五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达及生精功能的影响

目的观察五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达和生精功能的影响。方法正常SD雄性大鼠25只,随机分为5组,每组5只。分别为正常组,模型组,五子衍宗丸低、中、高剂量组。正常组早晚均予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;模型组上午给予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午给予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;低、中、高五子衍宗丸组大鼠上午予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午分别予0.5,1.0,2.0 g/kg五子衍宗丸灌胃。30 d后,取睾丸及附睾组织。检测大鼠精子总数、前向运动精子百分率,免疫组化法检测睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白的表达,TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果和正常组相比,模型组精子总数、前向运动精子百分率下降,睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白表达下降,生精细胞凋亡增加;与模型组相比,五子衍宗丸中、高剂量组精子总数、前向运动精子百分率均提高;五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸支持细胞波形蛋白、α-微管蛋白的表达均增加,生精细胞的凋亡率下降。结论五子衍宗丸可通过调控睾丸支持细胞骨架蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡,改善生精功能。     

肝硬化大鼠睾丸一氧化氮合酶免疫组化研究

探讨肝硬化睾丸功能障碍的发生机制.将清洁级雄性SD大鼠分为假手术组(SO,n=10)、肝硬化组(CIR,n=10).采用胆管结扎(BDL)复制肝硬化模型,假手术组则仅分离出胆总管而不予结扎.应用免疫组织化学法对SO组和CIR组大鼠睾丸组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达进行比较性研究.结果术后4周,组织学检查显示胆汁性肝硬化特征性表现.CIR组和SO组大鼠睾丸组织eNOS表达均在间质细胞胞浆,二者平均吸光度和面密度相比较均无显著性差异(P＞0.05).而iNOS表达则存在较大差异,SO组仅在睾丸组织间质细胞胞浆表达;CIR组不仅在间质细胞胞浆,还在支持细胞、生精细胞以及脱落的生精上皮细胞胞浆表达,二者平均吸光度及面密度相比均存在非常显著性差异(P＜0.01).表明CIR组大鼠睾丸组织iNOS活性增高,参与了支持细胞、生精过程的调节,从而进一步证明了肝硬化睾丸功能障碍的发生机制中存在NO途径.     

人胎儿睾丸发生过程中TGF-β1与PCNA的表达

目的:观察TGF-β1与PCNA在人胎儿睾丸发生过程中的表达特征,探讨二者在睾丸发生中的作用.方法:采用SP免疫细胞化学技术检测12～28周人胎儿睾丸间质细胞、支持细胞、生精细胞TGF-β1、PCNA的表达情况.结果:TGF-β1阳性细胞胞浆呈桔黄色或棕黄色颗粒状;在12周胎儿睾丸组织未见表达,在16～28周睾丸间质细胞呈阳性表达,16～20周为表达高峰;随着胎龄的增长TGF-β1阳性细胞率逐渐下降(P＜0.01).PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,在胎儿睾丸间质细胞、支持细胞和生精细胞均有不同程度表达,16～20周为表达高峰,随着胎龄的增长PCNA阳性细胞率逐渐下降(P＜0.01).结论:TGF-β1与PCNA在人胎儿睾丸发育过程中有不同程度的表达,表明TGF-β1与PCNA在睾丸发育过程中起着一定的作用.     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸生精细胞HIF-1α和Bax表达的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)对大鼠睾丸生精细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α、HIF-1α)和Bax表达的影响,探索VC引起不育的机理.方法:采用青春期雄性Wistar大鼠复制左侧VC模型,将25只大鼠随机分为VC组(n=15)和假手术组(SOG)(n=10),于术后30天一并处死、取左侧睾丸,用免疫组化SP法检测HIF-1α和Bax的表达.结果:HIF-1α和Bax在VC组左侧睾丸组织中的表达均明显高于假手术组(SOG).结论:实验性VC可以改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞HIF-1α和Bax的表达.     

甲醛对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构改变的影响

目的:研究甲醛对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达及超微结构的改变.方法:取24只雄性清洁级(ICR)小鼠,随机分为4组,每组6只,用0.2、2、20 mg/kg甲醛腹腔注射,每天一次,连续5 d,第6天用免疫组化法测定小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2、Bax蛋白表达率;用电镜观察小鼠睾丸生精细胞超微结构变化.结果:小鼠睾丸生精细胞的Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05),Bax蛋白表达率明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);电镜观察结果显示,各浓度甲醛能使生精细胞的细胞核、染色质、线粒体等超微结构发生不同程度的病理改变.结论:甲醛可使小鼠生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达及超微结构发生显著性改变,从而诱导细胞凋亡.     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸生精细胞HIF-1α和Bax表达的影响

目的 研究精索静脉曲张(varicocele, VC)对大鼠睾丸生精细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α、HIF-1α)和Bax表达的影响,探索精索静脉曲张引起不育的机制.方法 采用青春期雄性Wistar大鼠复制左侧精索静脉曲张模型,将25只大鼠分为VC组(n=15)和假手术组(SOG)(n=10),于术后30 d一并处死,取左侧睾丸,用免疫组化S-P法检测HIF-1α和Bax的表达.结果 HIF-1α和Bax在VC组左侧睾丸组织中的表达均明显高于SOG组(P＜0.05),二者呈现一定的相关性(r=0.479 2,P＜0.05).结论 实验性精索静脉曲张可以改变青春期大鼠睾丸组织生精细胞HIF-1α和Bax的表达.     

无精症患者睾丸病理、性激素水平及睾丸容积检测

目的:观察无精症患者睾丸病理、血清性激素水平及睾丸容积变化.方法:对97例无精症患者[A组32例(唯支持细胞综合征),B组28例(精子发育停滞于精母细胞)、C组37例(生精功能低下)]与正常对照40例(D组)进行睾丸活检病理、性激素和睾丸容积检测.结果:A、B、C组FSH和Johnsen评分均有差异(P<0.05).A、B组睾丸容积低于C、D组,而LH水平高于C、D组(P<0.05).B组E2水平低于其他各组(P<0.05).结论:FSH结合睾丸活检病理与睾丸容积可作为判断睾丸生精功能的重要指标.     

D-半乳糖衰老大鼠睾丸生精细胞端粒酶表达的变化

目的:观察D-半乳糖衰老大鼠血清睾酮含量及睾丸生精细胞端粒酶表达的变化.方法:20只SD大鼠随机分为正常组、衰老模型组,每组均为10只.采用D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型.ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮含量、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞端粒酶的表达.结果:衰老大鼠血清睾酮含量明显下降(与正常大鼠相比P＜0.05);衰老大鼠睾丸生精细胞端粒酶的表达明显少于正常大鼠.结论:衰老大鼠睾丸生精细胞增殖能力下降,睾丸功能减退.     

538例男性无精症睾丸活检的临床病理分析及临床意义

目的 探讨睾丸活检在男性不育诊治中的病理及临床意义.方法 镜检观察538例男性不育者的睾丸活检组织,依据第9版阿克曼外科病理学睾丸生殖病理的最新标准进行诊断分类.结果 538例患者中,生精功能正常或基本正常的睾丸组织191例,占35.5%;精子发生低下185例,占34.38%;唯支持细胞综合症97例,占18.03%;生精细胞发育完全阻滞23例,占4.28%;生精细胞发育不完全阻滞30例,占5.58%;Klinefelter综合症12例,占2.23%.结论 睾丸活检是诊断无精子症的最直接的方法,并对治疗及预后判断有实用价值.     

内皮祖细胞对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)移植对睾丸扭转复位后生精功能的影响.方法 获取大鼠骨髓源性EPC,采用携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-eGFP)转染EPC.将大鼠分3组,每组各6只.假手术组:左侧睾丸未扭转;缺血再灌注损伤(IRI)组:睾丸扭转复位后经股静脉注射1 ml生理盐水;EPC组:睾丸扭转复位后注射1 ml EPC悬液(EPC数为1.0×106个).另外对3只睾丸扭转复位后大鼠进行Ad-eGFP转染后的EPC移植.术后5 d,观察移植EPC的归巢特征,并检测各组睾丸组织病理变化以及凋亡细胞/生精小管情况.结果 重复感染倍数(MOI)=50时,Ad-eGFP对EPC的转染效率>73.7%.Ad-eGFP EPC移植后5 d,可在左侧睾丸组织中发现绿色荧光细胞.假手术组生精细胞结构正常,凋亡细胞/生精小管为0.09±0.02.IRI组生精细胞稀少,凋亡细胞/生精小管为2.82 ±0.81.EPC组生精上皮较IRI组显著增厚,EPC组凋亡细胞/生精小管为0.32±0.09,低于IRI组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EPC移植可改善睾丸扭转导致的生精功能障碍,对生精细胞产生保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of transplanted endothelial progenitor cells (EPCs) on the spermatogenic functions in testicular detorsion. Methods Bone-marrow-derived EPCs were obtained from rats and transfected by enhanced green fluorescent protein adenovirus (Ad-eGFP). The rats were divided into 3 groups (n=6 each). In the sham group, left testis was not twisted. In the ischemia reperfusion injury (IRI) group, 1 ml saline was injected into the femoral vein of each rat after testicular detorsion. In the EPCs group, 1 ml EPCs suspension (1.0×106 EPCs) was injected into each rat after testicular detorsion. The Ad-eGFP transfected EPCs were injected into the 3 additional rats of testicular torsion-detorsion. At Day 5 post-transplantation, the characteristics of transplanted EPCs homing were detected. And the pathological changes and apoptotic cells/seminiferous tubules in left testis were examined. ResultsWhen the value of multiplication of infection (MOI) was at 50, the transfection rate of EPCs by Ad-eGFP exceeded 73.7%. At Day 5 post-treatment, the cells exhibiting green fluorescence were detected in left testis. The germ cells in rats of the sham group were normal. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.09±0.02. The germ cells in rats of the IRI group were much fewer. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 2.82±0.81. As compared with the IRI group, seminiferous epithelium was thicker in the EPCs group. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.32±0.09 in the EPCs group. It was much smaller than that in the IRI group. There was significant difference (P<0.01). Conclusion The transplantation of EPCs is effective for treating the spermatogenic dysfunctions caused by testicular torsion so as to greatly enhance the spermatogenic functions.     

热休克蛋白60在高脂及高脂高糖大鼠睾丸中的表达及对生精细胞凋亡的影响

目的 探讨热休克蛋白60(Hsp60)在高脂及高脂高糖SD大鼠睾丸组织中的表达情况及对生精细胞凋亡的影响.方法 将雄性SD大鼠60只随机分成对照组15例、高脂组15例及高脂高糖组30例,对照组给予普通饲料喂养,高脂组给予高脂饲料喂养,24周后加入含0.2%丙硫氧嘧啶继续喂养;高脂高糖组给予高脂饲料喂养,24周后腹腔注射链脲佐菌素,所有大鼠均喂养36周.造模成功后取睾丸组织,用免疫组化法和免疫印迹试验分析检测大鼠睾丸组织中Hsp60表达情况,并检测组织中细胞凋亡情况.结果 对照组生精细胞数量多且按序逐层排列,管腔中央可见大量精子细胞,HSP60少量表达于次级精母细胞;高脂组及高脂高糖组生精细胞数量减少且排列紊乱,部分切片可观察到生精细胞脱落.免疫组化及免疫印迹试验结果均显示,高脂组及高脂高糖组Hsp60蛋白表达量高于对照组(P<0.05),而高脂组与高脂高糖组间比较差异无统计学意义(P>0.05).高脂组及高脂高糖组的生精细胞凋亡数量明显多于对照组,且高脂高糖组生精细胞凋亡数量多于高脂组(P<0.05).结论 高脂及高脂高糖大鼠睾丸生精细胞凋亡的发生可能与Hsp60密切相关.     

Effects of Local Testicular Heating on Bcl-2 and Bax Protein Expression in Spermatogenic Cells in Rats

Objective To investigate the expression of Bcl-2 and Bax in spermatogenic cells induced by local testicular heating in rats Methods Forty adult male SD rats were divided into experimental group and control group at random. According to day 0.5, 1, 3 and 6 after local testicular heating, each group was divided into 4 subgroups： experimental subgroup （n=6） and control subgroup （n=4）. The expression of Bcl-2 and Bax in the spermatogenic cells was detected on day 0.5, 1, 3 and 6 after heat exposure by using immunohistochemistry. Results Compared with control groups, the ratio of positive cells and content of Bcl-2 positive cells significantly decreased in all experimental subgroups （P〈0.01）. The content of Bax positive cells increased in all experimental subgroups （P〈0.01）, the ratio of positive cells which had no significant difference （P〉0.05） except 6 d group decreased （P〈0.01 ）. Redistribution of Bax from a cytoplasmic to perinuclear or nuclear localization could be observed after heating. Conclusions Expression of Bcl-2 would decrease and Bax would increase with redistribution in spermatogenic cells in rats after heating. The change of Bcl-2 and Bax expression in spermatogenic cells would be correlated with the spermatogenic cell apoptosis induced by heating.     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生精细胞PCNA表达的影响

目的:研究丝胶对2型糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA表达的影响.方法:40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组10只.糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型.待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理;丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天.采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮水平、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:糖尿病模型大鼠血清睾酮水平、睾丸生精细胞PCNA的表达均明显低于正常对照大鼠(P<0.01).丝胶可明显提高糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA的表达(丝胶治疗组与模型组比较:P<0.01);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差别(P>0.05).结论:丝胶可显著提高2型糖尿病大鼠睾酮的合成及睾丸生精细胞PCNA的表达,明显改善2型糖尿病大鼠的生精功能,且作用与二甲双胍相当.     

视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的 作用及其机制研究

目的 探讨视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的作用及其机制。方法 将30 只SD 孕 鼠随机分为3 组,每组10 只,取子代雄鼠进行研究。对照组常规饲养不给任何药物或试剂;模型组采用雄激 素拮抗剂氟他胺（Flu）复制隐睾大鼠模型;干预组在模型组基础上,在子代雄鼠生精细胞发育时期予以视黄 酸干预。采用TUNEL 法检测生精细胞的凋亡,免疫组织化学法观察睾丸组织中c-Kit、Stra8、Scp3 蛋白的 表达,qRT-PCR 检测睾丸组织中Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 的表达,Western blotting 检测睾丸组织中Stra8、 Scp3、c-Kit 和PLZF 蛋白的表达。结果 免疫组织化学结果显示,对照组和干预组中可见大量精子细胞排列 整齐;而模型组睾丸各级生精细胞数目减少、排列紊乱,且曲细精管管腔缩窄。TUNEL 检测结果显示,与对 照组和干预组比较,模型组可见大量生精细胞凋亡。对照组和干预组凋亡指数低于模型组（P <0.05）。对照 组和干预组Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 和蛋白相对表达量高于模型组（P <0.05）。对照组和干预组PLZF 蛋 白相对表达量高于模型组（P <0.05）。结论 视黄酸促进生精细胞发育的作用机制可能与调控隐睾生精细胞 增殖分化及减数分裂有关,可一定程度上恢复隐睾大鼠的生殖功能。     

四氯化碳对成年大鼠睾丸的影响

目的研究四氯化碳(CCl4)对大鼠睾丸组织结构及生精细胞p53蛋白表达的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠36只随机分为对照组和实验组,实验组另设3个小组(1 d组、1周组和2周组),每组9只。实验组背部皮下注射体积分数60%CCl4-橄榄油溶液(0.03 mL.kg-1)。1 d组于实验第1天注射,1周组实验第1天和第4天注射,2周组实验第1天、第4天、第8天和第11天注射。对照组于实验的第1天、第4天、第8天和第11天背部皮下注射橄榄油(0.012 mL.kg-1)。实验第14天处死大鼠,取睾丸、附睾称重计算脏器系数;苏木精伊红染色(HE)和天狼猩红染色观察睾丸的组织结构和生精细胞的变化;免疫组织化学染色检测睾丸生精细胞p53蛋白的表达。结果HE和天狼猩红染色显示,对照组和1 d组大鼠睾丸基膜完整,间质偶见少量纤维,生精细胞在管内排列紧密有序,可见许多精子生成;1周组和2周组部分大鼠睾丸基膜增厚,间质纤维化明显,生精细胞排列紊乱,生精上皮层数减少,精子数目较对照组明显减少(P<0.05);睾丸和附睾脏器系数各组间比较无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学染色显示,对照组和1 d组偶见p53蛋白阳性细胞;1周组和2周组p53蛋白阳性细胞率较对照组和1 d组明显增多,精子数目明显减少(P<0.05),2周组p53蛋白阳性细胞率较1周组明显增多,精子数目明显减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论CCl4可使大鼠睾丸的组织结构发生改变,生精细胞p53蛋白表达明显增强。     

孕鼠双酚A染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响

目的 探讨孕鼠双酚A(BPA)染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响。方法 将ICR孕鼠随机分成4组,自受孕第一天始,用溶剂对照组、BPA低剂量(10 nmol/L)组、BPA中剂量(50 nmol/L)组、BPA高剂量(300 nmol/L)组,饮水染毒,待子鼠出生后第6周,处死雄性子鼠,取睾丸组织,HE染色、电镜观察染毒后子鼠睾丸结构改变,Hoechst染色观察细胞凋亡,Western blot法检测睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白的表达。结果 与溶剂对照组比较,HE染色显示,染毒组睾丸组织的形态有损伤,且中、高剂量组较为严重;电镜显示,中、高剂量组的间质细胞、精原细胞、支持细胞均有损伤;Hoechst 33258染色显示:染毒组较对照组睾丸组织内各细胞凋亡明显;Western blot检测显示:随染毒剂量增加,睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白表达呈下降趋势。结论 BPA可影响睾丸组织学结构,诱导生精细胞和间质细胞的凋亡,其机制可能与降低睾丸组织中MnSOD和SIRT3表达有关。     

大鼠慢性砷中毒生精细胞XRCC_1蛋白表达与凋亡

目的:研究大鼠不同剂量慢性砷中毒生精细胞XRCC1蛋白表达水平和凋亡变化及其相互作用。方法:将40只健康雄性SD大鼠随机分为对照、低剂量、中剂量和高剂量4组,每组10只。以灌胃方式分别给予双蒸水、0.375mg/kgAs2O3水溶液、0.75mg/kgAs2O3水溶液、1.5mg/kgAs2O3水溶液,每日1次,连续给药16周。取睾丸组织免疫组化法检测其睾丸XRCC1蛋白表达、TUNEL检测细胞凋亡。结果:大鼠生精细胞XRCC1蛋白表达低剂量组与对照组无显著性差异(P>0.05);中、高剂量组XRCC1蛋白的表达较对照组降低(均P<0.05),XRCC1蛋白表达量随着染毒剂量的增高而降低(r=-0.637,P<0.001)。生精细胞凋亡指数低剂量组与对照组无显著性差异(P>0.05);中、高剂量组均高于对照组(P<0.05),且随着染毒剂量的增高而升高(r=0.893,P<0.001)。XRCC1蛋白表达与生精细胞凋亡指数呈负相关关系(r=-0.738,P<0.001)。结论:慢性接触0.75mg/kg和1.5mg/kgAs2O3可诱导SD大鼠生精细胞凋亡增加,XRCC1蛋白的表达降低可能是导致大鼠生精细胞凋亡增加原因之一。