素 6(rhIL 6 )的反应性。结果　检测到R2细胞具有高丰度的人IL 6受体蛋白表达并对rhIL 6具有极为灵敏的反应性和极高的亲和力 ;用R2细胞检测抗人IL 6单克隆抗体对rhIL 6的拮抗活性 ,发现单抗在 2 0mg·L- 1浓度下对rhIL 6所引起的R2细胞的增殖有很强的抑制作用 ,抑制率达 92 %。结论　R2细胞是可靠的筛选人IL 6受体拮抗剂的细胞模型     

抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.     

抗人TNF-α单链抗体rScFvH22原核表达及纯化

目的：应用PET32-c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。方法：将单链抗体H22基因克隆到PET32-c原核表达载体中，通过酶切及测序鉴定正确后，进行原核诱导表达和纯化。并检测纯化后单链抗体的功能。结果：DNA琼脂糖凝胶电泳表明，单链抗体基因克隆成功；SDS-PAGE结果表明，单链抗体得到成功表达和纯化；ELISA和Western印迹结果表明，单链抗体H22能够特异性结合人TNF-α。结论：成功地表达及纯化抗人TNF-α单链抗体rSeFvH22。     

蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立

目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。     

FTY720介导的淋巴细胞归巢作用对外周淋巴细胞的影响

FTY720是由ISP-I衍生而来的一类新型免疫抑制剂。近年来的研究显示，FTY720在器官移植排斥以及自身免疫性疾病的一系列模型中显示出良好的治疗效果。研究表明，FTY720主要通过减少外周淋巴细胞数目发挥免疫抑制作用，但其具体作用机制仍存在争议。一部分观点认为FTY720是通过诱导外周淋巴细胞发生凋亡而引起白细胞数急剧下降；另一部分观点则认为FTY720是通过阻断淋巴细胞外流，即将淋巴细胞阻断在次级淋巴组织中，从而阻止活化的淋巴细胞迁移至移植器官或炎症组织部位，达到免疫抑制作用。本研究通过流式细胞技术以及荧光染料标记细胞跟踪技术证实：FTY720主要是通过促进外周循环中的淋巴细胞归巢而发挥其免疫抑制作用。     

抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的　观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法　利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果　 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论　 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2 0分子并诱导其发生凋亡     

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

CD3AK细胞过继免疫治疗的实验研究

目的: 分析抗CD3分子的单克隆抗体 (mAb)yCD3的免疫学特性和生物学活性, 观察其激活的免疫活性细胞CD3AK体外及动物体内的抑瘤作用。方法: 用流式细胞术(FCM)测定yCD3的特异性, 以及CD3AK细胞的免疫表型和产生细胞因子的情况。用 3H -TdR法测定yCD3对淋巴细胞转化的作用; 乳酸脱氢酶法 (LDH)测定CD3AK细胞的体外细胞毒活性。建立荷瘤小鼠模型, 观察静脉注射CD3AK细胞后肿瘤生长的情况、转移灶数量和小鼠存活天数。结果: yCD3与T细胞呈特异性反应, 5μgyCD3可竞争抑制 70%的标准抗CD3抗体与细胞表面CD3分子的结合。yCD3刺激外周血淋巴细胞增殖的有效浓度为 8μg/L, 并与IL- 2、抗CD28抗体有协同作用。活化的CD3AK细胞中CD3 、CD8 和CD25 细胞增多; 产生IL- 2和IFN γ的CD3 细胞均有不同程度的增加, 在抗CD28抗体协同刺激下分别增加 3. 29和 2. 47倍。当效靶细胞比为 80∶1时, CD3AK细胞对体外肿瘤细胞杀伤的百分率为 57. 54%。分组观察荷瘤动物, CD3AK细胞治疗组的抑瘤率为 33. 17%, 对小鼠肿瘤肺转移的抑制率为39. 70%, 与LAK细胞联合治疗的疗效更显著。结论: yCD3可活化T细胞, 诱导的CD3AK细胞在体外及动物体内显示抑制肿瘤的作用, 在临床抗肿瘤过继性免疫治疗中具有重要意义。     

线粒体对缺氧心肌细胞内钙离子的调节

线粒体对缺氧心肌细胞内钙离子的调节张学敏杨怡汪宝珍张德添于鸣陈德蕙材料：１１例心脏标本均取自从内地进入或返回西藏高原后不久突发心衰死亡者，经尸检等已排除其它常见心脏病（如风湿性、肺原性、先天性和冠状动脉硬化性心脏病）和克山病及原发性心肌病。发病者均为...