钩藤多指标含量测定及化学计量学分析

目的 建立同时测定钩藤中绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、喜果苷含量的方法,基于化学计量学分析,评价钩藤的质量。方法 采用高效液相色谱(HPLC),KinetexC₁₈色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.6 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水(含0.5 g·L^-11-丁基-3-甲基咪唑氯盐)(B)为流动相,梯度洗脱,流速:0.8 mL·min^-1;检测波长327 nm(绿原酸)、246 nm(异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷);柱温:35 ℃;进样量:10 μL。结果 绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷分离良好,平均回收率分别为99.74%、103.25%、98.35%、99.45%、104.16%、97.98%。11批钩藤上述成分的含量测定结果分别为0.128 7～0.432 0、0.007 1～0.022 1、0.008 1～0.023 7、0.009 8～0.047 1、0.005 7～0.022 8、0.008 9～0.034 9 mg·g^-1。化学计量学分析表明不同产地的钩藤质量存在一定差异。结论 建立的钩藤多指标含量测定方法简单、准确,可为钩藤药材质量综合评价提供新的参考方法。     

基于体内暴露量的丹荷颗粒质量标志物研究

摘 要:目的基于丹荷颗粒中15个特征性成分(丹酚酸B、虎杖苷、大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、白藜芦醇、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、橙皮苷、川陈皮素、荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、去氢荷叶碱、乌药碱)在大鼠血浆暴露量的测定,筛选丹荷颗粒中适于作为质量标志物(quality marker,Q-Marker)的成分。方法以EC-C_(18)柱为预柱、ZORBAX RRHD Eclipse Plus C_(18)柱为色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,采用动态多反应监测扫描质谱,建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法;大鼠ig丹荷颗粒,采集不同时间点的血浆样品,并测定血浆样品中各特征性成分的质量浓度,计算其血浆暴露量;确定体内高暴露的成分,对其进一步进行活性及制剂含量分析,依据体内暴露量、高暴露成分活性、制剂相应成分含量确定Q-Marker。结果丹酚酸B、虎杖苷、大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、白藜芦醇、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、橙皮苷、川陈皮素、荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、去氢荷叶碱、乌药碱在大鼠血浆中暴露量分别为(1340.45±167.64)、(232.49±37.05)、(677.51±71.61)、(33.99±20.74)、(281.53±32.32)、(25.01±4.90)、(16.85±2.88)、(11.89±2.69)、(113.71±23.05)、(11.13±1.94)、(168.69±42.68)、(2595.00±314.78)、(9.55±1.36)、(1.29±0.11)、(13.96±0.88) ng.h/mL,其中丹酚酸B、虎杖苷、大黄素、金丝桃苷、紫云英苷、橙皮苷、荷叶碱具有调血脂活性且在制剂中质量分数均大于0.1 mg/g。结论丹酚酸B、虎杖苷、大黄素、槲皮素、橙皮苷、柚皮苷和荷叶碱可作为丹荷颗粒的Q-Marker。     

LC/MS/MS鉴定莲子心生物碱在Caco-2细胞中的代谢产物

目的:应用LC/MS/MS鉴定去甲乌药碱、莲心碱、异莲心碱、荷花碱4种莲子心生物碱在Caco-2细胞中的代谢产物,推测其代谢途径。方法:100μmol/L生物碱作用Caco-2细胞3~12 h后收集并纯化样品,采用LC/MS/MS分析鉴定代谢产物。结果:去甲乌药碱的代谢产物有甲基化去甲乌药碱和去甲乌药碱葡萄糖醛酸苷;莲心碱和异莲心碱的代谢产物分别是去甲基莲心碱和去甲基异莲心碱;荷花碱的主要代谢物为莲心碱、异莲心碱和它们的进一步去甲基产物。结论:LC/MS/MS操作简便,可快速鉴定Caco-2细胞中的莲子心生物碱的代谢产物。莲子心生物碱主要代谢途径有甲基化、去甲基化和葡萄糖醛酸化。     

莲子心化学成分及其抑制蛋白二硫键异构酶活性研究

蛋白质二硫键异构酶既能抑制肿瘤细胞凋亡,又能促进肿瘤细胞浸润转移,在肿瘤的发展进程中具有关键作用。为了研究中药莲子心是否对该酶活性有影响,该文首先对莲子心的化学成分进行了提取分离,得到12个单体化合物,其中N-甲基乌药碱、山柰酚、金圣草素-7-O-新橘皮糖苷和甘露醇为首次从该药材中分离得到。随后该文研究了莲子心中主要的生物碱成分N-甲基乌药碱、莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱对蛋白质二硫键异构酶活性的影响,首次发现它们均具有抑制蛋白二硫键异构酶活性的作用,其中N-甲基乌药碱活性最强(IC501.4μmol·L~(-1))。     

高效液相色谱法同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱的含量

目的:建立同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱--莲心季铵碱、莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的离子对反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱:H ibarTR,5μm,250 mm×4.6 mm;流动相:乙腈-水-冰醋酸(55∶45∶1,每1 000 m l中加入4 g十二烷基磺酸钠);流速:1.2 m l/m in;检测波长:282 nm;柱温:30℃。结果:莲心季铵碱在0.94~2.82μg,莲心碱在1.14~3.42μg,异莲心碱在0.7~2.1μg,甲基莲心碱在0.96~2.88μg范围内均呈良好线性关系;并均具有较好的加样回收率(>95%)。结论:该分析方法快速、准确、灵敏度高,重复性好,可用于同时对药材莲子心中四种异喹啉生物碱的含量测定。     

HPLC测定活络效灵颗粒中芍药苷和丹酚酸B的含量

目的:建立测定活络效灵颗粒中2种有效成分芍药苷和丹酚酸B含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,芍药苷以Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(10∶90)为流动相同,检测波长230 nm,柱温为40℃,流速为1.0 mL.min-1。丹酚酸B以Zorbax Extend-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.5%甲酸(22∶10∶68)为流动相,检测波长286 nm,柱温为25℃,流速1 mL.min-1。结果:芍药苷和丹酚酸B分别在0.084 4～0.928 4μg(r=0.999 8)和0.226～2.034μg(r=0.999 9)线性关系良好;平均回收率分别为100.4%(RSD 2.30%)和100.7%(RSD 2.73%)。结论:该方法简便易行、重复性好,可用于活络效灵颗粒中芍药苷和丹酚酸B含量测定。     

高效液相色谱法测定清心片中丹酚酸B的含量

[目的]建立高效液相色谱(HPLC)对清心片中丹酚酸B的定量分析方法.[方法]采用HPLC法.色谱柱:YMC-pack C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(3:10:1:59);检测波长:286nm;柱温:25℃.[结果]丹酚酸B质量浓度与峰面积呈良好的线性关系.丹酚酸B的平均回收率为99.62%,RSD为1.46%(n=8).[结论]该方法可用于清心片中丹酚酸B的含量测定.     

HPLC测定建莲莲子心生物碱的含量

目的:建立同时测定莲子心中莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱含量的HPLC方法,并测定了10个不同产地、批次的建莲莲子心生物碱的含量。方法:Platisil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(55∶45),乙二胺调pH 9.80;检测波长282 nm,流速1 mL·min-1。结果:莲心碱在3.9～115.9 mg·L-1(r=0.999 8)、异莲心碱在4.0～120.7 mg·L-1(r=0.999 8)、甲基莲心碱9.7～290.2 mg·L-1(r=0.999 8)呈现良好的线性关系。平均回收率分别为100.24%,99.17%,100.10%,RSD分别为0.78%,1.31%,1.40%。福建产的10个不同产地、批次的建莲莲子心的莲心总碱的含量多数在1.50%～2.00%。结论:该方法简便、灵敏、准确、可靠。测定的10个产地批次的建莲莲子心中,以产自福建建宁的几何莲子芯茶样品中莲心总碱含量最高,可达2.28%。     

HPLC同时测定妇炎康片中芍药苷、 丹酚酸B、小檗碱

目的:建立同时测定妇炎康片中芍药苷、丹酚酸B及小檗碱的含量测定方法。方法:采用HPLC,PhenomenexLuna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(含0.1%磷酸)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1;检测波长230,265,286 nm。结果:芍药苷的线性范围为0.077 08～0.770 8μg(r=0.999 7),平均回收率为98.87%;丹酚酸B的线性范围为0.1139～1.139μg(r=0.999 9),平均回收率为99.31%;小檗碱的线性范围为0.027 8～0.278μg(r=0.999 9),平均回收率为100.65%。不同厂家妇炎康片中芍药苷、丹酚酸B、小檗碱的含量差异较大。结论:该方法简便,专属性、重复性好,可作为该制剂中芍药苷、丹酚酸B及小檗碱的含量测定方法。     

HPLC测定安神养血口服液中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:深入研究安神养血口服液(钩藤、金不换、制何首乌、首乌藤、松针)含量测定方法,为该药质量标准研究和完善提供科学依据。方法:HPLC测定该药中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量,色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水(55∶45)(含0.01 mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5),柱温:25℃,15 min前检测波长为281 nm,15 min后为254 nm,流速1.0 mL/min。结果:延胡索乙素、钩藤碱、异钩藤碱平均回收率分别为98.47%,99.04%,98.75%,延胡索乙素在进样量0.01μg～0.10μg范围内、钩藤碱在进样量0.16μg～1.6μg范围内,异钩藤碱在进样量0.12μg～1.2μg范围内与峰面积呈良好线性关系。结论:该方法简便、快速和准确,可用于该药质量控制。     

高效液相色谱法测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:建立安神养血口服液的含量测定方法.方法:运用HPLC测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量.色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(55: 45)(含0.01mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5);柱温:25℃;检测波长:254nm; 流速:1.0mL/min.结果:钩藤碱的平均回收率为99.04%,异钩藤碱为98.75%.钩藤碱在进样量0.12～1.20μg 范围内线性关系良好(r1=0.9999),异钩藤碱在进样量0.08～0.80μg 范围内线性关系良好(r2=0.9993).结论:该方法简便、快速、准确,可用于安神养血口服液的质量控制.     

HPLC法测定妇炎康片中6种成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定妇炎康片中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、芍药苷、阿魏酸和盐酸小檗碱的含量。方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%H_3PO_4溶液(C),梯度洗脱;流速:1.0 m L/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:280、265、230、320 nm。结果:丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、芍药苷、阿魏酸和盐酸小檗碱分别在33.02~528.41μg/m L、2.88~46.13μg/m L、187.26~2 996.10μg/m L、11.89~190.22μg/m L、0.20~3.12μg/m L和39.06~625.00μg/m L浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.71%、99.04%、98.83%、98.50%、97.08%、98.12%。结论:该方法分离效果好,操作简单、方便,能达到较好的控制产品质量的目的。     

RP-HPLC同时测定莲心总碱中的3种生物碱含量

目的：建立同时测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的反相高效液相色谱法。方法：以Hypsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,甲醇-磷酸盐缓冲液(73∶27,pH 9.0)为流动相,检测波长为286 nm及230 nm,流速1 mL·min^-1。结果：3种生物碱分离良好,在20～700 μg·mL^-1线性关系良好,日内、日间RSD在0.24%～4.83%,3种生物碱的加样回收率分别为97.9%,98.4%,98.1%。利用该方法测定了不同批次不同方法提取的莲心总碱中3种生物碱含量,结果显示莲心总碱的甲醇提取方法优于乙醇提取方法。结论：本法简单、快捷、适合于测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量。     

丹芍生脉胶囊中丹酚酸B与芍药苷的含量测定

目的:采用高效液相色谱法测定丹芍生脉胶囊中丹酚酸B与芍药苷的含量,建立该制剂中主药丹参与赤芍的主要有效成分丹酚酸B与芍药苷含量测定方法。方法:色谱条件:色谱柱均为Kromassil C18(250mm×4.6mm,5μm),丹酚酸B以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)为流动相,检测波长为286nm;芍药苷以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(40∶65)为流动相,流速:1.0mL/min,检测波长为230nm。丹酚酸B在0.1～0.6μg范围内线性良好(r=0.9998),芍药苷在1.0～5.0μg范围内线性良好(r=0.9999)。平均回收率丹酚酸B为98.4%(RSD=(1.89%),芍药苷为98.7%(RSD=1.06%)。本方法简便,无干扰,重复性好,可用于该制剂的质量控制和评价。     

荷叶和莲子心“同源异效”的物质基础分析

目的 阐明影响同源药材荷叶和莲子心药效差异的关键活性物质,分析二者“同源异效”的物质基础。方法 利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术定性分析荷叶、乳汁（莲叶柄中的汁液）和莲子心中的主要生物碱类成分,选择Waters XBridge C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,流动相0.1%氨水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~13 min,35%~60%B;13~20 min,60%~80%B;20~20.1 min,80%~95%B;20.1~25 min,95%B;25~25.1 min,95%~35%B;25.1~40 min,35%B）,电喷雾离子源（ESI）,正离子模式,质谱扫描范围m/z 100~1 000,并对其主要生物碱进行代谢网络的构建。结果 从荷叶中鉴定出了5种生物碱（N-去甲基荷叶碱,O-去甲基荷叶碱,番荔枝碱,荷叶碱和莲碱）,从乳汁中鉴定出了6种生物碱（荷叶碱,norisoliensinine,6-hydroxynorisoliensinine,莲心碱,异莲心碱和甲基莲心碱）以及从莲子心中鉴定出了8种生物碱（莲心季铵碱,去甲基乌药碱,N-甲基乌药碱,原荷叶碱,dl-杏黄罂粟碱,莲心碱,异莲心碱和甲基莲心碱）,构建了双苄基异喹啉类生物碱（莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱）以及阿朴啡类生物碱（荷叶碱,N-去甲基荷叶碱,O-去甲基荷叶碱,莲碱和番荔枝碱）等末端生物碱的生物合成通路。结论 荷叶中荷叶碱等5种阿朴啡类生物碱和莲子心中莲心碱等3种双苄基异喹啉类生物碱是造成荷叶和莲子心“同源异效”的物质基础。荷叶和莲子心中生物碱的代谢来源于同一化合物（S）-N-甲基乌药碱,通过两类不同酶的作用进行两类生物碱的合成。合成的生物碱具有不同的结构,造成了不同组织间化学成分的差异,从而产生不同的药效。     

HPLC法测定强肝胶囊中龙胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B

目的建立同时测定强肝胶囊中龙胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B 3种成分的高效液相色谱分析方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长230 nm。结果龙胆苦苷在0.151～1.51μg线性关系良好(r=0.999 6),芍药苷在0.075 2～0.752 0μg线性关系良好(r=0.999 8),丹酚酸B在0.113 2～1.358 4μg线性关系良好(r=0.999 5);平均回收率分别为龙胆苦苷99.5%、芍药苷101.95%、丹酚酸B 102.74%,RSD分别为1.02%、1.77%、1.81%。结论该方法准确、重现性好、可用于强肝胶囊的质量控制。     

广东钩藤属4种植物生物碱含量的UV、HPLC测定

目的:建立UV、HPLC测定广东钩藤属4种植物的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量的方法,比较其不同品种、不同部位间有效成分的含量变化。方法:以UV测定总碱含量,检测波长为242 nm;以HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱含量,采用Hypersil ODS C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,甲醇-水(含0.50%三乙胺,冰乙酸调pH 6.33)=63∶37为流动相,流速为0.80 mL/min,进样量5.00μL,柱温为室温,245 nm波长下检测分析。结果:钩藤碱、异钩藤碱在0.02～5.00μg范围内线性关系良好,钩藤碱的r1=0.9999,异钩藤碱的r2=1.0000,平均回收率分别为98.52%、99.12%(RSD1=2.05%,RSD2=2.17%);总碱含量在不同品种、不同部位里存在差异性,其线性范围为6.00～14.00μg/mL,r=0.9989。结论:该法准确,操作简便、快速,重复性较好,精密度较高,可用于对广东钩藤属植物不同品种、不同部位的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量测定。     

HPLC法同时测定坤安膏中芍药苷、丹酚酸B、淫羊藿苷含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定坤安膏中芍药苷、丹酚酸B、淫羊藿苷的含量,为质量控制提供依据。方法:色谱柱为Akasil-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长为230nm;柱温为30℃,体积流量为1.0mL·min~(-1),进样量为10μL。结果:建立了坤安膏中芍药苷、丹酚酸B、淫羊藿苷的HPLC含量测定方法。芍药苷、丹酚酸B、淫羊藿苷的含量分别为66.80～71.47μg/g、776.60～850.94μg/g、49.80～57.14μg/g。结论:该研究建立的方法结果准确,稳定性好,简便易行,可用于坤安膏的质量控制。     

UHPLC-MS/MS法同时测定肠激安方冻干粉中10种成分

目的建立UHPLC-MS/MS法同时测定肠激安方(白芍、白术、黄芪等)冻干粉中芍药苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Phenomenex-C_(18)色谱柱(50 mm×2 mm, 5μm);流动相乙腈-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.7 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源(ESI);全扫描、选择离子监测(SRM)模式。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(R~2≥0.998 8),平均加样回收率85.92%～101.12%,RSD 1.15%～4.13%。结论该方法简便、灵敏、稳定,可用于肠激安方的质量控制。